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Deltorphin Ⅰ单克隆抗体的制备及Deltorphin Ⅰ样免疫活性在在体和离体大鼠脑神经元的表达
本研究利用结合到BSA 上的 deltorphin Ⅰ肽(DADTⅠ)免疫Balb/c小鼠,成功地制备了特异性抗DADT Ⅰ单克隆抗体.交叉试验表明,所获抗体仅识别DADT Ⅰ和DADT Ⅱ而不识别其L型同分异构体LADT Ⅰ,也与其它DADT Ⅰ类似物无交叉反应.Epitope分析表明,该抗体识别DADT Ⅰ的N末端特异氨基酸序列,其中包括对其活性有重要影响的第二位的D-Alanine.利用这一抗体对成年大鼠脑组织和新生大鼠培养神经元进行了免疫组织化学研究.大鼠脑中有含量较低的DADT I样免疫活性,主要分布在某些特定部位的神经纤维和神经元胞体,如终纹床核、杏仁核、海马、伏核、下丘脑外侧区、黑质、中央灰质等部位.然而在培养的大鼠脑神经元,DADT I样免疫活性的含量却很丰富,神经元的胞体和突起均呈较强的DADT I样免疫活性.两项结果均提示哺乳动物脑神经元很可能产生一种与DADT I在结构上极其类似的物质.
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梅毒螺旋体Tp0453重组蛋白的表达纯化及免疫活性研究
目的表达梅毒螺旋体膜蛋白Tp0453(28-288aa),纯化表达产物并进行免疫活性分析,为探索Tp0453重组蛋白在梅毒血清学诊断中的应用提供实验依据.方法通过生物信息学分析,挑选Tp0453抗原的优势表位,进行诱导表达;以Western-blot和间接ELISA法检测重组蛋白的免疫反应性;用重组蛋白免疫新西兰家兔,评价其免疫原性.结果纯化后获得了相对分子量约为32×103的融合蛋白.Western-blot检测其能与梅毒患者阳性血清发生特异性反应;同时以重组蛋白为包被抗原建立间接ELISA法,检测梅毒诊断试剂参考血清,其阴阳性符合率均为100%.用纯化的Tp0453重组蛋白免疫新西兰家兔,能诱导其产生特异性免疫应答,ELISA法测定免疫血清中特异性抗体滴度在1:1280以上.结论基因重组表达的Tp0453重组蛋白具有良好的免疫原性和免疫反应性,为进一步研究其在梅毒血清学诊断中的应用和其生物学功能奠定了基础.
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溶血磷脂酸对人类视网膜色素上皮细胞生物学功能的影响研究
目的:研究溶血磷脂酸(Iysophosphatidic acid,LPA)对体外培养人类视网膜色素上皮(human retinal pigment epithelialium,hRPE)细胞增殖活力、分化特性及免疫活性等生物学功能的影响.方法:采用MTT法检测体外培养hRPE细胞增殖活力;角蛋白及α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)免疫细胞化学染色方法分析体外培养hRPE细胞分化特性;流式细胞术检测hRPE细胞表面HLA-ABC、HLA-DR、ICAM-l的表达.结果:加药后第2d开始LPA组吸光度明显高于对照组(P＜0.001);角蛋白18表达对照组较LPA组强(uc=-12.683,P＜0.001),α-SMA表达对照组较LPA组弱(uc=10.402,P＜0.001);hRPE细胞表面HLA-ABC、HLA-DR、ICAM-1的阳性细胞率和平均荧光强度组间差异无统计学意义(各指标均P＞0.05).结论:LPA明显促进hRPE的增殖活力,促进hRPE转分化,在PVR形成过程中起潜在的促进作用,但对hRPE免疫活性无影响.
关键词： 人类视网膜色素上皮细胞 溶血磷脂酸 细胞增殖 转分化 免疫活性 -
刺糖多糖免疫活性的初步研究
目的：研究刺糖多糖对免疫抑制小鼠的免疫调节作用。方法采用水提醇沉法得刺糖多糖。建立免疫抑制小鼠动物模型，小鼠灌胃刺糖多糖，利用碳粒廓清实验测定非特异性免疫功能；血清溶血素实验反映抗体生成水平；测定血清中细胞因子的生成水平来评价刺糖多糖的免疫活性。结果刺糖多糖可以增强免疫抑制小鼠的碳粒廓清能力和血清溶血素水平，能够提升由环磷酰胺造成的免疫抑制小鼠血清中IL‐2、IL‐10的含量。结论刺糖多糖对免疫抑制小鼠免疫功能有促进作用。
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龙眼壳多糖含量的测定及其免疫活性研究
目的 从龙眼壳中提取分离龙眼壳多糖,测定龙眼壳多糖在龙眼壳中的含量,同时探索龙眼壳多糖对体外小鼠脾淋巴细胞的免疫活性的影响.方法 采用水提醇沉法提取分离龙眼壳多糖.经酶-Sevage法除蛋白和H2O2氧化法除色素后,进一步用DEAE-纤维素柱层析和葡聚糖凝胶Sephadex G-100柱层析时龙眼壳多糖进行纯化,苯酚-硫酸法测定龙眼壳多糖含量;MTT法测定龙眼壳多糖对ConA诱导小鼠脾淋巴细胞的增殖能力;酶联免疫吸附反应(ELISA)分析龙眼壳多糖对ConA诱导小鼠脾淋巴细胞分泌IL-2的诱生作用.结果 龙眼壳多糖总糖含量为51.84%,龙眼壳粗多糖得率为3.22%,经过纯化之后的龙眼壳多糖的糖含量为92.01%.龙眼壳多糖不同剂量组对ConA诱导小鼠脾淋巴细胞的增殖能力有增强作用,对ConA诱导小鼠脾淋巴细胞分泌IL-2有明显的促进作用,均与剂量呈正相关关系.结论 龙眼壳多糖能增强小鼠脾淋巴细胞的免疫作用.
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胸腔内注射唯尔本治疗恶性胸腔积液
近年肺癌发病率明显提高，肺癌致胸腔积液也很常见，使病情迅速恶化，严重影响患者的生活质量。有效地控制胸水有很大的临床使用价值。我们观察了胸腔内注射唯尔本(0.5mg/支，西安安泰制药厂)结合全身化疗治疗恶性胸液50例。1 一般资料 50例中男性38例，女性12例，平均年龄62岁，其中鳞癌17例，腺癌30例，小细胞癌2例，弥漫性肺泡癌1例。右侧胸水44例，左侧胸水1例。大量胸水38例，中等量胸水12例，伴有心包积液1例。2 治疗方法 尽量抽净胸水，将唯尔本10mg及地塞米松5mg注入胸膜腔，嘱病人平卧，多次变换体位，使药物与胸膜腔充分均匀接触。治疗期间均给予顺铂40mg，qd，1～3d。足叶一苷100mg，qd，1～3d。4周为一疗程。每周做一次胸部X线和B超检查，观察胸液变化，4周后全面评价疗效和毒副反应。3 疗效判定 显效：经穿刺抽液1～2次后胸水明显减少或仅残留少量积液。有效：经穿刺抽液1～2次后胸水减少一半或一半以上。无效：胸水不能控制。4 结果 有效48例，其中显效42例，注药1次后胸水明显减少，2次后胸水基本消失。2例无效，其中1例胸水持续增长，需每周抽胸水3次后才能缓解症状，另1例大量胸腔积液伴心包积液者，注药2次后死亡。给药后患者多有程度不同的发热和胸痛，不需处理可自行缓解。5 讨论 唯尔本注射液的主要成分为多糖核酸，具有免疫活性，能提高瘤细胞的免疫原性，增强宿主的免疫反应，诱导全身特异性肿瘤免疫，表现为激活巨噬细胞，提高其吞噬杀菌能力。
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白血病患者红细胞免疫功能的观察
用免疫学技术测定98例白血病患者红细胞C3b受体花环及免疫复合物花环和循环免疫复合物(CIC)水平,并与40例健康人比较,结果提示:白血病患者红细胞C3b受体花环低于正常人,红细胞免疫复合物花环高于正常人,免疫复合物水平高于正常人(P＜0.01);红细胞C3b受体花环与血清免疫复合物花环之间无相关关系(r=-0.204,P＞0.05);红细胞免疫复合物花环与血清CIC水平呈正相关(r=0.497,P＜0.01).故测定白血病患者红细胞免疫功能,对了解患者的免疫状态具有一定的临床价值.
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铅暴露和饮食钙摄入对健康和免疫活性的作用
调查亚致死剂量铅的慢性暴露及伴饮食摄入高钙或低钙对雌雄斑马雀的健康和免疫成分的作用.斑马雀60只,雌雄各半,随机分成对照组、饮水中含钙的铅暴露组及饮水中不含钙的铅暴露组.铅暴露组斑马雀的肾和骨中铅浓度显著增加,而钙摄入缺乏则明显增强了这一效应.铅并不影响如血细胞比容、脾质量及个体重量健康指数,也不影响肾上腺紧张素反应.通过对植物血球凝集素迟发性超敏反应的评价,铅暴露对细胞免疫反应也未见影响.另一方面,铅暴露明显抑制雌性斑马雀抗绵羊红细胞的二次体液免疫反应,但该作用仅见于不含钙组.这一作用未在雄性雀鸟见到,意味着斑马雀对铅暴露发生体液免疫反应的易感性存在性别差异.
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快速康复在结肠癌手术中应用的临床研究
目的:探讨应用快速康复外科对结肠癌患者围手术期免疫功能的影响.方法:将74例结肠癌患者随机分为观察组及对照组,每组37例,观察组患者应用快速康复外科的处理措施进行治疗,对照组常规传统治疗,测定术前1d、术后1、3、7 d患者血清中C反应蛋白和白细胞的水平.结果:C反应蛋白及白细胞在术前1 d观察组及对照组分别3 ± 1g/L对4 ± 1g/L及6.32±1.70个对5.98±1.59个,无统计学意义;术后1、3、7 d观察组的C反应蛋白和白细胞比对照组相对较低,数据分析发现有统计学意义.结论:快速康复外科可以减轻手术对患者造成的免疫受损.
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西安地区肠道病毒71型手足口病患儿细胞免疫功能的临床研究
目的：研究西安地区肠道病毒71型手足口病患儿急性期外周血 T 淋巴细胞亚群的变化，以探讨其细胞免疫功能变化的临床意义。方法：根据病情轻重，将100例肠道病毒71型手足口病患儿分为重症组40例，轻症组60例，并与20例同期身体健康的同龄儿童进行对照，应用流式细胞术检测外周血T淋巴细胞亚群。结果：三组患儿总T 淋巴细胞（CD3＋ CD19-）、抑制性 T 淋巴细胞（CD3＋CD8＋）以及辅助性T淋巴细胞（CD3＋CD4＋）的百分率比较具有显著性差异（ P＜0．05）；其中T 淋巴细胞、抑制性T淋巴细胞、辅助性T 淋巴细胞在重症组低，对照组高；N K （CD16＋CD56＋）细胞百分率、B （CD19＋）淋巴细胞百分率、辅助/抑制性 T 淋巴细胞比值在三组间的比较均无显著性差异（ P＞0．05）。结论：肠道病毒71型手足口病患儿急性期细胞免疫功能受到抑制，重症手足口病患儿存在显著的细胞免疫功能紊乱。
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细胞凋亡与免疫活性细胞的研究进展
细胞凋亡(Cell apoptosis)的概念早由Kerr于1972年提出,是一种不同于细胞坏死的细胞死亡方式,具有特征性形态和生化改变,是细胞自身主动死亡过程,又称细胞程序性死亡(Programmed cell death,PCD).细胞凋亡是机体维持自身平衡稳定的重要生理调节功能,是由基因控制的程序化生理调节过程,它在胚胎发生、变态反应、器官退化、肿瘤发生、器官移植和自身免疫性疾病等具有重要作用.免疫活性T细胞和B细胞在发育和成熟阶段都要发生凋亡,只有免疫活性细胞发生凋亡保持相对平衡状态,才能正常发挥细胞免疫和体液免疫,否则引起疾病的发生.
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ELISA检测错误原因分析
ELISA即酶联免疫吸附试验,是一种常用的固相酶免疫测定方法.ELISA的基本原理是:①使抗原(或抗体)结合到某种固相载体表面,并保持其免疫活性;②使抗原(或抗体)与某种酶联结成酶标抗原(或抗体),而且此酶标抗原(或抗体)既保留其免疫活性,又保留其酶活性;③测定时将受检标本(抗体或抗原)和酶标抗原(或抗体)按不同步骤与固相载体表面的抗原或抗体进行反应,再用洗涤方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其它物质分开,后结合在固相载体上的酶量与标本中受检的抗体或抗原量成一定比例;再加入酶反应底物后,底物被酶催化后变为有色产物,根据其颜色反应的深浅进行定性或定量分析,以了解被测标本中抗体或抗原含量.
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BAF／GM 细胞株法在生长激素生物测定中的应用
目的：探讨 BAF／GM 细胞株法测定正常儿童及特发性身材矮小患儿生长激素生物活性中的应用，为特发性身材矮小的病因学研究提供一定的实验依据。方法采用 BAF／GM 细胞株法建立体外生物测定系统，测定正常组儿童及特发性身材矮小患儿生长激素生物活性，同时采用免疫放射分析法测定其免疫活性。通过加入胰岛素、胰岛素样生长因子等评估该检测方法的稳定性，分析其对生长激素的阻断作用。结果（1）生长激素刺激BAF／GM 细胞株的增殖呈剂量依赖性。（2）两组儿童血清生长激素生物活性和免疫活性比较差异均无统计学意义（P 1＝0．393，P 2＝0．54）。（3）游离胰岛素样生长因子在浓度＞30 ng／mL 时刺激细胞增殖，且增殖呈剂量依赖性，其余生长因子对细胞增殖无影响。结论 BAF-GM 细胞株法测定生长激素生物活性具有较好的敏感性与特异性，是分析血清样本中生长激素的生物活性水平的一种切实可行方法。
关键词： 生长激素 生物活性 BAF/GM 细胞株 免疫活性 敏感 -
单纯性肥胖儿童血清生长激素生物活性、免疫活性及瘦素水平的研究
目的探讨比较单纯性肥胖儿童及正常儿童血清瘦素、生长激素（growth hormone GH）生物、免疫活性及瘦素水平，为临床进一步明确儿童单纯性肥胖的病因提供新的方向。方法随机选取单纯性肥胖儿童68例（单纯性肥胖组）和正常儿童72例（正常对照组），均空腹抽取静脉血离心，包被试管放射免疫法定测定瘦素水平， BAF /GM细胞株法测定血清GH生物活性，免疫放射分析法（IRMA）测定血清人GH的免疫活性，并评估两组的B/I比值。结果单纯性肥胖组血清样本G H 生物活性和免疫活性的平均值分别为（1．26±0．50）、（2．24±0．72），正常对照组G H生物活性和免疫活性分别为（2．18±0．77）、（2．07±0．66），两组生长激素生物活性与免疫活性比较差异无统计学意义（ P ＞0．05）。正常对照组血清样本的B/I比值平均为（1．02±0．21），单纯性肥胖组为（0．53±0．13），两组的B/I比值比较差异有统计学意义（P ＜0．05）。单纯性肥胖组血清瘦素含量为（23．58±4．35），正常对照组血清瘦素含量为（6．95±3．61）。单纯性肥胖组血清瘦素水平高于正常对照组（ P ＜0．05）。结论单纯性肥胖儿童瘦素水平较正常儿童增高，可能存在瘦素抵抗现象。单纯性肥胖儿童与正常儿童比较生长激素生物活性明显减低。
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刺糖精多糖对巨噬细胞 RAW264．7免疫活性的影响研究
目的：探讨不同浓度刺糖精多糖对巨噬细胞 RAW264．7免疫活性的影响。方法以正常培养的小鼠巨噬细胞 RAW264．7为正常对照组，小鼠巨噬细胞加入1 mg／mL 脂多糖（LPS）为 LPS 组，采用刺糖精多糖（12．5、25、50、100、200μg／mL）作用巨噬细胞 RAW264．724 h 和48 h 为实验组，采用 CCK-8法检测巨噬细胞的增殖。以刺糖精多糖及 LPS 作用巨噬细胞 RAW264．724、48 h，收集细胞培养上清液，用 Griess 试剂盒检测细胞培养上清中一氧化氮（NO）含量。采用中性红吞噬实验检测吞噬活性，酶联免疫吸附实验（ELISA）检测刺糖精多糖不同浓度（12．5、25、50、100、200μg／mL）及不同作用时间（24 h 和48 h）培养上清液中肿瘤坏死因子（TNF-α）含量。结果刺糖精多糖对巨噬细胞 RAW264．7作用24、48 h 后，与空白对照组比较，质量浓度为12．5、25、50、100、200μg／mL的刺糖精多糖均能够促进巨噬细胞 RAW264．7的增殖，差异有统计学意义（P ＜0．05）。质量浓度为12．5、25、50、100、200μg／mL 的刺糖精多糖和1 mg／mL LPS 作用于巨噬细胞 RAW264．724 h 和48 h 后，NO 生成量明显高于正常对照组，差异有统计学意义（P ＜0．05）。当多糖质量浓度为100、200μg／mL 时，NO 生成量高于LPS 组，差异有统计学意义（P ＜0．05）。在一定浓度范围，多糖作用巨噬细胞后 NO 的生成量随刺糖精多糖浓度的增加而增加，线性回归方程为：Y ＝0．0108X ＋0．0777，R 2＝0．997。刺糖精多糖浓度在12．5、25、50、100、200μg／mL时，能明显地增强 RAW264．7细胞的吞噬能力（P ＜0．05），且刺糖精多糖促进细胞吞噬的能力明显强于 LPS （P ＜0．05）。刺糖精多糖各剂量组能刺激小鼠巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子 TNF-α，并随着刺糖精多糖剂量的增加，TNF-α的分泌量逐渐升高。除正常对照组外，各组48 h 时 TNF-α的含量高于24 h。结论不同浓度的刺糖精多糖和 LPS 作用巨噬细胞 RAW264．7后，刺糖精多糖能够促进巨噬细胞 RAW264．7的增殖和吞噬功能及其产生 NO，分泌 TNF-α呈剂量相关性，对其免疫活性起正向调节作用。
关键词： 刺糖 多糖 巨噬细胞 RAW264.7 免疫活性 -
冬虫夏草多糖脂质体口服液质量研究
冬虫夏草为麦角科真菌冬虫夏草[Cordyceps sinensis(Berk．)Sacc．]寄生在蝙蝠科昆虫幼虫的子座复合体。近年来研究表明：其多糖部分具有较强的免疫活性。我们根据祖国传统中医学理论，并结合现代生物技术制成冬虫夏草多糖脂质体口服液。……
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黄精多糖对免疫抑制小鼠的免疫功能的影响
目的 研究黄精多糖对免疫抑制小鼠免疫功能的影响.方法 小鼠ip给予环磷酰胺,建立免疫抑制模型,以黄精多糖低、中、高剂量(100、400、800 mg/kg) ig给药,测定各试验组小鼠血清中SOD活性、MDA水平、血清溶血素、免疫器官指数、耳肿胀度,以及吞噬细胞的吞噬能力.结果 与模型组相比,黄精多糖给药组上述免疫指标均有不同程度的改善,免疫抑制小鼠的脏器和溶血素指数显著提高(P＜0.05)；其中高剂量给药组血清中SOD活性恢复显著(231.71±7.75),MDA水平显著降低(6.20±0.65),达到或超过了正常小鼠水平.小鼠吞噬能力也有所提高,一定程度上缓解了炎症.结论 黄精多糖能有效改善由环磷酰胺所致免疫抑制小鼠的免疫功能,可开发为肿瘤放化疗患者的辅助治疗剂.
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大面积烧伤脓毒症患者T淋巴细胞免疫功能的改变及临床意义
目的 了解大面积烧伤脓毒症患者T淋巴细胞免疫功能的变化,探讨其与脓毒症的关系.方法 选择59例烧伤面积≥30%TBSA的患者,分为脓毒症组43例和非脓毒症组16例.采集两组患者伤后1、3、5、7、14、21、28 d的外周静脉血,检测T淋巴细胞增殖能力和白细胞介素2(IL-2)的分泌水平,并行相关性分析;通过流式细胞仪检测CD3+/CD4+T淋巴细胞的百分率及其凋亡率,并行相关性分析.结果 与非脓毒症组比较,脓毒症组患者伤后1、14、21、28 d T淋巴细胞增殖能力和IL-2的分泌水平均显著下降(P＜0.05或P＜0.01),两指标呈显著正相关(r=0.82,P＜0.01).伤后1、5、14、21、28 d,脓毒症组患者CD3+/CD4+T淋巴细胞百分率明显低于非脓毒症组,而其凋亡率呈相反趋势(P＜0.05或P＜0.01),两指标呈显著负相关(r=-0.66,P＜0.05).结论 大面积烧伤脓毒症患者T淋巴细胞免疫功能持续处于抑制状态,T淋巴细胞凋亡参与了脓毒症细胞免疫紊乱的病理生理过程.
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脊髓肽MP1的固相合成工艺及其免疫活性的研究
目的:对脊髓肽MP1的固相合成工艺进行优化,并研究其免疫活性.方法:采用Fmoc法对脊髓肽MP1进行固相合成,利用反相高效液相、质谱和氨基酸分析的方法对其进行性质鉴定,并采用MTT法对其进行免疫活性检测.通过探索不同的缩合时间、氨基酸用量和切割条件对合成效率的影响,由此找出适宜的合成条件.结果:以DMF为反应溶剂、HBTU/HOBt为缩合剂、缩合时间50 min和氨基酸过量两倍进行多肽MP1的合成,并采用配方为:TFA-水-EDT-TES(90:6:3:1)的切割剂进行常温切割3.5 h,此条件下粗占占纯度可达到83.20%.质谱分析的分子离子峰[M+H]+是681.4与脊髓肽MP1的理论分子量680.80基本一致,氨基酸分析结果表明:脊髓肽MPl的氨基酸残基的实测摩尔比与理论摩尔比基本一致.纯化后的MP1具有明显的促进ConA刺激脾淋巴细胞增殖的作用.结论:本实验建立的固相合成工艺条件可以成功地合成具有免疫活性的脊髓肽MP1.
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蕨菜多糖的分离纯化单糖组分及免疫调节活性研究
目的:从蕨菜中分离纯化多糖成分,并进行相对分子质量、单糖组成和免疫调节活性研究.方法:采用热水浸提法提取蕨菜粗多糖,再经脱蛋白、DEAE Sepharose Fast Flow和Sepharose 4B凝胶柱层析得到3种均一多糖组分PLP1、PLP2和PLP3;采用高效液相凝胶渗透色谱法测定均一多糖相对分子质量;采用气相色谱分析均一多糖的单糖组分,采用MTT法和Griess法检测多糖对RAW264.7细胞生长和释放NO能力的影响.结果:PLP1、PLP2和PLP3的相对分子质量分别为6.62×104、4.34×105、1.88×105;PLP1含有鼠李糖、阿拉伯糖、岩藻糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖,PLP2含有鼠李糖、阿拉伯糖、岩藻糖、木糖、甘露糖和半乳糖,PLP3合有鼠李糖、阿拉伯糖、岩藻糖、木糖、甘露糖和半乳糖.3种多糖均可显著促进RAW264.7细胞的增殖,均具有显著增强RAW264.7细胞释放NO的能力,并呈一定的剂量效应关系.结论:PLP1、PLP2和PLP3 3个组分均为新的天然来源的均一杂多糖.3种多糖体外均能激活巨噬细胞,呈现显著的免疫调节活性.
