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实时荧光PCR检测儿童肺结核粪便中Mtb-DNA的效果评价
目的 应用实时荧光PCR快速检测肺结核患儿粪便中Mtb-DNA,并初步评估其临床效果.方法 收集肺结核住院儿童粪便标本76份,应用实时荧光PCR检测Mtb-DNA,检测结果与20例其他呼吸系统疾病患儿的炎便实时荧光PCR检测Mtb-DNA、76例炎便抗酸杆菌涂片检查以及41例患儿痰标本的涂片和(或)培养、实时荧光PCR检测结果进行比较.结果 粪便实时荧光PCR检测敏感度达到23.68％(18/76),特异度为100.00％(20/20),肺结核患儿粪便PCR阳性率[23.68％(18/76)]明显高于涂片阳性率[6.58％(5/76)],41例患儿中痰涂片和(或)培养阳性例数(15例)和痰PCR检测阳性例数(18例)高于粪便PCR检测阳性例数(11例).结论 实时荧光PCR检测儿童粪便Mtb-DNA,是一种特异度高、比较敏感、非侵入性且相对安全的儿童肺结核快速诊断方法.
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结核/非结核分枝杆菌核酸快速检测方法临床应用价值
目的 评价结核/非结核分枝杆菌核酸快速检测方法的临床应用价值.方法 应用实时荧光PCR技术对420例标本进行临床试验研究,并与抗酸杆菌涂片和分枝杆菌培养方法对照比较.结果 结核分枝杆菌核酸检测灵敏度为48.5%(其中菌阳标本灵敏度为95.8%,菌阴标本灵敏度为14.5%),特异度99.3%,阳性预测值为99.1%,阴性预测值为55.5%;临床试验388例痰标本中检测出1例非结核分枝杆菌核酸阳性,经测序确认,准确率100%;同时对32例非结核分枝杆菌临床分离株进行核酸检测,并经测序确认,准确率100%.结论 应用实时荧光PCR技术,能实现在1支管内同时进行结核分枝杆菌/非结核分枝杆菌的核酸检测.该方法具有简单快速、特异性好污染性少的特点.可作为实验室辅助检测结核/非结核分枝杆菌核酸方法之一.
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联合应用表型分析、热休克蛋白65限制性片段长度多态性分析和测序鉴定养鱼水中的非结核分枝杆菌
目的 了解养鱼水中非结核分枝杆菌(NTM)的分布情况.方法 采集30份市售养鱼水标本,通过分离培养和生化反应初步鉴定,然后从培养菌落中提取DNA,PCR扩增65kD分枝杆菌抗原,扩增产物:(1)分别应用两种限制性内切酶BstE Ⅱ和HaeⅢ酶切,然后进行琼脂糖凝胶电泳和限制性片段长度多态性分析(PRA);(2)直接测序.结果 30份市售养鱼水中29份样本分枝杆菌培养阳性,其中6份样本分别生长出两种形态性状完全不同的菌落,共分离出35株分枝杆菌,表型特征均符合NTM.理化性质、PRA和测序鉴定发现,戈登分枝杆菌8株(23%)、龟-偶然分枝杆菌复合群8株(23%)、日内瓦分枝杆菌9株(26%)、不产色分枝杆菌1株,其余9株未鉴定到种.结论 NTM广泛存在于市售养鱼水中,分子生物学方法与常规细菌学鉴定可互相补充,提高鉴定的正确性.
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PCR-SSCP技术快速检测结核分枝杆菌rpoB基因突变的研究
目的应用PCR-SSCP技术直接快速检测痰标本中结核分枝杆菌rpoB基因突变,评价此方法用于结核分枝杆菌利福平(RFP)耐药性的意义.方法以结核分枝杆菌H37Rv为对照、50例耐RFP(单耐和多耐)结核分枝杆菌临床分离株、12例RFP敏感菌株、35例耐RFP肺结核患者痰标本,采用PCR-SSCP检测痰标本和菌株中结核杆菌rpoB基因突变.结果 50例耐RFP菌株中有45例PCR-SSCP条带与结核分枝杆菌H37Rv条带有明显差别,与药敏试验结果做对比,PCR-SSCP检测敏感性为90%,特异性为100%;12例敏感菌株与H37Rv条带一致,35份肺结核病人痰标本,21份痰PCR扩增阳性,15份SSCP图谱与H37Rv图谱有差别,而且PCR-SSCP 28份图谱与H37Rv有差别,阳性率为80%.结论 PCR-SSCP检测结核分枝杆菌rpoB基因突变快速、简便、易行,有望用于结核分枝杆菌RFP耐药性的快速测定,并将成为直接检测临床标本中结核分枝杆菌耐RFP快速方法.
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石蜡包埋组织实时荧光定量聚合酶链反应检测在结核病诊断中的价值
目的 探讨石蜡包埋组织实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测结核分枝杆菌DNA在结核病诊断中的价值.方法 275例组织标本行常规组织病理学检查、抗酸染色,并对石蜡包埋组织应用实时荧光定量聚合酶链反应检测结核分枝杆菌DNA.结果 275例FQ-PCR检测结核分枝杆菌DNA阳性211例(76.7%),病理诊断为结核183例(66.5%),抗酸染色阳性23例(8.4%).病理诊断为结核者FQ-PCR阳性率为93.4%,抗酸染色阳性者FQ-PCR阳性率95.7%.结论 实时荧光聚合酶链反应技术敏感性高、其与组织病理学相结合可以提高诊断率.
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Amplisensor-聚合酶反应定量检测脑脊液中结核分支杆菌DNA的研究
目的探讨Amplisensor-聚合酶反应(Amplisensor-PCR)定量检测脑脊液中结核分支杆菌DNA(TB-DNA)对结核性脑膜炎的诊断价值.方法采用Amplisensor-PCR对117例结核性脑膜炎患者及36例非结核性脑膜炎患者的脑脊液标本进行检测,并与PCR(凝胶电泳后,经溴化乙锭染色)、涂片、培养法比较.结果 Amplisensor-PCR的敏感性显著高于涂片及培养,阳性率分别为57.13%、1.7%、6.7%(P＜0.001).结论 Amplisensor-PCR可以通过标准曲线划定检出下限,并可换算出标本中原始的靶DNA值,同时具有较高的特异性和敏感性,对结核性脑膜炎的诊断有一定的临床意义.
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荧光定量PCR技术对前驱期小儿结核性脑膜炎的应用价值
目的 了解荧光定量PCR(FQ-PCR)技术对前驱期(早期)小儿结核性脑膜炎(简称“结脑”)的快速诊断、疗效观察和预后判断的作用和意义.方法 选择被金标准(快速Mtb培养)确诊未经抗结核治疗的117例前驱期结脑组患儿和排除结脑的30例对照组患儿脑脊液标本,数字表法随机编号进行FQ-PCR检测Mtb DNA,计算其敏感度、特异度、诊断指数、阳性预测值、阴性预测值、符合率等统计指标并进行分析；治疗3周后结脑组肓法行 培养和FQ-PCR检测,计算二者阳性检出率；随访出院时两种方法检测为阴性的结脑组患儿2年后各自复发率,进行统计学分析.结果 初诊患儿FQ-PCR检测结果与金标准比较敏感度、特异度、符合率为100.0％ (117/117)、96.7％(29/30)、99.3％(146/147),诊断指数达196.7％,经卡方检验,两者差异无统计学意义(x2=0.000,P=1.000),相关性分析r=0.9790,两种方法间有相关性(x2=140.9,P=0.000).结脑组治疗3周后培养法和FQ-PCR法阳性检出率分别为27.35％(32/117)和58.12％(68/117),两者差异有统计学意义(x2=22.63,P=0.000)；随访结脑组患儿出院时两种方法检测阴性2年后复发结果为:78例培养法阴性患儿复发7例(8.97％),69例FQ-PCR检测阴性患儿未见复发患者,差异有统计学意义(x2=4.6736,P=0,0306).结论 FQ-PCR检测脑脊液TB-DNA,准确、简便、快速,有助于早期诊断结脑,对疗效监测和预后评估比培养法更具优势.
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江西省结核分枝杆菌耐二线抗结核药的分子学特征
目的 初步明确江西省耐二线抗结核药相关基因突变的特征,评价等位基因特异性多重PCR(multiplex allele-specific polymerase chain reaction,MAS-PCR)检测二线抗结核药耐药性的可行性.方法 采用DNA测序方法和MAS-PCR技术,对江西省52株耐二线抗结核药的结核分枝杆菌进行耐药相关基因突变位点检测.结果 DNA测序分析:39株耐氧氟沙星(Ofx)菌株中,32株存在gyrA基因错义突变,2株发生gyrB基因错义突变.29株耐卡那霉素(Km)或卷曲霉素(Cm)菌株中,22株为rrs1401位点A→G突变.52株耐二线抗结核药的结核分枝杆菌,40株为北京基因型(76.92％,40/52),其中17株北京基因型菌株发生gyrA-GAC94GGC突变(42.50％,17/40),19株北京基因型菌株发生rrs-A1401G突变(47.50％,19/40).北京基因型与基因突变类型gyrA-GAC94GGC和rrs-A1401G无明显相关性(x2=1.16、1.92,P值均＞0.05).MAS-PCR检测Ofx耐药株的敏感度为61.54％(24/39),检测Km或Cm耐药株的敏感度为79.31％(23/29).结论 gyrA基因94位密码子突变是江西省结核分枝杆菌Ofx耐药的主要机制；rrs-A1401G突变则是Km或Cm耐药的主要原因.MAS-PCR方法对于快速检测二线抗结核药的耐药性有一定的临床应用价值.
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复方PCR用于分支杆菌菌种鉴定的初步研究
目的寻找新的、快捷简便的分支杆菌菌种鉴定技术,进一步提高临床结核病诊断的水平.方法将3套分支杆菌基因组DNA的不同标记引物同时放入一个体系中,并在同一退火温度下进行PCR扩增,通过对扩增产物的不同带型进行分析,对已知标准株和部分临床株进行菌种鉴定.结果复方PCR方法可将结核复合群中的结核分支杆菌、牛结核分支杆菌与非结核分支杆菌一次性地区分开,特异性达到100%,灵敏度为10ng/反应.结论复方PCR技术是一种有效而又简捷的分支杆菌诊断方法,可用于临床上分结核与非结核分支杆菌或分支杆菌与非分支杆菌的初步区分.
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PCR测序和基因芯片快速鉴定分枝杆菌菌种的应用研究
目的 评价2种分枝杆菌菌种快速鉴定方法的临床应用价值.方法 分别用16S～23S rDNA转录间隔序列(ITS) PCR-直接测序和基于16S rRNA基因的基因芯片检测21株分枝杆菌标准菌株和50株临床分离株.结果 21株分枝杆菌标准株中,ITS PCR测序法将18株准确鉴定到种,结核分枝杆菌、非洲分枝杆菌菌株只能鉴定到结核分枝杆菌复合群,海分枝杆菌无法鉴别是海分枝杆菌还是溃疡分枝杆菌；芯片法正确鉴定16株,1株胃分枝杆菌鉴定为堪萨斯分枝杆菌,3株不在芯片检测范围内.50株临床菌株中,47株2种方法结果一致,1株不在芯片检测范围内.结论 基因芯片鉴定分枝杆菌快速、特异,准确性高,临床常规开展应用需要进一步研究.
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PCR-ELISA微孔板杂交技术检测结核杆菌DNA
目的采用PCR-ELISA微孔板杂交技术检测结核杆菌DNA.方法采用PCR技术扩增结核杆菌DNA,并将扩增产物加入预先包被结核杆菌探针的微孔板,再加入结核杆菌显色探针,同时进行微孔板核酸夹心杂交ELISA显色.共检测肺部疾病患者痰标本510例.结果该法的灵敏度为59.3%,特异性为95.0%;阳性预测值为96.3%,阴性预测值为51.4%.结论 PCR-ELISA微孔板杂交技术可快速、准确地检测结核杆菌DNA,是结核病早期诊断和鉴别诊断的可靠实验室方法.
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胸膜活检标本行基因扩增对结核性胸膜炎的诊断价值
目的评价胸膜活检组织行聚合酶链反应(PCR)对结核性胸膜炎的诊断价值.方法 PCR检测65例胸膜活检组织中结核分枝杆菌DNA,并与胸水检测及胸膜活检组织病检对比.结果胸膜活检组织PCR阳性率83.1%,胸水PCR阳性率为63.1%,胸膜活检组织病检阳性率为60.0%.前者较后两者更敏感.结论胸膜活检组织PCR检测对结核性胸膜炎有较高的诊断价值.
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CT引导下肺穿刺活检标本行PCR检测诊断肺结核的临床价值
目的 探讨CT引导下肺穿刺活检标本行PCR检测在肺结核诊断中的价值.方法 回顾性选取2017年1月至2018年3月同济大学附属上海市肺科医院曾疑诊为肺结核、后经病理证实或试验性抗结核治疗确诊的全部111例患者,其中肺结核患者73例(65.8％),非肺结核患者38例(34.2％;包括结节病3例、肺癌17例、隐球菌感染3例、曲菌感染4例、肺脓肿3例、异物肉芽肿2例,支气管扩张症6例).111例患者均在CT引导下获取肺穿刺活检标本行涂片细胞病理学检查(简称“细胞病理学检查”),其中13例因两次细胞病理学检查不能确诊而行CT引导下粗针肺穿刺活检标本组织病理学检查(简称“组织病理学检查”);上述标本同时采用PCR检测结核分枝杆菌DNA(分别简称为“细胞病理学标本TB-PCR检测”与“组织病理学标本TB-PCR检测”).以临床终诊断为标准,探究细胞病理学标本TB-PCR检测诊断肺结核的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、正确指数(一致性),以及组织病理学标本TB-PCR检测的检出效用.采用SPSS 21.0软件对数据进行统计学处理,计数资料采用x2检验,以P＜0.05为差异有统计学意义.结果 以临床终诊断为标准,细胞病理学标本TB-PCR检测的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、正确指数分别为83.6％(61/73)、89.5％(34/38)、93.8％(61/65)、73.9％(34/46)、0.73;对肺结核的检测阳性率[83.6％(61/73)]明显高于单一细胞病理学检查[39.7％(29/73)](x2=29.663,P=0.000).73例肺结核患者中,13例经组织病理学标本TB-PCR检测阳性者8例,而经细胞病理学标本TB-PCR检测阳性者为12例.另外,肺结核患者中9例(12.3％,9/73)经细胞病理学、组织病理学检查及传统检测方法(痰涂片抗酸染色及痰培养)均未能诊断结核病,经细胞病理学标本TB-PCR检测后有4例阳性.结论 CT引导下肺穿刺活检标本行TB-PCR检测可提高肺结核诊断的阳性率,具有良好的临床应用价值.
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荧光定量PCR技术快速检测rpoB基因突变及其临床应用
目的 探讨荧光定量PCR技术检测基因突变的价值及其临床应用.方法 针对结核分枝杆菌rpoB基因利福平耐药决定区(Rifampicin Resistance Determining Region,RRDR)526密码子和531密码子常见的突变形式设计探针(526CAC,526TAC,531TCG和531TTG),应用已知rpoB基因RRDR区序列的38株利福平耐药临床分离株和24株利福平敏感临床分离株以及5株非结核分枝杆菌菌株建立荧光定量PCR检测基因突变的方法.继而,应用该技术检测84份肺结核病例痰标本,与痰罗氏培养以及药敏结果进行比较,部分标本进行DNA测序证实.结果 在38株利福平耐药、24株利福平敏感的临床分离株和5株非结核分枝杆菌中,其检测526密码子和531密码子突变的敏感性和特异性达100%.在84份肺结核病例的痰标本中,罗氏培养阳性62株,其中利福平耐药株48份,荧光定量PCR检测痰标本结核分枝杆菌DNA阳性为75例.荧光定量PCR检测到531密码子TTG突变65例,526密码子TAC突变7例.在48株利福平耐药株中,荧光定量PCR检测43株为531TTG突变,3株为526TAC突变,另2株利福平耐药株,经测序证实,1株514密码子TTC插入突变,1株为511密码子CCG和516密码子GGC联合突变.结论 荧光定量PCR技术能快速检测rpoB基因突变,并能作为临床肺结核病人早期快速耐药诊断的辅助手段.
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荧光PCR探针熔解曲线法检测结核分枝杆菌复合群对利福平和异烟肼耐药性的价值
目的 评价荧光PCR探针熔解曲线法(简称“探针熔解曲线法”)检测结核分枝杆菌复合群对利福平(RFP)和异烟肼(INH)耐药性的价值.方法 从2015年1月至2018年7月山东省菏泽市传染病医院收治的883例肺结核和耐多药结核病(MDR-TB)患者中,选择萋-尼染色结果为阳性的结核病患者的痰标本共215份(例)进行分离培养,对鉴定为结核分枝杆菌复合群(MTBC)的200株(例)菌株同时使用比例法药物敏感性试验(DST)和探针熔解曲线法检测对RFP和INH的耐药性.以DST检测结果为金标准,分析探针熔解曲线法检测RFP和INH的敏感度、特异度、符合率和一致性(Kappa检验).结果 200株(例)MTBC分离株中,以DST检测结果 为标准,探针熔解曲线法检测RFP耐药性的敏感度、特异度和符合率分别为96.4％ (106/110;95％CI:90.7％～98.9％)、80.0％(72/90;95％CI:70.5％～87.1％)和89.0％(178/200);对INH耐药性检测的敏感度、特异度和符合率分别为85.4％(123/144;95％CI:78.6％～90.7％)、96.4％(54/56;95％CI:87.7％～99.6％)和88.5％(177/200).探针熔解曲线法与DST检测MTBC对RFP耐药性的Kappa值为0.78,对INH耐药性的Kappa值为0.74.结论 探针熔解曲线法检测MTBC对RFP和INH的耐药性均有较高的敏感度和特异度,且探针熔解曲线法与DST检测MTBC对RFP和INH耐药性的一致性较高,有助于对耐药结核病患者的及早发现和治疗.
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rDNA探针杂交检测病人痰标本中结核杆菌的研究
目的应用结核分枝杆菌特异的rDNA探针杂交检测痰标本中的结核杆菌rDNA,评价其在临床标本检测中的应用价值.方法用引物b对结核分枝杆菌16S-23S rDNA间隔区序列进行扩增,同时加入生物素标记,制成250bp的rDNA探针.对该探针的敏感性、特异性进行了研究,并对90份结核病人,30份非结核病人痰标本的PCR产物进行了斑点杂交检测.结果 rDNA探针检测引物b PCR扩增产物的敏感性为100pg.rDNA探针与受试24种分枝杆菌和11种非分枝杆菌引物b PCR扩增产物杂交只有结核分枝杆菌、胃分枝杆菌为阳性杂交,特异性较高.而rDNA探针对90份结核病人痰标本引物b扩增产物检测的阳性率为80.2%,高于PCR扩增产物电泳检测结果(64%).rDNA探针与30份非结核病人痰标本杂交结果均为阴性杂交.结论 rDNA探针与引物b PCR扩增相结合能提高结核病人痰标本检测的敏感性与特异性.
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免疫组织化学及PCR技术在淋巴结结核病理诊断中的应用价值
目的 探讨免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)及PCR技术在淋巴结结核病理学诊断中的应用价值.方法 收集首都医科大学附属北京胸科医院病理科保存的2012年1月至2013年7月之间的48例手术根治切除淋巴结结核患者(结核组)和21例非淋巴结结核患者(非结核组)的石蜡包埋组织标本,分别应用IHC染色、荧光定量PCR和抗酸染色法对标本进行检测,以临床后诊断为金标准,比较各方法的检测效能.结果 IHC染色、荧光定量PCR及抗酸染色检测的敏感度分别为52.1％ (25/48)、60.4％ (29/48)及27.1％(13/48);IHC染色和荧光定量PCR检测敏感度均高于抗酸染色,差异均有统计学意义(χ2值分别为6.27、10.84, P值分别为0.012、0.001);而IHC(:染色与荧光定量PCR比较,敏感度差异无统计学意义(;X2=0.68,P=0.411).IHC染色、荧光定量PCR及抗酸染色法检测非结核组结果均为阴性,特异度均为100％(21/21).IHC染色、荧光定量PCR及抗酸染色法的阴性预测值分别为47.7％(21/44)、52.5％(21/40)、37.5％(21/56);符合率分别为66.7％(46/69)、72.5％(50/69)、49.3％(34/69),IHC染色、荧光定量PCR均优于抗酸染色法.结论 IHC染色、荧光定量PCR与抗酸染色法相比,可提高阳性检出率,在淋巴结结核的病理学诊断中具有良好应用价值.
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应用PCR-SSCP技术检测痰中结核分枝杆菌katG、rpoB、embB基因突变的研究
目的 应用PCR-SSCP技术检测痰样本中结核分枝杆菌katG、rpoB、embB基因突变,探索其临床应用价值.方法 以结核分枝杆菌标准株H37Rv为对照,应用套式PCR扩增目的基因,并使用SSCP技术直接检测100例耐药患者和10例敏感患者痰样本中结核分枝杆菌katG、rpoB、embB基因突变并进行基因测序,将SSCP结果及测序结果与细菌培养药敏结果进行比较分析.结果 PCR-SSCP直接检测痰样本中的结核分枝杆菌katG基因突变的敏感性和特异性分别是55.9%和70.0%,rpoB为76.0%和90.0%,embB为46.4%和60.0%.结论 PCR-SSCP操作快速、简单,敏感性和特异性较高,可用来直接检测临床痰样本中结核分枝杆菌katG、rpoB、embB基因突变.
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γ-干扰素释放试验与其他三种检测技术临床诊断能力的比较研究
目的 分析γ-干扰素释放试验(IGRA,本研究采用IGRA-ELISA法)与齐尔-尼尔森(Ziehl-Neelsen)染色法(简称"Z-N法")、结核抗体(TB-Ab)胶体金快速检测方法(简称"TB-Ab法")和荧光探针PCR法(简称"荧光PCR法")等检测技术在北京同仁医院应用于TB辅助诊断中的作用,对IGRA-ELISA检测技术作出客观评价.方法 选取本院2012年8月至2013年7月进行TB诊断的1228例患者作研究对象,其中包括IGRA-ELISA 827例、TB-Ab法306例、Z-N法324例和荧光PCR法83例,共1540例次.采用SPSS 16.0软件统计分析和绘制受试者工作特征(ROC)曲线,计数资料采用x2检验,P＜0.05为差异有统计学意义,分别计算各技术ROC曲线下的面积(AUC),比较各技术辅助诊断价值的大小.结果 IGRA-ELISA的阳性检出率为36.0％ (298/827),均高于TB-Ab法(6.2％,19/306)、Z-N法(3.1％,10/324)和荧光PCR法(3.6％,3/83),差异有统计学意义(x2值分别为98.6、128.9、35.8,P值均＜0.001).IGRA-ELISA的阳性诊断率10.3％ (85/827),均高于TB-Ab法(1.3％,4/306)、Z-N法(2.5％,8/324)和荧光PCR法(3.6％,3/83),与TB-Ab法和Z-N法相比较差异有统计学意义(x2值分别为24.8、19.1,P值均＜0.001);而与荧光PCR法相比较差异无统计学意义(x2=3.8,P＞0.05).IGRA-ELISA的敏感度为97.7％ (85/87),均高于TB-Ab法(17.4％,4/23)、Z-N法(28.6％,8/28)和荧光PCR法(25.0％,3/12),差异有统计学意义(x2值分别为76.0、65.4、56.4,P值均＜0.001).IGRA-ELISA的特异度为71.2％ (527/740),均低于TB-Ab法(94.7％,268/283)、Z-N法(99.3％,294/296)和荧光PCR法(100.0％,71/71),差异有统计学意义(x2值分别为65.1、101.6、27.7,P值均＜0.001).IGRA-ELISA的阳性预测值为28.5％ (85/298),均低于Z-N法(80.0％,8/10)和荧光PCR法(100.0％,3/3),差异有统计学意义(x2 =12.1,7.3,P值均＜0.01);但高于TB-Ab法(21.1％,4/19)且差异无统计学意义(x2=0.5,P＞0.05).IGRA-ELISA的阴性预测值为99.6％ (527/529),均高于TB-Ab法(93.4％,268/287)、Z-N法(93.6％,294/314)和荧光PCR法(88.8％,71/80),差异有统计学意义(x2值分别为28.9、27.8、46.3,P值均＜0.001).IGRA-ELISA的ROC曲线的AUC为0.846,P＜0.001,95％CI为0.815～0.877;AUC均大于TB-Ab法(0.521)、Z-N法(0.622)和荧光PCR法(0.625).结论 在本院的TB辅助诊断中,IGRA与其他3种检测技术比较有较高的敏感度,阳性预测值不高却有较高的阳性检出率和阳性诊断率,特异度较低因阴性预测值较高有较好的阴性排查能力,AUC大有相对较好的辅助诊断价值.
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应用rpoB基因PCR反向斑点杂交快速鉴定分枝杆菌菌种的研究
目的 根据分枝杆菌rpoB基因序列建立一种准确、快速的分枝杆菌菌种鉴定方法.方法以分枝杆菌rpoB基因编码序列为靶基因,用聚合酶链反应(PCR)反向斑点杂交技术检测24种分枝杆菌标准株、8种非分枝杆菌标准株、37株分枝杆菌临床分离株.结果 分枝杆菌与非分枝杆菌标准株经PCR扩增后,分枝杆菌标准株均扩增出360 bpDNA片段,非分枝杆菌除甲型溶血性链球菌和假白喉棒状杆菌出现同样片段外,其它菌种均未见扩增.敏感性试验可检测出1 pg结核分枝杆菌DNA.探针特异性试验表明,21种寡核苷酸探针除海分枝杆菌与偶然分枝杆菌的探针有交叉杂交,其余均为特异性杂交.应用该方法对37株分枝杆菌临床分离株进行鉴定,结果与常规方法鉴定结果相符.结论 应用rpoB基因序列和PCR反向斑点杂交技术鉴定分枝杆菌菌种快速、准确,具有较高的应有价值.
