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X-连锁无丙种球蛋白血症患儿临床表型和基因诊断分析
目的 分析3例X-连锁无丙种球蛋白血症(X-linked agammaglobulinemia,XLA)的临床表型特点及Bruton's酪氨酸激酶(BTK)基因变异情况,以提高临床医师对XLA的认识.方法 收集本组3例XLA患儿外周静脉血,测定其血清Ig水平和淋巴细胞亚群表达情况,采用RT-PCR和测序的方法分析患儿及母亲BTK基因变异情况,并总结其临床特征.结果 在临床特征方面3例均为男性患儿,诊断XLA时的年龄分别为4岁、12岁6个月和2岁2个月,平均诊断年龄6岁3个月.3例患儿临床均表现为反复感染,如患中耳炎、鼻窦炎、反复全身脓疱疹、脓胸、细菌性关节炎、细菌性脑膜炎等,3例诊断时均表现为营养、生长发育较差,周围淋巴组织发育不良,扁桃体和淋巴结很小或难以查及；实验室检查血清Ig和循环B淋巴细胞明显降低；在基因诊断方面3例均发现存在BTK基因突变,例1为外显子9的949位G缺失,例2为外显子17的错义突变,例3为外显子15的错义突变,对例2、例3患儿母亲进行BTK基因分析,发现均为携带者,存在相同的基因突变.结论 本组3例中国贵州籍XLA患儿诊断时年龄较大,临床主要表现为不同部位的反复化脓性细菌感染,在临床表现基础上通过BTK基因分析有助于XLA患儿的进一步明确诊断,并且有利于发现携带者和进行遗传咨询.
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A抗原减弱表型的基因分析
目的:研究A抗原减弱的分子遗传学背景.方法:用血清学的方法筛选出2015年1月至11月A抗原减弱的样本6例,对其ABO基因的第6、7外显子进行测序分析.结果:6例中基因型为A102/O01有2例,A102/O02有1例,A102/B101有2例,1例样本发现新的等位基因.结论:由于ABO基因的多态性,除了常见的第6、7外显子上的基因突变引起抗原减弱外,第6、7外显子以外的基因变异或转录结构以及调控区域的异常都有可能导致A抗原减弱.
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1个遗传性凝血因子Ⅴ缺陷症家系表型与基因分析
目的:对1个遗传性凝血因子Ⅴ(FⅤ)缺陷症家系进行表型与基因分析,探讨其分子发病机制.方法:通过检测1例FV缺陷患者及其家系的凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原(FIB)、血浆FV活性(FⅤ∶C)和血浆FV抗原(FⅤ∶Ag)等凝血指标进行表型诊断,用DNA直接测序法分析患者及其家系成员FⅤ基因的全部外显子及侧翼、5'和3'非翻译区,发现突变位点用反向测序予以证实.结果:患者的PT和APTT均明显延长,分别为18.3 s和44.9s,其FⅤ∶C为26.0％,FⅤ;Ag为20.3％.患者FⅤ基因第22外显子上发现67868C→T的杂合突变,导致2031Glnstop;同时在患者FV基因第10和16外显子上发现2个多态性(SNP)位点,分别为Arg485Lys和Met1736Val;患者的母亲、二弟、三弟、儿子、侄儿同样存在上述的基因杂合突变和SNP,其FⅤ∶C和FⅤ∶Ag也均有不同程度下降;患者的父亲和女儿为正常野生型,其FⅤ∶C和FⅤ ∶ Ag均在正常水平.结论:FV基因第22外显子上67868C→T杂合突变,导致2031Glnstop与Arg485Lys纯合多态性的协同作用是该遗传性FV缺陷症家系FV水平降低的主要原因.
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500例血友病回顾性分析
目的:提高血友病的诊治水平.方法:分析500例血友病患者的临床特点,并对部分患者进行了基因分析、家系调查及抗体检测.结果:500例血友病患者中,甲型455例(重型185例,中型148例,轻型122例),乙型45例(重型14例,中型22例,轻型9例).46例血友病甲患者(重型30例,中型12例,轻型4例)测定FⅧ因子抗体,抗体阳性的例数分别为6例,2例和0例.22例血友病甲家系采用Bcl Ⅰ,Xbal Ⅰ多态位点和VNTR方法检测,检出率分别为55%,45%和36%.10例血友病患者进行了22内含子倒位分析,显示5例有倒位,均为重型.结论:我国血友病患者基数大,集中,往往呈家族性分布.且致残率高,中、重型较多,初诊年龄较大.
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广州地区儿童β地中海贫血的发生率及基因检测结果分析
目的:调查广州地区儿童β地中海贫血(β地贫)的发生率及其中国人常见突变基因的分布特征.方法:对4990例广州地区儿童进行以全自动凝胶电泳为主的β地贫血液学检查,并利用PCR-RDB法对筛查出的其中177例患儿进行中国人常见18种突变基因的诊断分析.结果:在4990人中检出β地贫562人,发生率为11.26%,其中β0地贫63人,发生率为1.26%,β+地贫499人,发生率为10.0%;进行基因分析的177例有174例得到确诊,共检出10种突变基因,22种基因型,多见的前5种依次是:CD41-42(45.5%),IVS-Ⅱ-654(26.07%),CD17(13.74%),TATbox-28(8.06%),CD71-72(3.32%),表型中轻型占78.73%(137/174),中间型和重型占21.27%(37/174).结论:广州地区是国内β地贫发生率较高和基因背景复杂的地区,在β地贫高发区应加强对儿童人群进行β地贫的血液学筛查和常见基因的诊断.
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血友病的规范化诊断
血友病A/B的规范化诊断已建立了包括临床诊断、家系调查、实验检8测和基因分析等系列的技术平台.
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基因分析在肥厚型心肌病、儿茶酚胺依赖性多形性室性心动过速、扩张型心肌病合并传导障碍中的作用
肥厚型心肌病(HCM) 具有很高的遗传异质性,目前已经发现了19个基因、2个位点与之有关,而且确定了数百个不同的突变.因此,在这么多的基因中寻找突变不可能成为临床工作中基因筛查HCM的可行方法.由于某些基因的突变率很低,因此建议检测那些阳性率较高的基因.
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肢带型肌营养不良的分子遗传学研究进展
肢带型肌营养不良是一种遗传模式和临床症状都高度不均一的常染色体遗传性肌营养不良症,主要表现为进行性的肩胛带和骨盆带肌无力和萎缩,仅有少数累及延髓肌及呼吸肌.以前由于对该类疾病认识甚少,临床诊断仅根据临床症状和遗传模式判断,无法明确分型.直至上世纪90年代以后,随着分子生物学的发展,对本组疾病的认识获得了较大突破.1995年,Bushby根据基因分析结果,并按照该病遗传方式的不同,以LGMD1和LGMD2分别表示常染色体显性遗传(1型)和常染色体隐性遗传(2型)[1].随着新的肌营养不良的类型不断被发现,目前已确认的共有18个亚型,1型有7个亚型(1A-1G),2型有11个(2A-2k),目前2型11个亚型的突变编码基因及蛋白产物已经明确,而1型中除了1A、1B、1C及1E亚型的突变的编码基因明确外,其他类型的致病的编码基因还不清楚.
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珠海市2008年H1N1亚型流感病毒血凝素HA1基因特征分析
目的 了解2008年珠海地区流行的H1N1亚型流感病毒血凝素重链区HA1基因特征. 方法按照时间不同选取7株2008年珠海市分离到的H1N1亚型流感毒株,选取的毒株进行血凝素HA1片段序列测定并推导出其氨基酸序列进行基因进化特性分析. 结果 H1N1亚型流感毒株为珠海市2008年的优势株,与该年WHO推荐疫苗株比较有多个氨基酸发生了替换,造成抗原性发生一定的变化. 结论 2008年根据WHO疫苗推荐株生产的疫苗对该年珠海市H1N1亚型流感预防效果并不理想,导致2008年珠海市H1N1亚型的流行强度增加.
关键词： H1N1甲型流感病毒 血凝素 基因分析 -
东莞市一起Ⅳ型登革热暴发疫情流行病学调查分析及处置
目的 对2016年东莞市某街道发生的一起登革热暴发疫情进行调查,分析其感染来源,并对防控措施效果进行评价. 方法 采取描述性流行病学方法对东莞市2016年发生的一起登革热暴发疫情进行描述;用新发病例数和蚊媒密度变化来评价防控措施的效果. 结果 东莞市莞城街道在8月7日-9月3日之间发生3例登革热轻症病例,2男1女,为同一商铺工作人员.其中两名确诊患者血清标本Ⅳ型登革病毒核酸阳性并分离到2株登革病毒株,2株病毒株E基因测序、进化分析同源性为99.3％,与印度2014年病毒株同源性为99.1％.经采取人工灭蚊、清除蚊虫孳生地、开展健康教育等措施,疫点核心区和监控区的蚊媒密度逐渐降低,疫情于9月3日平息. 结论 本起疫情为一起由输入性病例或病媒引起的本地感染的Ⅳ型登革热暴发疫情.采取杀灭成蚊和清除蚊虫孳生地为主的措施可有效控制蚊媒密度,进而控制疫情.
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471例儿童α地中海贫血缺失型基因谱分析
目的 探讨儿童α地中海贫血(α地贫)常见缺失型基因谱的分布特征.方法 在佛山市妇幼保健院就诊和体检的儿童中,血细胞分析检测红细胞体积(MCV)＜ 82 fl者抽取静脉血2 mL(E DTA抗凝),采用GAP-PCR法进行α地贫基因分析.结果 血细胞分析MCV＜ 82 fl者1341例,检出α地贫471人,检出率为35.1％,且随年龄增长而增高.基因缺失以东南亚缺失型(--SEA)为主,占75.3％；其次为右侧缺失型(-a3.7),占17.0％；左侧缺失型(-a4.2)占7.7％.基因型分布前3位分别是:--sEA/aa(73.2％),aa/-a3.7(12.5％)和--SEA/-a3.7(5.5％).结论 对MCV＜ 82 fl儿童进行α地贫的基因诊断是必要的.该资料中α地贫患儿基因缺失以东南亚缺失型(--SEA)占主导地位,基因型以-SEA/aa多见.
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儿童短肢型遗传性骨代谢性疾病的临床分析及基因诊断
目的 分析软骨发育不全(ACH)、软骨发育低下(HCH)及假性软骨发育不全(PSACH)3种短肢型遗传性骨代谢性疾病的临床表现、骨骼X线表现及基因结果.方法 对基因确诊的10例短肢型遗传性骨代谢性疾病患儿(其中4例为ACH,3例为HCH,3例为PSACH)的临床特点、骨骼X线表现及基因结果进行分析.结果 10例患儿的平均身高为-3.69±1.79 SD,平均坐高/身高比值为0.65±0.03,平均指间距/身高比值为0.93±0.04.4例ACH患儿及3例PSACH患儿具有典型骨骼X线表现,3例HCH患儿中1例表现为坐骨大切迹变小,1例表现为椎弓根间距未增宽.4例ACH患儿中3例检测到FGFR3基因G380R突变,1例检测到Y278C突变;3例HCH患儿均检测到FGFR3基因N540K突变;3例PSACH患儿检测到COMP基因的杂合突变.结论 ACH及PSACH患儿的矮小程度及骨骼畸形程度较HCH患儿重,HCH患儿临床表现轻,不典型;骨骼X线及基因分析有助于3种疾病的诊断及鉴别诊断;3种疾病涉及2个基因,分别有各自的突变热点,有利于临床基因诊断.
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生长激素缺乏合并1型神经纤维瘤病1例及其基因分析
1型神经纤维瘤病(neurofibromatosis Type 1,NF1)是一种常染色体显性遗传病,该病主要临床特征是牛奶咖啡斑、神经纤维瘤、Lisch结节、腋窝和腹股沟雀斑、视神经胶质瘤和骨骼发育异常,NF1基因为其致病基因.中南大学湘雅三医院内分泌科收治了1例以生长迟缓为主诉的11岁患儿,临床诊断为生长激素缺乏合并NF1.基因检测发现该患儿及其母亲NF1基因内含子34有一新的杂合剪切突变c.6579+2T＞C(IVS 34+2T＞C).NF1因生长迟缓收入内分泌科较少见,对于临床上表现为身材矮小并伴皮肤牛奶咖啡斑等特征的儿童应考虑NF1的可能,并进行NF1基因检测,这对于明确诊断及提供遗传咨询具有重要意义.
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5个中间型β-地中海贫血家系临床结果分析
目的 了解现行PCR-RDB法对中间型β-地贫基因诊断的准确性.方法 对5个中间型β-地贫家系进行血常规、血红蛋白电泳和β-地贫基因的PCR-RDB法检测,并用长链PCR法检测家系1和家系2中的先证者及母亲的β-地贫基因的缺失突变.结果 5例先证者HbF含量均增高,其中2例为轻度贫血,3例为中度贫血;4例先证者PCR-RDB法结果 为杂合子与其表现的临床症状不符,1例先证者PCR-RDB结果 为纯合子与父母基因检测结果 不符;先证者1及其母亲长链PCR法显示阴性,先证者2及其母亲长链PCR法均为东南亚(SEA)缺失型HPFH.结论 若在产前诊断时仅用PCR-RDB法检测β-地贫基因,会造成缺失型β-地贫基因漏诊,引起一系列严重的社会问题.
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中山市一起输入性D8基因型麻疹病毒基因特征分析
目的 对2014年5月由越南回国的女工所感染的麻疹病毒进行基因特征分析.方法 采集病人的急性期咽拭子,通过RT-PCR和基因测序分析N基因碳末端450个核苷酸片段,利用BLASTn对序列进行相似性检索,分析麻疹病毒基因特征,并与参考株及沪191疫苗株进行比对,采用Neighbor-Joining方法构建麻疹核蛋白核苷酸种系进化树.结果 获得1段相应样本N基因碳末端序列,上传至GenBank (KJ994346),该核苷酸序列与越南病毒株(Viet Nam:Ho Chi Minh City-AB928200)序列同源性100％,与WHO参考株(Manchester.UNK/30.94-AF280803)同一谱系,属于D8型,序列同源性为96％,氨基酸同源性为97％,其中产生5个基酸替换,第79位点发生变异,由异亮氨酸替代为苏氨酸,蛋白质极性发生改变,由疏水性变成亲水性.结论 该病例为中山市首次发现的输入性D8型麻疹病毒感染病例.
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深圳东部地区地中海贫血发病率的调查研究
目的对深圳东部地区本地居民、外来人群进行地中海贫血的调查研究.方法采用日本Sysmex SE-9000全自动血细胞分析仪,运用红细胞脆性一管定量法和血红蛋白电泳初筛法,对可疑阳性标本进行α-地中海贫血基因分析和β-地中海贫血基因分析.结果本地居民350人,异常基因携带者36例,其中β-地中海贫血异常基因12例,α-地中海贫血异常基因23例,双重杂合者1例,发病率10.28%.外来人群349人,异常基因携带者4例,β-地中海贫血异常基因1例,α-地中海贫血异常基因3例,发病率1.14%.结论本地居民发病率比外来人群发病率高9倍.
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液态芯片技术在β地中海贫血基因检测中的应用研究
目的 探讨液态芯片技术在检测β地中海贫血基因突变常见类型的应用价值.方法 采用液态芯片技术,使用Luminex 100多功能悬浮点阵检测仪及Lumi2 nex Data Collector Version 1.7数据收集软件检测并通过突变标本与正常标本的荧光强度比值(Mutan/Normal)分析100份正常人标本及68份PCR反向杂交技术确认的β地中海贫血基因突变标本.结果 100份正常标本检测结果正常.68份β地贫基因突变检测结果为密码子CD41/42(TCTF)突变37例(54.41%),IVS2-654(C→T)突变杂合12例(17.65%),-28(A→G)突变10例(14.71%),-17(A→T)突变5例(7.35%),CD71/72(+A)2例(2.94%),-29(A→G)突变杂合1例(1.47%).密码子71/72(+A)复合IVS2-654(c→T)突变杂合1例,-28(A→G)复合密码子CD41/42-TCTT突变2例,单位点突变β地贫病人为95.59%(65/68),多位点突变为4.41%(3/68).7种突变杂合类型与常用方法PCR-RDB检测结果为100%符合率.结论 液态芯片技术能准确区分β地贫基因突变杂合复合突变,可提供快速、敏感的临床β地贫基因突变检测技术平台.
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太子参醛氧化酶基因克隆及表达分析
目的:获取太子参醛氧化酶(abscisic acid aldehyde oxidase,AAO)基因.方法:基于AAO基因的同源性和太子参转录组数据库,以块根为材料,利用3’-RACE技术和PCR技术克隆获取AAO基因序列,通过qRT-PCR技术检测该基因在太子参茎、叶、须根,不同生长时期及经外源脱落酸及其抑制剂处理后的块根中表达情况.结果:克隆获得太子参PhAAO基因序列长6 773 bp,含完整开放阅读框(4 053 bp),由10个外显子和9个内含子组成,氨基酸结构预测其含有钼-黄素酶家族基因特有的结构域.qRT-PCR分析显示PhAAO基因在太子参叶、须根中显著表达,在块根形成的关键时期6月中旬表达量高;脱落酸和氟啶酮处理后PhAAO基因表达上调,其中氟啶酮处理组较为明显.结论:获得太子参PhAAO基因序列,并进一步研究该基因的表达情况,为后续研究其功能特点,探讨太子参脱落酸生物合成分子机制奠定理论基础.
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原位杂交技术及难点释疑
RNA原位杂交技术在基因分析和诊断方面能作定性、定位和定量分析、已成为有效的分子病理学技术,用寡核苷酸探针检测组织切片中相关的mRNA是较为常见的RNA原位杂交.该探针方法简便、探针较短,组织穿透性好,有较高的灵敏度.在大多数的恶性肿瘤中存在TERT-RNA,所以采用TERT-原位杂交检测方法,可以应用于众多的恶性肿瘤,我们用此方法对舌癌进行检测,经过反复的实践、改进、摸索出一套比较实用的方法,获得比较满意的结果,现报道如下.
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p62参与柳氮磺吡啶抑制NF－κB信号途径和诱导人神经胶质瘤U251细胞凋亡机制的研究
目的：以人神经胶质瘤U251细胞为研究对象，从p62参与核转录因子κB（ NF－κB）信号途径活化角度，探讨柳氮磺吡啶（ SAS）抑制NF－κB信号途径和诱导U251细胞发生凋亡的机制。方法：构建p62 siRNA表达载体，MTT法检测细胞生存率，萤光素酶报告基因分析检测NF－κB转录活性，Western blotting法和间接免疫荧光法检测细胞自噬、凋亡。结果：SAS抑制U251细胞NF－κB转录活性，诱导细胞凋亡和自噬；抑制p62的表达可以增加SAS引起的NF－κB信号途径的抑制和凋亡；SAS通过自噬引起p62蛋白表达下降，抑制自噬可以拮抗SAS引起的NF－κB信号途径的抑制和凋亡。结论：p62蛋白水平在SAS诱导的NF－κB信号通路的抑制和凋亡中起重要作用，靶向抑制p62可能成为提高SAS抗肿瘤效果的新策略。
