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三氯异氰尿酸对SD大鼠睾丸生精细胞凋亡相关蛋白表达的影响
目的 观察凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax、Fas/FasL、Caspase-3在三氯异氰尿酸(TCCA)染毒大鼠睾丸中的表达,探讨其在TCCA诱导生精细胞的凋亡中发挥的作用.方法 30只SPF级别雄性SD大鼠分为3组,每组10只.按0、275和550 mg/kg剂量隔日经口灌胃10周后,处死大鼠,免疫组织化学法检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax、Fas/FasL、Caspase-3的表达,实时荧光定量PCR法检测Bcl-2 mRNA和Fas mRNA的表达水平.结果 TCCA染毒组Bcl-2、Bax蛋白表达降低,Bcl-2/Bax的比值降低,Fas、FasL蛋白表达增加,Caspase-3蛋白表达增加,同时睾丸中Bcl-2 mRNA和Fas mRNA表达水平升高.结论 Bcl-2/Bax、Fas/FasL介导的2种凋亡途径在TCCA诱导的雄性生殖毒性中均发挥一定作用.
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蒸制轮叶党参对顺铂致小鼠肾损伤的保护作用及机制
目的 探讨蒸制轮叶党参(steamed codonopsis lanceolata,SCL)对顺铂(Cisplatin)致小鼠肾损伤的保护作用及机制.方法 雄性ICR小鼠一次性腹腔注射20 mg/kg顺铂诱发急性肾损伤模型,观察SCL给药后的改善作用.相关试剂盒测定小鼠血清中肌酐(CRE)、尿素氮(BUN)、炎症因子(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)和肾组织中丙二醛(MDA)的含量.苏木素-伊红(HE)和Hoechst 33258染色观察肾组织病理学改变.免疫组化法检测肾组织中相关凋亡蛋白的表达.结果 与模型组比较,SCL均能不同程度的降低血清中CRE、BUN、TNF-α、IL-1β及组织中MDA的水平(P＜0.05),改善顺铂所致的炎症反应,同时SCL能够下调肾组织中Bax,上调Bcl-2的蛋白表达水平.结论 SCL对顺铂致肾损伤具有保护作用,其主要部分通过减少炎症反应,抑制脂质过氧化及抗细胞凋亡而实现的.
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镧对大鼠原代星形胶质细胞Bax和Bcl-2表达的影响
目的 研究不同剂量氯化镧( lanthanum chloride,LaCl3)对大鼠原代星形胶质细胞凋亡以及促凋亡基因Bax、抑凋亡基因Bcl-2表达的影响.方法 原代培养的大鼠大脑皮质星形胶质细胞经0、0.125、0.25、0.5和1.0 mmol/LLaCl3处理12和24h后,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞存活率,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率,采用RT-PCR法检测细胞Bax和Bcl-2 mRNA表达水平.结果 0.25、0.5和1.0 mmol/L LaCl3染毒12、24h均显著降低大鼠原代星形胶质细胞存活率,显著增加大鼠原代星形胶质细胞凋亡率,具有一定的剂量-反应关系.0.25、0.5和1.0 mmol/LLaCl3染毒12、24 h组大鼠原代星形胶质细胞的Bax mRNA表达水平显著高于对照组,且随染毒剂量增加而增加.此外,0.25 mmol/L LaCl3染毒24h和0.5、1.0 mmol/L LaCl3染毒12、24h组大鼠原代星形胶质细胞的Bcl-2 mRNA表达水平显著低于对照组,且随染毒剂量增加而下降.结论 LaCl3对大鼠原代星形胶质细胞的毒性作用可能与促凋亡基因Bax表达升高、抑凋亡基因Bcl-2表达下降而致凋亡过度有关.
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乙醇对小鼠胰岛瘤细胞凋亡的影响及其分子机制
目的观察乙醇对小鼠胰岛瘤细胞(NIT-1细胞)凋亡的影响及Bcl-2、Bax和Caspase-3表达的变化,探讨乙醇诱发小鼠胰岛瘤细胞凋亡的分子机制.方法体外培养的小鼠NIT-1细胞,不同剂量乙醇(0、50、100、200、400mmol/L)作用24h,单细胞凝胶电泳实验(SCGE),AnnexinV/PI双标记法流式细胞仪检测细胞凋亡情况.不同剂量的乙醇作用6、12、24 h,RT-PCR法检测与凋亡有关的基因Bcl-2,Bax和Caspase-3 mRNA表达水平.结果SCGE实验结果显示,低剂量乙醇损伤不明显,高剂量(200、400 mmol/L)组DNA迁移率、DNA损伤程度分级、DNA平均迁移长度与对照组比较,差异均有显著性.Annexin V/PI检测结果表明,200、400mmol/L乙醇组NIT-1细胞凋亡率升高,与对照组相比,差异有非常显著性.乙醇作用6 h,随着乙醇剂量增加,Bcl-2/Bax mRNA表达先升高后降低;乙醇作用12 h,400 mmol/L剂量Bcl-2/Bax比值下降;作用24 h,各剂量组Bcl-2/Bax比值均下降.Caspase-3 mRNA表达水平与乙醇剂量和作用时间相关.400 mmol/L剂量组作用24 h,Caspase-3 mRNA表达增加.结论乙醇可诱发体外培养的NIT-1细胞凋亡,凋亡的发生很可能与Bcl-2家族和Caspase-3激活有关.
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锰对PC12细胞毒性作用的研究
目的研究不同剂量的锰(Mn)对PC12细胞生长增殖的影响.方法体外培养大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞,以100～900 μmol/L MnCl2染毒后进行四唑盐比色实验(MTT)观察MnCl2对细胞的抑制作用,TUNEL法观察细胞凋亡,Western blot检测α-共核蛋白(α-SYN)表达情况.结果MTT结果显示100～900 μmol/L MnCl2对细胞的生长增殖有显著的抑制作用(P＜0.01).TUNEL染色结果显示MnCl2处理组TUNEL阳性细胞增多(P＜0.05).Western blot结果显示与对照组相比,100、300、500μmol/L MnCl2组α-SYN表达水平分别升高1.8、4.5、7.3倍(P＜0.05).结论一定剂量的MnCl2对PCl2细胞的生长增殖有明显的抑制作用,这一作用可能是通过诱导胞内α-SYN表达增高实现的.提示预防、阻止α-SYN在细胞中的聚集可能会降低Mn对多巴胺能神经细胞的损伤.
关键词： MnCl2 大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞 凋亡 α-共核蛋白 -
C2-神经酰胺对线粒体膜间隙蛋白释放影响研究
目的 探讨外源性C2-神经酰胺对线粒体膜间隙蛋白释放的影响.方法 12.5、25和50μmol/L C2-神经酰胺作用人结肠癌HT-29细胞24 h,采用Mitochondrial/Cytosol Fractionation试剂盒分离细胞线粒体和细胞液,应用Western Blotting方法检测线粒体和细胞液中Cyt c、Smac和HtrA2蛋白表达水平.结果 C2-神经酰胺作用细胞后,Cyt c、Smae和HtrA2总蛋白的表达水平未见明显改变,但随着C2-神经酰胺浓度增加,Cyt c、Smac和HtrA2从线粒体释放入细胞液中的水平逐渐增加,具有剂量-效应关系.Caspases抑制剂存在下,50 μrnol/L C2-神经酰胺仍能使Cyt c和HtrA2从线粒体释放入胞液中,但Smac却不能释放.结论 C2-神经酰胺能通过Caspases依赖和非依赖的方式促进线粒体膜间隙蛋白的释放入细胞液,诱导细胞凋亡作用.
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内质网在铝致神经细胞凋亡过程中的作用
目的 探讨内质网在铝致神经细胞凋亡过程中的作用.方法 体外培养0～3 d新生大鼠的神经元细胞并用不同剂量氯化铝(AlCl3)染毒.(1)在光学显微镜和电子显微镜下观察神经元的凋亡和内质网的形态学改变;(2)测定凋亡相关蛋白Caspase和Ctyc在内质网的含量变化.结果 (1)光学显微镜和电子显微镜形态学观察发现了凋亡的典型形态学改变,电子显微镜下可观察到内质网的变形肿胀及脱颗粒现象.(2)凋亡相关蛋白Caspase的含量随染毒剂量的加大而上升,二者具有相关性;在染毒后可检测到Ctyc由内质网释放到胞浆的过程.结论 铝能诱导神经元凋亡,内质网在凋亡过程中发挥了重要的调控作用.
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番茄红素对人前列腺癌细胞(DU145)生长抑制的离体和整体水平研究
目的 研究番茄红素对人前列腺癌细胞DU145的影响。方法 体外培养的人前列腺癌细胞DU145经番茄红素作用后用苔盼蓝染色进行活细胞计数，绘制生长曲线并计算抑制率；应用流式细胞仪分析番茄红素对DU145细胞周期和凋亡的影响。制作裸鼠人前列腺癌模型，观察番茄红素在整体动物上的作用。结果 番茄红素可以明显抑制DU145细胞的生长，且呈剂量-效应和时间-效应关系。10、20、40μmol/L处理细胞7 d后，细胞增长的抑制率分别为10.76％、92.90％、99.11％(P＜0.01)。裸鼠人前列腺癌模型上的研究显示，6％番茄红素油树脂可显著抑制腺瘤的生长，300 mg/kg剂量组腺癌抑制率可达到75.76％(P＜0.05)。用经番茄红素处理过的细胞致瘤力消失。流式细胞仪分析显示番茄红素可影响该细胞周期并引起细胞凋亡，凋亡率高达42.42％。结论 番茄红素可以在离体细胞和整体动物水平明显抑制雄激素非依赖型人前列腺癌DU 145，其抑制机制可能是通过影响人前列腺癌细胞的生长周期和诱导其凋亡而实现。
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IRE1信号通路在热诱导睾丸生殖细胞凋亡中的作用
目的 探讨内质网应激IRE1信号通路在急性热应激诱导睾丸生殖细胞凋亡中的作用.方法 24只成年ICR雄性小鼠,随机分为4组.将热处理组小鼠身体的下1/3部分(包括阴囊、后腿和尾巴)浸于43℃恒温水浴中15 min,于热处理后0.5、2和6h取睾丸组织.将对照组小鼠下腹部浸入22℃水浴15 min,6h后取睾丸组.采用TUNEL法检测睾丸组织生殖细胞凋亡;用半定量RT-PCR技术检测uXBP-1/sXBP-1 mRNA表达;用Western blot检测睾丸总蛋白p-JNK表达.结果 单次热应激能够明显诱导小鼠睾丸生殖细胞凋亡.与对照组相比,热处理能够明显降低睾丸组织uXBP-1/sXBP-1 mRNA的比值,以热处理后0.5和2h为显著,而随着时间的延长,又逐渐恢复正常.热应激明显诱导睾丸JNK(另一个IRE1的下游分子)磷酸化水平.结论 单次热处理能激活睾丸组织内质网应激IRE1通路,在早期可能激活IRE1-XBP-1通路保护睾丸组织对抗热应激,而后期可能通过激活IRE1-JNK通路诱导睾丸生殖细胞凋亡.
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甲醛对HepG2细胞凋亡的影响
目的 探讨甲醛对HepG2细胞凋亡的影响.方法 以0.004、0.02、0.1、0.5、2.5、12.5 mmol/L的甲醛(formaldehyde)分别处理人肝癌HepG2细胞24和48 h,采用MTT法检测细胞活性.分别以0.004、0.02、0.1 mmol/L的甲醛处理人肝癌HepG2细胞24和48 h,采用Western blot法检测p53、mdm2、Caspase-3、RIP1、RIP3和NF-B的蛋白表达水平.结果 与阴性对照组相比较,0.5 ～ 12.5 mmol/L FA染毒24和48 h可显著降低HepG2细胞活性(P＜0.05);染毒24 h后Caspase-3蛋白表达降低(P＜0.05);p53、p-p53、mdm2、RIP3表达水平在染毒24和48 h后均明显降低(P＜0.05);cleaved RIP1表达水平在0.1 mmol/L剂量染毒24和48 h后表达增加(P＜0.05)上述变化均有统计学意义;染毒24和48 h后NF-κB蛋白表达无明显变化.结论 甲醛可能是通过死亡受体途径而不是线粒体途径引起肝细胞凋亡.
关键词： 甲醛 HepG2细胞 凋亡 受体相互作用蛋白激酶1 -
新型大气污染物MMT诱导人SK-N-SH细胞凋亡的分子机制
目的 研究甲基环戊二烯羰基锰(MMT)诱导人SK-N-SH细胞凋亡的分子机制.方法 MMT诱导SK-N-SH细胞后,MTT法检测细胞存活率,分光光度法检测活性氧(ROS)生成;化学发光法检测Caspase-3活性;Western blot法检测p38 MAPK磷酸化程度.结果 在MMT诱导SK-N-SH细胞过程中,细胞ROS生成量为正常组的5.2倍(P＜0.01);抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)及二硫苏糖醇(DTT)可有效抑制细胞ROS生成(P＜0.01).提高细胞存活率(P＜0.01);在这一过程中,Capase-3活性明显增强,为对照组的3.01倍(P＜0.01);同时p38 MAPK磷酸化程度加强;p38 MAPK特异性抑制剂SB203580可提高细胞存活率(P＜0.05),抑制Caspase-3的活性(P＜0.01).结论 MMT诱导的SK-N-SH细胞凋亡与ROS升高,激活Caspase-3有关,这一过程有p38 MAPK相关信号转导途径参与.
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氯化铝对大鼠皮层神经元凋亡及bcl-2、bax基因表达的影响
目的探讨氯化铝(AlCl3)对大鼠皮层神经元凋亡的诱导作用及对bcl-2、bax基因表达的影响.方法体外原代无血清培养至第7天的大鼠皮层神经元,实验组的培养液中加入A1C13(终浓度分别为10、100、1000μmol/L),对照组的培养液中加入等体积分数为0.9%的生理盐水,培养48 h后,用原位末端标记法(TUNEL)测定其细胞凋亡率;培养24h后,用RT-PCR法检测bcl-2、bax基因的表达.结果各染铝组大鼠皮层神经元凋亡率明显升高,与对照组相比,差异有显著性(P＜0.05),并具有明显的剂量-反应关系;bcl-2基因表达明显下降,bax基因表达明显升高,bcl-2/bax逐渐下降,与对照组相比,差异有显著性,也具有明显的剂量-反应关系.相关分析表明,大鼠皮层神经元凋亡率与bcl-2基因表达呈负相关,与bax基因表达呈正相关,而与bcl-2/bax呈负相关(P＜0.01).结论铝可以诱导大鼠皮层神经元凋亡,其机制可能与bcl-2基因表达下调,bax基因表达上调以及bcl-2/bax下降有关.
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醋酸铜诱导Hela细胞的凋亡
目的 研究醋酸铜对人宫颈癌细胞(Hela细胞)存活,生长,周期和凋亡的影响及Bcl-2,Fas基因表达的变化,探讨铜离子引起细胞凋亡的分子机制.方法 体外培养Hela细胞,不同剂量醋酸铜(0～40 μg/ml)作用72 h,苔盼蓝拒染法测细胞存活率,噻唑蓝法(MTT)测醋酸铜对细胞生长的抑制作用.不同剂量的醋酸铜(0～60 μg/ml)作用36 h,碘丙啶(PI)单染测铜离子对细胞周期的影响;作用24、36和48 h,Annexin V/PI双染法测细胞凋亡;作用24 h,RT-PCR法检测与凋亡有关基因Bcl-2,Fas表达的变化.结果 苔盼蓝拒染法显示,随着浓度醋酸铜的增加,细胞存活率降低;MTT法显示,醋酸铜对细胞生长有强烈的抑制作用.PI单染证明铜离子对细胞周期无影响.Annexin V/PI双染法的结果显示,随着醋酸铜浓度及作用时间的增加,细胞凋亡率显著升高.基因表达分析显示Bcl-2表达量随铜离子增加而降低,而Fas与Bcl-2相反.结论 醋酸铜降低Hela细胞的存活率,抑制Hela细胞的生长,这主要是由细胞凋亡引起的.凋亡的发生可能与Bcl-2 mRNA水平的下降及Fas mRNA水平的升高有关.
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镍染毒大鼠睾丸生精细胞凋亡及其对Bcl-2和Bax表达的影响
目的 探讨硫酸镍诱导大鼠睾丸生精细胞凋亡的类型及其对生精细胞Bcl-2、Bax蛋白表达和雌二醇水平的影响.方法 健康性成熟Wistar雄性大鼠32只,随机分为4组,正常对照组,硫酸镍1.25、2.5、5.0 mg/kg 3个剂量组.腹腔注射染毒,1次/d,连续30 d.采用原位缺口末端标记法(TUNEL)检测睾丸生精细胞凋亡;免疫组化SABC法检测生精细胞Bcl-2和Bax蛋白表达;放射免疫法检测血清雌二醇(E2)水平.结果 与对照组比较,各剂量组大鼠睾丸生精细胞凋亡增多(P＜0.05),且凋亡细胞主要是生精早期和晚期阶段的精原细胞和精母细胞.各剂量组大鼠生精细胞Bcl-2阳性表达减少而Bax阳性表达增多,且血清E2水平降低(P＜0.05).结论 硫酸镍可诱导大鼠睾丸精原细胞和精母细胞凋亡,其机制可能与生精细胞内Bcl-2蛋白表达下调,Bax蛋白表达上调以及雌二醇水平降低有关.
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合欢皮总皂苷所致小鼠肾毒性及其机制的研究
目的 研究合欢皮总皂苷对小鼠肾毒性及其机制.方法 采用一次性灌胃致毒剂量总皂苷,观察14 d时,合欢皮总皂苷对小鼠肾毒性表现.苏木素-伊红(HE)染色观察病理形态的变化,生化法测定其对肾SOD和GSH-Px的影响,末端标记法检测肾细胞凋亡,免疫组织化学法检测肾组织Bcl-2、Bax、COX-1及COX-2基因蛋白的表达.结果 合欢皮总皂苷口服致毒剂量可引起肾组织形态的变化,降低肾SOD和GSH-Px的活性;肾小球内皮细胞凋亡数目增多,Bcl-2表达下降,COX-2表达增加;肾小管COX-1表达增加.结论 致毒量合欢皮总皂苷对肾有一定毒性,促使细胞凋亡,可能与总皂苷降低肾的抗氧化能力和改变凋亡相关基因的表达、升高COX-1的表达有关.
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BMH-21诱导人肝癌BEL-7402细胞凋亡的研究
目的 探讨核仁应激对人肝癌BEL-7402细胞的凋亡诱导作用.方法 以人肝癌BEL-7402细胞为研究对象,依据给药剂量实验分为4组:对照组(0μmol/L),1、2和4μmol/L组.MTT检测BEL-7402细胞生存率,共聚焦显微镜观察核仁应激标志蛋白变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率,蛋白印迹检测凋亡相关蛋白表达.结果 MTT结果表明BMH-21对BEL-7402细胞生长抑制作用呈剂量依赖性,共聚焦显微镜观察发现BMH-21诱导BEL-7402细胞核仁应激标志蛋白发生变化,流式细胞仪检测结果表明BMH-21以剂量依赖性的方式诱导细胞凋亡,蛋白印迹结果显示凋亡相关蛋白表达明显增加(P＜0.05).结论 BMH-21诱导人肝癌BEL-7402细胞核仁应激,导致细胞凋亡的发生.
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Bcl-2 siRNA联合奥沙利铂对HT-29结肠癌细胞系凋亡的影响
目的 探讨bcl-2 siRNA联合奥沙利铂对结肠癌细胞HT-29凋亡的影响及相关作用机制.方法 将化学合成的针对bcl-2的siRNA序列转染至HT-29细胞,将HT-29细胞分为5组:空白对照组、阴性对照组、干扰组、奥沙利铂组、联合组(干扰+奥沙利铂).采用MTT比色法、Western blot、流式细胞术和分光光度法分别检测HT-29细胞增殖、Bcl-2和Bax蛋白表达、细胞凋亡及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶家族成员Caspase 9和Caspase 3的活化程度.结果 Bcl-2siRNA转染后,相对于奥沙利铂处理组,联合组细胞死亡率明显升高(P ＜0.01);Bax蛋白表达、Caspase 9和Caspase 3的活化程度显著升高(P＜0.01).结论 Bcl-2靶向RNA干扰联合奥沙利铂处理通过调节促凋亡蛋白表达从而促进了细胞凋亡,bcl-2可作为结肠癌基因治疗的后选新靶点.
关键词： HT-29细胞 Bcl-2 siRNA 奥沙利铂 凋亡 -
死亡受体介导的信号传导及调控
凋亡，又称程序性细胞死亡，是机体固有和基本的生物过程，对维持机体的正常发育和稳定起重要作用。一些细胞表面有被称为死亡受体(Death receptors,DR)的特异性感受器，该死亡受体能识别外来死亡信号，并迅速启动细胞凋亡机制[1]。由于凋亡失控可引起多种疾病，如肿瘤、神经退行性病变和获得性免疫缺陷综合征[2，3]，故对死亡受体的理解有助于认识凋亡的生理和病理性意义。现就死亡受体的特性、介导的信号传导及调控的新进展作一综述。
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镉致肾细胞凋亡机制的研究进展及防治
镉是环境中常见的对人体毒性很强的重金属污染物,被美国毒物和疾病管理委员会(The Agency for Toxic Substances and Disease Registry,ATSDR)列为第6位危及人体健康的有毒物质.人体主要通过食物、饮水、吸烟和吸入含镉的粉尘而使镉在体内积累,不易排出,其半衰期为10～30年,可蓄积50年之久[1],镉对人体肺部、肝脏、肾脏、心血管系统、骨骼、泌尿生殖系统、免疫系统、神经系统(听觉系统)等都会造成损害.肾脏是镉重要的蓄积部位和主要靶器官[2],一般认为镉所致的肾损伤不可逆[3].我国是重金属丰产国家,镉污染现象相当严重,因此,研究镉对肾细胞凋亡的机制及其保护因素具有重要意义.
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新型5-氟尿嘧啶衍生物TBF抗肿瘤活性及其作用机制
目的研究新型5-氟尿嘧啶衍生物TBF抗肿瘤活性并探讨其抗肿瘤作用机制.方法采用MIT比色法检测TBF体外对不同肿瘤细胞生长的抑制作用,改进寇式法计算TBF小鼠经口急性毒性,采用小鼠肿瘤模型评价TBF体内抗肿瘤活性,流式细胞仪检测TBF诱导SMMC-7721细胞凋亡和细胞周期时相的改变.
