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铝对体外培养大鼠神经细胞凋亡的研究
目的 研究铝对体外培养大鼠神经细胞凋亡的作用.方法 体外培养0～3天大鼠单纯神经元、神经胶质细胞及混合培养神经细胞,并用不同浓度AlCl3·6H2O处理,分为对照组、低、中、高剂量组(分别为0、0.5、1.0和2.0mmol/L),做光镜观察、荧光染色及流式细胞检测.结果 ①在光镜下和荧光染色法观察,可以见到神经元有凋亡细胞的典型形态学改变,但在神经胶质细胞及混合培养细胞中没有观察到凋亡的典型形态学改变.②神经元的流式检测结果显示,铝可以诱导神经元凋亡,且其早期、晚期及总凋亡率与铝的作用剂量有关;而神经胶质细胞的流式检测结果在染毒剂量组中未发现凋亡率的显著升高,其凋亡率在各组间差异均无显著性;混合培养神经细胞的流式检测结果在染毒剂量组中亦有凋亡率的显著升高,但其凋亡率升高的程度远低于神经元.结论 低浓度铝可诱导神经元细胞凋亡.
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饮水氯化消毒副产物MX对人胚肝细胞(L-02)的DNA损伤及凋亡作用
目的 研究饮水氯化消毒副产物3-氯-4-二氯甲基-5-羟基-2(5氢)-呋喃酮(MX)致人胚肝细胞(L-02)DNA损伤及凋亡作用.方法 以L-02为靶细胞,采用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)和流式细胞术(FCM)分别检测MX致L-02细胞DNA损伤及凋亡作用.结果 随着MX浓度的增加,L-02细胞DNA链断裂逐渐增加,且100和300μmol/L剂量组与溶剂对照组相比具有统计学显著性差异(P＜0.05,P＜0.01);MX各剂量组均引起L-02细胞凋亡率明显增加,与溶剂对照组相比具有统计学显著性差异(P＜0.001).结论 饮水氯化消毒副产物MX可致L-02细胞DNA单链断裂和凋亡.
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铅对海马神经细胞Brn-3a表达的影响与致凋亡作用
目的探讨体外条件下铅对神经细胞内转录因子Brn-3a的表达和致凋亡作用.方法采用海马神经细胞体外培养建立细胞模型,醋酸铅的染毒浓度分别为0.1、1、10、100、1000μmol/L,对照组给予等量培养液.染毒后24h及48h时MTT法测定各组细胞的存活率;免疫组织化学法测定Brn-3a的表达以及TUNEL法检测神经细胞凋亡.结果引起海马神经细胞存活率明显下降的醋酸铅的低浓度是10μmol/L,醋酸铅浓度越高,细胞存活率越低.1μmol/L醋酸铅可引起Brn-3a阳性细胞积分光密度显著下降(P＜0.05),10μmol/L醋酸铅可引起Brn-3a阳性面积比的显著下降(P＜0.01).1μmol/L是醋酸铅引起培养海马神经细胞凋亡的低浓度,各组细胞凋亡程度呈现明显的浓度依赖效应.结论铅对发育期海马组织的损害至少部分是与铅所致神经细胞凋亡相关联的,并且铅导致培养海马神经细胞Brn-3a的表达下降很可能是铅诱导神经细胞凋亡的原因之一.
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番茄红素对前列腺癌细胞PC-3增殖和细胞周期的影响
目的 研究番茄红素对体外培养的雄激素非依赖性前列腺癌细胞PC-3的抑制作用及其可能的作用机制.方法 采用MTT法和H3-TdR掺入法观察番茄红素对癌细胞增殖的影响,流式细胞仪观察同步化的细胞经番茄红素作用后细胞周期及凋亡的变化,RT-PCR检测cyclin D1、bcl-2、bax的mRNA的表达的变化.结果 番茄红素抑制PC-3细胞的增殖和DNA合成、诱导其凋亡、改变细胞周期分布(使C0/G1期细胞增多、而S期和G2/M期细胞减少).RT-PCR结果显示,cyclin D1和bcl-2的mRNA表达水平下调,而bax的mRNA表达水平上调.上述作用呈剂量效应关系.结论 番茄红素可诱导PC-3细胞凋亡、改变细胞周期分布、影响cyclin D1、bcl-2、bax的mRNA的表达,从而抑制肿瘤细胞增殖.
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溴丙烷两种同分异构体对雄性大鼠生殖系统的影响
目的 了解溴丙烷两种同分异构体对雄性大鼠的生殖毒性和初步的毒性机制.方法 将18只SPF级SD大鼠随机分为对照组、1-溴丙烷组(1g/kg)和2-溴丙烷组(1g/kg),连续腹腔注射1周.对附睾的精子数量和形态进行评价;HE和PAS染色评价睾丸的病理变化;运用TUNEL染色法和caspase-3活性的免疫组化法评价睾丸的细胞凋亡损伤;利用化学比色法对谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)等氧化应激指标进行测量.结果 溴丙烷导致睾丸重量下降、精子数量减少和精子形态异常比例增加.与对照组比较,1-溴丙烷显著增加大鼠睾丸谷胱甘肽还原酶(GR)活性(7.42±2.98 vs.4.25±1.18)、附睾的MDA含量(0.49±0.20 vs.0.39±0.08)和SOD活性(91.87±3.93 vs.80.59±9.92)(均P<0.05);2-溴丙烷显著升高睾丸和附睾的MDA含量(0.42±0.07 v8.0.24±0.11;0.48±0.08 v8.0.39±0.08),降低GSH含量(6.35±1.86 v8.10.89±3.69),以及附睾谷胱甘肽转移酶(GST)(53.21±9.60 vs.61.98±10.41)及GR活性(2.48±1.21 vs.7.75±8.56)(均P<0.05).1-溴丙烷的病理切片除观察到睾丸生精小管的精子释放延迟外,未见其他病理变化,而2-溴丙烷的暴露使生精小管出现萎缩和空泡.生殖细胞发生减少、坏死.伴随着2-溴丙烷引起的睾丸病理变化,TUNEL标记结果显示每小管睾丸凋亡细胞数、凋亡百分比和凋亡指数明显高于对照组(17.72±4.59 vs.5.92±1.05,P<0.05;0.34±0.14 vs.0.10±0.02.P<0.05;6.64±3.40 v8.0.59±O.20,P<0.01),与1-溴丙烷组相比,凋亡百分比(0.34±0.14 vB.0.12±0.03)和凋亡指数(6.64±3.40 v8.0.76±0.21)明显升高(P<0.05).2-溴丙烷暴露使caspase-3活性增强,与对照组和1-溴丙烷组相比,平均每生精小管的阳性细胞数和caspase-3阳性百分比有明显的升高(均P<0.01).结论 溴丙烷的两种同分异构体时雄性大鼠有一定的毒性,两种同分异构体可能具有不同的毒性机制,2-溴丙烷的毒性可能高于1-溴丙烷.
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MAPK信号通路在铝致SH-SY5Y细胞死亡中的作用
目的 研究铝致人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)死亡过程中MAPK信号通路的作用,探索铝致神经细胞死亡的机制.方法 用4 mmol/L的AlCl3 ·6H20染毒SH-SY5Y细胞模拟铝致神经细胞死亡模型,用凋亡的特异性阻断剂zVAD-fmk(20 μmol/L)抑制凋亡发生,用程序性坏死的特异性阻断剂necrostatin-1(Nec-1,60μmol/L)抑制程序性坏死发生,用CCK-8检测不同组间细胞活力的变化,用流式细胞术检测凋亡率及坏死率的差异,用蛋白印迹法检测MAPK信号通路蛋白磷酸化水平的改变.结果 与空白对照组、溶剂对照组、zVAD-fmk对照组和Nec-1对照组相比,染铝组、凋亡抑制组和程序性坏死抑制组的细胞活力下降(P＜0.05);与染铝组相比,程序性坏死抑制组和凋亡抑制组的细胞活力上升(P＜0.05).与空白对照组、溶剂对照组、zVAD-fmk对照组和Nec-1对照组相比,染铝组、凋亡抑制组和程序性坏死抑制组的凋亡率和坏死率上升(P＜0.05);与染铝组相比,凋亡抑制组和程序性坏死抑制组的凋亡率和坏死率下降(P＜0.05).与空白对照组、溶剂对照组、zVAD-fmk对照组和Nec-1对照组相比,染铝组、凋亡抑制组和程序性坏死抑制组p38磷酸化水平升高,ERK磷酸化水平下降(P＜0.05);与染铝组相比,程序性坏死抑制组的p38磷酸化水平下降,ERK磷酸化水平上升(P＜0.05).结论 MAPK信号通路中的p38和ERK信号通路参与了铝致SH-SY5Y细胞程序性坏死,ERK信号通路参与了铝致SH-SY5Y细胞凋亡,而JNK信号通路未参与铝致SH-SYSY细胞死亡.
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锰对PC12细胞的增殖抑制及其MAPKs活化表达的实验研究
目的 筛选锰对PC12细胞增殖抑制作用的时间及剂量效应关系,观察在此条件下细胞MAPKs信号通路活化表达的特点,探讨锰作为PD相关危险因子神经毒性作用的分子机制.方法取对数生长期PC12细胞株,用200、400、600、800μmol/L MnCl2培养液分别培养1、2、3、4天,噻唑蓝(MTT)比色试验和平板集落形成实验筛选锰的毒性剂量,台盼蓝染色法绘制细胞生长曲线;western-blot法检测p-Erk,p-p38.结果 MTT和平板克隆结果显示200～800μmol/L MnCl2作用1、2、3、4天对PC12细胞有抑制作用,且呈剂量和时间依赖趋势,600μmol/L MnCl2 作用4天对PC12细胞的抑制率达50%以上.Western-blot结果显示600μmol/L MnCl2作用1～4天,p-Erk2逐渐降低,作用2天时较对照降低了75%(n=3,P<0.05),200、400、600μmol/L MnCl2分别作用4天时,p-Erk逐渐降低,400μmol/L MnCl2作用4天较对照降低了78%(n=3,P<0.01);600μmol/L MnCl2作用1～4天可见p-p38逐渐升高,作用3天时较对照组增加6.6倍 (n=3,P<0.05),200、400、600μmol/L MnCl2分别作用4d时,p-p38逐渐升高,当400μmol/L MnCl2作用4天时较对照组升高了4.7倍(n=3,P<0.05).结论锰的神经毒性可能是通过阻抑p-ERK通路上调p-p38引发细胞增殖抑制和诱导细胞凋亡实现的.
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镰刀菌T-2毒素对人急性早幼粒白血病细胞HL60增殖与凋亡的影响
目的 研究镰刀菌属真菌产生的倍半萜烯类化合物T-2毒素对体外培养急性早幼粒白血病细胞HL60生长抑制与凋亡诱导的作用.方法 体外培养的HL60细胞经0、4、8、16和32μg/ml的T-2毒素处理48h,以MTT法检测T-2毒素对HL60细胞的生长抑制作用；吉姆萨染色观察细胞凋亡形态；流式细胞术(FCM)检测凋亡率；FCM及Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达情况.结果 MTT显示T-2毒素对HL60细胞的增殖具有抑制作用,并呈剂量依赖关系.形态学观察显示旱幼粒白血病细胞出现明显凋亡形态特征.FCM定量检测表明,T-2毒素各处理组细胞凋亡率均高于对照组,并随T-2毒素浓度升高而增加.FCM和Western blot结果显示,T-2毒素处理后HL60细胞Bax蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下降.结论 T-2毒素可剂量依赖地抑制体外培养的HL60细胞增殖并诱导凋亡.
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亚砷酸钠和三氧化二砷对人正常肝细胞增殖与凋亡效应的影响
目的 研究亚砷酸钠和三氧化二砷对人正常肝细胞L02增殖与凋亡效应的影响.方法 分别采用亚砷酸钠和三氧化二砷处理人正常肝细胞L02,比色实验和集落形成实验检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期分布,试剂盒法测定细胞内活性氧水平和谷胱甘肽含量,微核实验评价细胞染色体损伤.结果 随着亚砷酸钠或三氧化二砷染毒浓度的增加,L02细胞的存活率、集落形成率和谷胱甘肽含量均下降,而集落形成抑制率、凋亡率、活性氧水平和微核率均增加,此外细胞周期都被阻滞在G2/M期.结论 亚砷酸钠和三氧化二砷均能诱导人正常肝细胞L02活性氧增加和谷胱甘肽含量下降,继而引起细胞染色体损伤、细胞凋亡、细胞周期阻滞和细胞生长抑制,提示氧化应激是亚砷酸钠和三氧化二砷“致癌”与“治癌”共同的分子机制.
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乙醇对体外培养小鼠中脑细胞发育的影响研究
目的 探讨酒精对胚胎中脑细胞发育的影响及其与畸形发生之间的联系.方法 从12天龄、体节数34～36的小鼠胚胎分离中脑神经母细胞接种培养板,给予不同剂量的酒精于体外培养3d或5d后,检测酒精对细胞分化、神经纤维蛋白表达和凋亡的影响.结果 酒精对中脑神经母细胞分化有抑制作用,随酒精染毒剂量的增加,神经纤维蛋白表达下调,细胞凋亡比例逐渐增加,存在剂量-反应关系.结论 酒精通过抑制发育期神经母细胞的分化、抑制神经纤维蛋白表达以及诱导细胞过度凋亡而导致中枢神经系统畸形.
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六价铬诱导L-02肝细胞凋亡与线粒体功能损伤的关系研究
目的研究六价铬[Cr(Ⅵ)]对L-02肝细胞凋亡率和线粒体功能的影响,初步探讨二者之间的关系.方法选取0、2、4、8、16、32和64μmol/L Cr(vⅥ)溶液处理L-02肝细胞6h,采用流式细胞分析检测细胞凋亡率;荧光分光光度法检测线粒体膜通透性转运孔(PTP)的开放程度和线粒体膜电位(△ψ,m)的变化.结果2～64μmol/L Cr(Ⅵ)对L-02肝细胞具有细胞毒性,随着Cr(Ⅵ)浓度的增加L-02肝细胞凋亡率升高;线粒体PTP开放程度增加;线粒体膜电位(△ψm)降低,且与对照组比较差异均有显著性(P＜0.05).结论Cr(Ⅵ)诱导L-02肝细胞凋亡与线粒体功能损伤有关.
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bax基因siRNA序列的筛选及其对铝致神经胶质瘤细胞凋亡的影响
目的 应用RNA干扰技术降低促凋亡基因bax的表达,以阻抑铝诱导的神经胶质瘤细胞凋亡.方法 设计了3对阻抑bax基因表达的siRNA序列,对神经胶质瘤细胞进行了转染,根据不同siRNA序列在不同转染剂量、不同转染时间的细胞活力,找到bax siRNA转染的佳转染剂量和适转染时间.依据RNA干扰前后bax基因的表达变化筛检出有效的siRNA序列.用荧光染色法、荧光定量PCR法和免疫组织化学染色法分别检测其转染效率、对基因表达的干扰效率及对蛋白表达的阻抑效应.结果 有效的针对bax基因的siRNA序列为siRNA1,该序列的转染效率90%,时bax基因表达的干扰效率为62.3%.佳转染后检测点为转染后72h,适转染剂量为20nmo/L.结论 阻抑bax基因表达的siRNA序列能有效干扰bax基因和蛋白的表达,降低凋亡率.
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腺病毒介导转化生长因子β1诱导786-0肾癌细胞凋亡的观察
目的 探讨腺病毒介导的转化生长因子β-1(TGF-β1)对肾癌细胞凋亡的诱导作用.方法 将肾癌细胞系786-0细胞培养后分实验组及对照组,实验组以腺病毒为载体将TGF-β1转染,对照组未转染,流式细胞仪检测细胞凋亡的情况.结果 实验组的TGF-β1 mRNA以及蛋白的表达明显增强;实验组24、36、48、48、72h的凋亡率分别为(7.58±0.02)％、(8.55±0.13)％、(13.49±0.25)％、(15.54±0.25)％、(16.58±0.27)％,与对照组细胞各时相点比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 TGF-β1能够诱导786-0细胞的凋亡.
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直链烷基苯磺酸钠致人张氏肝细胞损伤的毒性作用
目的 通过检测不同剂量的直链烷基苯磺酸钠(LAS)对人张氏肝细胞(Chang liver cells)增殖、损伤、凋亡及坏死的影响,探讨LAS对人张氏肝细胞的毒性作用.方法 体外培养人张氏肝细胞,将细胞分为对照组及LAS不同剂量组,分别为正常对照组(不合LAS的正常培养基培养细胞)、LAS低、中、高剂量组(37.5、75.0及150.0 mg/L).各组细胞培养24 h后,倒置显微镜下观察细胞形态及结构;四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞生存率;检测丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平以了解肝细胞损伤程度;Hoechst 33342及PI染色观察细胞凋亡及坏死情况.结果 LAS处理后细胞表面出现黑色颗粒,部分细胞变圆脱落并产生碎片,高剂量组出现细胞脱落、死亡.LAS各处理组细胞存活率明显低于对照组(P＜0.01),MDA、LDH及AST水平也均明显高于对照组;细胞凋亡率与坏死率明显增加(P＜0.01),且这些变化随LAS剂量增加更加明显(P＜0.01).结论 LAS可抑制人张氏肝细胞增殖,改变细胞形态,并导致细胞损伤、凋亡和坏死.
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氟对原代培养大鼠睾丸支持细胞氧化应激和凋亡的影响
目的 研究氟化钠对大鼠睾丸支持细胞氧化应激和凋亡水平的影响.方法 采用原代细胞培养方法,将大鼠睾丸支持细胞暴露于0、6、12和24 μg/ml的氟化钠中,24 h后检测支持细胞内活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)含量,超氧化物歧化酶(SOD)活性,线粒体膜电位及凋亡率水平.结果 氟可降低睾丸支持细胞活力(P＜0.01);与对照组相比,各氟化钠处理组的ROS水平均显著上升(P＜0.01),12和24 μg/ml氟化钠组的MDA含量显著上升(P＜0.01).同时,各氟化钠处理组的SOD活性均显著低于对照组(P ＜0.05或P＜0.01).随着氟化钠剂量的增高,各氟化钠处理组的线粒体膜电位均显著下降,细胞早期凋亡率均显著升高(P＜0.01).结论 氟可致睾丸支持细胞氧化应激水平及凋亡率升高.
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番茄红素对高糖环境下人外周血内皮祖细胞增殖、凋亡的影响
目的 探讨不同浓度番茄红素对体外高糖培养环境下健康人外周血内皮祖细胞(EPCs)增殖、凋亡的影响.方法 密度梯度离心法分离健康成年人外周血单个核细胞,在体外诱导分化后,用FITC标记的荆豆凝集素Ⅰ(FITC-UEA-Ⅰ)和Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白(Dil-ac-LDL)双染色鉴定为内皮祖细胞.观察不同浓度番茄红素对高糖环境下的内皮祖细胞增殖、凋亡的影响.结果 33mmol/L葡萄糖明显抑制EPCs增殖,并促进其凋亡(P＜0.05);番茄红素10μg/ml、30μg/ml、50μg/ml组EPCs增殖能力均明显高于0μg/ml组,凋亡率明显低于番茄红素0μg/ml组(P＜0.05).结论 高浓度葡萄糖能抑制体外培养条件下人外周血EPCs的增殖、促进其凋亡;番茄红素可以保护高糖环境下EPCs的增殖能力并抑制其凋亡.
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不同有氧运动时间对小鼠心肌细胞凋亡的影响
目的 比较不同有氧运动时间对小鼠心肌细胞凋亡的影响及作用机制.方法 80只2月龄雄性清洁级BALB/c小鼠随机分为短期静止组、长期静止组、短期运动组和长期运动组各20只.短期静止组和短期运动组小鼠饲养和有氧训练3个月,长期静止组和长期运动组小鼠饲养和有氧训练6个月.分别采用TUNE法、RTPCR法和蛋白印迹法测定心肌细胞凋亡情况以及Bcl-2、Bax的mRNA和蛋白表达.结果 长期运动组小鼠心肌细胞凋亡指数较其他三组小鼠明显下降(P＜0.05),并且心肌Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平、Bcl-2/Bax比值较长期静止组及短期静止组小鼠显著上升(P＜0.05),而Bax mRNA及蛋白表达水平较长期静止组、短期静止组显著下降(P＜0.05).与短期运动组比较,长期运动组Bcl-2/Bax mRNA比值及蛋白比值得到明显改善(P＜0.05).短期运动组小鼠的心肌细胞凋亡指数以及心肌Bcl-2、Bax表达较短期静止组有所改善,但差异无统计学意义.结论 6个月有氧运动训练可有效阻止小鼠心肌细胞凋亡,改善心肌细胞Bcl-2、Bax表达和Bcl-2/Bax水平是其重要的作用途径.
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白藜芦醇与三氧化二砷联合处理诱导肺腺癌细胞凋亡及其机制探讨
目的 探讨白藜芦醇(RES)与三氧化二砷(As2O3)联合处理诱导肺癌细胞凋亡的作用及机制.方法 以人肺腺癌A549细胞为研究对象,按处理方式分为对照组、单独RES或As2O3处理组及二者联合组,观察RES和As2O3联合处理对细胞存活率、集落形成率、活性氧(ROS)、谷胱甘肽(GSH)、线粒体膜电位、细胞凋亡等的影响;同时,加入谷胱甘肽合成酶抑制剂L-丁硫氨酸亚砜胺(L-BSO),观察RES是否通过GSH耗竭导致细胞内ROS蓄积,进而增强As2O3诱导的细胞凋亡.结果 RES单独作用于细胞时,在浓度大于20μmol/L时,A549细胞存活率随浓度的增加而下降.与As2O3单独处理相比,加入60 μmol/L RES组的集落形成率、细胞凋亡率、ROS水平、GSH含量、线粒体膜电位的变化及细胞色素c和Cas-3水平的差异均有统计学意义(P＜0.05).经谷胱甘肽合成酶抑制剂BSO预处理后,RES和As2O3诱导的细胞凋亡由30.0％增加至77.7％,同时细胞内GSH含量锐减而ROS大量蓄积.结论 RES与As2O3联合处理与RES和As2O3单独处理相比,可诱导更多的A549细胞凋亡,其机制可能是RES和As2O3联合处理可降低GSH含量,诱导ROS产生与蓄积,使线粒体膜电位下降和细胞色素c释放入细胞质,活化Cas-3,终诱导细胞凋亡.
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EGCG对人肝癌HepG2细胞增殖和侵袭的影响
目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对肝癌HepG2细胞增殖和侵袭的影响及可能的分子机制.方法 不同浓度EGCG对HepG2细胞进行干预后,CCK-8法检测EGCG对肝癌HepG2细胞增殖的影响；荧光显微镜及流式细胞术(FCM) Annexin V-FITC/PI双染法检测EGCG对HepG2细胞的凋亡诱导作用；Transwell侵袭实验检测EGCG对HepG2细胞侵袭的影响；ELISA法检测HepG2细胞中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达水平.结果 EGCG各浓度组干预HepG2细胞24、48h后,细胞的生长增殖均明显受到抑制,其24h IC25值和IC50值分别为58.19和133.90mg/L.以60、135mg/L EGCG干预肝癌HepG2细胞24h后,FCM结果显示药物组细胞凋亡率明显高于对照组(P＜0.05),荧光显微镜观察显示随着药物浓度的增加,细胞凋亡程度加重.Transwell侵袭实验显示,60、135mg/L EGCG对HepG2细胞侵袭力抑制率分别为69.47％和100％ (P＜0.05).ELISA检测结果显示,EGCG干预后HepG2细胞上清液中MMP-2和VEGF表达水平下降(P＜0.05).结论 EGCG对人肝癌HepG2细胞具有抑制增殖和侵袭作用,其机制可能与EGCG诱导HepG2细胞凋亡和抑制肿瘤细胞中MMP-2及VEGF表达水平有关.
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铅致原代培养海马神经元凋亡及Bcl-2、Bax、p53和NOS1基因表达的影响
目的 观察铅对原代培养海马神经元的致凋亡作用并初步探讨其机制.方法 原代培养乳大鼠海马神经元,不同浓度的醋酸铅(50、100和200μg/ml)染毒后,Giemsa染色观察铅诱导海马细胞凋亡的形态学改变,流式细胞仪检测铅诱导海马神经元的凋亡率,免疫细胞化学染色观察各浓度组细胞Bcl-2、Bax和p53表达,激光扫描共聚焦显微镜定量分析各浓度组神经元胞浆中游离Ca2+ 的平均荧光强度.结果 Giesma染色观察发现一定浓度醋酸铅作用于海马神经元后出现凋亡的形态学改变,且与剂量相关;流式细胞术检测结果铅浓度分别为50、100、200μg/ml作用细胞24h后,可致海马神经元凋亡率增加,与对照组相比均有统计学意义(P<0.01);免疫细胞化学染色结果表明Bcl-2蛋白表达随染铅剂量增大而减少.染色强度逐渐降低,Bax、p53表达随染铅剂量增大而上调,与对照组相比,细胞积分光密度(IOD)值有统计学意义(P<0.01);激光共聚焦显微镜检测结果显示随着醋酸铅剂量的增大,细胞内液Ca2+浓度也随着增大,醋酸铅3个浓度组的平均荧光强度均显著高于正常对照(P<0.01),并有剂量反应关系.结论 铅可诱导海马神经元不同程度的凋亡,提示细胞内Ca2+ 浓度升高可能与铅致海马神经元损伤和诱导其凋亡有重要关系.推测铅在一定浓度范围内可能影响海马神经元在学习记忆等功能的正常发挥.
