香兰素衍生物对细胞增殖和辐射敏感性的影响

目的香兰素是天然的食品添加剂,是已知对DNA修复蛋白DNA-PKcs具有一定抑制.香兰素0.5 mmol/L时有显著的抑制细胞增值的作用.本研究旨在从香兰素衍生物中筛选抗癌与辐射增敏药,且研究药物增强辐射敏感性的机制.

汉防己甲素诱导大鼠原代肝细胞线粒体途径的凋亡:依赖于caspase和由Endonuclease G(Endo G)介导的不依赖于caspase的凋亡途径

目的汉防己甲素(Tetrandrine,Tet)具有广泛的药理学作用,但其肝毒性机制尚不明确.本实验主要探讨了汉防己甲素诱导的大鼠原代肝细胞线粒体功能紊乱和经由线粒体途径的细胞凋亡.

P44/42MAPK及P38MAPK介导氯化镉致肾上腺皮质细胞凋亡的作用

目的 观察氯化镉对豚鼠肾上腺皮质细胞凋亡的影响，并探讨P44/42MAPK及P38MAPK在此过程中的可能作用。

丙烯腈对大鼠脑组织形态学及神经细胞凋亡的影响

目的探讨丙烯腈对神经细胞凋亡的影响.方法采用光镜、电镜观察、DNA电泳、免疫组织化学方法和TUNEL技术,研究丙烯腈对大鼠脑组织病理形态学和神经细胞凋亡的影响.

甲基汞对小鼠睾丸生殖细胞凋亡的作用机制

目的研究甲基汞对小鼠睾丸生殖细胞凋亡及其作用机制.方法采用原位末端标记(TUNEL)和免疫组织化学的方法研究甲基汞对小鼠睾丸生殖凋亡及其凋亡基因的表达情况.

二巯基丁二酸钠对大鼠芥子气中毒的疗效观察/硫芥中毒淋巴细胞NO和NOS的变化/硫芥中毒淋巴细胞的凋亡和坏死/基因重组碱性成纤维细胞生长因子促创面的愈合/二巯基丁二酸静脉注射针剂的制备

α-生育酚琥珀酸酯诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡及其作用的分子形式

目的探讨α-生育酚琥珀酸酯(α-TOS)诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡时发挥作用的分子形式.方法在体外培养的SGC-7901细胞中,分别加入5、10和20μgml的α-TOS,以20μg/ml α-生育酚(α-TOH)和1μl/ml乙醇为对照培养48小时后采用联咪二苯吲哚(DAPI)染色,荧光显微镜下观察细胞形态,琼脂糖凝胶电泳检测DNA降解片段,并用HPLC法检测细胞内和培养液中α-TOS和α-TOH含量.结果细胞经DAPI染色发现,10μg/ml和20μg/ml α-TOS处理组细胞核染色体浓集,伴有细胞核固缩和核碎片形成.琼脂糖凝胶电泳检测发现,上述2组细胞DNA出现梯形分子条带.在α-TOS处理的细胞内和培养液中HPLC仅检测到α-TOS,未发现其分解产物α-TOH.结论α-TOS能诱导SGC-7901细胞凋亡,且是以不分解的整体分子形式发挥其诱导凋亡作用,与α-TOH的作用无关.

抑制野生型p53诱导的蛋白磷酸酶1提高肺腺癌细胞对砷剂的敏感性

目的 研究抑制野生型p53诱导的蛋白磷酸酶1(wild-type p53-induced phosphatase 1,WiP1)提高肺腺癌细胞对砷剂的敏感性及其分子机制.方法 设计并合成WIP1编码基因的靶向siRNA,以Lipofectimient 2000转染入肺腺癌A549细胞,从而抑制WIP1蛋白的表达.运用Western-blot检测抑制WIP1对三氧化二砷(As2O3)诱导的P53磷酸化蛋白及其下游效应因子的影响;采用流式细胞术检测抑制WIP1后细胞凋亡情况;以噻唑蓝(MTT)法检测抑制WIP1后细胞的存活率.结果 以siRNA技术成功将A549细胞中WIP1 mRNA和蛋白表达水平均抑制70％左右.相同浓度As2O3 (5 ～ 40 μmol/L)处理后,WIP1表达抑制组细胞中P53 serl5表达低于对照组,而P53 ser46表达显著高于对照组.此外,相同浓度As2O3(10 ～40 μmol/L)处理后,WIP1表达抑制组中P53 ser15下游效应因子-P53上调凋亡诱导蛋白(P53 up-regulated modulator of apoptosis,PUMA)的表达水平显著低于对照组,而P53ser46下游效应因子——细胞周期调节蛋白P21的表达显著高于对照组.与之对应的是,相同剂量As2 O3(5～ 40 μmol/L)作用下,WIP1表达抑制组细胞的凋亡率和细胞死亡率均显著高于对照组.结论 抑制肺腺癌细胞中WIP1的表达可通过促进P53磷酸化进程提高砷引发肺腺癌细胞凋亡的效率.

核因子-kB、p53及Bcl-2在铅诱导PC12细胞凋亡中的作用

目的 探讨核因子kB(NF-KB),p53及Bcl-2在铅诱导PC12细胞凋亡中的作用.方法 应用细胞培养、流式细胞术、RT-PCR、Western Blot的方法分析NF-kB、p53、Bel-2基因的表达情况,研究醋酸铅诱导PC12细胞凋亡及其分子机理.结果 PC12细胞经不同浓度醋酸铅(100、200和400μmol/L)处理24h后,用流式细胞仪检测其凋亡率(n=3),铅组凋亡率明显高于对照组,改变呈剂量依赖性.差异有显著性(P<0.05).RT-PCR结果显示NF-kB p65 mRNA、p53 mRNA转录水平随铅剂量升高而升高(P<0.05),两基因表达的改变呈剂量依赖性.Western Blot结果显示,表明随着铅浓度的增加,Bcl-2蛋白表达逐渐降低.结论 铅诱导PC12细胞凋亡的这种效应可能与增强NF-kB及D53基因的活性、降低Bcl-2基因的活性有关.

植酸对人胃癌细胞的生长抑制和凋亡诱导作用的研究

目的 了解植酸对人胃癌SGC-7901细胞的生长抑制和诱导凋亡作用.方法 MTT法检测植酸在体外对人胃癌SGC-7901细胞的生长抑制作用;AO/EB荧光染色和DNA Ladder实验检测细胞凋亡;免疫组化法检测凋亡调控基因P53蛋白的表达.结果 植酸在体外可以明显抑制人胃癌细胞的生长,并诱导细胞发生凋亡.免疫组化实验结果表明,植酸可以抑制SGC-7901细胞中凋亡相关P53蛋白的表达.结论 植酸在体外可以抑制人胃癌SGC-7901细胞的生长并诱导细胞发生凋亡,且对于P53蛋白表达的下调作用可能是其诱导细胞凋亡的机制之一.

染氟大鼠生精细胞凋亡和血清雌二醇水平的关系

目的探讨染氟大鼠生精细胞凋亡和血清雌二醇水平的关系.方法雄性Wistar大鼠30只,随机分为6组,即对照28d组、低剂量染毒28d组、高剂量染毒28d组、对照38d组、低剂量染毒38d组和高剂量染毒38d组.通过腹腔注射NaF溶液的方法建立氟中毒模型,采用酸浸-氟离子选择电极法测定睾丸氟含量,放射免疫的方法检测血清雌二醇水平,采用TUNEL方法检测凋亡的生精细胞.结果随着染毒剂量加大和时间延长,染氟大鼠血清雌二醇水平显著下降(P＜0.05),睾丸氟含量显著升高(P＜0.05),生精细胞凋亡率显著升高(P＜0.05),且血清雌二醇水平与睾丸氟含量和生精细胞凋亡率均呈负相关(P＜0.05).结论氟在一定剂量和作用时间内可致血清雌二醇水平紊乱,是导致生精细胞凋亡的重要原因之一.

抗氧化剂对大鼠肝星形细胞增殖和凋亡影响的实验研究

目的了解膳食维生素E和硒对大鼠肝纤维化恢复期肝星形细胞(HSC)增殖和凋亡的影响.方法采用腹腔内注射50%CCl4制备大鼠肝纤维化模型,在饲料中添加适量维生素E(250mg/kg饲料)和Se(0.2mg/kg饲料)进行营养干预,在后一次注射后3、7、14、28天(恢复期)各处死3只大鼠取其肝组织,用HE和Sirius red染色结合图象分析检测肝纤维化指标,用α-SMA免疫组化方法检测激活的HSC细胞,用原位凋亡(TUNEL)技术和α-SMA免疫组化双标染色检测HSC凋亡.结果在恢复期各时间点,病理对照组和抗氧化干预组激活的HSC数量呈逐步下降趋势,同时,从恢复期第7d开始,HSC凋亡细胞数以及肝组织内的胶原量亦同步下降;在同一时间点,干预组激活的HSC数量低于病理对照组,而HSC凋亡数和凋亡率均高于病理对照组.结论饲料中添加适量维生素E和硒能减轻肝纤维化的程度,并可能使恢复期HSC凋亡增加,激活HSC数量减少.

对羟基苯甲酸丁酯通过氧化应激导致人精子活力降低和凋亡增加

目的 探究对羟基苯甲酸丁酯(BP)对人精子活力、氧化应激和细胞凋亡的影响及其机制.方法 选取人精液样本20份,随机分为4组:对照组及BP低、中、高浓度组,每组5个平行样.与BP体外共培养4h,BP染毒浓度分别为0、200、400和800 μmol/L.观察精子活动力、细胞毒性、活性氧阳性细胞率和细胞凋亡率.结果 BP低、中、高浓度组精子总活力[(26.44±7.83)%、(32.79±2.90)%和(1o.51±5.88)%]均低于对照组[(47.67 ±3.93)%],差异有统计学意义(P＜0.05).与对照组相比,BP低、中、高浓度组精子存活率分别为(63.36±9.08)%、(49.72±7.15)%和(29.91±5.93)％.BP诋、中、高浓度组活性氧阳性细胞率[(24.67±0.50)%、(54.50 ±3.40)%和(59.93±3.47)%]高于对照组[(8.63±0.57)%],差异有统计学意义(p＜0.05),晚期精子凋亡率[(1 1.8±1.74)%、(12.87±0.25)%和(14.60±0.87)%]高于对照组[(9.63±1.00)%],差异有统计学意义(p＜0.05).精予活性氧的水平和晚期凋亡率均与精子的总活力呈负相关,r分别为-0.727和-0.688(P ＜0.05).结论 对羟基苯甲酸丁酯具有细胞毒性,能够降低精子活动能力,促进精子活性氧的生成和细胞凋亡.

茶多酚对皮肤角朊细胞生长与凋亡的影响

为探讨茶叶中的重要活性成分茶多酚对皮肤角朊细胞的生长周期动力学和对细胞凋亡的影响,在原代培养大鼠皮肤角朊细胞基础上,根据培养基中乳酸脱氢酶释放情况确定的茶多酚浓度范围,采用细胞计数法和流式细胞仪研究角朊细胞的生长、周期动力学和凋亡发生率.结果发现,在一定浓度范围内(0.1～1.0g/L),茶多酚可以促进角朊细胞生长.在细胞周期动力学上,表现为促进细胞从G1期和静止期(G0)转向有丝分裂合成期S和G2/M期,增殖指数(PI)也从18.17%增至25.62%;同时细胞凋亡发生率从27.10%下降到17.97%.表明茶多酚可以促进皮肤角朊细胞有丝分裂和生长,减少细胞凋亡发生.

酒精对小鼠NIT-1细胞氧化损伤及凋亡的影响

目的研究酒精能否诱导小鼠胰岛素瘤细胞(NIT-1)凋亡,初步探讨凋亡发生机制.方法体外培养的小鼠NIT-1细胞用不同浓度酒精处理后,采用DNA琼脂糖凝胶电泳法观察酒精对小鼠NIT-1细胞凋亡的影响;测定细胞丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)的含量以及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px,GPX)的活性以判断细胞氧化程度;采用比色法测定Caspase-3酶活性.结果酒精导致NIT-1细胞琼脂糖凝胶电泳显示典型的梯状凋亡条带.与对照组比,剂量组MDA生成增多,SOD、GSH-Px活性下降,GSH含量下降.酒精作用后NIT-1细胞caspase-3活性升高,升高程度与作用时间及剂量有关.结论提示高浓度酒精可导致体外培养的小鼠NIT-1胰岛β细胞氧化抗氧化失衡,氧化应激诱导细胞发生凋亡,凋亡的发生很可能与Caspase-3激活有关.

镉对大鼠肝细胞凋亡的影响

采用体内染毒方式,用末端标记法(TUNEL)、DNA梯状电泳、流式细胞术研究了CdCl2对大鼠肝细胞凋亡作用的影响.结果表明,5、10和20μmol/kg的CdCl2均可引起大鼠肝细胞TUNEL阳性细胞并产生大鼠肝细胞DNA电泳的梯状条带.用流式细胞术检测细胞凋亡率,该三种浓度的CdCl2引起的大鼠肝细胞凋亡率均较对照组显著增高, P<0.01.结果提示CdCl2对大鼠肝细胞凋亡具有一定的诱导作用.

MK801抑制乐果诱导的大鼠皮层神经元凋亡的作用研究

目的 通过应用N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体非竞争性拮抗剂MK801探讨兴奋性氨基酸神经递质在乐果诱导的新生大鼠皮层神经元凋亡中发挥的作用.方法 在纯化的新生鼠皮层神经元中,加入终浓度为100μmol/L的乐果,并用50和100μmol/L NMDA受体非竞争性拮抗剂MK801对100μmol/L乐果染毒组进行干预.染毒后48小时收获细胞,TUNEL染色检测神经元凋亡情况；HPLC-FLD方法测定细胞内兴奋性氨基酸递质含量,RT-PCR检测NMDA受体NR2B亚基mRNA表达的变化,荧光探针DCFH-DA试剂盒检测细胞内活性氧水平.结果 在纯化培养的皮层神经元中,100μmol/L乐果染毒48h后,与对照组相比,Tunel染色强度为对照组1.40倍(P＜0.01)；兴奋性氨基酸的含量均上升(P＜0.01)；细胞内ROS水平逐渐增高为对照组的2.47倍(P＜0.01).对100μmol/L乐果染毒组给予50和100 μmol/L MK801干预后,高剂量干预组凋亡减少为干预前的79.6％ (P＜0.01),EAA含量下降(P＜0.01)；细胞内ROS水平下降为干预前的88.9％和74.8％ (P ＜0.01),但仍远高于对照组细胞内活性氧水平(P＜0.01)；NR2B mRNA表达上升为干预前的1.59和2.22倍(P＜0.01),显著高于对照组水平(P＜0.01).结论 兴奋性氨基酸递质和细胞内活性氧共同参与乐果诱导的神经元凋亡.NMDA受体阻断剂MK801不仅能减少活性氧的生成并能降低神经元兴奋性氨基酸含量,从而减少乐果诱导的神经元凋亡.

双酚A对原代培养胎鼠脑多巴胺神经元的氧化损伤作用研究

目的探讨双酚A对原代培养的胎鼠脑多巴胺神经元的毒性作用及损伤机制.方法孕14～15天SD胎鼠中脑多巴胺神经元在无血清条件下分别培养4或7天后,分别加入1、10、25、50、100μmol/L双酚A,于24h和48h后检测细胞内活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA);流式细胞术检测细胞凋亡;酪氨酸羟化酶(TH)免疫组化用于鉴定和计数多巴胺神经元比例的变化.结果与对照组相比,各处理组均可导致细胞内活性氧升高,双酚A≥50μmol/L时,可无选择地使细胞内活性1氧明显升高,同时使SOD、GSH水平明显降低,MDA水平明显升高;双酚A浓度≥50μmol/L时可使凋亡细胞数显著增加.酪氨酸羟化酶阳性细胞数在25μmol/L以上时随双酚A浓度增加其比例显著降低.结论双酚A可通过氧化损伤导致体外培养的多巴胺神经元凋亡.

萘乙酸对睾丸细胞增殖与凋亡的影响

目的 探讨萘乙酸(NAA)对小鼠睾丸细胞增殖与凋亡的影响.方法 将25只健康雄性昆明种小鼠随机分为5组,每组5只.正常对照组和阳性时照组小鼠喂饲普通颗粒饲料,高、中、低剂量组的饲料中加入萘乙酸的剂量分别为5000、1000、200mg/kg,喂养4周处死小鼠,阳性对照组于处死前3天每天腹腔注射环磷酰胺20mg/kg.取睾丸组织,用MTT法测定各组睾丸细胞增殖活性,用免疫组织化学方法检测各组增殖细胞核抗原(PCNA)和半胱天冬酶(Caspase-3)表达.结果 高荆量组和正常对照组的睾丸细胞增殖活性分别为(0.501±0.069)和(0.875±0.082),差别有显著性(P<0.05).高剂量NAA组PCNA和Caspase-3阳性表达率分别为8.9%和41.3%,正常对照组分别为34.9%和9.1%,差异均有显著性(P<0.05).结论 萘乙酸有一定抑制睾丸细胞增殖活性、诱发睾丸细胞凋亡的作用.

Bcl-2、Bax基因表达在大鼠免疫性肝损伤中作用的探讨

目的研究细胞凋亡调节基因bcl-2/bax在免疫性大鼠肝损伤中的作用和血清铁的影响.方法通过放血或去铁胺(DFO)处理建立低铁动物模型.采用卡介苗加脂多糖(BCG+LPS)诱导法复制免疫性肝损伤模型.检测血清铁(SI)、转铁蛋白(TRF)、总蛋白(TP)含量及天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性, 肝组织中丙二醛(MDA)和铁(HIC)含量, 细胞凋亡调节蛋白基因bcl-2和bax表达量的变化, 计算细胞凋亡指数(AI)、细胞增殖指数(PI)和bax与 bcl-2(bax/bcl-2)比值.结果 (1)单纯肝损伤大鼠凋亡相关基因bax的表达显著增加,bcl-2不变,bax/bcl-2比值和AI增大;AST活性和MDA含量增加,TP含量降低. (2)血清铁降低大鼠的AST活性和TP含量不变, bax和 bcl-2的表达显著高于空白对照,bax/bcl-2比值和AI亦显著增大;但bax/bcl-2比值和AI增大的程度显著低于单纯肝损伤动物.(3)放血或注射DFO背景下肝损伤动物的 bcl-2、bax表达明显升高,但bax/bcl-2比值和AI显著低于单纯肝损伤动物;MDA含量低于单纯肝损伤动物,AST增高的幅度小于单纯肝损伤动物,TP含量不变.结论免疫性肝损伤时,细胞凋亡过程增强, 易化肝细胞损伤;铁在调节免疫性肝损伤的细胞凋亡过程中起重要作用.