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槲皮素对子宫颈癌HeLa细胞的作用及其机制
的凋亡.
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叶黄素对人宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响
目的 探讨叶黄素对体外培养的人宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响.方法 选择对数生长期的人宫颈癌HeLa细胞为研究对象,采用随机数字表法,将其随机分为6组:20,40,80,160,320 μmol/L叶黄素组及对照组,叶黄素组分别加入200 μL含20,40,80,160,320μmol/L叶黄素终浓度的RPMI 1640培养基及HeLa细胞,对照组仅加入200 μLRPMI1640培养基及HeLa细胞.采用噻唑蓝(MTT)法检测人宫颈癌HeLa细胞增殖抑制率,并采用流式细胞术检测HeLa细胞凋亡率.采用统计学方法分析相同时间不同浓度叶黄素培养及相同浓度叶黄素培养不同时间的HeLa细胞增殖抑制率及凋亡率差异.结果 HeLa细胞在培养时间相同(为24 h或48 h或72 h)时,随着叶黄素浓度依次增加(分别为20,40,80,160,320 μmol/L)均较前一低浓度组的增殖抑制率及凋亡率显著升高,且差异均有统计学意义(P＜0.01);HeLa细胞在叶黄素浓度相同(为20μmol/L或40 μmol/L或80 μmol/L或160μmol/L或320 μmol/L)培养时,随着培养时间增加(分别为24,48,72 h)均较前一时间点的增殖抑制率及凋亡率显著升高,且差异有统计学意义(P＜0.01).结论 叶黄素可抑制体外培养的人宫颈癌HeLa细胞的增殖,诱导其凋亡,并且HeLa细胞体外培养的增殖抑制率及凋亡率分别随着叶黄素浓度增加及作用时间延长而升高.
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组蛋白脱乙酰酶抑制剂丁酸钠对宫颈癌HeLa细胞增殖与凋亡的影响
目的 探讨组蛋白脱乙酰酶抑制剂——丁酸钠对宫颈癌HeLa细胞增殖与凋亡的影响.方法 0、2.5、5.0、10.0 mmol/L丁酸钠作用HeLa细胞24、48、72 h后,噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期,蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中B淋巴细胞瘤因子-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(BAX)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、p27、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路相关蛋白的表达.结果 与0 mmol/L丁酸钠比较,2.5、5.0、10.0 mmol/L丁酸钠处理24、48、72 h后HeLa细胞的细胞活力均明显降低(P<0.01).与0 mmol/L丁酸钠比较,2.5、5.0、10.0 mmol/L丁酸钠处理48 h后HeLa细胞的细胞凋亡率和G1期细胞所占比例均明显增高,细胞中cyclin D1、PI3K、p-AKT蛋白的相对表达量均明显降低,细胞中BAX、p27蛋白的相对表达量均明显增高,差异均有统计学意义(P<0.01);5.0、10 mmol/L丁酸钠处理48 h后HeLa细胞中bcl-2蛋白的相对表达量较0 mmol/L丁酸钠明显降低(P<0.01).结论 丁酸钠可能通过阻断PI3K/AKT信号通路诱导HeLa细胞凋亡,并抑制细胞增殖.
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PFKFB3对宫颈癌细胞影响机制探讨
目的 肿瘤细胞产生能量的方式是糖酵解,且糖酵解与恶性肿瘤发生、发展及转移密切相关,因此糖酵解中涉及的限速酶可能是恶性肿瘤治疗重要靶点.本研究分析宫颈癌细胞中糖酵解限速酶6-磷酸果糖2激酶/果糖-2,6-二磷酸酶3(6-phosphofructo-2-kinase/fructose-2,6-biphosphatase 3,PFKFB3)的表达水平,并探讨PFKFB3对宫颈癌细胞生长、迁移、体内成瘤的影响,以期为宫颈癌治疗提供新思路.方法 免疫荧光技术和蛋白质印迹法检测人宫颈癌Hela细胞和正常上皮细胞中PFKFB3的表达.腺病毒载体抑制Hela细胞中PFKFB3的表达,并观察PFKFB3沉默对细胞生长、迁移、体内成瘤的影响.结果 细胞免疫荧光和蛋白质印迹法结果显示,Hela细胞中PFKFB3表达水平明显高于正常上皮细胞.抑制Hela细胞PFKFB3表达,可抑制Hela细胞体外增殖、迁移和侵袭.裸鼠移植瘤模型结果显示,Sh-PFKFB3-Hela细胞组肿瘤体积(514±147)mm3明显小于Hela细胞组肿瘤体积(1424±254)mm3,差异有统计学意义,t=3.53,P=0.0001.Sh-PFKFB3-Hela细胞组肿瘤质量(301±74)mg小于Hela细胞组肿瘤质量(623±87)mg,差异有统计学意义,t=4.34,P=0.006.肿瘤组织免疫荧光染色结果显示,Sh-PFKFB3-Hela细胞肿瘤标本中Ki-67表达阳性率为(11.3±1.2)％,明显小于Hela细胞组阳性率(41.5±3.2)％,差异有统计学意义,t=3.34,P=0.002.裸鼠肺转移模型结果显示,单位面积内Sh-PFKFB3-Hela细胞组平均肺部转移灶数目为3.5个,明显少于Hela细胞组平均转移灶数目13个,差异有统计学意义,t=4.33,P=0.003.结论 Hela细胞中高表达的PFKFB3在Hela细胞增殖、迁移、体内成瘤及转移等生物学过程中起重要作用.抑制PFKFB3可能作为宫颈癌生物治疗的分子靶点.
关键词： 宫颈癌 Hela细胞 糖酵解 6-磷酸果糖2激酶/果糖-2 6-二磷酸酶3 -
宫颈癌HeLa细胞株GCNF和Oct-4诱导分化表达
目的:检测生殖细胞核因子(germ cell nuclear factor,GCNF)及Oct-4在宫颈癌HeLa细胞诱导分化前后的表达.方法:用全反式维甲酸(all-trans-retinoicacid,ATRA)诱导HeLa细胞分化,HE染色观察诱导前后细胞的形态变化;通过免疫组化和半定量的RT-PCR方法,检测GCNF及Oct-4在HeLa细胞诱导分化前后的表达.应用SPSS 13.0软件进行统计学处理.结果:随着诱导时间的延长HeLa细胞体积变小,圆形细胞逐渐增多,细胞核开始固缩;GCNF在诱导前后的HeLa细胞中均有表达,随着诱导时间延长其表达逐渐增强但3d后表达强度开始下降,F=14.67,P＜0.001.3d组和1d组、2d组和5d组比较差异无统计学意义;但与对照组比较,差异有统计学意义,P＜0.05;Oct-4在诱导前后的细胞中均不表达.结论:GCNF参与了肿瘤细胞的体外分化;在体外培养的宫颈癌细胞株中,GCNF基因可能关闭了Oct-4的激素反应元件.
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黄芩苷对人宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡影响机制研究
目的 观察黄芩苷对人宫颈癌HeLa细胞增殖及凋亡的影响,初步探讨其作用机制.方法 不同浓度(5、10、20、40、80和160 μg/mL)的黄芩苷作用于人宫颈癌HeLa细胞24、48和72 h后,采用CCK-8法检测黄芩苷对HeLa细胞增殖的影响;40 μg/mL黄芩苷作用于HeLa细胞24 h后,采用普通光学显微镜观察细胞形态学变化,Hoechst 33342染色后在荧光倒置显微镜下观察细胞核形态学改变;Annexin V/PI双染后采用流式细胞术检测细胞凋亡的改变;蛋白质印迹法检测Caspase家族中Caspase 3、8、9蛋白表达变化.结果 黄芩苷可明显抑制HeLa细胞增殖,随时间延长及剂量增加,细胞增殖抑制率也明显升高,P＜0.05;经40 μg/mL黄芩苷处理24 h的HeLa细胞明显变小、变圆、且有凋亡小体产生,细胞核固缩、碎裂,呈现典型的凋亡形态学改变;40 μg/mL黄芩苷处理HeLa细胞24、48 h后细胞早期凋亡率分别为(10.5±1.5)％、(21.8±2.4)％,与对照组的(1.3±0.9)％相比,差异均有统计学意义,P＜0.05;蛋白质印迹检测法结果表明,黄芩苷处理后Caspase-3蛋白由0.09上调至0.65,Caspase-8蛋白由0.04上调至1.22,Caspase-9蛋白由0.12上调至1.10,提示剪切片段蛋白的表达呈上调趋势.结论 黄芩苷可抑制人宫颈癌HeLa细胞增殖,并诱导其凋亡,其机制可能与激活Caspase相关.
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靶向VEGF发夹状RNA对宫颈癌HeLa细胞抑制作用的研究
目的:运用RNAi技术下调血管内皮生长因子(VEGF)在HeLa细胞中的表达,观察其对肿瘤细胞凋亡的影响,为人宫颈癌治疗提供理论依据.方法:设计并构建针对VEGF的携带绿色荧光蛋白( GFP)发夹状RNA (shRNA)质粒表达载体(PGPU6/GFP/Neo-shRNA),脂质体法转染HeLa细胞；荧光显微镜观察GFP的表达,并计算转染效率；RT-PCR检测HeLa细胞VEGF的表达,筛选出靶序列；再用流式细胞仪法检测细胞凋亡.结果:构建的PGPU6/GFP/Neo载体成功转入HeLa细胞；转染48 h后,HeLa-shVEGF1组HeLa细胞VEGFmRNA表达的抑制率为75.0％；与HeLa组和HeLa-shNC组相比,HeLa-shVEGF1组HeLa细胞凋亡率明显增加,P＜0.01.结论:本研究构建的PGPU6-shRNA表达载体携带GFP便于观察细胞的转染情况,且不影响U6启动子的转录,同时有效沉默了VEGF基因,明显增加HeLa细胞的凋亡,为未来肿瘤的治疗提供新途径.
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miR-99a对宫颈癌Hela细胞增殖影响机制研究
目的 miR-99a在宫颈癌等多种肿瘤组织中异常表达,且与肿瘤细胞的多种生物学行为密切相关.本研究旨在探讨miR-99a沉默HOXA1表达抑制宫颈癌Hela细胞增殖的影响及相关机制.方法 通过瞬时转染将miR-99amimics导入宫颈癌Hela细胞,采用MTT法和平皿克隆形成实验观察miR-99a增加对Hela细胞增殖的影响;应用Tar-getscan 6.2软件预测miR-99a与HOXA1基因3'UTR的靶向性作用,荧光素酶报告基因分析miR-99a对HOXA1基因表达的影响,采用qRT-PCR和蛋白质印迹法检测miR-99a对HOXA1表达的作用;构建HOXA1干扰载体,转染Hela细胞,筛选后利用MTT法和平皿克隆实验观察HOXA1表达降低后对Hela细胞增殖的影响.结果 miR-99a被导入宫颈癌Hela细胞后,细胞的生长速度减慢,miR-99a mimics组Hela细胞克隆数为156±30,与miR-ctr组(386±49)比较,克隆数减少,F=26.093,P=0.001.采用Targetscan6.2 (http://www.targetscan.org/)软件分析miR-99a与HOXA1基因的作用位点发现,miR-99a与HOXA1基因3'UTR的1 485～1 497位核苷酸位点存在结合,miR-99a表达后,抑制Hela细胞中HOXA1的表达.干扰HOXA1表达后,Hela细胞生长速度减慢,平皿克隆形成能力降低,si-HOXA1克隆数为165±35,si-control克隆数为390±46,P＜0.05.结论 miR-99a与HOXA1基因3,UTR 1 485～1 497位核苷酸位点结合沉默其表达,抑制宫颈癌Hela细胞的增殖.
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PMA诱导Hela细胞ROS升高机制研究
目的 活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)升高是癌症转移的主要原因之一,ROS已成为一种新的抗癌靶点,但其形成机制尚未完全阐明.本研究以佛波酯(phorbol-12-myristate-13-acetate,PMA)诱导Hela细胞ROS升高为模型,探讨Hela细胞ROS升高的相关机制.方法 500 ng/mL的PMA诱导Hela细胞0.5 h,荧光酶标仪检测Hela细胞经过PMA诱导后的ROS产量,蛋白质印迹法检测Hela细胞经过PMA诱导后的HIF-1α 、Rac2和NOX2蛋白的表达量.结果 500 ng/mL PMA诱导Hela细胞0.5、1、2和4 h,与空白对照组比较,P值分别为<0.001、0.055、0.125和0.135,表明0.5 h为PMA诱导Hela细胞ROS升高的佳诱导条件.500 ng/mL PMA诱导Hela细胞0.5 h后,诱导组中HIF-1α 、Rac2和NOX2蛋白条带灰度平均值分别为15833.33±63.13、20448.33±78.65和21840.33±123.91,均高于空白组的9853.33±124.13、9782.00±93.62和10638.33±106.57,均P<0.001,表明PMA诱导了HIF-1α 、Rac2和NOX2蛋白的高表达.荧光酶标仪检测Hela细胞ROS结果显示,echinomycin组 、NSC23766组和DPI组与PMA组比较,P值分别为<0.001、0.003和<0.001,表明HIF-1α 、Rac2和NOX2抑制剂均抑制了Hela细胞中PMA诱导的ROS升高.蛋白质印迹法检测结果显示,空白组HIF-1α 、Rac2和NOX2灰度平均值分别为13571.00±287.68、10495.67±253.72和17403.33±162.87,PMA组分别为22946.33±67.10、30578.67±251.11和30582.00±88.39,NSC23766组分别为22629.67±445.26、3919.00±41.68和22618.67±161.51,echinomycin组分别为16691.33±9.504、15424.00±315.05和14899.00±71.55,DPI组分别为22970.00±714.88、30120.33±555.05和5787.00±12.29.echinomycin组与PMA组比较,均P<0.001,表明echinomycin抑制了PMA诱导的HIF-1α 、Rac2和NOX2蛋白的高表达;NSC23766组与PMA组比较,P值分别为0.354、<0.001和<0.001,表明NSC23766抑制了PMA诱导的Rac2和NOX2蛋白的高表达,但没有抑制HIF-1α 蛋白的高表达;DPI组与PMA组比较,P值分别为0.944、0.117和<0.001,表明DPI抑制了PMA诱导的NOX2蛋白的高表达,但没有抑制HIF-1α 和Rac2蛋白的高表达.结论 PMA能引起Hela细胞ROS升高,该现象依赖HIF-1α/Rac2/NOX2途径.这可能为阐明与ROS升高相关的癌症转移分子机制 、干预癌症转移的靶向治疗分子研究提供思路.
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雷帕霉素联合顺铂对宫颈癌Hela细胞生长和对HIF-1α与VEGF表达影响的观察
目的:探讨mTOR抑制剂雷帕霉素与顺铂联合应用对宫颈癌Hela细胞生长的抑制作用及对HIF-1α和VEGF表达的影响.方法:分别以雷帕霉素、顺铂及雷帕霉素联合顺铂处理体外培养人宫颈癌Hela细胞,采用MTT比色法检测人宫颈癌Hela细胞的抑制率,金氏公式评价两药联合用药的效果,采用RT-PCR法、蛋白质印迹法检测各组细胞HIF-1α和VEGF mRNA和蛋白的表达.结果:雷帕霉素和顺铂对宫颈癌Hela细胞的生长有明显的抑制作用,并呈剂量依赖性,分别联合应用2种浓度雷帕霉素(10和20 nmol/mL)与顺铂(0.25和0.5 mg/mL)协同治疗指数q值均＞1.15,两者有协同作用.雷帕霉素与顺铂联合用药HIF-1αmRNA的表达为0.242±0.048,单独用药雷帕霉素组为0.428±0.068,顺铂组为0.357±0.051；雷帕霉素与顺铂联合用药组VEGF mRNA的表达为0.498±0.093,单独用药雷帕霉素组为0.651±0.112,顺铂组为0.623±0.125,联合用药组与单独用药组比较表达量明显降低,P＜0.05；雷帕霉素与顺铂联合用药组HIF-1α蛋白的表达为0.514±0.092,单独用药雷帕霉素组为0.625±0.132,顺铂组为0.635±0.120；雷帕霉素与顺铂联合用药组VEGF蛋白的表达为0.409±0.082,单独用药雷帕霉素组为0.650±0.114,顺铂组为0.623±0.102,联合用药组与单独用药组比较表达量明显降低,P＜0.05.结论:单独及联合应用雷帕霉素与顺铂对宫颈癌Hela细胞的生长均有抑制作用,两药联合应用有明显的协同作用,雷帕霉素联合顺铂具有明显下调HIF-1α、VEGF基因和蛋白表达的作用.
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人参皂苷Rh2增强紫杉醇诱导Hela细胞的凋亡
目的:探讨人参皂苷Rh2能否增强紫杉醇诱导Hela细胞的凋亡.方法:应用SRB法检测药物抑肿瘤效应;荧光染色和流式细胞仪检测细胞凋亡;应用金氏公式分析药物间的相互作用.结果:人参皂苷Rh2可浓度依赖性地抑制Hela细胞的增殖,并可协同性地增强紫杉醇对细胞增殖的抑制作用;人参皂苷Rh2可协同性地增强紫杉醇诱导的Hela细胞凋亡,并具有浓度依赖性.结论:人参皂苷Rh2可协同性地增强紫杉醇对Hela细胞增殖抑制作用和诱导凋亡作用.
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RNAi沉默环氧合酶-2基因对宫颈癌Hela细胞细胞周期影响的实验研究
目的:利用RNA干扰(RNAi)抑制宫颈癌Hela细胞环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)表达研究其对细胞周期的影响.方法:构建特异性COX-2小干扰RNA(siRNA)真核表达载体质粒Pgenesil-COX-2,以脂质体法将其转染至人宫颈癌Hela细胞.转染48 h分别用RT-PCR和Western blot方法评价Pgenesil-COX-2对COX-2表达的抑制效应,48和96 h时用流式细胞技术检测Hela细胞细胞周期,用RT-PCR方法检测CyclinE的表达变化.结果:转染48 h后,Pgenesil-COX-2特异性抑制了Hela细胞COX-2的表达,与对照组比较差异有统计学意义,t=4.496,P=0.002.48及96 h流式细胞仪分析显示,转染Pgenesil-COX-2后Hela细胞增殖活性降低,与对照组比较G0/G1期细胞增多,t值分别为3.217和2.495,P值分别为0.011和0.043;S期细胞减少,t=5.978和6.137,P值均为0.000.同时,CyclinE表达降低,t值分别为2.879和8.612,P值分别为0.020和0.000.结论:siRNA真核表达载体可特异性抑制Hela细胞COX-2基因的表达,抑制COX-2表达可能通过下调CyclinE的表达使细胞周期阻滞于G0/G1期.
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靶向Survivin基因siRNA对HeLa细胞放射敏感性的影响
目的:探讨siRNA抑制Survivin表达对宫颈癌HeLa细胞γ射线敏感性的影响.方法:设计并合成siRNA,构建siRNA真核表达载体的.将测序正确的pSUPER/Survivin载体转染HeLa细胞,应用RT-PCR和流式细胞仪检测HeLa细胞中Survivin基因在mRNA和蛋白表达水平的改变.流式细胞仪检测各组HeLa细胞的凋亡率差异.结果:成功构建了pSUPER/Survivin载体.转染pSUPER/Survivin的HeLa细胞其Survivin基因表达水平明显低于未转染及转染空载体pSUPER的HeLa细胞.γ射线照射后,转染pSUPER/Survivin的HeLa细胞凋亡细胞率显著高于其他两种细胞.应用X2检验比较3种细胞的早期凋亡细胞率:转染pSUPER/Survivin与未转染(X2=14.88,P=0.00);转染pSUPER/Survivin与转染空载体pSUPER(X2=13.10,P=0.00);未转染与转染空载体pSUPER(X2=0.082,P=1.00).结论:在HeLa细胞中抑制Survivin基因的表达能够提高其对γ射线的敏感性,增加细胞凋亡.
关键词： siRNA Survivin基因 放射敏感性 γ射线 Hela细胞 -
地西他滨诱导宫颈癌细胞凋亡分子机制探讨
目的 地西他滨(decitabine, DAC)具有较好的抗肿瘤活性,其分子机制与DNA去甲基化有关,本研究通过DAC对腺瘤性结肠息肉病(adenomatous polyposiscoli,APC)基因的表达水平和去甲基化的影响,探讨DAC诱导宫颈腺癌Hela细胞凋亡分子机制.方法 不同浓度的DAC作用于宫颈腺癌Hela细胞24、36和48 h,MTT法检测对宫颈癌细胞的增殖抑制作用,观察DAC对Hela细胞增殖的浓度依赖效应和时间依赖效应.流式细胞术检测DAC对宫颈腺癌Hela细胞凋亡和细胞周期的影响.在DAC作用于宫颈腺癌Hela细胞前后,通过甲基化特异性PCR(Methylation specific PCR, MSP)检测APC基因的甲基化状态;RT-PCR法检测APC基因mRNA表达水平;蛋白质印迹法检测APC蛋白、β-catenin蛋白在胞内及核内表达的变化.结果 DAC对宫颈腺癌Hela细胞增殖抑制具有浓度依赖效应和时间依赖效应,Hela细胞半数抑制浓度(IC50) 24、36、48 h 分别为 28.23、7.65和5.64 μmol/L.DAC处理后的宫颈腺癌Hela细胞的凋亡率为(73.82±0.11)%,明显高于对照组的(12.41±0.24)%,P<0.001.DAC处理Hela细胞后,S期细胞比例(47.82±2.57)%和G2期细胞比例(30.87±2.28)%显著高于空白对照组的S期细胞比例(24.08±0.71)%和G2期细胞比例(2.52±0.84)%,P<0.001.DAC处理后,APC基因启动子区域去甲基化状态明显增高,APC mRNA表达量上升,处理前后比较差异有统计学意义,P<0.05.DAC处理后,胞内APC蛋白表达上调,而胞内和核内的β-catenin蛋白表达下调,差异均有统计学意义,P<0.05.结论 DAC可通过对APC基因的去甲基化作用,上调胞内APC蛋白表达,下调胞内和核内β-catenin表达,诱导宫颈癌细胞凋亡.
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硫化砷对人宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡及COX-2表达的作用
目的:体外研究中药雄黄的主要成分硫化砷(As4S4)对子宫颈癌HeLa细胞的增殖抑制和诱导凋亡的作用及与环氧合酶-2(cyclooxygenase-2, COX-2)表达的关系.方法:以不同浓度的As4S4 (7.5～60 mg/L),分12～60 h 5个时间点处理HeLa细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖抑制率;DNA梯状电泳检测凋亡的发生; Western blot检测COX-2蛋白的表达;放射免疫法检测细胞前列腺素E2(prostaglandin E2, PGE2)释放水平.结果: As4S4可抑制HeLa细胞增殖,作用呈明显的时效和量效关系,P＜0.01;As4S4可诱导HeLa细胞凋亡,DNA电泳呈梯状条带;As4S4可明显抑制COX-2的表达,P＜0.01,并呈浓度依赖性;As4S4明显抑制HeLa细胞PGE2释放水平,其值分别为(70.56±2.03)、(48.58±2.28)、(29.25±1.57)和(18.02±1.04) μg/L,与对照组(83.15±1.01) μg/L比较差异有统计学意义,P＜0.01.结论: As4S4 体外对HeLa细胞具有增殖抑制和促进凋亡作用,其机制可能与抑制COX-2蛋白表达有关.
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姜黄素抑制HeLa细胞诱导的血管内皮细胞增殖作用及其机制研究
目的:研究姜黄素对HeLa细胞诱导的血管内皮细胞增殖的抑制作用及其机制.方法:采用台盼蓝排染法计数人脐静脉内皮细胞系ECV304细胞,MTT法测定不同浓度姜黄素对ECV304细胞和HeLa细胞诱导的ECV304细胞增殖的抑制,采用RT-PCR和Western blot检测40 μmol/L姜黄素作用于HeLa细胞诱导的血管内皮细胞4、8、16和24 h后,血管内皮生长因子(VEGF)及其受体VEGFR2(KDR)基因及蛋白的表达.结果:姜黄素直接作用于ECV304细胞,其细胞计数较对照组显著减少(P<0.05),并呈浓度依赖性.MTT法测得不同浓度姜黄素作用后,可产生显著的细胞增殖抑制作用,48 h体外半数抑制浓度(IC50)值为(38.4±0.031) μmol/L.随着姜黄素浓度的增加,其时ECV304细胞和HeLa细胞诱导的ECV304细胞的增殖有明显的抑制作用,P值分别为0.000 0和0.000 1.姜黄素作用于HeLa细胞诱导的血管内皮细胞4、8、16和24 h后,能明显下调VEGF与KDR的mRNA和蛋白表达.结论:姜黄素能直接抑制血管内皮细胞的增殖,对HeLa细胞诱导的血管内皮细胞的增殖也有抑制作用.此作用可能是通过押制VEGF及其受体KDR的mRNA和蛋白表达来实现的.
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NF-κB抑制对宫颈癌HeLa细胞放疗敏感性影响的观察
目的:探讨抑制核转录因子κB(NF-κB)表达对宫颈癌HeLa细胞放疗敏感性的影响.方法:通过对HeLa细胞加入NF-κB的抑制剂100,umol/LPDTC或2umol/L PS-341,均作用2 h来抑制NF-kB的表达.将HeLa细胞分为PDTC组、PS-341组及对照组加入等量生理盐水.各组均给予直线加速器照射,剂量分别为0、2、4和6 Gy.用蛋白质印迹法来观察细胞核内NF-κB含量的变化,用TUNEL法来检测细胞的凋亡,用MTT法检测细胞增殖.结果:辐射可以使HeLa细胞内NF-κB的表达增多,PDTC及PS-341均可以抑制由射线介导NF-κB的增加.在0 Gy条件下对照组与PDTC组及PS-341组HeLa细胞的凋亡指数分别为3%、12%和15%,两实验组的凋亡指数均高于对照组,P<0.01;6 Gy条件下实验组细胞的凋亡指数都高于同条件下对照组,P<0.01.结论:在宫颈癌HeLa细胞中,PDTC及PS-341均可抑制NF-κB的表达从而增加了由射线介导的细胞凋亡,增加HeLa细胞的放疗敏感性.
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多柔比星对人宫颈癌Hela细胞凋亡的形态学观察
目的:从形态学方面探讨多柔比星影响Hela细胞生长的作用机制.方法:采用MTT法观察多柔比星对人宫颈癌Hela细胞生长的影响,并采用倒置显微镜、荧光显微镜、透射电镜和激光扫描共聚焦显微镜观察Hela细胞形态变化.结果:MTT实验发现,2 mg/L的多柔比星对Hela细胞的生长有显著的抑制作用,培养4 d后,其生长抑制率达到55.51%,而对L929细胞的生长抑制率仅为18.51%.形态学观察结果表明,多柔比星作用4 d后的Hela细胞呈典型的凋亡形态学改变.结论:2 mg/L多柔比星是通过诱导Hela细胞凋亡而抑制其生长的.
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X射线照射对HeLa细胞TP和D PD酶表达影响的研究
目的:探讨X射线照射对宫颈腺癌HeLa细胞TP和DPD酶表达的影响,为卡培他滨与放射联合用于宫颈腺癌的治疗提供依据.方法:宫颈腺癌HeLa细胞体外培养,分别行0、2和6 Gy X射线照射,0 Gy为对照组.之后第1、3、5、7和9天收集细胞,采用ELISA及RT-PCR的方法对照射前后HeLa细胞TP和DPD酶的表达进行测定.结果:HeLa细胞被照射后,与对照组相比,2和6 Gy放射组的TP酶蛋白水平均有明显提高,放射后第3天都升高达高峰分别为(1.110±0.115)和(0.845±0.135)ng/mg蛋白,差异有统计学意义,P值均为0.000.放射后HeLa细胞TP酶的mRNA表达,在照射后第3天也迅速升高达到高峰分别为(2.098±0.116)和(1.841±0.104),明显高于未经照射的对照组(0.362±0.059),P值均为0.000.其升高时间与ELISA测定的TP酶蛋白水平的变化情况基本相吻合.而HeLa细胞DPD酶mRNA的表达,在放射组(1.367±0.539、1.211±0.215)与对照组(1.156±0.221)之间显示差异无统计学意义,P=0.085.结论:放射后HeLa细胞TP/DPD比值升高,能增加其对卡培他滨的敏感性,卡培他滨与放疗联合应用于宫颈腺癌的治疗可能获得较好疗效.
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藏红花素诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡及其作用机制
目的:研究藏红花素对HeLa细胞的促凋亡作用和机制.方法:设置0、02、0.4及0.8 mmol/L 4个浓度梯度,MTT法分析不同浓度藏红花素对HeLa细胞增殖的影响;设置空白阴性对照及秋水仙素(10 μg/L)阳性对照,向HeLa细胞培养物分别加入0.4和0.8 mmol/L的藏红花素,培养48 h后用PI/AnnexinⅤ双染法分析其凋亡情况;1.6 mmol/L藏红花素作用于HeLa细胞72 h后,蛋白质印迹法检测Caspase-3的切割.结果:MTT实验分析显示,在0、0.2、0.4及0.8 mmol/L浓度下HeLa细胞存活率分别为1、0.964、0.796和0.586.藏红花素显著地抑制HeLa细胞生长,P<0.05;各浓度组间均差异有统计学意义,P<0.05.PI/Annexin V双染法、流式细胞仪检测显示,阴性对照组、10μg/L秋水仙素阳性对照组、0.4及0.8 mmol/L藏红花素处理组的细胞凋亡率分别为3.64%、15.99%、4.86%和9.28%,藏红花素促进HeLa细胞凋亡.蛋白质印迹法检测显示,藏红花素促进HeLa细胞Caspase-3切割.结论:藏红花素可明显地抑制HeLa细胞生长,并通过增加HeLa细胞Caspase-3切割促进其凋亡.
关键词： 藏红花苦素 Hela细胞 细胞凋亡 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶
