首页 > 文献资料
-
C基因型HBV较B基因型HBV易引起肝炎慢性化的机制
目的 探讨HBV C基因型较B基因型易引起肝炎慢性化的机制.方法 从GenBank分别下载C基因型和B基因型小S蛋白的氨基酸序列(即HBsAg),用CLustalW2.0生物软件分别比较C基因型和B基因型小S蛋白氨基酸序列的相似性;用神经网络的方法预测同基因型不同的小S蛋白氨基酸序列之间的T细胞表位的差异.结果 通过分别比较C基因型和B基因型小S蛋白的氨基酸序列的相似性,C基因型小S蛋白的氨基酸序列之间的相似性为(90～100)%,B基因型小S蛋白的氨基酸序列之间的相似性为(94～100)%;同基因型不同的小S蛋白氨基酸序列之间的T细胞表位存在明显差异.结论 C基因型小C蛋白的氨基酸序列之间较大的变异和同基因型不同的小S蛋白氨基酸序列之间的T细胞表位的差异可能是HBV C基因型较B基因型易引起肝炎慢性化的原因或部分原因.
-
HBV特异性T细胞表位肽的研究和应用
HBV特异性T细胞表位肽能够刺激机体产生特异的T细胞免疫应答反应.寻找能快速有力激发T细胞应答的抗原肽,提高患者自身的免疫水平,达到清除病毒的目的.随着免疫学和生物信息学的高速发展,研究T细胞表位肽的方法不断进步,越来越多的T细胞表位肽被发现,T细胞表位肽在HBV持续感染治疗中也有非常重要的应用.
-
T细胞克隆应用研究进展
T细胞克隆指将单个T细胞从细胞群中分离出来后单独培养,使之重新繁殖成为单一克隆的T细胞群体.它是研究T细胞的有效手段,广泛应用于T细胞受体、T细胞治疗、T细胞表位、移植免疫以及细胞因子分泌和细胞间的协调作用等研究领域,并已取得了重要进展,本文拟就有关内容作一综述.
-
结核分枝杆菌抗原Rv2389的T细胞表位的生物信息学分析
目的:分析结核分枝杆菌(MTB)抗原Rv2389的T细胞表位,确定和筛选优势表位,为研制更加有效的诊断标志物,和更安全、高效的表位疫苗奠定基础.方法:应用在线预测软件IEDB和SYFPEITHI对MTB抗原Rv2389的T细胞表位进行预测,并与ESAT-6相比较;采用SOPMA Sever软件预测其编码蛋白的二级结构;用ExPASy在线软件预测Rv2389的三级结构,综合分析Rv2389的T细胞抗原决定簇.结果:经软件分析,Rv2389多肽预测分值普遍高于ESAT-6,Rv2389分值较高的T细胞表位区域氨基酸位于35～43、85～93、107～126和184～200.MTB抗原Rv2389蛋白无规则卷曲占71.89％,β折叠占5.53％,主要覆盖的氨基酸区域位14～23,51～67,72～112,117～127和134～212.说明这些肽段存在潜在的抗原表位优势区域的可能性;三级结构预测显示,85～93位氨基酸和107～126位氨基酸暴露于蛋白表面,是有可能的抗原表位.结论:经生物信息学软件预测MTB抗原Rv2389有2个T细胞优势表位,即85～93位和107～126位氨基酸.
-
人绒毛膜促性腺激素β亚基的T细胞表位
本文根据人绒毛膜促性腺激素β亚基(β-Hcg)序列用多针同步固相多肽合成技术合成了一系列短肽,用T细胞增殖法进行T细胞表位的筛选.结果表明,合成的肽纯度高,结构正确.完全满足细胞表位筛选的要求.β-Hcg(19-30)、(37-48)、(85-96)、(136-145)段肽与对照相比有显著性差异,为免疫活性较高的区域.
关键词： 人绒毛膜促性腺激素 多针同步固相多肽合成技术 T细胞表位 -
户尘螨Der p2T细胞表位融合肽对哮喘小鼠STAT6信号通路的影响
目的 通过户尘螨(Dermatophagoides pteronyssinus)2类变应原Der p 2 T细胞表位融合肽对哮喘小鼠的特异性免疫治疗,探讨信号转导因子和转录活化因子6 (signal transducer and activator of transcription factor 6,STAT6)的变化及其特异性免疫治疗的作用机制. 方法30只小鼠用随机数表法分为哮喘组、Der p 2 T 细胞表位融合肽免疫治疗组(简称免疫治疗组)和阴性对照组(PBS组),每组10只.哮喘组和免疫治疗组分别于第0、7、14天经小鼠腹腔注射100μl致敏液[含100 μg/ml Der p2和2％ Al (OH)3的PBS液],PBS组注射等量PBS液[含2％ Al (OH)3].哮喘组和免疫治疗组自第21天起,雾化吸入0.5 μg/ml Der p 2致敏液,1次/d×30 min,连续7 d;PBS组雾化吸入等量PBS液.免疫治疗组在第25～27天雾化前30 min,经腹腔注射100 μg/ml Der p 2 T细胞表位融合肽200μl,PBS组和哮喘组注射等量PBS液.末次雾化吸入24h后处死小鼠,收集每组小鼠的支气管肺泡灌洗液(BALF),用ELISA检测BALF中白细胞介素-4(IL-4)、IL-13、γ干扰素(IFN-γ)水平.取肺组织提取肺组织全蛋白,蛋白质印记(Western blotting)检测肺组织全蛋白中STAT6和磷酸化STAT6(p-STAT6)的表达情况.组间样本的均数比较采用单因素方差分析. 结果 免疫治疗组小鼠的IFN-γ水平为(234.40±24.46) pg/ml,高于哮喘组的(155.80±20.53) pg/ml (P＜ 0.01);免疫治疗组小鼠的IL-4和IL-13水平分别为(30.00±5.50)和(174.50±25.99) pg/ml,均低于哮喘组小鼠的(53.28±8.26)和(308.10±28.32) pg/ml(P＜0.01).免疫治疗组小鼠STAT6、p-STAT6的相对表达量分别为0.803±0.221和0.966±0.323,均低于哮喘组的1.669±0.296和1.735±0.298(P＜0.01). 结论Der p 2 T细胞表位融合肽可能通过抑制STAT6治疗哮喘组小鼠.
-
屋尘螨1类变应原T细胞表位融合肽对过敏性哮喘小鼠的免疫治疗效果
目的 探讨以屋尘螨(Dermatophagoides pteronyssinus)1类变应原T细胞表位融合肽(TAT-IhC-DPTCE)为疫苗,评价其对过敏性哮喘小鼠特异性免疫治疗的效果. 方法 120只SPF级BALB/c小鼠随机均分为PBS组(阴性对照,A组)、ProDer p 1变应原致敏组(B组)、ProDer p 1变应原免疫治疗组(C组)、DPTCE蛋白免疫治疗组(D组)、TAT-DPTCE蛋白免疫治疗组(E组)和TAT-IhC-DPTCE蛋白免疫治疗组(F组),每组20只.分别于第0、7、14天,A组小鼠腹腔注射PBS,B～F组小鼠均腹腔注射屋尘螨变应原提取液10 μg.第21天起,A组小鼠雾化吸入PBS,B～F组小鼠均吸人0.5 μg/ml屋尘螨变应原提取液,1次/d×30 min,连续7d.C～F组小鼠于第25 ～27天雾化前30 min分别腹腔注射100 μg/ml ProDer p 1、DPTCE、TAT-DPTCE和TAT-IhC-DPTCE溶液各200μl,进行特异性免疫治疗,A、B组小鼠分别注射200 μlPBS.后1次雾化后24 h,处死各组小鼠.HE染色观察小鼠肺组织病理变化.分别收集各组20只小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF),ELISA检测BALF中γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素13(IL-13)、IL-10和β转化生长因子(TGF-β)的水平,并计数嗜酸粒细胞数量(EOS).分别取各组5只小鼠眼眶血,ELISA检测血清中变应原特异性IgE、IgG1和IgG.的抗体水平.结果 HE染色镜检结果显示,与B组比较,F组小鼠支气管周围嗜酸粒细胞增多、上皮细胞脱落和支气管上皮细胞肥大等肺部炎症明显减轻.小鼠BALF中,F组的IFN-γ水平为(298.75±26.09) pg/ml,高于B组(158.71±20.89) pg/ml、C组(210.38±18.92) pg/ml、D组(229.44±13.00) pg/ml和E组(233.24±20.39) pg/ml(P＜0.01);IL-10和TGF-β水平与IFN-γ相似,F组IL-10和TGF-β水平分别为(105.32±.7.24)和(119±9.33) pg/ml,均高于B组(23.29±3.18)和(41.19±4.63) pg/ml、C组(43.54±4.28)和(60.19±6.47) pg/ml、D组(51.33±6.19)和(69.34±8.27) pg/ml、E组(52.78±7.83)和(71.22±7.94) pg/ml (P＜0.01);而C、D、E和F组的IL-13水平分别为(47.35±4.71)、(41.90±4.28)、(41.05±6.50)和(18.53±5.67) pg/ml,均低于B组(66.68±6.63) pg/ml(P＜0.01),其中F组IL-13水平低.B组小鼠BALF中的EOS数量为(5.65±0.91)×105/ml,高于A组(0.45±0.39)×105/ml(P＜0.01),而C、D、E和F组的嗜酸粒细胞数量均显著下降,分别为(4.00±0.59) ×107ml、(3.39±0.63) ×105/ml、(3.24±0.69)×105/ml和(1.42±0.49) ×105/ml(P＜0.01).血清中抗体水平的ELISA检测结果显示,F组小鼠血清IgE水平为(5.26±1.72) ng/ml,低于B组(32.81±2.98)ng/ml、C组(20.06±3.17) ng/ml、D组(17.06±3.18) ng/ml和E组(16.23±3.61) ng/ml(P＜0.01);F组中血清IgG1水平为(9.85±1.42) ng/ml,亦低于B组(43.72±3.05) ng/ml、C组(31.54±4.25) ng/ml、D组(25.20±2.91) ng/ml和E组(23.96±4.12) ng/ml(P＜0.01或P＜0.05);F组中血清IgG2a水平为(43.10±1.34) ng/ml,高于B组(12.61±1.87) ng/ml、C组(23.37±2.67) ng/ml、D组(25.60±2.10) ng/ml和E组(25.91±1.33) ng/ml (P＜0.01). 结论 通过TAT-IhC-DPTCE免疫治疗小鼠哮喘,可有效改善小鼠变态反应性气道及肺部炎症.
-
户尘螨Ⅱ类变应原Der p2 T细胞表位融合基因的克隆和原核表达
目的 原核表达、纯化户尘螨(Dermatophagoides pteronyssinus)主要变应原Der p2的T细胞表位融合肽. 方法 将已报道的户尘螨Der p2中编码4个T细胞表位(T1～T4)的核苷酸序列以T1-T2-T3-T4的方式连接,人工合成为嵌合基因,命名为Der p2 T.PCR扩增目的基因Der p2 T,将纯化的扩增片段克隆至pET-28a(+)载体,构建原核重组表达质粒pET-28a(+)-Der p2 T,并进行双酶切验证.大量诱导表达含pET-28a(+)-Derp2T的E.coli BL-21菌株,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,经Ni-NTA亲和层析获得纯化重组蛋白,并进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)分析.ELISA法检测重组Der p2 T细胞表位融合肽对户尘螨过敏患者血清IgE抗体的结合能力. 结果 双酶切结果表明,构建了原核重组表达质粒pET-28a(+)-Der p2 T.SDS-PAGE分析结果显示,获得相对分子质量(Mr)为10 000的重组Der p2T细胞表位融合肽.Western blotting分析结果显示,纯化了Der p2的T细胞表位融合肽.Der p2 T细胞表位融合肽对粉尘螨哮喘患者的血清IgE结合能力[(37.70±9.89) μg/ml]较Der p2显著降低[(85.89±9.63) μg/ml](P＜0.01). 结论 制备Der p2 T细胞表位融合肽.与Der p2相比,重组Der p2 T细胞表位融合肽对户尘螨过敏患者血清IgE抗体的结合能力明显降低.
-
日本血吸虫22.6 kDa抗原T细胞表位的重组、表达及初步鉴定
目的鉴定日本血吸虫中国大陆株22.6 kDa抗原(Sj22.6)的T细胞表位.方法用计算机软件预测Sj22.6分子的T细胞表位,设计并合成其编码核苷酸,定向克隆入融合表达载体pET-32c(+),转化大肠杆菌BL21感受态细胞,经酶切及测序鉴定出重组克隆.阳性克隆经IPTG诱导表达,表达产物用NTA柱纯化.用纯化后的表位肽融合蛋白体外刺激C3H小鼠脾单个核细胞,3H-TdR掺入法检测其增殖.结果用计算机软件预测获得Sj22.6抗原的4个候选表位肽,并成功克隆入pET-32c(+).其重组体均可表达分子量约20 kDa的融合蛋白,用NTA柱纯化后经12%聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)显示单一条带.其中P4、P5、P6融合蛋白能有效刺激小鼠脾单个核细胞增殖.结论从Sj22.6抗原中初步鉴定出P4、P5、P6 3个T细胞表位.
关键词： 日本血吸虫 22.6 kDa抗原 T细胞表位 鉴定 -
屋尘螨变应原Der p2 T细胞表位疫苗对哮喘小鼠的特异性免疫治疗效果
目的：探讨屋尘螨变应原Der p2的4个T细胞表位融合肽对哮喘小鼠的特异性免疫治疗效果。方法30只雌性BALB/c小鼠随机分为3组，分别为阴性对照组（PBS组）、阳性对照组（哮喘组）以及Der p2 T细胞融合肽治疗组（Der p2 T组）。用屋尘螨粗提取液致敏小鼠建立哮喘模型，PBS组以PBS缓冲液代替，Der p2 T组分别于小鼠致敏第25～27天雾化致敏前30 min行背部皮下注射相应治疗蛋白。后一次雾化激发24 h后，收集各组小鼠血清及支气管肺泡灌洗液（BALF）。采用ELISA法检测小鼠BALF中IFN?γ、IL?4、IL?13以及血清中屋尘螨粗提取液致敏的特异性IgE、IgG2a抗体水平，并行肺组织切片HE染色。结果哮喘组小鼠BALF中的嗜酸性粒细胞数量为（5.57±0.64）×105个/ml，高于PBS组[（0.50±0.30）×105个/ml]（P<0.01）和Der p2 T组[（3.45±0.36）×105个/ml]（P<0.01）。PBS组、哮喘组、Der p2 T组小鼠BALF中IFN?γ含量分别为（267.00±21.98）、（155.80±20.53）pg/ml和（234.40±24.46）pg/ml；与哮喘组比较，Der p2 T组小鼠BALF中产生了较高的IFN?γ水平（P<0.01）。PBS组、哮喘组、Der p2 T组小鼠BALF中IL?4含量分别为（23.40±5.96）、（53.28±8.26）pg/ml和（30.00±5.50）pg/ml；与哮喘组比较，Der p2 T组小鼠BALF中IL?4含量显著降低（P<0.01）。与哮喘组[（308.10±28.32）pg/ml]比较，Der p2 T组小鼠BALF中IL?13含量[（174.50±25.99）pg/ml]显著下降（P<0.01）；PBS组鼠BALF中IL?13含量为（95.99±31.14）pg/ml。肺组织切片显示，Der p2 T组小鼠肺部炎症较哮喘组明显减轻，且炎性细胞浸润显著减少、气道上皮结构重塑。结论 Der p2 T细胞表位融合肽可有效改善哮喘小鼠变态反应性气道及肺部炎症，可作为屋尘螨哮喘患者特异性免疫治疗的候选疫苗。
-
结核杆菌ESAT-6抗原多表位DNA疫苗的构建与表达
目的:构建含3个结核杆菌ESAT-6抗原T细胞表位及Fh3配体基因的重组质粒,并使其在大鼠肾小球系膜细胞(GMCs)中表达.方法:用计算机软件预测结核杆菌ESAT-6抗原的T细胞表位谱,选取3个T细胞表位,并以Ala-Ala-Tvr(AAY)序列作为接头,合成全基因序列,定向克隆入真核双表达载体pIRES及质粒plRES-FL.在酶切分析与序列测定后.用PEI转染至GMCs细胞,并行Western blot鉴定其体外表达.结果:核酸序列测定证实重组质粒构建正确,Western blot证实该重组质粒能在体外GMCs细胞中表达融合蛋白.结论:成功构建了结核杆菌ESAT-6抗原多表位基因重组质粒.
-
人MUC4氨基酸序列片段CD+8T细胞表位的多参数预测
目的:预测人MUC4氨基酸序列(AAD53171)的CD8T细胞表位.方法:结合2种常用表位预测数据库和工具,应用多种参数和方法进行综合分析,包括主要组织相容抗原(MHC)结合力、蛋白酶体切割位点等综合预测方法.结果:得到HLA-A*0201的1(ATLLPVTSL)、145(ATPLPVTSL)和52(LPVTDASSV)3个可能表位,和HLA-A24的145(ATPLPVTSL)、1(ATLLPVTSL)两个可能表位.结论:本研究为应用合成肽抗原制备MUC4肿瘤疫苗提供了依据,提供了表位预测的可行方法.
-
靶向人端粒酶逆转录酶T细胞表位肽的治疗性癌症疫苗研究进展
人端粒酶逆转录酶(hTERT)是人端粒酶的催化亚单位,正常成熟组织中基本无表达,而在多数恶性肿瘤中高表达,而使其成为恶性肿瘤特异性疫苗免疫治疗的首选抗原.T细胞表位肽疫苗是用抗原的T细胞表位制备的疫苗,在肿瘤免疫治疗中有其独特的优势.hTERT的T细胞表位肽疫苗可诱导机体产生特异性免疫应答,在小鼠体内显示了抗肿瘤效应,并已进入人体试验阶段,显示出较好的应用前景.文中就hTERT的T细胞表位肽疫苗在恶性肿瘤中的免疫治疗的研究进展作一综述.
-
人端粒酶逆转录酶HLA-A* 0201限制性CTL表位的预测和鉴定
目的 人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)在正常组织中不表达而在肿瘤组织中广泛表达,且与肿瘤生长密切相关,是肿瘤免疫治疗的理想靶位.HLA-A* 0201是中国人群中为常见的HLA-I类分子的型别,阳性率达30％.筛选hTERT HLA-A* 0201限制性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic lymphocyte,CTL)表位,对于有hTERT表达的人群的肿瘤免疫治疗有重要临床意义.文中采用生物信息学和免疫学方法,预测和鉴定hTERT的HLA-A* 0201限制性CTL表位. 方法 联合利用表位预测数据库SYFPEITHI、BIMAS和NetCTL和分子模拟技术对hTERT的HLA-A* 0201限制性CTL表位进行预测.用T2细胞株测定各肽与HLA-A *0201分子的亲和力和稳定性.酶联免疫吸附斑点法(enzyme linked immunospot assay,ELISPOT)检测HLA-A* 0201+健康人对肽的T淋巴细胞反应. 结果 预测得出hTERT抗原的6个CTL表位,即ILAKFLHWL(540 ～548)、LMSVYVVEL(548～556)、ILSTLLCSL(836 ～844)、CLKELVARV( 76～84)、LLGASVLGL (675～683)、FLDLQVNSL(923～931).分子模拟的计算结果提示ILAKFLHWL(540～548)和LLGASVLGL (675～683)肽与HLA-A*0201分子之间的结合较其他多肽稳固.亲和力实验结果表明上述2个肽与HLA-A* 0201的亲合力较强,荧光系数FI分别为3.20和2.98,肽-HLA-A* 0201复合物半数解离时间DC50均大于8h.ELISPOT显示ILLGASVLGL (675～683)与其他5个肽相比,可诱导较强的T淋巴细胞反应,T细胞频率为(534±57)个斑点形成细胞(spot-forming cell,SFC)/106个外周血单个核细胞( peripheral blood mononeuclear cell,PBMC). 结论 ILLGASVLGL( 675～683)有可能是人端粒酶逆转录酶HLA-A*0201的限制性CTL表位.
-
汉坦病毒核衣壳蛋白T细胞表位研究进展
汉坦病毒核衣壳蛋白是主要结构蛋白,具有很强的抗原性和免疫原性,可诱导细胞免疫,尤其是特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)反应,在抗病毒免疫中起着关键作用.本文就近年来汉坦病毒核衣壳蛋白T细胞表位方面的研究作一简要综述.
-
精子相关抗原9 B细胞及T细胞表位富集区预测
目的:预测人精子相关抗原9(SPAG-9)的表位富集区.方法:以SPAG-9的全长序列为基础,利用生物信息学软件,采用Hopp&Woods的亲水性方案、Zimmerman极性参数和Jameson-Wolf抗原指数方案和Emini表面可及性方案,并结合SPAG-9的二级结构与其柔性区域及跨膜区域对SPAG-9的优势B表位进行综合分析,进一步运用抗原指数分析预测SPAG-9的B细胞表位.同时,分别应用SYFPEITHI、NetCTL以及IEDB预测HLA-A2、HLA-A24限制的CTL表位.后,综合B细胞表位和CTL表位,预测SPAG-9的表位富集区.结果:经综合分析,SPAG-9的B细胞优势表位可能存在于N端的197-201,236-243,249-253,291-299,306-312,324-327,332-337,348-352,488-494,539-542,546-550,565-573,699-702,802-807,869-873,875-880,882-887,1173-1178,1195-1200区段.其HLA-A2限制的CTL表位肽为19-27,49-57,50-58,56-64,343-351,381-389,413-421,447-455,521-529,551-559,665-673,733-741,837-845,926-934,950-958,964-972,998-1006,1016-1024,1094-1102,1140-1148,1150-1158区段,HLA-A24限制的CTL表位肽为31-39,137-145, 517-525,943-951.综合B表位与CTL表位,SPAG-9的332-352与551-573区段,即SAENEEKSEVQAIIESTPELD、SIWQFFSRLFSSSSNTTKKPEPP肽段是SPAG-9的表位富集区.结论:利用生物信息学预测发现SPAG-9抗原的332-352与551-573为SPAG-9的表位富集区.
-
羊种布鲁氏菌OMP16蛋白结构的生物信息学分析
目的 使用生物信息学方法预测羊布鲁氏菌OMP16蛋白的结构特点,并预测可能的B细胞和T细胞优势表位.方法 从NCBI数据库中获取羊布鲁氏菌的OMP16蛋白的氨基酸序列.通过ProtParam分析OMP16蛋白的理化性质;利用DNAstar和SOMPA分析OMP16蛋白二级结构;利用Phyre2和Rasmol构建并分析OMP16蛋白三级结构;利用IEDB、DNAStar、ABCpred和BepiPred预测OMP16蛋白的B细胞抗原表位;利用SYFPEITHI和IEDB预测OMP16蛋白的T细胞抗原表位.结果 OMP16蛋白有426个氨基酸序列,理论等电点为9.72,原子组成为C2026H3209 N499O536S17,为稳定性疏水性蛋白.二级结构显示α-螺旋、β-折叠、β-转角和无规则卷曲分别是40.61％,19.01％,8.45％和31.92％.预测出4个B细胞优势表位,分别是93-102,183-187,273-289,294-301;5个CTL细胞优势表位,分别是69-77,175-183,267-275,373-381,408-416;5个Th细胞优势表位,分别是4-20,32-46,63-77,316-330,352-366.结论 羊布鲁氏菌OMP16蛋白结构中有4个B细胞优势表位,5个CTL细胞优势表位和5个Th细胞优势表位,为进一步为布鲁氏菌诊断和疫苗研究的奠定基础.
-
创伤弧菌溶细胞素抗原表位预测及其噬菌体展示肽的构建
目的 预测创伤弧菌溶细胞素(vibrio vulnificus cytolysin)的抗原表位,为研制多抗原肽疫苗(MAP)奠定基础.方法 采用生物信息学技术对Vvc的T细胞和B细胞表位进行预测及分析.选取Vvc主要T细胞和B细胞联合表位肽构建噬菌体展示系统.PEG/NaCl沉淀法提纯重组噬菌体,SDS-PAGE鉴定目的重组PIII蛋白(rPIII).Ni-NTA亲和层析法纯化的重组蛋白rVvc常规皮下免疫法制备兔抗血清.rVvc抗血清为一抗,采用Western blot对上述表位肽进行鉴定和筛选.结果 预测的4个主要表位肽Vvha1、 Vvah2、 Vvha3和Vvha4在M13噬菌体中获得成功表达.采用rVvc抗血清为一抗,Western blot对上述表位肽进行鉴定和筛选:Vvha2、Vvha4反应强度高于Vvha1和Vvha3.结论 本实验成功地构建Vvc主要T细胞和B细胞联合表位肽噬菌体展示系统.
-
Q热疫苗研究
Q热(Q fever)为一种世界性分布的重要人兽共患病,疫苗接种是预防Q热的有效手段.专性细胞内寄生的贝氏柯克斯体是Q热的病原体,灭活I相贝氏柯克斯体Q热疫苗(WCV)免疫保护效能几乎为100％,但是其免疫副反应强.氯仿—甲醇提取贝氏柯克斯体(CMR)和三氯醋酸提取贝氏柯克斯体可溶性抗原(TCA)Q热疫苗保留灭活Q热疫苗的免疫保护效能,且免疫副反应显著减轻.但CMR和TCA Q热疫苗均需要用鸡胚大量培养贝氏柯克斯体,需要在高等级生物防护实验室采用复杂步骤提取、纯化贝氏柯克斯体,这些使Q热疫苗的生产成本高、批量生产难.近十年来,国内外Q热疫苗研究着力于分子疫苗,并已经由研究贝氏柯克斯体保护性抗原转移到筛选能诱导特异性细胞免疫应答的C D4+和CD8+T细胞表位上,以期望T细胞表位在机体内高效表达,诱导机体产生良好的抗Q热保护性免疫应答.
-
乙肝核心抗原为载体进行HCV治疗性疫苗的实验研究
目的 以乙肝核心抗原为载体进行HCV T表位的表达,并对表达产物进行免疫原性分析.方法 利用DNA重组技术将HCV T表位(131-140aa)插入HBcAg el-loop处,构建病毒颗粒样抗原表达载体pTrc-core-HCV(T),并在JM109中进行表达,蔗糖密度梯度离心提取纯化表达产物HBcAg-T,该蛋白经免疫原性检测、纯度分析及定量后,以pTrc-core表达产物HBcAg作对照免疫Balb/C鼠.适时进行抑瘤实验、HBcAb检测、流式细胞仪进行T细胞分类,以观察HBcAg-T的免疫原性.结果 抑瘤实验中HBcAg-T免疫组小鼠仅形成一个瘤块,数量和大小均低于对照组,ELISA结果显示HBcAg-T免疫组HBcAb滴度相似于HBcAg免疫组,流式散点图显示HBcAg-T免疫组CD8+T细胞所占比例明显增高.结论 HBcAg-T诱导出高水平的细胞免疫应答,可作为HCV治疗性疫苗的候选.该实验为HCV治疗性疫苗的成功研制奠定了基础.
