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仙草提取物的体外抗氧化实验研究
仙草(hsian-tsao,Mesona procumbens Hemsl),又名凉粉草,唇形科仙草属一年生草本植物,因其具有清热、解毒、消暑的功效,民间常用作制备龟苓膏和天然凉茶的主要原料,是我国传统的药食两用植物资源.仙草的水提取液具有较强的抗氧化作用[1],为了探讨其抗氧化作用机制,我们采用体外实验方法研究了仙草提取物对大鼠脂质过氧化和抗氧化酶活性的影响.
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凉粉草化学成分分离鉴定
目的:研究唇形科(Labiatae)植物凉粉草Mesona chinensis的干燥地上部分的化学成分,从物质基础的角度探寻其作为药食同源的可能性.方法:取凉粉草的干燥地上部分,用95％乙醇浸泡提取,经减压浓缩后得到凉粉草浸膏,然后将凉粉草浸膏加水溶解后,依次用正己烷,乙酸乙酯溶剂萃取,得到正己烷部位浸膏和乙酸乙酯部位浸膏,然后采用硅胶、小孔树脂凝胶(MCI)和LH-20羟丙基葡聚糖凝胶(Sephadex LH-20)等柱色谱分离方法对乙酸乙酯部位浸膏进行分离纯化,并且利用NMR,MS等各种现代波谱技术以及化合物的理化性质并结合参考文献确定化合物的化学结构.结果:从凉粉草的干燥地上部分的95％乙醇提取物中总共分离得到13个化合物,分别鉴定为熊果酸(ursolic acid,1),齐墩果酸(oleanic acid,2),2α,3α-二羟基-12-烯-28-齐墩果酸(2α,3α-dihydroxyolean-12-en-28-oic acid,3),2α-羟基乌苏酸(corosolic acid,4),2α,3α,19α-三羟基-12-烯-28-乌苏酸 (2α,3α,19α-trihydroxyurs-12-en-28-oic acid,5),豆甾醇(stigmasterol,6),β-谷甾醇(β-sitosterol,7),山柰酚(kaempferol,8),槲皮素(quercetin,9),3-吲哚甲酸(3-indoleformic,10),橙黄胡椒酰胺乙酸酯(aurantiamide acetate,11),十七烷酸(heptadecanoic acid,12),十六烷酸(palmitic acid,13).结论:化合物3-5,7,10～13均为首次从凉粉草以及从凉粉草属植物中分离得到.
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凉茶药材凉粉草与混伪品的ITS2条形码鉴定
目的 建立一种准确、快速的凉茶药材凉粉草与其混伪品的DNA条形码鉴定方法.方法 本实验收集凉粉草及其混伪品共5个物种和4个变种的55份样本,提取基因组总DNA,通过PCR扩增和CodonCode Aligner软件拼接注释获得完整的ITS2序列,然后应用种内种间K2P遗传距离和系统进化NJ树分析进行物种鉴定.结果 凉粉草ITS2序列长度为232 bp,种内遗传距离为0,远小于其与混伪物种间的小遗传距离0.210 2～0.310 9;NJ树结果表明,凉粉草独成一支,与其混伪品均可准确区分.结论 基于ITS2序列的DNA条形码技术能够准确有效地实现凉粉草与其混伪品的快速鉴别,保障凉茶药材凉粉草的使用安全.
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凉粉草挥发油化学成分的气相色谱-质谱联用分析
目的 对凉粉草挥发油中的化学成分进行分析.方法 采用水蒸气蒸馏法对凉粉草中的挥发油进行提取,用气相色谱-质谱法对其成分进行分析,同时采用面积归一化法测定各组分的相对含量.结果 从凉粉草中共分离分析得到26个成分,经计算机谱库检索鉴定了其中15个化合物的结构,占总组分的98.08%.其中相对含量较高的是正十六酸(59.18%)、亚油酸(12.42%)、亚麻酸(10.12%).结论 该方法快速、灵敏度高,适用凉粉草中挥发性成分的分析.
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凉粉草中总黄酮的提取工艺研究
目的:研究凉粉草中总黄酮的佳提取工艺.方法:以乙醇为提取剂,芦丁为对照品,NaNO2-Al(N0)3-Na0H显色体系进行显色,测定波长510nm,采用分光光度法测定仙人草中的总黄酮含量.实验设计以单因素实验为重点,考察了温度,浸提时间,浸提次数,和溶媒倍量对总黄酮提取率的影响.结果:总黄酮佳提取条件为:乙醇浓度50%,提取温度100℃,溶媒倍量12倍,提取次数2次,每次1.0h.结论:凉粉草总黄酮的提取率稳定,RSD为0.52%,总黄酮含量平均值为28.55%.该方法简便,重现性好.
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凉粉草中抗缺氧化学成分
目的 研究凉粉草(Mesona chinensis Benth)中的抗缺氧化学成分.方法 用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱、ODS柱色谱及制备HPLC色谱分离纯化化合物;通过化合物的理化常数、1H-NMR和13C-NMR波谱数据,鉴定化合物结构;通过大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤克隆化细胞株(PC12)实验,对各单体化合物进行活性评价.结果 从凉粉草体积分数为65%的乙醇提取物的氯仿层和乙酸乙酯层分离得到8个化合物:咖啡酸(1)、3-(4-乙氧基-3-羟基-苯基)烯丙酸(2)、咖啡酸乙酯(3)、山奈酚(4)、高山黄芩素(5)、2-十六烷基-十八烷酸(6)、熊果酸(7)和豆甾醇(8);应用PC12细胞缺氧模型在DMSO溶液中测得化合物1、4、5、6、7、8在不同质量浓度下具有不同的抗缺氧活性.结论 首次从凉粉草属中分离得到化合物2、3、5、6;化合物1、4、5、6、7、8有一定的抗缺氧活性,化合物4、5、7、8有较好的抗缺氧活性.
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凉粉草枝插生根发芽特性研究
目的 了解凉粉草枝插生根发芽特性.方法 将凉粉草枝条剪成长约10cm(含3个茎节)的插条,扦插于以沙壤土为基质的苗床上.结果 插后5d开始生根,10d生根插条迅速增多,15～20d普遍生根成活,成活率达95.0％以上；插后30d,单株平均生根11.2条,根长4.5cm,芽长5.4cm,芽叶数4.4对,≥1.0cm分枝0.7条.结论 凉粉草枝条的再生能力较强,枝插繁殖生根发芽快且整齐.
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凉粉草中熊果酸和齐墩果酸的提取工艺研究
目的 研究从凉粉草中提取熊果酸和齐墩果酸的工艺.方法 以高效液相色谱法测定熊果酸和齐墩果酸的含量,以两者含量之和为指标,通过对提取方法和提取温度进行单因素考察以及L9(34)正交法对提取条件进行优选.结果 凉粉草中熊果酸和齐墩果酸的佳提取工艺采用回流提取法、温度80℃、95％乙醇、液料比14:1、提取1次、每次1.5 h.结论 该工艺操作简单、易行,可提取得到含量较高的熊果酸和齐墩果酸.
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凉茶还需热饮
凉茶并不算“茶”,而是中草药植物性汤饮,除了水和白砂糖外,多由凉粉草、鸡蛋花、布渣叶、菊花、金银花、夏枯草、甘草等中药配料组成,当然不能乱吃“药”.常见的凉茶配料中,菊花、金银花、夏枯草以及甘草都属于清热药的范畴,药性偏凉,具有清热泻火、凉血解毒、利尿凉肝等功效,少量服用确实能起到消除湿毒的作用,但若服用过量,则“苦寒者必伤阴”.
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不同凉粉草中天然苯甲酸的含量测定
目的：建立不同产地和存放时间的凉粉草中天然苯甲酸的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法,色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18(250 mm ×4.6 mm,5μm),以甲醇-0.02 mol·L-1的乙酸铵溶液为流动相(5∶95)；流速：1.0 ml· min-1；柱温：35℃；检测波长：230 nm；进样量：10μl。结果：苯甲酸在0.1~10.0μg·ml-1范围内线性关系良好,r=0.9999；平均回收率在99.59%(RSD为1.57%,n=9)。数据表明不同产地凉粉草所含苯甲酸的含量不同；1号凉粉草的苯甲酸含量多,为141.8 mg·kg-1,3号凉粉草的苯甲酸含量少,为73.8 mg·kg-1,凉粉草打粉存放两年后苯甲酸的含量均明显下降。结论：该方法操作简单,准确性和重复性良好,为凉粉草资源的进一步深入研究提供依据,同时为其他植物中天然苯甲酸含量测定提供参考。
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凉粉草药材生产质量的指纹图谱评价研究
目的:运用指纹图谱技术,对不同采收月份、采收时间和不同加工方法的凉粉草进行质量评价,确定佳采收时间和适宜的加工方法.方法:采用高效液相色谱法测定,色谱柱为Dikma Diamonsil(2)C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相为乙腈-2%甲酸(梯度洗脱);检测波长为320 nm;流速为0.8 ml·min-1;柱温为25℃.结果:凉粉草佳采收月份为9～10月,佳采收时间为午后16:00左右;加工方法可根据用途作相应的加工.结论:该法准确可靠,重复性好,为凉粉草药材生产质量控制提供了依据.
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凉粉草的酚酸类成分研究
目的:对凉粉草的酚酸类成分进行研究.方法:采用色谱分离方法进行纯化,经现代波谱技术对化合物进行结构鉴定.结果:从凉粉草中分离得到15个酚酸类化合物,分别鉴定为:迷迭香酸(1)、迷迭香酸甲酯(2)、迷迭香酸葡萄糖苷(3)、丹酚酸A(4)、迷迭香酸甲酯葡萄糖苷(5)、9′,9'''-紫草酸B二甲酯(6)、紫草酸甲酯(7)、紫草酸(8)、紫草酸B(9)、咖啡酸(10)、咖啡酸葡萄糖苷(11)、原儿茶酸(12)、丹参素(13)、丹酚酸J(14)、4-hydroxy-2,6-dimethoxyphenol-1-O-β-D-glucoside(15).结论:其中,化合物1～9、11、13～15为首次从该属植物中分离得到,化合物12为首次从该植物中分离得到.
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超临界CO2萃取法与水蒸气蒸馏法提取凉粉草挥发油及其GC-MS分析
目的:对超临界二氧化碳萃取法及水蒸气蒸馏法提取的凉粉草挥发油化学成分进行比较研究.方法:采用超临界二氧化碳萃取法及水蒸气蒸馏法提取凉粉草挥发油,用GC-MS法对挥发油进行化学成分的分析鉴定,用面积归一化法获得各化合物的相对百分含量.结果:从超临界CO2萃取法提取的挥发油鉴定出40个成分,从水蒸气蒸馏法提取的挥发油鉴定出34个成分,两者共有成分21个.结论:两种方法提取的挥发油主要成分相近,但含量有较大差异.
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凉粉草的显微鉴别
凉粉草又名仙草、仙人冻等,为唇形科植物凉粉草Mesonae chinensis Benth的干燥地上部分,分布于浙江、江西、台湾、广东及广西等地.本品性寒、甘、淡凉,具有消暑、清热、凉血解毒等功效,用于治疗中暑、糖尿病、高血压、急性肾炎、风火牙痛、丹毒、梅毒、黄疸等症[1].在广东、广西民间广泛用凉粉草制成凉粉作清凉饮料降温解暑[2].该药材易于栽培,值得进一步系统深入研究及开发,特作如下试验.
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正交试验法优化凉粉草总黄酮的提取工艺研究
目的 研究凉草粉总黄酮的佳提取工艺.方法 本实验采用水回流提取方法.首先确定以溶媒量、提取时间、提取次数为主要考察因素进行单因素试验,并分析各因素对凉粉草总黄酮提取效率的影响.在单因素试验的基础上,设计L9(34)正交试验,测定凉粉草水提取液中槲皮苷含量作为评价指标,从而优化槲皮苷的佳水提工艺.结果 佳水提取工艺的条件为:溶媒量15倍量的水(除去吸水率),提取次数3次,提取时间1 h.此佳水提取工艺所得到的槲皮苷的含量为3.241 g.结论 槲皮苷的提取率较高,可行性较好,提取工艺稳定.
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南药“凉粉草”药材水溶性成分HPLC指纹图谱鉴别研究
目的 建立南药“凉粉草”水溶性成分的HPLC指纹图谱,为药材质量控制提供依据.方法 采用Kromasil C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,乙腈-0.1％甲酸溶液梯度洗脱,流速1.0 mL· min-1,检测波长254 nm,柱温25℃.结果 建立凉粉草药材水溶性成分HPLC指纹图谱,确定11个共有色谱峰,并指认图谱中的5个色谱峰,分别为咖啡酸、异槲皮苷、迷迭香酸苷、紫云英苷、迷迭香酸.对16批凉粉草药材指纹图谱进行聚类分析和主成分分析,筛选并判断合格样品,以合格样品构建指纹图谱共有模式,并用国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件(2004B版)对其质量进行分析与评价.结论 该色谱方法简单、准确、重复性好,可用于凉粉草药材的质量评价.
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ICP-MS法测定凉粉草中7种微量重金属元素的含量
目的:建立电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法测定凉粉草药材中Cu、As、Cd、Pb、Mn、Ni、Cr等7种微量重金属元素的含量.方法:样品经微波消解处理,分别以Ge、In、Bi、Sc为内标,采用ICP-MS法同时测定上述7种元素的含量.结果:所测元素标准曲线的相关系数r均＞0.9998,回收率为80.0％～ 110.0％,RSD均＜5.58％(n=6).结论:本研究所建立的方法简便、准确、快速,可用于凉粉草中微量元素的含量测定.
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凉粉草成分功效及提取方法的研究进展
目的:为凉粉草的提取加工提供理论依据.方法:检索国内外与凉粉草成分功效及提取方法相关的文献,分析比较各类化学成分主要的提取方法.结果:采用提取溶剂不同、方法不同,所得的成分不同、收率也不同.结论:需要根据不同的应用来采取不同的提取方法.
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龟苓膏粉类产品重金属污染评价及其来源分析
对华南地区龟苓膏粉类产品的重金属污染状况进行研究分析.结果表明:龟苓膏粉类产品铅、砷含量范围分别在0.76～2.58 mg/kg和0.10～0.26 mg/kg之间.所抽检产品的铅超标率为66.1％,砷未发现超标批次.经评价发现该类产品受重金属铅轻度污染的情况普遍存在.从生产原辅料分析产品中重金属铅的来源发现产品中的铅元素主要来源于凉粉草原料.因此对龟苓膏粉类产品中铅元素的污染控制,重点在原料凉粉草的质量控制.
