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细粒棘球蚴AgB亚单位抗原基因的克隆和表达系统的优化
目的 从我国细粒棘球绦虫分离株(新疆源和甘肃源)中克隆AgB1和AgB2两个亚单位基因,并试用不同的表达载体对两个AgB亚单位基因的表达情况进行比较观察.方法 设计特异性引物,扩增AgB1和AgB2亚单位抗原基因,分别用pET28a(+)、pET32a(+)和pGEX4T-13种表达载体构建重组质粒,对AgB亚单位基因在不同载体中的表达情况进行比较.结果 从我国细粒棘球绦虫分离株中克隆的AgB1和AgB2抗原基因与GenBank中的序列比对,AgB1与德国人源、巴西羊源、意大利牛源均有一定的核苷酸和氨基酸差异;AgB2与乌拉圭羊源序列完全一致.在3种载体中表达重组蛋白的结果显示,不同载体和表达系统对重组表达蛋白的生物活性和可溶性有较大的影响.结论 成功地克隆了细粒棘球蚴AgB亚单位基因,AgB1和AgB2基因在3种不同表达载体中的表达情况及对融合标签蛋白的血清基础反应性的比较分析表明,两个重组抗原在pET32a载体中的表达优于pET28a和pGEX4T-1载体.
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乳链菌表达系统的构建及其鉴定
目的构建可以在乳链菌表达外源性基因的系统.方法采用基因拼接方法拼装含有P59启动子、USP45蛋白信号肽及多克隆位点的基因序列,并将其连入质粒pBluescript Ⅱ SK(+)以形成重组质粒pBS-PU,PCR扩增USP45终止子并连接至质粒pBS-PU构建可将外源性基因分泌表达于菌体外的质粒pNBC1000,PCR扩增M6基因随后连接至pNBC1000构建可将外源性基因分泌表达于菌体外及锚定表达于细胞壁的质粒pNBC2000.通过将增强绿色荧光蛋白(EGFP)基因连接至质粒pNBC2000,激光共聚焦显微镜下观察含有pNBC2000-EGFP质粒及对照质粒的细菌,验证EGFP定位表达情况.结果所构建的表达系统可以表达EGFP基因.结论通过基因拼接方法成功构建了乳链菌表达系统,其可将外源性基因分泌表达于菌体外.
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登革病毒重组包膜蛋白表达及其应用的研究进展
登革病毒(dengue virus,DV)是当前严重影响人类健康的虫媒传播病毒,无特效的疫苗和药物.目前在DV的诊断、疫苗的研发以及对抗体依赖性增强效应(ADE效应)机制的研究上,DV包膜蛋白越来越受到人们的关注.研究人员通过不同的载体表达不同形式的DV包膜蛋白,对研究目的以及研究结果的应用有着巨大的影响.本文主要就DV包膜蛋白在不同表达系统中的表达方式进行综述,尝试比较分析各种表达系统表达包膜蛋白的关键点以及其应用范围.
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蛇毒神经生长因子基因表达系统的探讨
神经生长因子(Nerve Growth Factor,NGF)早是20世纪50年代初由Levi-Montalcini在小鼠肉瘤中发现的,自从获得诺贝尔奖的Cohens从蛇毒中首次分离了NGF突破了资源关后,使得NGF得以进行开拓性的研究.
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大肠埃希菌JM109表面抗原 Ag43基因敲除与鉴定
目的：敲除大肠埃希菌JM109表面抗原43（Ag43）基因并对其进行鉴定。方法采用Sigma公司的TargeTron基因敲除系统和Ag43基因特异设计的PCR引物扩增获得突变Ⅱ组内含子RNA蛋白复合体（RNP）基因序列，然后将这段基因序插入表达RNP的质粒pACD4K‐C中，获得Ag43特异的重组RNP质粒pACD4K‐Ag43。后将pACD4K‐Ag43转化JM109，经过IPTG诱导表达将Ⅱ组内含子插入Ag43特异的部位。结果通过软件分析发现插入Ⅱ组内含子的佳位点位于碱基1812和1913之间，琼脂糖凝胶电泳发现PCR扩增的突变Ⅱ组内含子RNP基因序列分子量大小和预期值（350 bp）相一致，用NheⅠ和HindⅢ二种酶切分析重组质粒pACD4K‐Ag43结果和预期值相符，PCR扩增相应产物和基因测序显示Ⅱ组内含子特异地插入Ag43基因碱基序列的1812／1913位点。结论成功地将大肠埃希菌JM109中的基因敲除，为更进一步深入研究Ag43基因的功能和将其作为制备重组Ag43嵌合蛋白的宿主菌奠定了基础。
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浅谈手语在医疗护理工作中的应用
手语是一种特殊的语言,也是人类交流的基本方式之一.它是由手形动作辅之以表情姿势而构成的比较稳定的表达系统.手语以手势动作来表示语言文字的含义,其特点主要是模拟、象征物的形状[1].手语是聋哑人交流的主要工具.作为特定社会机构的医院,难免要与聋哑病人这一特殊群体进行接触,因而常常会碰到说不清、道不明的尴尬场面,有时还会发生误解,甚至引起医疗纠纷[2].同时,一些病人由于疾病的原因暂时失去了听觉或言语的能力,他们的医疗护理工作也是医院工作的难点之一.因此如何充分发挥手语的作用,协助医务人员开展医疗护理工作,早日解除病人的痛苦,成为当前医院工作必不可少的环节.
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病毒样颗粒疫苗的生产及其在临床应用中的研究进展
病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs)是由一个或多个病毒结构蛋白组成的纳米级颗粒.它不含病毒的遗传物质而失去感染性,但保留了天然病毒衣壳相似的免疫原性,被用于疫苗的研发与生产.与天然病毒类似,VLPs可以分为无囊膜及囊膜两种类型,它们均能在异源表达系统表达病毒结构蛋白时自装配而形成,且能够直接作为疫苗或作为展示平台构建疫苗以预防相应疾病.根据VLPs的复杂程度,可以在适当的原核、真核或无细胞表达系统下生产.目前,已经有多种针对病毒、细菌、寄生虫、真菌的VLPs疫苗在不同的表达载体上被成功构建,其中部分疫苗已经商品化,另一些则进入不同的临床阶段.本文主要综述了VLPs疫苗表达系统及VLPs疫苗作为商业医疗产品的临床发展现状及其面临的挑战.
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昆虫杆状病毒表达系统的研究进展
体外基因表达系统包括原核细胞系统和真核细胞系统.原核细胞系统主要是大肠杆菌细胞, 它操作简便、周期短、收益大及表达产物稳定, 但是表达基因的相对分子质量(Mr)有限, 不宜过大, 且不能对表达产物进行一些翻译后加工、修饰.真核细胞系统包括CHO等哺乳动物细胞、酵母细胞和昆虫细胞等.昆虫细胞表达系统(即杆状病毒表达系统)具有独特的生物学特性, 日益受到人们的重视.
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幽门螺杆菌基因工程疫苗的研究进展
幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染是慢性活动性胃炎和消化性溃疡的主要病因,与胃腺癌、B细胞淋巴瘤的发生亦密切相关.世界卫生组织国际癌症研究机构(IARC)已将Hp列为Ⅰ类致癌因子[1].流行病学调查显示,全世界成年人口约50%携带该菌[2].
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包膜病毒样颗粒疫苗研究进展
病毒样颗粒(VLPs)是指由病毒一个或几个结构蛋白自行组装成不含病毒基因组且不能复制、不具有感染能力的病毒样蛋白颗粒,形态结构上类似完整病毒,具有与完整病毒相似的免疫原性.VLPs可以分为两大类:无包膜VLPs和包膜VLPs,包膜VLPs被源于宿主细胞的脂质包膜包裹,包膜表面含有保护性抗原纤突.主要就包膜病毒样颗粒疫苗的结构、重组表达及免疫原性等方面的研究进展进行了综述.
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宿主细胞系用于病毒性疫苗生产初期可行性的比较
为了缩短病毒疫苗研究和生产的时间，应以宿主细胞系作为表达系统来生产抗多组病毒病原体的病毒性疫苗。选择的作为表达系统的各细胞系，就其对于脊灰病毒、A型流感病毒和呼吸道合胞病毒（野生型株A2）复制作用的初期可行性进行比较。研究了6个贴壁细胞系（ Vero、HEK-293、MRC-5、CHO-K1、BHK-21 c13、MDCK ）和6个单细胞悬浮式细胞系（ CAP、AGE1、CR ．HS、sCHO-K1、BHK-21 c132 p、MDCK SFS ）它们增殖病毒的能力。第一，测定了细胞大密度，第二，用流式细胞计量术和免疫细胞化学监测了分配有8种不同病毒受体的细胞系的病毒受体表达与极化作用。通过用编码肌动蛋白-EGFP的构建物LifeactTM 转染细胞研究了肌动蛋白细胞骨架的组织。后，测定了每一个细胞系生产所研究病毒的子代的能力。结果表明，培养于无血清培养基的单细胞悬浮细胞系是好的用于病毒复制的宿主细胞系候选者。
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毕赤酵母高效表达外源基因的研究进展
巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris,Pp)表达系统是目前分子生物学领域中用于表达重组蛋白的标准工具之一[1,2].酵母被认为是一个很有前途的真核表达系统而受到广泛的关注.本文综述了Pp在生物学特性、遗传学特征、载体、基因整合、胞内表达和分泌表达、影响外源蛋白在Pp表达系统中高效生产因素的研究进展.
