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川明参多糖的理化性质和免疫活性研究
目的 研究精制川明参多糖的分子量分布范围和单糖组成等理化性质及其免疫药理活性.方法 采用水相高效凝胶渗透色谱法测定多糖分子量的分布;TLC和GC分析多糖的单糖组成和摩尔比;碳粒廓清实验和血清溶血素实验研究川明参多糖的免疫药理作用.结果 川明参多糖重均分子量为9.7632×105,数均分子量为5.2270×104;多糖的单糖组成为甘露糖和葡萄糖,二者摩尔比为1:16.2;川明参多糖高剂量组对小鼠碳粒廓清指数和血清溶血素吸光度的影响与空白对照组比较有显著性差异.结论 确定了川明参多糖的部分理化性质,并证明高剂量的川明参多糖能够显著增强小鼠特异性和非特异性体液免疫功能.
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单链抗体与lidamycin辅基蛋白融合蛋白工程菌的高密度发酵及其免疫活性
目的 实现抗Ⅳ型胶原酶单链抗体(Fv)与lidamycin辅基蛋白(LDP)结合构成的融合蛋白Fv-LDP产生菌的高密度发酵,并测定融合蛋白Fv-LDP免疫活性.方法 先在5L发酵罐中进行工程菌分批发酵和补料分批发酵,再用同定化金属亲和层析从菌体中纯化融合蛋白Fv-LDP,分步透析使之复性,酶联免疫吸附试验和免疫荧光细胞化学染色检测其免疫活性.结果 确定分阶段恒速补料分批发酵为工程菌佳高密度发酵模式,融合蛋白Fv-LDP高表达量为4g/L,A600为55左右,培养时问约14h.融合蛋白Fv-LDP对Ⅳ型胶原酶呈阳性免疫反应,能与PG细胞特异结合.结论 确定了工程菌高密度发酵工艺,融合蛋白Fv-LDP免疫活性良好,为融合蛋白Fv-LDP与lidamycin烯二炔发色团(AE)构成的小型高效化抗体药物Fv-LDP-AE的研究奠定良好基础.
关键词： 单链抗体 lidamycin辅基蛋白 分批发酵 补料分批发酵 免疫活性 -
Ki-P21ras蛋白原核表达质粒的构建、表达及纯化的研究
目的:构建Ki-ras-PET-28α(+)原核表达质粒,并表达、纯化得到Ki-P21ras蛋白.方法:人工合成Ki-ras基因cDNA的蛋白编码CDs区序列,并在其正义链5'加上BamH Ⅰ酶切位点,3'加上Hind Ⅲ酶切位点,经过BamH Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切后纯化回收得到具有粘性末端的Ki-ras cDNA,将PET-28α(+)同样经过BamH Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切后纯化回收得到与Ki-ras cDNA有相同粘性末端的线形片段,通过T4DNA连接酶将具有粘性末端的Ki-ras cDNA与酶切后的PET-2α(+)定向连接,构建重组质粒Ki-ras-PET-28α(+),经酶切和测序鉴定.将鉴定正确的Ki-ras-PET-28α(+)转入感受态细菌BL21(DE3)中诱导表达,利用组氨酸"标签"(His-Tag)对P21ras进行亲和层析纯化.结果:测序分析证实,克隆人PET-28α(+)的Ki-ras序列与Genbank登录号为"M54968"的Ki-ras cDNA序列一致,将重组质粒Ki-ras-PET-28α(+)转化BL21(DE3),IPTG诱导目的蛋白表达.SDS-PAGE和蛋白纯化结果表明,Ki-ras-PET-28α(+)在大肠杆菌中获得可溶性高表达,经Ni2+NTA-树脂柱亲和层析纯化得到了PAGE纯的ki-P21ras蛋白,Western-Blot分析证实其免疫活性.结论:成功构建了原核表达载体Ki-ras-PET-28α(+),并经表达、纯化得到具有生物活性的P21ras蛋白,为研究P21ras在肿瘤发病中的作用和机制以及抗P21ras细胞内抗体的研究奠定了基础.
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微波辐射损伤雷达作业人员外周血T淋巴细胞免疫活性
目的 探讨微波辐射对雷达作业人员外周血T淋巴细胞免疫活性的影响.方法 采取30例雷达作业人员和20例健康人的外周血,对外周血T淋巴细胞进行银染,检测淋巴细胞核仁银染强度;另外采用微量全血直接荧光法标记CD3+、CD4+、CD8+,用流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群变化.结果 巨嗜银核仁银染面积与细胞核银染面积的比值(I.S%),对照组为6.06±0.32,雷达作业组为5.12±0.57;对照组外周血CD3+、CD4+、CD8+百分比分别为(65.81±1.60)%、(32.58±0.71)%、(25.07±1.46)%,雷达作业组为(59.20±3.07)%、(28.32±2.66)%、(27.24±1.72)%.与对照组相比,雷达作业组外周血T淋巴细胞的I.S%明显降低(P＜0.05),T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD4+/CD8+比值明显降低(P＜0.05).结论 微波辐射对雷达作业人员的免疫活性产生明显影响,提示应加强雷达作业人员的防护措施.
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甘露聚糖肽对ROU患者淋巴细胞免疫活性的影响
目的:观察免疫增强剂甘露聚糖肽对口腔粘膜病患者淋巴细胞免疫活性的影响.方法:采用3H-TdR及14C-UR渗入淋巴细胞标记法,体外培养,观察甘露聚糖肽对淋巴细胞DNA及RNA合成功能的影响.结果:低浓度甘露聚糖肽(1～10 mg/L)可使淋巴细胞合成DNA及RNA功能增强;高浓度(30～100 mg/L)作用相反.结论:甘露聚糖肽对ROU患者淋巴细胞的免疫功能的影响与剂量有关,随剂量增加而出现抑制性影响.
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蝉拟青霉多糖对环磷酰胺处理大鼠生长及外周血的影响
目的: 研究蝉拟青霉多糖对正常及环磷酰胺所致免疫抑制大鼠生长及其外周血生化指标的影响.方法: 大鼠随机分为4组,各只大鼠连续皮下注射相应药物21 d,处死大鼠后称脾脏和胸腺湿重,并计算湿重指数,常规方法测定大鼠外周血白细胞(WBC)数、血红蛋白(Hb)含量、电解质水平及蛋白含量,在全自动生化分析仪上分别以双试剂终点法、速率法测定酸性磷酸酶(ACP)、乳酸脱氢酶(LDH)的活力.结果: 蝉拟青霉多糖能使大鼠体重、胸腺湿重指数、外周血WBC数、Hb含量、总蛋白和球蛋白水平等显著提高,并能阻遏由环磷酰胺所致的抑制作用.结论: 蝉拟青霉多糖能改善并调节大鼠营养状况和造血功能,从而增强机体的免疫功能.
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九头狮子草对小鼠免疫功能的影响
目的: 研究九头狮子草对小鼠免疫功能的影响.方法: 采用小鼠碳廓清实验和血清溶血素测定法,观察九头狮子草对小鼠单核巨噬细胞吞噬功能、溶血素抗体生成的影响.结果: 九头狮子草可激活小鼠网状内皮系统,增加小鼠血清溶血素含量.结论: 九头狮子草具有一定增强机体免疫力的作用.
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甘草多糖促进脐血源树突状细胞分化与成熟的初步研究
目的:研究两种浓度的GPS体外对脐血单核细胞来源的DC的分化、成熟的影响.方法:无菌条件下采集脐血,非连续密度梯度离心法获取脐血单核细胞并分为2组,分别用低、高浓度为100μg/ml、400 μg/ml的GPS悬液诱导DC.运用倒置相差显微镜观察DC形态,ELISA法检测DC培养上清中IL - 12的水平.结果:GPS刺激后,两组DC均呈现典型成熟DC形态学特征,尤以高浓度组诱导的DC数量多,形态学特征明显,且上清液中IL - 12的水平高(P＜0.01).结论:GPS可刺激体外对脐血单核细胞来源DC的分化和成熟,以高浓度组佳.
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白蔹醇提物免疫活性的初步研究
目的:研究白蔹醇提物对小鼠免疫功能的影响,探讨白蔹抗感染的免疫活性机制.方法:用白蔹醇提物5g/kg,10g/kg,20g/kg对小鼠进行灌胃给药7天后,分别测定对照组和给药组小鼠外周血淋巴细胞ANAE阳性率、脾淋巴细胞增殖能力、腹腔巨噬细胞吞噬功能.结果:白蔹醇提物对小鼠外周血淋巴细胞ANAE阳性率、脾淋巴细胞增殖能力、巨噬细胞吞噬功能均有促进作用(P＜0.05或P＜0.01),并随剂量增加而作用增强,量效呈正相关.结论:白蔹醇提物对小鼠免疫功能有增强作用,推断与其可临床应用于抗感染治疗有关.
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马鞭草醇提物免疫活性的初步研究
目的:研究马鞭草醇提物时小鼠免疫功能的影响,探讨马鞭草抗感染的免疫活性机制.方法:用马鞭草醇提物20mg/kg对小鼠进行腹腔注射10天后,分别测定对照组给药组小鼠T淋巴细胞增殖能力、抗体形成细胞分泌抗体的能力、吞噬细胞的吞噬能力.结果:马鞭草醇提物对小鼠T淋巴细胞增殖能力、抗体形成细胞分泌抗体的能力具有明显的增强效应(P<0.05或P<0.01),对小鼠吞噬细胞功能则具有明显抑制效应(P<0.05).结论:马鞭草醇提物能增强小鼠T、B细胞免疫功能和抑制小鼠吞噬细胞功能.
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桂枝茯苓丸对脐血来源树突状细胞分化、成熟 及免疫活性的影响
目的:探讨桂枝茯苓丸体外对人脐血单核细胞来源树突状细胞分化、成熟及免疫活性的影响,并揭示其作用机制.方法:获取单核细胞分为4组(空白对照组、细胞因子组、桂枝茯苓丸组和桂枝茯苓丸+细胞因子组)进行体外细胞培养,观察各组树突状细胞的形态变化、表面标志物蛋白的表达及刺激T细胞增殖的能力.结果:各组单核细胞体外培养均可诱导为树突状细胞;各组细胞表面标志物蛋白随树突状细胞成熟表达增强,尤以桂枝茯苓丸+细胞因子组诱导的树突状细胞多、表达强(P<0.05),形态学特征更为明显,诱导T细胞的增殖能力强(P<0.05).结论:桂枝茯苓丸可促进人脐血单核细胞来源的树突状细胞分化、成熟,增强树突状细胞的免疫活性,并与细胞因子协同作用效果更佳.
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皮肤淋巴瘤新分类的必要性和特点
皮肤虽然不是淋巴样器官,但皮肤内的淋巴细胞具有免疫活性,被称为皮肤相关性淋巴样组织,可以发生皮肤淋巴瘤.皮肤淋巴瘤是仅次于胃肠道的第二常见的淋巴结外淋巴瘤,分为原发于皮肤的原发性皮肤淋巴瘤和继发于淋巴结和其它器官的继发性皮肤淋巴瘤,虽然原发性皮肤淋巴瘤与继发性淋巴瘤的相同亚型的组织形态相同,但生物学行为、治疗反应和预后有很大的差异,故应该加以仔细的鉴别.
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光照灭活病毒法对血浆成分的免疫活性及生物指标的影响
目的 探讨光照灭活病毒法对血浆成分的免疫活性及生物指标的影响.方法 采集44例经体检合格的献血浆者的新鲜血浆,分离处理后分为两试管,一试管对凝血因子水平及血糖进行测定,另一试管对血液生化指标及体液免疫和补体C3、C4水平进行测定,在可见光下,以ZBK-TBM-01仪器室温照射30min.结果 光照射30min后,血浆凝血因子活力较光照射前明显改善,结果有显著性差异(P<0.05);光照射前、光照射30min后,血浆电解质K+、Na+、CI-含量对比,结果无显著性差异(P>0.05);光照射前、光照射30min后,血浆免疫球蛋白IgG、IgA、IgM及补体C3、C4水平对比,结果无显著性差异(P>0.05);光照射前、光照射30min后,血浆葡萄糖、白蛋白含量对比,结果无显著性差异(P>0.05);光照射前、光照射30min后,血浆酶活性各指标对比,结果无显著性差异(P>0.05);光照射前、光照射30min后,pH值无显著性差异(P>0.05).结论 光照灭活病毒法对大多数血浆成分的免疫活性及生物指标影响不显著,值得进行深入研究和推广.
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下调T细胞肿瘤坏死因子α诱导蛋白8样分子2(TIPE2)促进T细胞增殖并增强其免疫活性
目的 利用RNA干扰技术沉默小鼠脾脏T淋巴细胞肿瘤坏死因子α诱导蛋白8样分子2(TIPE2)基因表达,观察TIPE2基因沉默对T淋巴细胞增殖及免疫活性的影响.方法 磁珠分选T739小鼠脾脏T细胞,采用Western blot法筛选能有效沉默T淋巴细胞TIPE2基因的小干扰RNA (siRNA)序列.采用TIPE2特异性siRNA、阴性对照siRNA转染T细胞,在转染24h后,流式细胞术检测T细胞表面CD69水平;转染72 h后,CCK-8法检测转染T淋巴细胞增殖情况,同时,ELISA检测转染T细胞上清液中白细胞介素2(IL-2)和γ干扰素(IFN-γ)分泌水平.结果 成功筛选出特异性沉默TIPE2水平的siRNA序列,下调TIPE2基因表达后,T细胞CD69水平增加;T淋巴细胞增殖能力显著增强,IL-2和IFN-γ水平增加.结论 下调TIPE2基因水平,促进T淋巴细胞增殖和免疫活性.
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脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白NMB0315作为B群流脑疫苗候选抗原的免疫效果
目的 研究原核重组表达的B群脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白0315(rNMB0315)在诱导小鼠产生特异性免疫应答中的作用、免疫血清抗体体外杀菌活性和重组蛋白的免疫保护效果,初步评价rNMB0315作为B群流脑疫苗候选抗原的潜力.方法 将构建的原核表达载体pET30a-NMB0315转化大肠杆菌BL21表达重组蛋白,纯化鉴定后的重组蛋白免疫雌性BALB/c小鼠,检测体液免疫和细胞免疫水平;测定血清抗体在补体介导下的体外杀菌活性,观察rNMB0315蛋白疫苗对实验小鼠的免疫保护效果.结果 rNMB0315具有良好的免疫原性,能诱导产生较高水平的体液免疫应答:包括血清特异性IgG、IgG1、IgG2a、IgG3、IgG2b和生殖道黏膜特异性分泌型IgA (sIgA),免疫后第6周抗体效价分别为1∶150 000、1∶85 000、1∶60 000、1∶35 000、1∶30 000和1∶30 000;也能激发较高水平的细胞免疫应答,免疫小鼠脾淋巴细胞增殖反应的刺激指数(SI)值明显高于PBS、Freund佐剂对照组.在免疫的2、4、6周,血清IgG2a/IgG1比值均小于1,提示rNMB0315疫苗以诱导Th2细胞性体液免疫应答为主.rNMB0315疫苗免疫血清在补体介导下的体外杀菌抗体效价为1∶128;72 h内,对实验小鼠的免疫保护率为90％.结论 原核表达的rNMB0315具有良好的免疫活性和免疫保护效果,NMB0315外膜蛋白具有作为预防B群流脑蛋白疫苗候选抗原的潜力.
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香加皮羽扇豆烷乙酸酯(CPLA)对树突状细胞分化成熟的影响
目的:探讨香加皮羽扇豆烷乙酸酯(CPLA)对人外周血单个核细胞(PBMC)来源的树突状细胞(DC)在体外分化成熟及免疫活性的影响.方法:从人外周血分离单个核细胞,与细胞因子GM-CSF、IL-4共培养,于第5天加入DC的促成熟刺激剂TNF-α(阳性对照组)或CPLA.倒置显微镜和透射电镜下观察DC的形态;应用流式细胞术检测成熟DC的表面标志CD1a、CD83、CD80和CD86的表达情况;用ELISA检测DC培养上清中IL-12和IFN-γ的含量;用MTT法测定DC刺激T细胞增殖的能力.结果:培养10 d后,经CPLA刺激的PBMC呈现出典型DC的形态学特征;成熟DC的特征性表面分子CD1a、CD83、CD80和CD86表达水平均明显上调(P<0.05);细胞培养上清中IL-12和IFN-γ含量明显增高(P<0.05);刺激T细胞增殖的能力明显增强(P<0.05).结论:CPLA可诱导PBMC来源的DC分化成熟,并可促进其细胞因子的分泌,增强DC的免疫调节活性.
关键词： 香加皮羽扇豆烷乙酸酯(CPLA) 树突状细胞 诱导 免疫活性 -
聚乙二醇修饰鼠抗人CD3单克隆抗体
目的:确定一条聚乙二醇化鼠抗人CD3单克隆抗体(mAb)和抗体片段的制备工艺路线.方法:以胃蛋白酶酶解并通过凝胶柱分离和纯化得到抗体Fab′, 利用PEG-SPA修饰抗体和抗体片段Fab′上的氨基, 通过体内和体外T细胞增殖实验, 考查修饰后的抗体和抗体片段的免疫活性.结果:较佳的修饰工艺条件为:在pH9.0硼酸缓冲液, 反应温度25℃, 抗体浓度0.2 g/L, 抗体和聚乙二醇摩尔比为1∶ 20, 反应3 h.修饰后抗CD3 mAb全抗, 对T淋巴细胞增殖抑制活性下降了32.3%, 抗体Fab′下降了8.0%, PEG化Fab′下降了19.9%.利用ELISA检测血液中修饰后的抗体和抗体片段的半衰期.结果显示mPEG修饰后抗体和抗体片段血药浓度降低明显减缓, 修饰后抗CD3抗体半衰期从2.66 h延长到8.72 h, 延长了3.28倍.而修饰后抗体Fab′片段半衰期从2.21 h延长到4.17 h, 延长了1.90倍.结论:利用聚乙二醇修饰抗体和抗体片段, 提高了抗体半衰期, 且无细胞毒性, 活性损失较小, 该技术具有较高的可行性, 可极大地提高mAb尤其是非人源性抗体在临床上的应用.
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乙肝特异性免疫核糖核酸免疫学活性的观察
免疫核糖核酸(iRNA)的特异性免疫活性,国内外学者已进行了大量研究.鉴于iRNA具有超种属传递免疫功能等特点,已被作为一种免疫调节剂而广泛使用.文献报道,从HBsAg免疫动物的脾及淋巴结提取的iRNA,可将其免疫活性转移给乙肝患者,临床应用已取得了疗效.但从脾及淋巴结提取iRNA产量低,难以满足临床需要.为此,我们由乙肝疫苗免疫动物的肝脏提取iRNA,采用白细胞粘附抑制试验(LAI)、巨噬细胞(MФ)吞噬试验及间接血凝试验,对其免疫活性做了初步观察.
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输血相关性移植物抗宿主病研究进展综述
输血相关性移植物抗宿主病(TA-GVHD)是指受血者输入含免疫活性淋巴细胞的血液成分在宿主体内存活并增殖,将患者的组织识别为非己物质,并攻击和破坏其组织,从而引起相关性移植物抗宿主病.其临床症状早在60年代中期已被描述,但直到 1987年国外才逐渐报道[1],自此国外文献报道甚多,而国内文献报道较少[ 2].由于TA-GVHD发病急,漏诊误诊率高,早诊断及早治疗就尤为重要.
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血清PSA的影响因素
前列腺特异性抗原(PSA)是由前列腺上皮及尿道旁腺上皮所产生的蛋白酶,它的作用是液化精液.1980年在血中检测到了PSA,但到目前为止它进入血液循环的机制尚不清楚.1991年Stenman首次报道了血清中存在不同分子形式的PSA,游离态的PSA(fPSA)和复合态的PSA(cPSA),fPSA是PSA的酶原形式或是PSA的部分分解产物,具有免疫活性,可用免疫法测出.cPSA是与血清中多种蛋白酶抑制剂结合的PSA,主要包括与α1～抗糜蛋白酶形成的复合物(PSA～ACT)和与α2巨球蛋白形成的复合物(PSA～MG).PSA～ACT具免疫活性可用免疫法测出,PSG～MG不具免疫活性不能用免疫法测出.目前血清PSA、fPSA检测已普遍应用于前列腺癌的诊断,鉴别诊断,治疗效果监测,但是血清PSAfPSA受到一系列因素影响,同时血清PSA的诸多影响因素也引起了一些学者的极大兴趣.本文就影响因素做一综述.
