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性别因素对应激大鼠下丘脑c-fos表达的影响
目的:探讨性别因素对下丘脑室旁核中Fos表达的影响,以期揭示应激相关障碍的中枢机制.方法:雌、雄wistar大鼠各15只随机分为4组:正常对照组10只,分为雌(A)、雄(B)2组各5只;束缚应激实验组20只,分为雌(C)、雄(D)2组各10只,束缚应激组大鼠束缚在特制的限制器内3 h,对照组不予束缚处理;用免疫组织化学方法检测应激前后的大鼠室旁核Fos的表达.结果:雌、雄性应激组大鼠下丘脑c-fos基因表达阳性细胞百分率分别为(61.2±2.5)%,(61.4±2.4)%,两组比较差异无显著性意义(t=0.066,P＞0.05),不同性别大鼠应激后下丘脑室旁核Fos阳性细胞数量无显著差别.结论:性别因素可能和应激相关障碍无关.
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经颅磁刺激后脑梗死大鼠学习记忆与海马c-Fos的表达
目的:研究经颅磁刺激对脑梗死后大鼠学习记忆功能和脑海马区c-Fos表达的影响. 方法:实验于2004-09/12在华中科技大学同济医学院附属协和医院神经内科实验室完成.48只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、经颅磁刺激组,每组16只.模型组和经颅磁刺激组大鼠采用线栓法制作一侧大脑中动脉闭塞的脑梗死模型.经颅磁刺激组在制模后第2天给予每天2次、每次30个脉冲的经颅磁刺激治疗,疗程4周.每组中的8只大鼠分别于4周后检测Y-迷宫中的学习记忆成绩和梗死侧海马c-Fos的表达.结果:经颅磁刺激组大鼠学习记忆功能明显改善(学习尝试次数:18.36±4.87;记忆再现次数:6.05±1.34),与模型组比较(学习尝试次数:26.40±5.45;记忆再现次数:3.72±1.18),差异均有显著性意义(t=3.65,3.28;P均＜0.01);经颅磁刺激组大鼠海马各区c-Fos阳性表达细胞数显著增加(CA1:28.55±3.62,CA2:25.27±3.09,CA3:27.65±3.53,齿状回:34.92±6.56),与模型组比较(CA1:9.42±1.28,CA2:7.58±1.18,CA3:8.63±1.24,齿状回:11.36±2.04),差异均有显著性意义(t=17.22,19.32,17.57,11.87;P均＜0.01).结论:应用转基因技术获得的c-fos基因突变的小鼠,表现出明显的空间学习记忆障碍,提示c-fos等即早基因的激活可能是学习记忆形成的必要条件.经颅磁刺激能增加脑海马各区c-Fos阳性细胞的表达,有促进脑梗死大鼠学习记忆功能恢复的作用.
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保留神经损伤诱致中枢痛敏的发生部位及其作用方式的实验观察
目的:利用已建立的保留神经损伤(spared nerve injury,SNI)动物模型,采用形态学方法研究探讨脊髓胶质细胞激活与中枢敏化的关系.方法:实验于2002-07/2003-02在解放军第四军医大学动物实验中心进行.取SD大鼠8只,建立SNI模型:坐骨神经的分支中胫神经和腓总神经被结扎切断,保留腓肠神经不受损伤.实验分两组:处理组:术前1 d及术后2 d连续鞘内给予胶质细胞功能干扰剂propentofylline,对照组:鞘内给予相应的溶媒.在术后第3天取脊髓腰膨大处切片进行c-Fos免疫细胞化学染色.光镜下对c-Fos免疫染色阳性细胞计数.结果:处理组c-Fos免疫反应阳性细胞[(11.5±2.0)个/视野]明显少于对照组[(41.5±3.3)个/视野].脊髓背角浅层的c-Fos免疫反应阳性细胞明显多于脊髓后角深层.结论:SNI模型中机械性痛敏的发生主要位于同侧脊髓背角的浅层.
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参麦注射液对缺血性脑损伤大鼠海马c-fos基因表达的影响
背景:c-fos基因为神经元细胞常见的基因,其表达情况可作为受损神经细胞活性和反映性的标志物之一.目的:从分子水平探讨缺血性脑损伤大鼠海马c-fos基因表达情况和参麦注射液的保护作用.设计:随机对照实验.单位:泸州医学院组织学与胚胎学教研室.材料:实验于2002-01/03在泸州医学院组织学与胚胎学实验室完成.选择雄性Wistar大鼠30只,随机分为对照组、缺血组和治疗组,每组10只.方法:缺血组和治疗组大鼠夹闭双侧颈总动脉30 min后再灌注1 h,建立缺血性脑损伤模型;治疗组在缺血30 min前腹腔注射参麦注射液2 mL/kg(由红参、麦冬等中药组成);缺血组不给药;对照组做假手术,不夹闭颈总动脉,也不给药.取大鼠脑海马组织制备石蜡切片,每只大鼠取1张切片,每组共随机统计100个神经元胞核.根据神经元胞核着色情况观察各组大鼠海马神经元c-fos基因的表达(+++为着色深,呈深棕色.++为着色较深,呈棕色者.+为着色较浅,呈浅棕色者.-为未着色).主要观察指标:各组大鼠海马神经元c-fos表达.结果:30只大鼠全部进入结果分析.缺血组大鼠海马内神经元c-fos基因的表达明显多于对照组[+++:24,7个/视野,P＜0.05],而治疗组明显少于缺血组[+++:13,24个/视野,P＜0.05].结论:参麦注射液可减少缺血性脑损伤大鼠海马神经元c-fos基因的表达,具有对缺血性脑损伤组织神经细胞的保护作用.
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针刺预处理诱导全脑缺血大鼠海马CA1区即刻早期基因c-fos mRNA及其蛋白的表达
目的:观察针刺预处理对全脑缺血大鼠海马CA1区c-fos mRNA及其蛋白表达的影响,并与缺血预处理的效果进行比较.方法:实验于2005-02/09在黑龙江中医药大学神经电生理实验室完觋成.①选用健康Wistar大鼠120只,雄性,体质量(250±20)g.采用随机数字表法将120只Wistar大鼠随机分为5组,每组24只:正常对照组:正常饲养,不干预.假手术组:暴露4条血管,不造模;脑缺血组:四动脉阻断法全脑缺血10 min制作大鼠全脑缺血模型;脑缺血预处理组:预全脑缺血3 min,再灌注24 h后再次全脑缺血10 min;针刺预处理组:术前7 d给予针刺,双侧足三里、曲池穴,双侧连接全能脉冲电疗仪,频率为1 Hz,电压为2 V,30 min/次,针刺百会30 min/次,1次/d,7 d后全脑缺血10 min.②每组分别于术后12,24,48和72 h麻醉状态下取材,每个时间点6只大鼠.免疫组织化学法检测海马CA1区c-Fos蛋白阳性细胞数,原位分子杂交技术检测大鼠海马CA1区c-fos mRNA表达.③计量资料差异比较采用单因素方差分析,两组间比较采用Newman-Keuls q检验.结果:120只大鼠均进入结果分析.①脑海马CA1区c-Fos阳性细胞数:正常对照组和假手术组无;脑缺血组少量表达,术后48 h为高峰[(23.35±7.68)个/mm2],而脑缺血预处理组和针刺预处理组术后24,48,72 h比较,差异不明显,但均明显高于脑缺血组(P＜0.05).②脑海马CA1区c-fosmRNA阳性细胞数:正常对照组和假手术组无;脑缺血组少量表达,术后72 h为高峰[(20.87±6.67)个/mm2,而脑缺血预处理组和针刺预处理组术后24,48,72 h比较,差异不明显,但均明显高于脑缺血组(P＜0.05).结论:针刺预处理和脑缺血预处理均可能通过上调c-fosmRNA表达而减轻严重缺血后细胞凋亡,促成脑缺血耐受的产生.
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高乌甲素对甲醛溶液致痛大鼠脊髓神经细胞c-fos表达的影响
目的:观察高乌甲素对甲醛溶液致痛大鼠脊髓背角c-fos基因表达的影响,探讨其脊髓水平的镇痛作用.方法:实验于2003-07/09在潍坊医学院麻醉学系实验室完成.SD大鼠15只,随机分为对照组、单纯甲醛组、高乌甲素组,每组5只.对照组、单纯甲醛组腹腔注射生理盐水,高乌甲素组腹腔注射6 mg/kg高乌甲素,2 min后单纯甲醛组、高乌甲素组向大鼠右侧后肢跖部皮下注射甲醛溶液,观察动物行为学变化.免疫组化法染色观察脊髓内c-fos基因表达.结果:15只大鼠均进入结果分析.①单纯甲醛组、高乌甲素组注射甲醛溶液后出现缩腿、舔咬注射爪的疼痛反应,注射后马上开始持续约5 min的急性早反应(第1期),经过5～10 min的静息期,随后出现持续约40 min的迟反应(第2期);高乌甲素组在第1期无疼痛反应;第2期时间短于单纯甲醛组[(73±7),(892±72)s,P＜0.01].单纯甲醛组注射处肿胀,直径达2.0～3.0 cm,高乌甲素组直径0.5～1.0 cm.对照组无异常行为表现.②单纯甲醛组、高乌甲素组见大量淡染Fos样免疫阳性神经元,主要分布在Ⅰ～Ⅱ层及Ⅴ～Ⅶ层.单纯甲醛组及高乌甲素组同侧脊髓腰膨大背角浅层Fos样免疫阳性神经元数明显多于对照组(P＜0.01);高乌甲素组同侧背角浅层Fos样免疫阳性神经元数明显少于单纯甲醛组(P＜0.01).结论:高乌甲素处理能对疼痛引起的脊髓灰质背角Fos样免疫阳性神经元增多效应产生抑制作用;脊髓灰质背角Ⅰ～Ⅱ及Ⅴ～Ⅶ层可能是高乌甲素镇痛作用的靶位.
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全脑缺血再灌注小鼠额叶和海马c-fos基因的表达
目的:探讨c-fos基因表达在全脑缺血再灌注后不同时间的变化规律.方法:实验动物全部采用由白求恩医科大学实验动物中心提供的雄性昆明小鼠,6～7周龄,体质量25～28 g.①动物分组:第1批:40只小鼠随机分为假手术组5只,脑缺血再灌注组35只,根据再灌注不同时间提取标本,分别为术后1 h,1 d,3 d,7 d,2周,4周,6周,每个时间点5只.第2批:40只小鼠用于反转录-聚合酶链反应,分组同上.②模型制备及检测方法:制备全脑缺血再灌注损伤模型,假手术组不阻断颈总动脉亦不放血.采用卒中指数对各组小鼠神经病学症状进行评价.于小鼠双侧颈总动脉阻断再灌注后1 h,1 d,3 d,7 d,2周,4周,6周取小鼠额叶皮质、海马区脑组织采用免疫组织化学染色、反转录-聚合酶链反应技术,对c-fos基因表达变化进行检测.结果:80只小鼠均进入结果分析,无脱落.①免疫组化检测c-fos基因表达产物Fos蛋白结果:假手术组Fos蛋白有较弱表达,免疫组化染色假手术组未见Fos蛋白阳性神经元;再灌注1 h在额叶皮质与海马区即可见Fos蛋白表达升高,与假手术组差异显著,再灌注1 d Fos蛋白表达达高峰,并持续至2周(P＜0.01),以后随时间延长逐渐下降,到6周达假手术组水平.②反转录聚合酶链反应检测c-fos表达结果:假手术组海马区有少量c-fos mRNA表达.再灌注1 h c-fos mRNA转录水平显著升高,与假手术组差异有显著性意义(P＜0.01),至5周时仍呈现较高转录水平(P＜0.05),随后下降,至4周时达假手术组水平.结论:全脑缺血再灌注可诱导中枢神经系统c-fos基因的持续表达.
关键词： 脑缺血/病理学 再灌注 基因 fos 原癌基因蛋白质c-fos/血液 -
亚低温条件下局部脑神经元c-fos蛋白表达变化
目的:研究颅脑枪弹伤常温下及全身亚低温治疗后脑神经元c-fos蛋白表达的变化.方法:18只杂种犬,随机分为常温组(正常犬温为38.5～39.5℃),亚低温组(31.5～32.5℃).以德国小口径步枪子弹致伤犬颅脑贯通伤(penetrating craniocerebral injury,PCI)模型为对象,采用免疫组化法检测两组脑组织伤后30 min,2,3 h弹道挫伤区,震荡区及脑干神经元中fos蛋白的表达.结果:全身亚低温治疗3 h组弹道挫伤区、震荡区及脑干神经元中fos蛋白阳性数分别为(15.5±1.6),(21.6±2.1),(6.7±1.8)个,较常温对应组弹道挫伤区,震荡区及脑干神经元中fos蛋白阳性数分别为(21.6±5.4),(32.2±1.7),(11.2±1.8)个显著减少(P＜0.01).结论:颅脑枪弹伤后全身亚低温治疗能够抑制脑神经元c-fos蛋白的表达.
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浅低温对急性颅脑损伤大鼠脑保护作用的治疗窗研究
目的:通过观察浅低温 (33.0～ 34.0 ℃ )对不同程度创伤性颅脑损伤的治疗作用,探讨浅低温的治疗窗. 方法:成年雄性 Wistar 大鼠 90只随机分为 5组,中度损伤组 20只,浅低温中度损伤组 20只,重度损伤组 20只,浅低温重度损伤组 20只和假手术对照组 10只.中度损伤组、浅低温中度损伤组及重度损伤组、浅低温重度损伤组用液压装置分别制成中、重度创伤性颅脑损伤动物模型,伤后早期 (5 min内 ) 中度损伤组、重度损伤组及浅低温中度损伤组、浅低温重度损伤组脑温分别维持在 37.0～ 38.0 ℃及 33.0～ 34.0 ℃,假手术对照组除不液压打击外处理同中度损伤组、重度损伤组.控温 1 h后每组 5只立即灌注固定取脑,冷冻切片免疫组织化学方法染色显示早期快反应基因 (IEGs)c-fos的表达产物.其余放回动物房,观察 24 h死亡率并进行运动功能评分. 结果:浅低温中度损伤组死亡率 (13%, 2/15)明显低于中度损伤组 (53%, 8/15)(χ 2=5.400, P=0.020),运动功能评分明显高于中度损伤组 (P< 0.01),损伤侧皮质 cfos表达 [(3.0± 0.7)分 ]明显高于中度损伤组 [(1.2± 0.4)分 ],差异有显著性意义 (t=-3.817, P=0.001). 结论:浅低温对中度创伤性颅脑损伤具有脑保护作用,但对重度创伤性颅脑损伤可能无明显的脑保护作用.
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亚低温治疗改善急性颅脑损伤后近期运动功能的机制研究
背景:目前已有大量国内外研究显示亚低温能够改善脑缺血和脑创伤后的神经功能预后,然而其脑保护作用的机制尚未明确,尤其尚未深入到分子生物学水平.目的:探讨亚低温对脑创伤的治疗作用,并从分子生物学角度探讨其可能的机制.设计:随机对照的实验研究.单位:北京天坛医院麻醉科、检验科、神经外科.地点和对象:实验在首都医科大学附属北京神经外科研究所完成.对42只Wistar大鼠进行研究.42只健康大鼠随机分为3组:常温组15只,亚低温组15只和假手术对照组12只.干预:常温组和亚低温组用液压装置制成创伤性颅脑损伤(traumatic brain injury,TBI)侧方打击模型,伤后早期(5 min)脑温分别维持在37～38℃和33～34℃,假手术对照组除不损伤外处理同常温组.控温1 h后每组5只立即灌注固定取脑,冷冻切片免疫组织化学方法染色显示c-fos的表达产物Fos蛋白.其余放回动物房,观察24 h死亡率并进行运动功能评分.主要观察指标:①运动功能评分.②c-fos的表达产物Fos蛋白表达情况.③24 h死亡率.结果:亚低温组与损伤有关的24 h死亡率(10%)较常温组(60%)明显降低(x2=5.495,P＜0.05),亚低温组前肢肌力、侧方推力、爬坡能力[(3.0±0.7)分,(2.7±0.7)分,(3.0±0.7)分]较常温组[(1.8±1.0)分,(1.5±0.6)分,(1.8±0.5)分]明显改善(t=-2.655,-2.88,3.165,P＜0.05),亚低温组损伤侧皮质Fos的表达(3.0±0.7)较常温组(1.2±0.4)明显增加(t=-4.811,P＜0.01).结论:亚低温对TBI有显著的治疗作用,其机制可能与Fos表达增加有关.
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大鼠脑挫裂伤后c-jun和c-fos基因快速反应的特点
背景:目前关于c-jun和c-fos基因表达的重要性已逐渐被人们认识,而关于脑挫伤后两种基因表达的特点报道较少.目的:探讨脑挫裂伤后c-jun和c-fos基因表达的特点.设计:随机对照实验研究.地点和材料:实验地点:原张家口医学院实验中心电镜室,成年Wistar大鼠45只,体质量200～310 g.干预:将45只大鼠随机分为模型组、假手术组及正常对照组,正常组不做任何处理,假手术组开颅窗不进行打击,模型组大鼠以自由落体法复制脑挫伤模型,伤后30min,1,2,4,8,24,72 h杀死大鼠取脑组织,石蜡切片,用PV6000免疫组织化学染色.主要观察指标:c-jun和c-fos基因蛋白表达的异同点.结果:正常对照组和假手术组c-fos无阳性表达,而c-jun呈弱阳性.模型组c-fos阳性神经元分布在伤灶周围区皮质1.0～2.0 mm和同侧海马;c-jun阳性神经元在伤侧皮质和海马广泛分布,相邻脑片c-jun阳性细胞着色深,尤其在海马中c-jun阳性细胞密集而核深,72 h c-fos基本上已无表达,而c-jun仍有较明显的阳性神经元.结论:脑挫伤后,同侧脑组织c-jun基因表达较c-fos更强烈、更广泛和表达时间更长.
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c-fos在阿尔茨海默病及血管性痴呆模型大鼠脑中的表达
目的 :探讨 c-fos在阿尔茨海默病 (Alzheimer's disease,AD)模型大鼠和血管性痴呆 (vascular dementia,VD)模型大鼠脑中表达的特征 ,并分析是否存在差异及其意义. 方法 :实验使用 SD雄性大鼠 ,体质量 350～ 520 g;先对所有大鼠进行迷宫训练,筛选出达到学会标准的大鼠,再将其随机分成对照组( 3只), AD模型组和 VD模型组.手术切断大鼠左侧穹窿海马伞 (FF)建立 AD大鼠模型,以在颅骨外固定小磁铁吸附经舌下静脉注入 Fe3O4粉进而堵塞脑血管复制缺血性 VD大鼠模型.在经迷宫检查证实上述模型建成后的不同时段,对含有海马结构的脑组织切片进行 Fos蛋白的免疫组化染色. 结果 :Fos样免疫反应活性( Fos-LI)在 AD大鼠的海马及大脑皮质均有增强 ,并随建模后时间的延长呈逐渐增强的趋势 ,在 VD大鼠脑中 Fos-LI则以皮质增强为主且只在建模初期有增强 ,1周时即已恢复正常. 结论 :c-fos在 AD及 VD模型大鼠脑中的表达存在空间及时程上的差异 ,反映了 c-fos功能的多样性及复杂性.
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白细胞介素-6对周围神经损伤后神经细胞FOS表达的影响
背景:神经系统正常情况下低水平 FOS表达,损伤后 FOS表达增强,白细胞介素- 6(interleulin- 6, IL- 6),在中枢神经系统损伤后能抑制,神经细胞 FOS表达,但周围神经损伤后神经细胞 FOS表达与 IL- 6的关系的研究目前尚未见报道. 目的:观察周围神经损伤后神经细胞 FOS表达及 IL- 6对其表达的影响. 设计:完全随机对照的前瞻性实验研究. 地点和对象: 2002/08～ 12在广东医学院实验动物中心完成,实验对象为 DS大鼠 48只,体质量 250～ 340 g,雌雄不拘. 干预:大鼠在无菌条件下显露左侧坐骨神经,实验组神经内注射 IL- 6 2 mL,对照组神经内注射生理盐水 2 mL.术后 1 h挤压损伤坐骨神经,分别于伤后 1, 2, 3, 4 h取出标本进行免疫组化染色. 主要观察指标:观察实验组和对照组 FOS免疫阳性细胞. 结果:伤后 1, 2, 3, 4 h对照组 FOS免疫阳性细胞分别为 548± 14, 640± 12, 718± 21, 732± 11;实验组分别为 202± 13, 212± 17, 245± 22, 288± 14.随挤压时间的延长而增加.实验组各时间 FOS免疫阳性细胞数较对照组明显减少(t=- 1.812, 2.128, P< 0.05; t=- 2.864, 3.159, P< 0.01)差异有显著性意义. 结论: IL- 6对周围神经损伤后神经细胞 FOS表达有抑制作用,提示 IL- 6参与神经损伤后的调控过程.
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脊髓缺血再灌注损伤中即早基因表达及细胞凋亡的研究
目的细胞凋亡是受一些基因控制的，很多因素可激活这些基因而导致细胞凋亡。研究脊髓缺血再灌注损伤（SCII）后即早基因（c- fos、 c- jun）表达的变化和细胞凋亡。方法制作 SCII动物模型，采用光镜、荧光显微镜、激光多普勒超声、免疫组化等技术，研究 SCII后即早基因（ c- fos、 c- jun）表达的变化和细胞凋亡。结果缺血 30 min，血灌流量平均下降 85.37％，再灌流即刻血灌流量迅速升高，再灌流 10 min左右达到高点。再灌流 30 min，血灌流量基本恢复到缺血前的基线水平，以后逐渐降低。缺血的部分再灌注后出现"二次瘫痪"现象。荧光染色发现缺血再灌注后脊髓神经细胞有凋亡的形态学改变：如核固缩、边聚等。实验组动物脊髓神经细胞核中出现棕色 c- fos和 c- jun的阳性表达产物，对照组仅有轻微 c- fos和 c- jun表达。结论脊髓缺血一定时间后恢复血液供应，可以发生再灌注损伤。脊髓缺血再灌注后 c- fos和 c- jun的表达均增加，而且在 SCII后细胞死亡以凋亡为主， c- fos和 c- jun可能参与了 I/R损伤诱导的神经细胞凋亡。
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兔血管平滑肌细胞在低剂量电离辐射后的分子生物学变化
目的:观察体外培养的兔动脉平滑肌细胞( smooth muscle cells, SMCs)对γ射线照射的分子生物学机制. 方法:取新西兰白兔 (n=2)SMCs培养至第 5～ 7代,对静止期 SMCs分别给予γ射线 2.5,5.0,10.0,20.0及 30.0 Gy一次性照射后继续培养 4,24或 72 h.通过原位杂交方法观察γ射线对 SMCs的 c fos与 p53基因表达的影响. 结果 :低剂量γ射线照射后早期( 4 h左右) SMCsc fos mRNA表达减少, p53 mRNA表达增加,而高剂量γ射线照射及低剂量γ射线照射 24 h及 72 h时 c fos与 p53基因表达无明显变化. 结论 :SMCs在低剂量电离辐射后,早期发生了 c fos与 p53基因改变, c fos与 p53基因的改变可能参与了γ射线抑制 SMCs的增殖过程.
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丹参、黄芪合用对脑缺血再灌注后脑组织Fos,Jun蛋白表达的影响
AIM: To investigate the expression of Fos and Jun proteins in rat brainsafter focal cerebral ischemia followed by reperfusion and effects of RSMand astragus. METHODS: 30 SD adult male rats were divided into 5groups at random . Group A: sham-operated group; Group B: model group;Group C: treated with RSM; Group D: treated with astragus; Group E:treated with RSM and astragus. The immunohistochemistry and medicalimage processing system(MIPS) were used to measure the numbers andmean grey levels of Fos and Jun protein positive cells in rat cerebralcortex of 5 groups. RESULTS: ( 1 ) In cerebral cortex of group B , C , D, E, the numbers of Fos and Jun positive cells were more than those ingroup A and mean grey levels of Fos and Jun positive cells were lower thanthose in group A(P ＜ 0.01); (2) In cerebral cortex of ischemic sidesin group C, D, E,the numbers of Fos and Jun positive cells were less thanthose in group B and mean grey levels of Fos and Jun positive cells werehigher than those in group B(P ＜ 0.01) ; (3) Group E had more sig-nificant effects than group C or group D ( P ＜ 0. 01 ). CONCLUSION:The expression of Fos protein and Jun protein in model group increasedsignificantly, compared with sham-operated group; RSM , astragus , RSMand astragus all could inhibit partly the expression of Fos protein and Junprotein after cerebral ischemia and reperfusion; Prescription of RSM andastragus had stronger inhibiting effects than RSM or astragus. It may be oneof mechanisms that ischemic stoke is treated by reinforcing Qi and acti-vating blood circulation therapy in TCM clinic.
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参附注射液影响大鼠缺血再灌注心肌Bcl-2,Bax与c-Fos蛋白的表达
背景:研究证实,参附注射液对各种休克、心力衰竭、心肌缺血以及室上性/室性心律失常均有改善治疗作用,对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有良好的保护作用.目的:观察参附注射液对急性缺血再灌注损伤大鼠心肌凋亡相关基因Bcl-2,Bax和c-Fos蛋白表达的影响.设计:完全随机分组设计,对照实验.单位:重庆医科大学附属第二医院麻醉科.材料:实验于2004-04/12在重庆医科大学附属第二医院麻醉教研室完成.选用健康成年Wistar大鼠35只,由解放军第三军医大学大坪医院实验动物中心提供.参附注射液是中医"回阳救逆"参附汤的中药配方,其主要成分是人参皂甙及乌头类生物碱(雅安三九药业有限公司出品,规格10 mL/支,批号:030110).方法:采用在体心脏缺血再灌注模型,35只大鼠按随机数字表法分为5组,每组7只.①假手术组:只穿线不结扎,静脉注射生理盐水8 mL/kg,观察120 min.②参附注射液30 min组:结扎前15 min静脉注射参附注射液8 mL/kg,结扎左冠状动脉前降支40 min,再灌注30 min.③参附注射液120 min组:再灌注120 min,余同参附注射液30 min组.④生理盐水30 min对照组:结扎左冠状动脉前降支前15 min静脉注射生理盐水8 mL/kg,结扎左冠状动脉前降支40min,再灌注30 mi.⑤生理盐水120min对照组:再灌注120min,余同生理盐水30min组.应用免疫组化法检测各组大鼠心肌凋亡相关基因Bcl-2,Bax和c-Fos蛋白的表达量.主要观察指标:各组大鼠心肌凋亡相关基因Bcl-2,Bax和c-Fos蛋白的表达量.结果:35只大鼠全部进入结果分析,无脱失.①与假手术组比较,生理盐水30 min组和120 min组大鼠心肌Bcl-2,Bax和c-Fos蛋白表达水平显著升高(P＜0.01),Bcl-2/Bax比率显著降低(P＜0.01).②与相应生理盐水组比较,参附注射液30 min组和120 min Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P＜0.01),Bax和c-Fos蛋白表达水平显著降低(P＜0.01),Bcl-2/Bax比率显著升高(P＜0.01).结论:参附注射液对缺血再灌注心肌保护效应可能与其促进Bcl-2蛋白高表达、抑制Bax与c-Fos蛋白表达、增加Bcl-2/Bax比率,从而抑制心肌细胞凋亡有关.
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丹参酮ⅡA对心肌细胞肥大的影响
目的:观察丹参酮ⅡA对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞肥大及原癌基因c-fos mRNA表达的影响.方法:实验于2005-09/12在十堰市人民医院临床研究所完成.①将100只出生后1周内乳鼠心肌细胞原代培养24h后,按随机数字表法分为6组:对照组:心肌细胞培养液中未加入任何药物;血管紧张素Ⅱ.组:心肌细胞培养液中加入1×10-6mol/L血管紧张素Ⅱ;血管紧张素Ⅱ+丹参酮ⅡA组:心肌细胞培养液中预先加入1×10-5mol/L丹参酮ⅡA作用30 min后,再加入1×10-6mol/L血管紧张素Ⅱ(中国药品生物制品检定所提供,批号0766-200010);血管紧张素Ⅱ+缬沙坦组:心肌细胞培养液中预先加入1×10-6 mol/L缬沙坦后,再加入1×10-6 mol/L血管紧张素Ⅱ;丹参酮ⅡA组:心肌细胞培养液中加入1×10-5mol/L丹参酮ⅡA;缬沙坦组:心肌细胞培养液中加入1×10-6mol/L缬沙坦.所有实验均重复3次.②持续加药作用7d后采用流式细胞仪检测心肌细胞总蛋白含量.采用3H-亮氨酸掺入法测定心肌细胞蛋白质合成速率.采用反转录聚合酶链式反应检测心肌细胞原癌基因c-fosmRNA表达.③计量资料差异比较采用单因素方差分析.结果:①血管紧张素Ⅱ可以使心肌细胞蛋白总量增多(P＜0.01),预先加入丹参酮ⅡA或缬沙坦作用30 min,可阻断血管紧张素Ⅱ的作用(P＜0.01).②血管紧张素Ⅱ作用24 h后,血管紧张素Ⅱ组心肌细胞合成速率明显高于对照组[(1900±97),(1205±75)min-1,P＜0.01],丹参酮ⅡA和缬沙坦本身对心肌细胞蛋白质的合成没有影响,但能抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞蛋白质合成速率的增加(P＜0.01).③在培养液中加入血管紧张素Ⅱ作用30min后,c-fosmRNA的表达显著增强(P＜0.01),预先加入丹参酮ⅡA或缬沙坦作用30 min,可阻断血管紧张素Ⅱ的作用(P＜0.01),而丹参酮ⅡA和缬沙坦本身对原癌基因c-fosmRNA的表达无影响. 结论:丹参酮ⅡA可以抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞肥大,这与其抑制了原癌基因c-fos的表达有关.
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鞘内维拉帕米对甲醛致痛大鼠的抗伤害作用
目的:观察鞘内注射维拉帕米( Ver)后大鼠伤害性行为学反应,脊髓背角 Fos表达的改变,从组织化学及行为学角度探讨维拉帕米对甲醛致痛大鼠的抗伤害作用的可能机制. 方法:雄性 SD大鼠 24只,随机数字表法分为 3组 :生理盐水对照组( NS组) , 甲醛对照组 (F组 )和维拉帕米甲醛组( VeF组). F组给予 50 mL/L甲醛 100 μ L,足底注射, VeF组在同 F组处理前鞘内给予 Ver.在甲醛处理后观察大鼠的行为学表现并检测大鼠脊髓 Fos的表达. 结果: VeF组的缩腿舔爪时间、脊髓的 Fos表达显著短于或弱于 F组. 结论: Ver能抑制大鼠脊髓背角 Fos的释放,可能是其产生抗伤害作用的机制之一.
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雷公藤对豚鼠表皮c-fos基因表达及表皮再生能力的调节
目的:观察雷公藤甲素对豚鼠皮肤原癌基因c-fos表达的影响,探讨雷公藤甲素的有效作用浓度.方法:实验于2004-01/08在泸州医学院组织学与胚胎学实验室进行.将20只雄性豚鼠随机分成为4个实验组,分别为对照组、雷公藤甲素5 mg/L组、雷公藤甲素10 mg/L组和雷公藤甲素20 mg/L组,每组5只.使用雷公藤甲素5,10,20 mg/L 3种浓度对局部皮肤真皮注射处理,免疫组织化学方法显示c-fos阳性细胞,用光学显微镜和图像分析仪对结果进行观察和分析.结果:20只豚鼠均进入结果分析.与对照组比较,雷公藤甲素5,10,20 mg/L组豚鼠表皮角质细胞c-fos表达明显增强(149,162,144,87个/视野,P＜0.05),吸光度明显增高(0.142±0.025,0.157±0.066,0.159±0.079,0.107±0.076,P＜0.05).不同浓度药物之间作用差异无显著性意义(P＞0.05).结论:雷公藤甲素对豚鼠皮肤原癌基因c-fos表达具有调节作用,其有效作用浓度范围较实验采用的5～20 mg/L大.
