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5-FU增强TRAIL诱导的胃癌BGC823细胞凋亡的实验研究
目的 观察5-FU对TRAIL诱导的胃癌BGC823细胞凋亡的影响,明确死亡受体5(DR5)在5-FU和TRAIL诱导凋亡中的作用.方法 采用MTT法测定细胞活力、流式细胞仪检测细胞凋亡、免疫印迹检测蛋白表达.结果 TRAIL可导致BGC823细胞轻度的增殖抑制和少量的细胞凋亡.与单药TRAIL和5-FU相比,TRAIL联合5-FU对细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用明显增强(P＜0.05).免疫印迹结果显示,TRAIL没有改变DR5的蛋白表达,而5-FU作用BGC823细胞48 h后,DR5蛋白表达上调(P＜0.05).TRAIL和5-FU联合作用后,DR5蛋白表达同样明显上调(P均＜0.05).结论 5-FU通过上调DR5蛋白表达提高了BGC823细胞对TRAIL的敏感性.
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Fas/FasL系统与胃癌
Fas抗原是细胞表面重要的死亡受体之一.Fas与相应配体(FasL)相结合是诱导细胞凋亡的重要途径之一.而肿瘤的发生不仅有细胞增殖的异常,也存在细胞凋亡的异常.近年来为了阐明胃癌发生过程中细胞凋亡异常的分子机制,对Fas/FasL系统在胃癌及癌前病变中的表达和作用进行了深入研究,现将有关的研究进展综述如下:
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皮肤血管瘤患儿肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体及死亡受体的表达与细胞凋亡的关系
目的探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)及其死亡受体4、5(DR4、DR5)在小儿皮肤血管瘤各阶段的表达及其与细胞凋亡的关系.方法采用免疫组织化学法检测增生期、消退期血管瘤和正常皮肤组织中TRAIL和DR4、DR5蛋白的表达,并采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的末端标记技术(TUNEL法)检测各组织细胞凋亡情况.结果TRAIL、DR4、DR5蛋白的阳性表达率及细胞凋亡指数(AI)在血管瘤消退期明显高于血管瘤增生期和正常皮肤组织(P＜0.05).结论血管瘤的各个阶段均存在细胞凋亡现象,在由增生期转变为消退期的过程中出现细胞凋亡的上调,TRAIL及DR4、DR5参与细胞凋亡的调节,其与血管瘤的自行消退过程有关.
关键词： 血管肿瘤 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 死亡受体 细胞凋亡 -
死亡受体4和5在颅咽管瘤中的表达
目的研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)的死亡受体(DR)4和DR5在颅咽管瘤细胞中的表达,探讨其临床意义.方法联合采用免疫组织化学和原位杂交方法检测颅咽管瘤28例和正常脑组织25例中DR表达.观察原位杂交前后颅咽管瘤和正常脑组织中DR表达差异性.结果免疫组织化学染色显示,颅咽管瘤28例均大量表达DR4和DR5,而正常脑组织25例中表达DR4 10例(40.0%),表达DR5 8例(32.0%).颅咽管瘤组织DR蛋白高表达不同于正常脑组织DR蛋白低表达,两者差异有显著性(P＜0.01).原位杂交显示,DR在28例颅咽管瘤组织和大部分正常脑组织中均呈强阳性表达,两者差异无显著性(P＞0.05).结论颅咽管瘤细胞中普遍存在DR高表达,这可能为颅咽管瘤的凋亡诱导治疗提供新靶点.DR蛋白在正常脑组织和颅咽管瘤中的表达差异可能是TRAIL选择性诱导凋亡的机制之一.
关键词： 颅咽管瘤 凋亡 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 死亡受体 -
抗人DR5单克隆抗体(mDRA-6)对Jurkat细胞作用研究
目的:观察抗肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)的死亡受体5(DR5)单克隆抗体-mDRA-6对Jurkat细胞的凋亡作用.方法:制备抗人DR5单抗-mDRA-6;检测Jurkat细胞表面DR5表达率;荧光显微镜下观察mDRA-6作用下Jurkat细胞形态变化;MTT法计算mDRA-6对Jurkat细胞存活的影响;FITC-AnnexinⅤ及PI双染流式细胞仪检测mDRA-6对Jurkat细胞凋亡率影响; 琼脂糖凝胶电泳检测mDRA-6对Jurkat细胞DNA片段化的作用.结果:Jurkat细胞表面DR5表达率为94.8%;mDRA-6使Jurkat细胞染色质边集、断裂,细胞出芽,凋亡小体形成;MTT法显示mDRA-6具有明显的Jurkat细胞杀伤作用,1.563 mg/L的mDRA-6可使Jurkat细胞死亡60.50%;AnnexinⅤ及PI双染显示0.3mg/L的mDRA-6作用10 h,Jurkat细胞凋亡率达43.22%;10 mg/L mDRA-6作用HL-60细胞3h, DNA琼脂糖凝胶电泳显示明显的"梯形"条带.结论:抗DR5单抗-mDRA-6能够诱导Jurkat细胞凋亡.
关键词： 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 死亡受体 凋亡 单克隆抗体 -
死亡受体调控的尘肺发病新机制
尘肺是一种古老的职业病,尘肺病发病机制研究已有80余年历史,虽然提出了多种学说,但均不能完全解释尘肺的病理过程.随着分子生物学技术的发展,对尘肺病的探索也深入到细胞、分子和基因水平.近年来越来越多的学者开始关注细胞信号转导及细胞凋亡在尘肺发病中的作用.本文从死亡受体及其信号通路在介导肺组织细胞凋亡与尘肺发病中的作用出发,阐述尘肺发病的细胞凋亡新理论,以期为尘肺病防治提供新的理论、方法和思路.
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死亡受体的信号传导途径及其调节机制
细胞凋亡是多细胞生物保证个体正常发育成熟和维持正常生理过程所必需的.凋亡细胞表面有特定的感应器即死亡受体,死亡受体可以接受胞外的死亡信号而激活细胞内的凋亡机制.本文简要综述了死亡受体的信号传导途径及其调节机制的研究进展.死亡受体CD95、TNFR1和DR3的信号传导途径相似,均有死亡结构域结合蛋白FADD和死亡效应蛋白caspase-8的参与,而DR4和DR5的信号传导途径研究得不是十分清楚,可能存在FADD依赖性和不依赖性两条不同的信号传导途径.
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死亡受体在肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导TT细胞凋亡中的作用
目的 观察死亡受体4(DR4)及死亡受体5(DR5)在肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导甲状腺髓样癌TT细胞凋亡中的作用.方法 噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖抑制情况;流式细胞仪检测细胞凋亡;实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测DR4及DR5的基因表达;Western blot检测DR4、DR5及半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-8蛋白的表达.结果 (1) TRAIL以1 000、2 000 μg/L作用48 h后对TT细胞的增殖抑制率分别为(7.51±1.57)％、(12.76±3.23)％,TT细胞对TRAIL具有明显抵抗性.(2)塞来昔布(celecoxib)联合TRAIL作用48 h,TT细胞凋亡率为(21.92±1.35)％,明显高于单用TRAIL[(4.32±0.83)％]及采用celecoxib[(14.29±2.15)％].(3)单用TRAIL,TT细胞DR5蛋白表达与对照组差异无统计学意义(P＞0.05),且表达量均很低;而单用celecoxib及celecoxib与TRAIL联合组均能上调TT细胞DR5 mRNA及蛋白的表达,两组差异无统计学意义(P＞0.05),同时联合组能够促进Caspase-8的裂解,而对DR4的表达则无明显作用.结论 TT细胞对TRAIL的抵抗性与DR5低表达有关,celecoxib能够上调DR5的表达,促进TRAIL对Caspase-8的裂解,增强TRAIL诱导凋亡的能力.
关键词： 死亡受体 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 塞来昔布 甲状腺髓样癌 -
FasL、抗DR5单克隆抗体对结肠癌细胞株HT29的杀伤作用及其机制
目的 探讨FasL、抗DR5单克隆抗体(Anti-DR5 mAb)对结肠癌细胞株HT29的杀伤作用及机制.方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、噻唑蓝(MTT)比色法、DNA倍体分析,Western blot等.结果 HT29细胞表面Fas mRNA的表达低于DIL5 mRNA的表达.50 mg/L FasL和Anti-DR5 mAb对HT29细胞的杀伤率分别为(25.49±0.90)%和(48.90±3.15)%,这种作用呈剂量依赖性.流式细胞术分析细胞周期和凋亡实验表明FasL和Anti-DR5 mAb能够抑制HT29细胞的生长,并且诱导它的凋亡.25 mg/L FasL和Anti-DR5 mAb对HT29细胞的凋亡指数分别为(13.8±1.5)%和(22.6±1.1)%.FasL和Anti-DR5 mAb作用HT29细胞后,Caspase-3蛋白表达上升,bcl-2蛋白表达水平下降.结论 FasL、Anti-DR5 mAb能不同程度的诱导结肠癌细胞株HT29凋亡,其机制与其受体和Caspase-3、bcl-2的表达有关.
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肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对人骨肉瘤的作用
目的 研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对人骨肉瘤的作用,以及此作用与TRAIL受体(TRAILR)在人骨肉瘤中表达的相关性.方法 应用原位杂交、Western blot方法检测人骨肉瘤细胞系MG-63及新鲜骨肉瘤组织块中TRAILR的表达;将在大肠杆茵中表达的TRAIL纯化后用于MG-63及新鲜骨肉瘤组织块,同法处理人白血病细胞株Jurkat作为阳性对照.MTT法检测细胞毒作用;流式细胞术检测凋亡,先镜下观察形态学变化,计数细胞,绘制生长曲线,测定细胞倍增时间.结果 人骨肉瘤中死亡受体DR4、DR5呈高表达而诱惑受体DcR1、DcT2 呈低表达,但TRAIL抑制人骨肉瘤细胞增殖而不能诱导其凋亡,MG-63在TRAIL作用下变肥大且呈编织排列.结论 人骨肉瘤细胞对TRAIL耐受与其诱惑受体表达无关,TRAIL能改变体外培养的人骨肉瘤细胞形态及增殖动力学.
关键词： 骨肉瘤 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 诱惑受体 死亡受体 -
细胞凋亡作用机制的研究进展
细胞凋亡(apoptosis,APO)是新近提出的有关细胞死亡的一种模式,是生物界重要的生命现象之一,就近几年来细胞凋亡机制研究进展作一综述,为相关研究提供参考.
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Caspase-8的研究进展
细胞凋亡依赖一类对天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶(caspases)产生的级联反应.caspase-8是死亡受体介导的凋亡途径中关键的启动子,能够通过寡聚而自身切割活化,并能激活下游caspase,产生凋亡效应.除此之外,caspase-8在非死亡受体介导的凋亡、细胞增殖等方面发挥作用.caspase-8基因甲基化、基因突变及其它表达异常可导致细胞凋亡和增殖失调,从而参与某些疾病的发生.
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细胞凋亡通路研究进展
凋亡发生是一个主动过程,该过程的启动和进行受到基因的精确调控,目前发现细胞凋亡存在三条通路:线粒体通路、死亡受体通路和内质网通路,各条通路间又有串话(cross talking),共同促进细胞凋亡.
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鼻咽癌组织细胞死亡受体DR4和DR5 mRNA的表达
目的分析鼻咽癌(NPC)组织细胞死亡受体(death receptor, DR)DR4和DR5 mRNA的表达.方法从NPC癌组织提取的细胞总RNA逆转录生成第一条cDNA链后,再用DNA多聚酶链式反应扩增.经电泳、溴乙锭染色后,分析DR4和DR5受体mRNA的表达.结果 20例NPC癌组织有12例可检测到DR4 mRNA 的表达,表达阳性率为60%.而所有20例NPC癌组织均可检测到DR5 mRNA的表达.8例非NPC鼻咽组织也都可检测到DR5 mRNA的表达,但未能检测到DR4 mRNA的表达.结论 DR4受体mRNA在NPC癌组织与非NPC鼻咽组织之间表达不同,而DR5受体mRNA在NPC癌组织与非NPC鼻咽组织之间的表达无差别,提示DR4和DR5死亡受体在NPC癌组织与非NPC鼻咽组织可能起着不同的作用.
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知柏地黄汤对解脲脲原体感染大鼠动物模型生殖细胞凋亡及Fas、FasL表达的影响
目的探讨知柏地黄汤(ZBDHD)抗大鼠解脲脲原体(UU)感染后生殖细胞凋亡及调节Fas、FasL(死亡受体、死亡因子)表达作用.方法将55只雄性SD大鼠,40只经膀胱注射造成解脲脲原体感染动物模型,观察60d,再随机抽取30只分成知柏地黄汤治疗组、西药治疗组、模型对照组,另取10只动物作正常空白对照组.连续灌胃45d后,检测各组UU培养结果、生殖细胞凋亡率、Fas、FasL表达水平.结果模型组与正常组、中药治疗组、西药治疗组相比,UU培养阳性率、生殖细胞凋亡率、Fas、FasL表达水平均有统计学差异(P＜0.05).正常组、中药治疗组、西药治疗组两两相比,各项指标均无统计学差异.结论知柏地黄汤有抗UU感染大鼠动物模型生殖细胞凋亡作用,能下调Fas、FasL表达水平.
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细胞凋亡发生机制研究进展
细胞凋亡是通过一系列基因的激活、表达及调控，按照自身程序出现的主动性、生理性的死亡过程。细胞凋亡在多细胞生物的组织分化、器官发育、机体稳态的维持中有着重要的意义。细胞凋亡异常会导致疾病的发生，如肿瘤、自身免疫性疾病、神经退化性疾病等。本文对细胞凋亡的生物学意义及其分子机制进行综述。
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TRAIL 及其受体对煤工尘肺患者肺泡巨噬细胞凋亡调控作用
目的：探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（ TRAIL）及其受体（ TRAILR）信号转导通路在煤工尘肺（ CWP ）患者肺泡巨噬细胞（ AM）凋亡中的作用机制。方法以接触煤尘及煤矽尘的24例观察对象和CWP壹期、贰期患者各22例为研究对象，收集大容量肺灌洗回收液，分离、纯化AM后，分为对照组、超氧化物歧化酶（ SOD ）组、TRAIL组、抗-TRAIL抗体组、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶（ Caspase ）-8抑制组、核转录因子（ NF ）-κB抑制剂组，给予相应处理后进行培养。收获细胞后，检测细胞凋亡情况，并提取蛋白采用免疫印迹法检测TRAIL／TRAILR信号转导通路Caspase-3、Caspase-8和死亡受体5（DR5）蛋白相对表达水平。结果5个处理组AM凋亡指数均低于对照组（P＜0.05），TRAIL组AM凋亡指数分别高于SOD组、抗-TRAIL抗体组、Caspase-8抑制剂组和NF-κB抑制剂组（P＜0.05）；CWP壹期和贰期患者AM凋亡指数均高于观察对象（P＜0.05），CWP贰期患者AM凋亡指数高于CWP壹期患者（P＜0.05）；不同处理和不同程度患者AM凋亡指数的交互作用有统计学意义（P＜0．01）。5个处理组Caspase-3、Caspase-8和DR5的蛋白相对表达水平分别低于对照组（P＜0.05），TRAIL组Caspase-3和Caspase-8的蛋白相对表达水平分别高于SOD组、抗-TRAIL抗体组、Caspase-8抑制剂组和NF-κB抑制剂组（ P＜0.05），SOD组DR5蛋白相对表达水平分别低于TRAIL组、抗-TRAIL抗体组、Caspase-8抑制剂组和NF-κB抑制剂组（ P＜0.05）；CWP 壹期和贰期患者Caspase-3、Caspase-8和 DR5的蛋白相对表达水平均高于观察对象（ P ＜0.05）；不同处理和不同程度患者Caspase-3的蛋白相对表达水平的交互作用有统计学意义（ P＜0．01），不同处理和不同程度患者Caspase-8和DR5的蛋白相对表达水平的交互作用均无统计学意义（ P＞0.05）。结论 TRAIL／TRAILR信号转导通路介导的AM凋亡可能在CWP发病中发挥一定作用；在不同环节对TRAIL／TRAILR信号转导通路进行抑制或阻断，可有效抑制CWP患者AM凋亡的发生。
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矽肺病患者肺泡巨噬细胞死亡受体表达及意义
目的 探讨矽肺病患者肺泡巨噬细胞(AM)死亡受体(DR)的表达水平及其与肺纤维化程度的关系.方法 以61例进行肺灌洗的汉族男性观察对象及矽肺病患者为观察组,以13例肺部X射线表现完全正常的汉族男性为对照组,分离、纯化及培养各研究对象的AM,检测3种DR[凋亡蛋白-1(Fas)、肿瘤坏死因子受体-1(TNFR1)和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体-2]的表达水平,采用酶联免疫吸附试验检测AM培养上清中的可溶性DR(sDR)水平,采用免疫印迹法检测AM裂解液中3种膜结合型DR(mDR)水平,分析DR表达水平与粉尘接触各因素的关系.结果 矽肺病患者膜结合型Fas(mFas)及膜结合型TNFR1(mTNFR1)的相对水平均高于对照组及观察对象(P＜0.05),且随着肺部病变的加重而升高；矽肺病患者可溶性Fas(sFas)及可溶性TNFR1(sTNFR1)水平均低于观察对象(P＜0.05),且sFas随着肺部病变的加重而下降.结论 矽尘诱导的mFas和mTNFR1表达上调、sFas表达下调在矽肺病发病及进展中起重要作用,DR信号通路活化可能是矽肺病发病的重要机制之一.
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凋亡与肿瘤及其治疗进展
肿瘤是机体在各种致瘤因素作用下,局部组织细胞在基因水平上失去了对其生长的正常调控,导致异常增生而形成的新生物.肿瘤的发生与细胞的异常增生、分化停滞以及细胞凋亡失衡有关.凋亡是在生命进化过程中形成的保守的基本生命活动之一,它清除机体损伤、衰老或多余的细胞,是维持机体发育和自身组织稳定的重要生命现象,而不能维持细胞数量的适当平衡是肿瘤的一个特征[1].
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死亡受体5介导的促动脉粥样硬化形成作用
死亡受体4／5（DR4／5）是肿瘤坏死因子大家族成员TRAIL的受体。和人类不同，小鼠只有DR5基因而没有DR4基因。以往研究证实敲除TRAIL基因加重动脉粥样硬化的形成，提示TRAIL具有血管保护作用。然而DR5在介导TRAIL对动脉粥样硬化调节作用中的角色尚不清楚。我们培育了ApoE／DR5双敲小鼠。我们意外发现，敲除DR5基因并没有复制TRAIL敲除后的血管表型，相反，DR5敲除后动脉粥样硬化形成减轻。我们用外源性TRAIL处理ApoE敲除小鼠，发现TRAIL增加了动脉粥样硬化形成，而这种作用在ApoE／DR5双敲小鼠中观察不到。 TRAIL的促动脉粥样硬化作用可被CCL2加 CCL5的中和抗体所阻断。 TRAIL对小鼠单核细胞的表型没有明显改变。体外研究发现TRAIL可以通过DR5刺激巨噬细胞吞噬脂质，刺激巨噬细胞凋亡，刺激平滑肌细胞的炎症反应。为了解释TRAIL和DR5敲除后相互矛盾的血管表型，我们推测在小鼠体内TRAIL可能还具有非DR5依赖的生物学作用。在DR5＋／＋和DR5－／－的外周血单个核细胞中，我们用TRAIL刺激后进行了基因转录组的检测。我们发现TRAIL不但在DR5＋／＋细胞中引起了众多基因表达水平的变化，而且在DR5－／－细胞中也引起了基因表达的变化，而且这些变化的基因只有10％是与DR5＋／＋细胞重合的，提示TRAIL可能的确有非DR5依赖的作用。我们的结果首次提示DR5介导的信号通路对动脉粥样硬化形成可能具有增强作用。
