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CYP4F2基因单体型与心肌梗死的相关性研究
目的 研究CYP4F2基因单体型与心肌梗死的关系.方法 250例心肌梗死患者和250例对照分别分为整体组、男性组、女性组.选择CYP4F2基因的5个SNPs(rs3093105、rs3093135、rs1558139、rs2108622、rs3093200),应用TaqMan SNP基因分型方法进行基因分型,并应用病例对照单体型分析方法进行相关性研究.结果 对于男性,心肌梗死患者rs2108622的G等位基因频率远远高于对照(P=0.005);心肌梗死患者和对照相比较,单体型的总体分布在男性组显著不问(P=0.002);男性组心肌梗死患者的T-C-G单体型频率显著高于对照(P=0.002),男性组心肌梗死患者的T-C-A单体型频率显著低于对照(P=0.003).结论 CYP4F2基因rs2108622的G等位基因可能与男性心肌梗死相关,T-C-G单体型可能是男性心肌梗死的遗传标记.
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细胞色素P450 4F2基因的克隆、突变、表达和纯化
目的 构建人细胞色素P450 4F2基因野生型、V81G和V433M突变型表达载体,在大肠杆菌中表达并纯化出CYP4F2蛋白.方法 用RT-PCR方法从人肾脏总RNA中逆转录扩增CYP4F2,将其插入克隆载体pMD18-T Simple Vector中,将测序鉴正确的CYP4F2基因N、C端改造,克隆构建重组表达载体pCWori+-CYP4F2(His)4-WT.同时采用重叠PCR定点突变法构建pCWori+-CYP4F2 V81G(His)4和pCWori+-CYP4F2 V433M(His)4表达载体,分别转化至E.Coli XL-Blue中表达.结果 经IPTG诱导可有效表达CYP4F2和突变体V81G与V433M,经Western blot分析可以观察到分子量为57 kD的诱导表达条带,该表达蛋白可与His-Probe多克隆抗体起特异反应.用His-bind亲和层析纯化得到了纯度较高的His融合蛋白.结论 用基因工程技术在大肠杆菌中有效表达人CYP4F2基因野生型、V81G和V433M突变型蛋白、并得到了纯度较高的CYP4F2蛋白,为进一步研究其生物学功能及研制相应抗体奠定了基础.
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维生素K代谢相关基因CYP4F2参与凝血因子FⅨ活化的研究
目的 探索维生素K代谢相关基因CYP4F2对维生素K依赖性凝血因子活化(凝血因子FⅨ为例)的影响.方法 构建同时含有CYP4F2-cDNA片段与FⅨ-cDNA片段的pIRES质粒,通过酶切验证.使用Lipofectamine 2000转染试剂,将构建成功的pIRES-FⅨ-CYP4F2质粒以及pIRES-FⅨ质粒、pIRES空白对照质粒瞬时转染LO2细胞.在不同质粒转染的细胞中,通过Western blotting验证CYP4F2和FⅨ蛋白的表达,应用FⅨa Assay检测试剂盒检测FⅨa活性.结果 经酶切证实,pIRES-FⅨ-CYP4F2质粒构建成功.Western blotting证实,pIRES-FⅨ及pIRES-FⅨ-CYP4F2质粒成功转染LO2细胞.FⅨa Assay检测发现,在过表达FⅨ的LO2细胞培养上清和细胞裂解液中,FⅨa活性较对照组显著升高;当同时过表达CYP4F2和FⅨ后,LO2细胞培养上清和细胞裂解液中的FⅨa活性较单独过表达FⅨ组明显降低.结论 维生素K代谢相关基因CYP4F2的过表达对维生素K依赖性FⅨ的活化具有抑制作用.
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中国人群CYP4F2基因多态性对华法林抗凝作用的影响
目的：研究中国人群中CYP4F2基因多态性对华法林抗凝作用的影响。方法：本研究纳入我院应用华法林进行抗凝治疗的患者，对患者CYP4F2基因多态性位点用连接酶检测反应进行检测，以国际标准化比值(INR)作为监测指标，统计学分析基因位点的多态性与华法林用药剂量个体间差异的相关性。结果：207例样品中，CYP4F2基因突变率为22.2%，其中杂合子分型为35.7%，且达到遗传平衡。不同基因分型组间的华法林剂量未见显著性差异，但是携带T的患者华法林稳定剂量有逐步升高的趋势。结论：CYP4F2基因多态性对华法林稳定期剂量有影响但不显著。
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CYP4F2基因多态性与华法林维持剂量关系的研究进展
华法林是目前临床上应用广泛的口服抗凝药,其治疗安全范围窄,剂量个体差异大,临床应用中容易出现抗凝不当所致的并发症.近3年来,随着药物基因组学的快速发展,发现细胞色素P450酶4F2(CYP4F2)基因多态性(rs2108622)与华法林个体剂量差异相关.本文综述了近3年来在不同人种中进行的有关CYP4F2*3(rs2108622)与华法林的维持剂量关系的研究.大多数研究发现CYP4F2基因多态性与华法林维持剂量存在相关性,其中突变的T等位基因与华法林高剂量相关;CYP4F2*3可以解释1%～10%华法林剂量个体差异.
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华法林使用剂量影响因素及临床应用研究进展
上个世纪50年代开始，华法林开始应用于深静脉血栓形成，房颤以及瓣膜置换术后患者的抗凝治疗，并证实是安全有效的。但是由于华法林治疗窗窄，个体间存在差异性，要达到治疗效果的华法林剂量仍然较困难。临床上通常根据国际化标准比值（ INR）调整华法林药量。近几年国内外学者一直在研究华法林的作用机制以及遗传基因学特点，并发现以及证实了基因多态性与华法林剂量的关联性，以基因多态性来预测华法林合适剂量的模式已经应用于临床。本文就目前国内外研究的新的华法林相关影响因素以及临床应用做一综述，为进一步研究华法林基因与剂量的关系提供参考。
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华法林给药剂量预测模型的建立与应用
华法林是临床上广泛应用的抗凝剂，可用于治疗房颤、深静脉血栓、肺栓塞、瓣膜移植等［1］，而且价格便宜。但是华法林个体药物代谢能力的差异很大，治疗安全范围狭窄，影响其药效的因素又很多，使得华法林个体剂量的变动性很大（0．5～60．0 mg／d），还会存在严重的潜在出血风险和抗凝不足的栓塞，使得对华法林治疗的管理具有挑战性［2］。服用华法林的患者用药起始阶段（1～3个月）有明显的出血风险。国内外研究表明华法林过度抗凝的原因与 CYP2 C9， VKORC1的基因多态性高度相关［3］。目前临床上华法林的给药方案通常采用首先给予一定标准剂量，然后临床医生根据每个患者国际标准化比率（international normalized ratio，INR ）值的情况，增加或减少剂量直至INR达到靶标。但是在这样的抗凝疗法中，调整剂量的周期较长，患者发生血栓或出血的可能性较高。为此，我们在介绍影响华法林用药剂量因素的基础上，综述了国内外基于遗传药理学研究结果结合临床数据构建华法林维持剂量的模型及其应用。
关键词： 剂量预测模型 华法林 单核苷酸多态性CYP2C9 VKORC1 CYP4F2 -
CYP4F2基因多态性与原发性高血压易感性的相关性研究
目的 探讨浙江地区不同性别汉族人群中CYP4F2基因多态性与原发性高血压易感性的相关性.方法 以690例原发性高血压患者(观察组)和656例非高血压患者(对照组)为研究对象,运用TaqMan荧光定量法对CYP4F2(rs1558139、rs2108622)进行基因分型,应用非条件logistic回归和多因子降维法软件按性别分析CYP4F2基因多态性与高血压的相关性.结果 两组间无论男女,其年龄、BMI、总胆固醇、甘油三酯的差异均有统计学意义(均P＜0.01),而且两组间男性饮酒和体力活动分布的差异有统计学意义(P＜0.05).仅在女性对象中,观察组rs2108622的A等位基因的分布频率明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).男性中rs1558139 CC基因型进入终模型(P＜0.05);女性中rs2108622 AA+AG基因型进入终模型,但差异无统计学意义(P ＞0.05).MDR分析未见CYP4F2基因多态与环境暴露之间存在交互作用.结论 CYP4F2 rs1558139 CC基因型可增加男性患高血压的风险.
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CYP4F2基因多态性与云南汉族人群冠心病的相关性研究
目的:研究CYP4F2基因多态性与中国云南汉族人群冠心病(CHD)的相关性.方法:采用Sequenom MassARRAY 对云南汉族人群198名正常人(对照组)和514例CHD病人(CHD组)CYP4F2基因rs2108622、rs3093135两个单核苷酸多肽位点的多态性进行基因分型,分析该基因多态性与CHD的相关性.结果:对照组和CHD组两个等位基因频率分布差异有统计学意义(P<0.01);校正年龄、性别、体质量指数等因素后logistic回归分析显示rs2108622位点携带T等位基因者患CHD的风险降低(P<0.05);rs3093135位点携带A等位基因者患CHD风险降低(P<0.05).结论:CYP4F2基因多态性与云南汉族人群CHD发生风险相关.
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CYP2C9、CYP4F2、GGCX和VKORC1基因多态性对房颤患者华法林使用剂量的影响
目的:探讨CYP2C9、CYP4F2、GGCX和VK OR C1基因多态性对房颤患者华法林使用剂量的影响.方法:采用PCR-RFLP法检测157例口服华法林抗凝治疗房颤患者CYP2C9、CYP4F2、GG CX和VKORC1基因多态性,登记并计算患者INR稳定在1.5～3.0时一周的平均日剂量.比较不同基因型房颤患者华法林日用量的差异.结果:INR稳定在1.5～3.0时,CYP2C9* 1/*1个体使用华法林剂量[(2.73±0.80)mg·d-1]显著高于*1/*3使用量[(1.83±0.51)mg·d-1];V-KORC1TT基因型携带者使用剂量[(2.56±0.79)mg·d-1]显著低于CT基因携带者使用量[(3.31±0.75)mg·d-1];CYP 4F2 CC基因型使用剂量[(2.58±0.78)mg·d-1]显著低于TT基因携带者使用量[(3.21±1.04)mg·d-1];GGCXCC基因型使用剂量[(2.49±0.89)mg·d-1]显著低于GG基因型使用量[(3.04±0.75)mg·d-1].多因素回归分析结果显示CYP2C9、VKORC1和GGCX与个体华法林剂量有关.结论:CYP2C9、VK ORC1和GGCX基因多态性可能与个体华法林使用剂量差异有关.
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基于CYP2C9、VKORC1及CYP4F2基因多态性的华法林给药模型的验证
目的:对已发表的4个基于CYP2C9、VKORC1和/或CYP4F2基因多态性的华法林给药模型的准确性进行验证,寻找真正适合中国人的给药模型.方法:选择心脏瓣膜置换术后服用华法林至少3个月的患者,用PCR-基因测序方法确定患者CYP2C9、VKORC1及CYP4F2基因型,收集患者基本信息,并记录华法林的实际维持剂量,将患者信息带入4个剂量模型中得到模型预测剂量,计算预测剂量与实际剂量的差异率(DR).用SPSS统计软件配对t检验、线性回归方法及Bland Altman分析,验证模型预测剂量的准确性.结果:包含CYP2C9、VKORC1及CYP4F2三个基因在内的给药模型(模型3和模型4)对华法林剂量的预测的DR较仅有CYP2C9和VK ORC122个基因的给药模型(模型1和模型2)小,预测剂量与实际剂量的线性回归相关系数高,准确性较高,临床可接受度较高.4个模型对中高等剂量(≥3.00 mg·d-1)的预测准确性较好,然而除了模型1外,其他3个模型对极低剂量(≤1.5 mg·d-1)的预测准确性较差.结论:基于CYP2C9、VKORC1及CYP4F2基因多态性的给药模型可以较为准确地预测华法林的给药剂量,但对剂量≤1.5 mg·d-1的预测准确性较差,模型的临床应用有待进一步研究来证实.
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湖北恩施地区土家族人群CYP4F2基因多态性及血清硒含量与冠状动脉疾病的相关性
目的:探讨湖北恩施地区土家族人群CYP4F2基因多态性与冠状动脉疾病(coronary artery disease,CAD)易感性的关系,以及血清硒水平与CYP4F2基因多态性在CAD发生中的交互作用.方法:采用成组病例-对照研究方法,选择湖北恩施地区土家族人群CAD患者100例,对照组人群100例,采用PCR检测CYP4F2基因多态性,氢化物发生原子荧光光谱法测定血清硒水平.结果:CAD组血清硒水平显著低于对照组;CYP4F2基因rs1558139与CAD风险无明显关系;rs2108622多态性与CAD风险有明显关系,携带CC基因型的患者发生CAD的风险增加,此外CYP4F2基因rs1558135多态性与CAD风险有明显关系,rs3093135位点携带A等位基因者患CAD风险降低.血清硒水平低与CYP4F2 rs2108622 CC基因型者在CAD发生中有正交互作用.结论:湖北恩施土家族人群血清硒水平与CAD发生负相关;血清硒水平低与CYP4F2 rs2108622 CC基因型者之间存在协同作用,使CAD发生的危险性显著增加.
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基于华法林药物基因组学的临床用药模型建立
目的 探讨CYP2C9,CYP4F2和VKORCl基因多态性对中国汉族人群中华法林稳定剂量的影响,评价华法林用药遗传背景,为临床个体化用药奠定基础. 方法 采用PCR-HRM法对181例接受华法林治疗并达到稳定剂量的中国汉族患者检测CYP2C9*2、CYP2C9*3、CYP4F2 V433M和VKORCl 1173C/T四个SNP位点的多态性.基因分型数据结合临床资料(性别、年龄和华法林剂量等)进行统计学分析并建立数学模型. 结果 20岁以下年龄组与70岁以上年龄组间华法林剂量有统计学差异(P=0.041),且随着年龄的增长,华法林剂量有降低趋势；CYP2C9*3基因型CA(杂合突变型)华法林日平均剂量( 1.93 mg)比AA(野生型)日平均剂量(2.96 mg)低l mg(P=0.001)；VKORC11173 C/T基因型CT(杂合突变型)华法林日平均剂量(3.34 mg)比TT(野生型)日平均剂量(2.77 mg)高0.57 mg(P=0.002)；CYP4F2 V433M基因型TT(纯合突变型)华法林日平均剂量(3.52 mg)比CT(杂合突变型)高0.68 mg(P=0.021),比CC(野生型)高0.72 mg(P=0.026). 结论 华法林剂量受CYP2C9、CYP4F2、VKORC1基因多态性和年龄的影响,临床用药前进行CYP2C9、CYP4F2、VKORC1基因多态性检测有助于华法林抗凝治疗用药剂量的评估.
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CYP4F2基因多态性影响华法林初始治疗效果的临床究
目的 研究心脏瓣膜置换术后口服华法林抗凝治疗的初始剂量的个体化区别,分析CYP4F2 rs2108622基因型对口服华法林初始剂量的影响.方法 入选广东省心血管病研究所2000年至2008年瓣膜置换术后口服华法林抗凝治疗的患者,回顾患者一般资料、临床资料、用药剂量、国际标准化比值(international normalized ratio,INR)和进入治疗窗时间(INR≥1.8)、超出治疗窗时间(INR＞3.5).结果 本次研究共有769例患者资料齐全,民族均为中国汉族,其中CYP4F2基因型为CC型的患者占65.8％(n=506),CT型28.7％ (n=221),TT型5.5％(n=42).按基因型不同分别分析进入治疗窗(INR＞1.8)和过度抗凝(INR＞3.5)的时间发现,不同基因型之间比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 CYP4F2基因型多态性对于口服华法林初始剂量存在一定的影响.
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药物基因CYP4F2和CYP3A4在中国汉族人群中的分布
目的:探讨中国汉族人群中药物基因CYP4F2和CYP3A4基因多态性的分布情况.方法:收集2015年5月至2016年5月在广州市妇女儿童医疗中心就诊的汉族儿童1311例为研究对象,其中男855例、女456例,包括川崎病694例、非川崎病617例.收集外周静脉血进行CYP4F2 rs2108622、CYP3A4 rs2242480基因PCR扩增和序列分析.采用Hardy-Weinberg平衡进行总体样本的等位基因分布频率检测.分析性别与上述基因的基因型分布的关系;按疾病类型进行分组,分析疾病类型与上述基因的基因型和等位基因分布的关系.结果:纳入本研究的汉族儿童1311例,基因检测显示CYP4F2 rs2108622的CC、CT、TT基因型频率分别为59.57％(n=781)、35.39％(n=464)和5.04％(n=66),其中小T等位基因频率为22.7％;CYP3A4 rs2242480的CC、CT、TT基因型频率分别为51.26％(n=672)、40.43％(n=530)和8.31％(n=109),其中小T等位基因频率为28.5％..按性别分组,上述基因的基因型分布组间比较差异均无统计学意义(均P>0.05).按疾病类型分为川崎病组(n=694)和对照组(n=617),川崎病组与对照组CYP3A4 rs2242480基因型分布差异有统计学意义(P<0.05),而等位基因分布差异无统计学意义(P>0.05);川崎病组与对照组CYP4F2 rs2108622基因型及等位基因分布差异均无统计学意义(均P>0.05).结论:中国汉族儿童华法林药物基因CYP4F2 rs2108622以野生型为主,而CYP3A4 rs2242480以变异型为主,包括纯合变异和杂合变异.
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老年患者CYP4F2（rs2108622）基因多态性对华法林剂量的影响
目的：观察 CYP4F2（rs2108622）基因多态性对房颤老年患者（65～75岁）口服华法林剂量的影响。方法选择60例老年房颤患者，服用华法林后国际标准化比值（INR）维持在1．6～2．5之间3个月后，用 PCR 检测 CYP4F2（rs2108622）基因序列。结果具有 CYP4F2（rs2108622）C/C 等位基因的患者服用华法林的剂量明显低于具有 C/T 和 T/T 变异体等位基因的患者（P ＜0．05）。结论CYP4F2（rs2108622）基因的多态性影响老年患者口服华法林的剂量。
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中国人群CYP4F2基因多态性对华法林维持剂量影响的系统评价
目的：系统评价中国人群CYP4F2基因多态性与华法林维持剂量的关系，以为临床治疗提供循证参考。方法：计算机检索Cochrane图书馆、PubMed、EMBase、中国期刊全文数据库、中文科技期刊数据库和万方数据库，收集中国人群CYP4F2基因多态性与华法林维持剂量关系的研究，提取资料并进行质量评价后，采用Rev Man 5.0统计软件进行Meta分析。结果：共纳入13项研究，合计2958例患者，基因检测结果分为TT、CT和CC型。Meta分析结果显示，CYP4F2的3种基因型华法林稳定剂量的关系为：TT型＞CT型＞CC型，各组间比较差异均有统计学意义。结论：中国人群CYP4F2基因多态性与华法林维持剂量有显著相关性。受纳入研究方法学质量的限制，该结论有待大样本、高质量的研究进一步验证。
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CYP4 A11基因多态性与脑梗死的相关性研究
目的：评估CYP4 A11基因多态性及其与脑梗死发病及梗死后血管事件的相关性。方法采用基质辅助激光解吸附电离／飞行时间质谱法（ MDLDI-TOF-MS ）对396例脑梗死患者及378例对照者的 CPYP4 A11 rs2269231、CPYP4 A11rs9333025、CYP4F2rs3093135及CYP4F2rs2108622 SNPs进行检测。并对所有的脑梗死患者随访12月。结果脑梗死组CPYP4 A11rs9333025 GG基因型频率发布明显高于对照组（ P＜0.001）。 CPYP4 A11rs9333025 GG与脑梗死的发病密切相关（ OR＝1.82，95％CI：1.24～5.04，P ＝0.016）。 rs9333025 GG基因型患者在随访期内脑梗死复发率及其他血管事件发生率明显高于rs9333025 AG基因型患者（ P ＝0.04）。 rs9333025 GG为脑梗死后血管事件发生的独立危险因素（ RR＝1.87，95％CI：1.16～5.36，P ＝0.003）。结论 rs9333025 GG基因型增加了脑梗死的易感性和脑梗死后血管事件发生的风险。
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LNA-taqman探针实时荧光PCR快速检测CYP4F2-C1347T,CYP2C9*3,VKORC1-C1173T与VKORC1-G1639A基因多态性方法的建立
目的 建立一种基于 LNA-taqman探针实时荧光PCR检测华法林剂量相关基因型维生素 K单氧酶 CYP4F2,维生素K环氧化物还原酶复合体亚单位1(VKORC1)和细胞色素 P4502C9(CYP2C9)的方法.方法 针对 CYP4F2-1347C>T,CYP2C9*3,VKORC1-1173C>T与 VKORC1-1639G>A四个单核苷酸多态性(SNP)位点,分别设计一套等位基因特异性探针与引物,并对LNA-taqman探针特异性进行评价.提取150例接受华法林治疗患者外周血样本基因组DNA进行检测,同时对部分实时荧光 PCR产物样品进行验证.结果 ①LNA-taqman探针检测方法特异性高,没有交叉性.②150例患者中,CYP4F2-1347C>T基因型CC,CT和TT分别有87,56和7例,各占58%,37.3%和4.7%;CYP2C9*3基因型*1/*1和*1/*3分别有142和8例,各占94.7%和5.3%,未检出纯合子*3/*3基因型;VKORC1-1173C>T基因型TT,TC和CC分别有127,20和3例,各占84.7%,13.3%和2%;VKORC1-1639G>A基因型AA,AG和GG分别有124,23和3例,各占82.7%,15.3%和2%.结论 基于 LNA-taqman探针的实时荧光PCR分型方法具有操作简便,价格低廉,结果准确可靠等特点,适于临床实验室对CYP4F2,CYP2C9*3,VKORC1的基因分型.
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汉族人群花生四烯酸ω-羟化酶4F2基因编码区多态性位点的研究
目的 寻找汉族人群花生四烯酸细胞色素P450ω-羟化酶基因CYP4F2的编码区多态性位点分布情况.方法 采集50例血压正常、无血缘关系的汉族人外周静脉血白细胞;提取基因组DNA;设计特异性引物,PCR法分段扩增基因编码区序列,电泳检测后回收目的 片断;测序,与参考序列比对后统计结果.结果 CYP4F2共发现6个多态性位点,其中3个有意义:1个3'端非编码区的多态性位点G19026A,2个引起氨基酸改变的多态性位点T2013G和G18000A.其余为同义突变或者位于内含子区.结论 ①多态性位点存在种族差异;②突变位点大多数位于内含子区,或者为同义突变,仅有少数有意义;③发现的多态性位点可能引起蛋白质构象进而改变蛋白质功能,或者引起基因转录活性的改变.
关键词： 花生四烯酸ω-羟化酶 CYP4F2 多态性位点
