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抗膜抗原的单抗对痢疾杆菌入侵HeLa细胞的影响
目的观察抗痢疾杆菌膜蛋白和LPS的单抗对痢疾菌入侵HeLa细胞的影响. 方法采用不同膜抗原的单抗处理痢疾杆菌后进行HeLa细胞入侵及阻断实验,观察不同膜抗原单抗对痢疾杆菌入侵的作用. 结果观察到抗菌膜蛋白IpaB的单抗和LPS的单抗均不能阻断细菌的入侵且能促进细菌的入侵,在HeLa细胞胞浆内出现成簇的S.flexneri-2a菌,入侵菌数远远超过未经单抗处理的S.flexneri-2a菌感染的HeLa细胞组. 结论提示痢疾杆菌的抗菌膜蛋白单抗和LPS单抗所识别的表位,均具有调节S.flexneri-2a菌进入HeLa细胞的能力.
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mSemcap2对HeLa细胞骨架及福氏志贺菌入侵HeLa细胞的影响
目的研究mSemcap2对HeLa细胞骨架的影响及其对福氏志贺菌(F2a)入侵HeLa细胞的影响,以了解mSemcap2的功能. 方法利用免疫荧光细胞化学染色结合激光共聚焦显微镜观察转染重组质粒的HeLa细胞和野生HeLa细胞系微丝及微管的含量及分布;利用普通光学显微镜及激光共聚焦显微镜观察F2a对2种细胞入侵的差别. 结果转染mSemcap2后的HeLa细胞,其F-actin呈解聚状态,荧光强度减弱,actin在细胞核周集中分布的现象消失;转染mSemcap2的HeLa,其F2a入侵率明显高于野生HeLa细胞. 结论 mSemcap2可以通过细胞骨架的重排来促进细菌对上皮细胞的入侵.
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携带usp基因的尿道致病性大肠杆菌强毒株诱导HeLa细胞快速早期凋亡的研究
目的 了解致病基因在尿液分离大肠杆菌中的分布情况,分析由携带usp致病基因的尿道致病性大肠杆菌介导的HeLa细胞快速凋亡.方法 采用PCR检测6种尿道致病性大肠杆菌相关致病基因在28株尿液分离的大肠杆菌的分布;通过黏附试验和锥虫蓝染色对尿液分离的大肠杆菌进行初步致病表型筛选;采用Annexin V/PI法进一步检测大肠杆菌引起HeLa细胞早期凋亡的能力;电子显微镜观察细胞凋亡特征.结果 在28株尿液分离的大肠杆菌中,检测到usp基因阳性6株.通过致病表型筛选试验筛选到2株强致病性大肠杆菌(6N和27N),其中6N菌株携带usp基因,而27N除了没有检测到usp基因,其他致病基因与6N相同.它们可以在4 h破坏大量HeLa细胞,使HeLa死亡;流式细胞仪检测凋亡结果 显示,6N菌株在1.5 h可以诱导20.75%的HeLa细胞发生早期凋亡,而27N只有1.55%的HeLa细胞发生早期凋亡.电镜结果 从形态学证实6N菌株可以快速引起HeLa细胞发生早期凋亡.结论 携带usp基因的尿道致病性大肠杆菌可以诱导HeLa发生快速早期凋亡.
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反义寡聚核苷酸抗柯萨奇A24病毒感染的研究
目的 针对柯萨奇病毒A组24型(coxsackievirus A24,CVA24)基因组特殊功能区设计系列反义寡聚核苷酸序列,通过实验观察特异性反义核酸对病毒感染细胞的抑制作用.同时进行抗病毒作用的量效评价.方法 通过抑制空斑形成实验、病毒致细胞病变作用及免疫印迹等实验,了解反义核酸抑制及阻断CVA24病毒感染细胞的能力,及经反义核酸抑制后病毒结构蛋白在感染细胞中的表达状况,并对抗病毒效果较好的反义核酸进行量效关系测定.结果 从本实验所设计的8条反义核酸中,筛选出5条能较好抑制CVA24的反义核酸序列,分别为SCA547、SCA551、SCA554、SCA558、SCA568.当病毒感染量为1 M0I时,5 μmol/L的上述反义核酸的病毒活性抑制率均在50%以上.经过量效关系分析显示,0.3 μmol/L的SCA568已经对细胞产生较强的保护作用,对病毒空斑形成抑制程度达80%;在2.5 μmol/L的SCA568保护下,病毒空斑抑制率达到90%以上,足几条反义核酸中抗病毒效果好的一条.SCA568对病毒早期结构蛋白的表达有较强的抑制作用.而抗病毒效果稍差的SCA723,随浓度的增加也表现出一定程度对病毒蛋白表达的抑制作用.结论 本实验所筛选的5条反义核酸SCA547、SCA551、SCA554、SCA558、SCA568能较好地抑制CVA24活性,为进一步研究反义核酸治疗和预防CVA24感染、防止CVA24引起的流行性出血性结膜炎的暴发流行打下基础.
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HeLa细胞及Ehrlich瘤细胞分别提取RA33/36抗原用于诊断RA的比较
目的比较由HeLa细胞及Ehrlich瘤细胞分别提取RA33/36抗原在类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)诊断中的敏感性和特异性.方法RA33/36抗原由HeLa细胞及Ehrlich瘤细胞提取,抗RA33/36用免疫印迹法检测.研究对象分RA患者、非RA患者及正常对照.结果HeLa细胞抗原和Ehrlich瘤细胞抗原两者检测抗RA33/36对RA诊断的特异性为85.7%和87.5%,敏感性为28.2%和26.9%.抗RA33和抗RA36对RA均有诊断价值.结论HeLa细胞及Ehrlich瘤细胞均可用于提取RA33/36抗原.
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线粒体在血卟啉单甲醚-PDT诱导HeLa细胞凋亡中的作用
目的探讨线粒体在血卟啉单甲醚( HMME)- PDT诱导 HeLa细胞凋亡中的作用. 方法膜联蛋白 (annexin)V- PI双染法检测 HMME- PDT处理后 6 h HeLa细胞的凋亡率和坏死率. Rh123染色法检测 PDT后 2 h内 HeLa细胞的线粒体膜电位(△Ψ m)变化. Western 杂交法检测 PDT后 6 h内细胞质内细胞色素 C( Cyt C)的含量变化. 结果 HMME- PDT后 6 h HeLa细胞的凋亡率和坏死率分别为 11.48%± 3.42%和 17.68%± 1.05%. PDT后 2 h内△Ψ m无显著改变. PDT后即刻( 0 h)细胞质内未检测到 Cyt C,而在 PDT后 2、4和 6 h均可检测到 Cyt C,且含量有增高的趋势. 结论线粒体内的 Cyt C转位于细胞质,是 HMME- PDT导致 HeLa细胞凋亡的机制之一.
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不同活性氧成分在血卟啉单甲醚-PDT诱导HeLa细胞死亡中的作用
目的探讨不同活性氧成分在血卟啉单甲醚 (HMME)-PDT诱导 HeLa细胞死亡中的作用. 方法将接种人宫颈癌 HeLa细胞的培养皿随机分成单纯 HMME-PDT组、 HMME-PDT加叠氮钠 (单线态氧淬灭剂 )与 HMME-PDT加甘露醇 (羟自由基淬灭剂 )组.以功率密度为 15 mW/cm2,能量密度为 5.4 J/cm2、波长为 510.6 mm的激光照射.用膜联蛋白 (annexin)V-碘化丙啶 (PI)双染法检测激光照射后第 6和 24 h三组中 HeLa细胞的凋亡率和坏死率. 结果 PDT后第 6小时,单纯 HMME-PDT组和 HMME-PDT加入叠氮钠组的坏死率 17.68%± 1.05%和 4.15%± 2.19%( P=0.0006),单纯 HMME-PDT组和 HMME-PDT加 D 甘露醇组的 HeLa细胞凋亡率分别为 11.48%± 3.42%和 3.19%± 1.01%( P=0.0158). PDT后第 24小时,单纯 HMME-PDT组的 HeLa细胞凋亡率和坏死率分别为 48.51%± 2.85%和 19.26%± 1.57%,加入叠氮钠组为 40.45%± 3.56%和 13.12%± 2.75%,加入 D 甘露醇组为 39.43%± 4.37%和 21.00%± 4.31%. 结论 HMME-PDT产生的单线态氧以导致 HeLa细胞坏死为主,而羟自由基则以导致细胞凋亡为主.
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钙在血卟啉单甲醚-光动力学疗法处理后HeLa细胞中的变化及作用
目的了解钙离子在血卟啉单甲醚-光动力学疗法(HMME-PDT)处理后 HeLa细胞中的变化和作用.方法 Fura-2/AM孵育荧光分光光度计检测细胞质游离钙浓度 [Ca2+ ]i的变化,MTT法分析 PDT及钙离子对 HeLa细胞存活率的影响,Western 印迹法分析 HMME-PDT后 HeLa细胞的肌浆 /内质网钙泵(SERCA2)蛋白的降解情况.结果 HMME-PDT处理后即刻 HeLa细胞内 [Ca2+ ]i就开始增高,且与 PDT剂量成正相关用,BAPTA/AM拮抗 [Ca2+ ]i的升高可增加 HeLa细胞的存活率.同时 HMME-PDT可引起 SERCA2蛋白的降解.结论 HMME-PDT处理后 HeLa细胞内 [Ca2+ ]i可迅速增高,[Ca2+ ]i 升高可能与 SERCA2蛋白的降解相关,并可促进 HeLa细胞的死亡.
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光动力疗法对3T3成纤维细胞、宫颈癌HeLa细胞增殖及凋亡的影响
背景与目的光动力疗法有抑制细胞增殖的作用,这项技术利用细胞吸收光敏剂后,暴露于合适波长的光,即可产生细胞毒性反应.光动力可以通过凋亡或坏死引起细胞死亡.
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两种方法建立人宫颈癌细胞顺铂耐药细胞株及其 耐药性的评价
目的:通过两种方法建立顺铂耐药的人宫颈癌细胞耐药细胞株,对其耐药性进行分析.方法:用小剂量诱导法和大剂量冲击法分别建立Hela细胞顺铂耐药细胞株.比较正常Hela细胞株和两种方法建立的顺铂耐药Hela细胞株的RI指数和相关耐药基因表达情况,评价耐药细胞株是否成功建立.绘制三种细胞的生长曲线,计算比较三种细胞的细胞倍增时间.结果:成功用两种方法建立了Hela细胞顺铂耐药细胞株,分别命名为Hela/DDP细胞株和Hela/DDPs细胞株,其耐药相关基因的表达、RI指数、细胞倍增时间表达均与亲代Hela细胞有明显差异.结论:成功用两种方法建立两株Hela细胞耐药细胞株,分别属低度或中度耐药.
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选择性COX-2抑制剂NS-398对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响
目的 研究选择性COX-2抑制剂NS-398对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响.方法 不同浓度NS-398处理体外培养的人宫颈癌细胞系Hela细胞后,采用噻唑蓝(MTT)法检测处理48 h、72 h后hela细胞的增殖活性,流式细胞仪测定细胞周期和细胞凋亡.结果 50、100、200 umol/L NS-398处理hela细胞48 h,72 h后,细胞增殖明显受到抑制,呈时间和剂量依赖性特点.200 umol/L NS-398处理hela细胞48h后,流式细胞仪细胞周期分析表明,NS-398处理组G1期细胞明显增加,S期细胞明显减少.而细胞凋亡指数无明显变化.结论 体外实验表明,NS-398能有效抑制宫颈癌细胞生长,其机制可能与其阻滞细胞周期有关.
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槲皮素对宫颈癌HeLa 细胞STAT3的表达及其信号通路的影响
目的 初步探讨信号转导子和转录激活子STAT3 在宫颈癌发生发展中的作用以及槲皮素对宫颈癌细胞中STAT3 表达的影响.方法 用RT-PCR 检测不同浓度的槲皮素作用人宫颈癌HeLa 细胞中STAT3 mRNA 的表达,并以细胞免疫荧光技术观察凋亡细胞内STAT3 和磷酸化STAT3(P-STAT3)的改变.结果 槲皮素处理HeLa 细胞后,当槲皮素浓度从6.25 μmol/L 增加到50 μmol/L,相同时间HeLa 细胞内STAT3 mRNA 表达逐渐降低,除6.25 μmol/L 组与溶剂对照组相比无统计学差异(P >0.05)外,余差异全部有统计学意义(P <0.05),且处理24 h 后,STAT3 mRNA 表达量与给药浓度呈负相关,r1 =-0.861,P =0.000;各时间段不同浓度组(6.25、12.5、25、50 μmol/L)两两相比,差异均有统计学意义(P <0.05).随着时间变化,相同浓度组中STAT3 mRNA 表达明显降低,在给予6.25 μmol/L 槲皮素后,STAT3 mRNA 的表达量呈时间依赖性,r2 =-0.539,P =0.000.运用免疫荧光技术观察到STAT3 蛋白及磷酸化水平随槲皮素浓度及时间增加表达呈明显下降趋势.结论 槲皮素能明显抑制HeLa 细胞的生长;槲皮素可抑制细胞内STAT3 表达,从而可能通过抑制JAK/STAT 信号通路诱导宫颈癌细胞凋亡.
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竹红菌甲素脂质体对体外培养肿瘤HeLa细胞的光灭活作用
目的 本研究旨在观察及探讨竹红菌甲素(HA)脂质体对体外培养肿瘤细胞的光动力作用.方法 构建HA脂质体,注入体外培养瘤细胞的培养基中,并用新鲜Hank′s液反复冲洗后,于室温下在碘钨灯下照光,通过与单纯照光组、单用HA脂质体组、空白对照组对比的实验方法,观察HA脂质体对体外培养瘤细胞的光动力学作用.结果 注有HA脂质体的培养基中经光照显示HeLa细胞的不同时间段的死亡率比单纯照光组及单用HA脂质体组均高(P<0.05).结论 HA脂质体对培养基中HeLa细胞光动力灭活作用确切.HA结构单一清楚,光动力作用确切可靠,也应是一种具有发展前途的光敏剂.
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腺病毒介导p27基因转染对HeLa细胞增殖和凋亡的影响
目的 观察p27基因对人宫颈癌细胞HeLa增殖及凋亡的影响.方法 将已构建成功的腺病毒载体Ad-p27转染至宫颈癌细胞系HeLa细胞,Western blotting法检测病毒转染后p27蛋白在不同时间点表达;噻唑兰(MTT)法检测其对肿瘤细胞增殖的影响;流式细胞术检测其对肿瘤细胞凋亡的影响.结果 HeLa细胞成功转染进Ad-p27;在各观察的时间点内,与对照组比较,同一时间点的细胞中p27蛋白水平均显著增加(P<0.01),细胞增殖能力显著降低(P<0.01),细胞凋亡率则显著增加(P<0.01).结论 p27基因抑制肿瘤细胞增殖,促进肿瘤细胞凋亡,腺病毒构建p27基因有望成为宫颈癌治疗的一个新方法.
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TRPV4对 HeLa 细胞增殖的作用
目的观察瞬时感受器电位离子通道香草素受体4（ TRPV4）与宫颈癌HeLa细胞增殖的关系。方法采用宫颈癌HeLa细胞系，用Western blot技术检测HeLa细胞中TRPV4的表达量；并分别用TR-PV4阻滞剂RN1734干预体外培养HeLa细胞，通过细胞计数法、LDH检测及流式细胞技术观察TRPV4通道调控对HeLa增殖和细胞周期进展的影响。结果与对照组W12细胞系相比，宫颈癌HeLa细胞系中TRPV4呈高表达。 TRPV4阻滞剂干预48和72 h后，HeLa细胞增殖较未干预组降低（ P＜0.05）；而TRPV4阻滞剂干预24 h和48 h时，处于S期细胞的百分率明显低于未干预组；处于G0/G1期细胞的百分率则明显高于未干预组（ P＜0.05）。结论 TRPV4抑制可以阻滞体外培养宫颈癌HeLa细胞增殖及细胞周期进展。
关键词： Hela细胞 细胞增殖 细胞周期 瞬时感受器电位离子通道香草素受体 -
胰岛素联合顺铂对人宫颈癌细胞株 HeLa生长的影响
目的：观察胰岛素（INS）联合顺铂（DDP）对人宫颈癌 HeLa 细胞生长及凋亡的影响，并初步探讨其作用机制。方法体外培养的人宫颈癌细胞株（HeLa）经INS、DDP单独或联合作用后，MTT检测细胞增殖抑制情况；Annexin V-FITC双染流式细胞术分析细胞凋亡；流式细胞仪检测不同加药处理组的细胞周期时相变化情况；Western blot 印迹方法检测细胞中 JNK2、p-JNK2及caspase-3蛋白的表达情况。结果 MTT结果显示：INS无抑制细胞增殖作用，DDP单药组与联合用药组均能抑制细胞的增殖，两药联合时细胞增殖抑制率明显高于DDP单药组，差异有统计学意义（P=0.000），细胞凋亡结果显示：INS无促细胞凋亡的作用，联合用药组的细胞凋亡率明显高于DDP单药组（P<0.01）。细胞周期结果显示：DDP、INS单药均能促进细胞由G1期向S期转变；联合用药组HeLa细胞S期比例增加更加明显，与DDP组相比，差异有统计学意义（P<0.05）。Western blot 结果显示：实验组与对照组比较，JNK2蛋白水平无明显变化， p-JNK2、caspase-3于DDP组及 DDP+INS 组中表达增加，联合用药时增加更为明显，与DDP组相比，差异有统计学意义（P<0.05），而在INS组中三种蛋白表达变化均不明显。结论 INS 可增强DDP对宫颈癌HeLa细胞的毒性作用，其机制可能与协同DDP促进细胞由G0期步入S期，上调p-JNK2及 caspase-3蛋白表达有关。
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甘草提取物（GC-3）体外诱导HeLa细胞凋亡及机制研究
目的：探讨甘草提取物（GC-3）抑制人宫颈癌HeLa细胞增殖及诱导HeLa细胞凋亡的机制。方法通过水提取、乙醇沉淀、大孔吸附树脂柱层析，分离提取GC-3；四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测GC-3对HeLa细胞增殖的影响；透射电镜观察GC-3诱导HeLa细胞凋亡的形态学改变；Western blot测定25μg/ml GC-3不同时间作用于HeLa细胞后，凋亡相关蛋白聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶（PARP）表达水平的变化。结果 MTT检测结果表明，GC-3能够抑制HeLa细胞增殖且呈现出良好的时间剂量效应关系，其中GC-3作用于人HeLa细胞12 h、24 h和48 h的半数抑制浓度（IC50）分别为35.21μg/ml、17.05μg/ml、12.07μg/ml，而对照组顺铂相对应的IC50分别为20.48μg/ml、7.34μg/ml、8.66μg/ml。电镜检测可见细胞表面绒毛脱失，细胞核内染色质凝聚、散在或边集，细胞的核浆比减少，胞质内可见空泡等明显的凋亡细胞特点。Western blot检测结果显示，随着GC-3（25μg/ml）作用时间的增加，PARP-1被激活剪切，其裂解蛋白Cleaved-PARP-124 kD表达水平随之增高，且从6 h时起即与正常对照组有显著性差异（P＜0.05），呈现明显的时间效应关系。结论 GC-3在体外可明显抑制HeLa细胞的增殖和诱导HeLa细胞凋亡，PARP-1在该细胞分子凋亡机制中起重要作用。
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连翘提取物LQ-4体外诱导Hela细胞凋亡作用研究
目的：探索连翘提取物 LQ-4体外诱导 Hela 细胞凋亡作用。方法应用 MTT 法测定 LQ-4对宫颈癌Hela细胞的增殖抑制作用，透射电镜观察药物作用后Hela细胞形态学变化，DNA ladder实验观察 DNA 的变化。高效液相色谱-质谱联用分析 LQ-4的成分。结果 MTT 实验结果显示连翘提取物 LQ-4可以抑制Hela细胞的增殖，并有时间剂量依赖性。LQ-4作用于Hela细胞12、24和48 h的半数抑制浓度（IC50）分别为97.68、39.16、25.83μg/ml。透射电镜显示细胞发生了凋亡形态变化，DNA ladder实验显示了LQ-4可引起细胞DNA的断裂。高效液质联用分析确定LQ-4中抗肿瘤活性成分五环三萜类成分的存在。结论连翘提取物LQ-4体外明显抑制Hela细胞的增殖并可诱导细胞凋亡。
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牛幽门螺杆菌抗体中和菌体蛋白对Hela细胞的生长抑制作用
目的:研究H pylori菌体蛋白对Hela细胞增殖的影响及牛抗H pylori抗体对H pylori菌体蛋白的中和作用.方法:Hpylori超声全菌抗原接种奶牛,按多克隆抗体制备常规,腋下皮下接种,全程免疫后每1-2 mo加强1次,琼脂双向扩散至1:32时可采集牛血制备抗血清,同期收集牛常乳.抗血清及牛乳低温保存备用.经500、330、330 g/L饱和硫酸铵粗提后,沉淀用生理盐水溶解,对生理盐水透析24 h,上DEAE-32柱,收集高峰蛋白,经SDS-PAGE鉴定后分装,-20℃保存.通过Hela生长曲线确定Hela细胞的接种密度.建立SS1及NCTC11637对Hela细胞生长增殖功能的抑制作用的MTT分析方法,以牛抗H pylori IgG分别与SS1及NCTC11637共育2 h后各自对Hela增殖功能的抑制率变化来评价牛抗H pylori IgG对SS1及NCTC11637菌体蛋白的中和作用.结果:细胞毒模型发现SS1与NCTC11637均能浓度依赖性地抑制Hela细胞增殖(SS1:r=0.9 594;NCTC11637:r=0.9 371),Hela细胞圆缩、边界突显,胞质内可见较多颗粒,折光性差,至高浓度抗原孔,Hela多见碎片,或明显皱缩.但对于相同的细胞毒效应SS1所需浓度高于NCTC11637;中和模型发现牛特异性IgG可分别中和SS1及NCTC11637的细胞毒作用,且具有剂量-反应关系(SS1:r=-0.9 936;NCTC11637:r=-0.9 627).结论:牛抗H pylori抗体能够剂量依赖地中和H pylori对Hela细胞生长增殖的抑制作用.
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人转铁蛋白受体基因载体的构建与鉴定及在Hela细胞中的表达
目的 运用人转铁蛋白受体(hTfR)作为MR报告基因,制作包含hTfR蛋白编码区的表达质粒,并对其进行检测鉴定,为下一步体外、体内MR分子影像研究打下基础.方法 通过脂质体介导的基因转染构建过量表达hTfR的Hela细胞系,以pCDNA3.1 (+)-hTfR为实验组,转染空白质粒pCDNA3.1 (+)为对照组,运用PCR及Westen-Blot的方法在基因水平和蛋白水平检测hTfR在转染前后的表达水平,鉴定转染效果.结果 以pOTB7-TFRC质粒为模板,运用RT-PCR的方法进行hTfR基因编码区的扩展,成功构建了pCDNA3.1(+)-hTfR高表达质粒,测序鉴定正确;通过脂质体转染Hela细胞,瞬时转染效率约70%;RT-PCR显示转染pCDNA3.1(+)-hTfR质粒组较对照组生成的hTfR mRNA明显增高(1.179±0.047 vs.0.260,t=16.8,P＞0.05);Western-Bolt显示转染组较对照组编码的TfR蛋白明显增高(0.648±0.025 vs.0.333,t=10.8,P＜0.05).结论 成功构建了pCDNA3.1(+)-hTfR表达质粒;质粒转染Hela细胞后表达的hTfR mRNA及hTfR蛋白均明显增高;为下一步分子影像学的实验奠定了基础.
