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在线固相萃取-HPLC测定4种虫草类药材中虫草素和2'-脱氧腺苷
该文建立一种同时测定4种虫草类药材(冬虫夏草、蛹虫草、虫草菌丝体和蝉花)中虫草素(3'-脱氧腺苷)和2'-脱氧腺苷含量的在线固相萃取-高效液相色谱分析方法.供试品经ZORBAX SB-AQ(4.6 mm×12.5 mm,5 μm)色谱柱富集,水-甲醇(91:9)洗脱;ZORBAX SB-AQ(4.6 mm×150 mm,5 μm)色谱柱分离,流动相为0.1％甲酸水溶液-甲醇(91:9),检测波长260 nm,柱温40℃,流速1.0 mL·min.-1,分别对4种虫草类药材中虫草素和2'-脱氧腺苷含量进行检测.结果表明冬虫夏草、虫草菌丝体和蝉花样品中仅检测到2'-脱氧腺苷,蛹虫草样品中仅检测到虫草素,早期报道的在冬虫夏草中检测到的虫草素色谱峰可能是其同分异构体2'-脱氧腺苷色谱峰或以2'-脱氧腺苷为主的与虫草素的共洗脱色谱峰.该方法重复性好,准确度高,分析时间短,可用于虫草类药材中虫草素和2'-脱氧腺苷的分析.
关键词： 固相萃取 高效液相 虫草素(3'-脱氧腺苷) 2'-脱氧腺苷 -
固相萃取高效液相色谱法测定人血浆中灯盏乙素及3,5-二咖啡酰基奎宁酸
灯盏细辛酚注射液具活血通络、祛风通脉功效,临床用于缺血性中风、脑络痹阻等.其有效成分灯盏乙素和总咖啡酸酯的含量大于80%.主要活性单体为灯盏乙素(scutellarin),具有扩张微血管、降低血液黏稠度和脑血管阻力、增加脑血流量、改善微循环的作用,可用于缺血性脑血管病的治疗.3,5-二咖啡酰基奎宁酸也有一定的活性作用.作者采用固相萃取小柱提取血浆中的灯盏乙素及3,5-二咖啡酰基奎宁酸,用高效液相色谱法检测,以期为灯盏细辛酚注射液的药代动力学研究提供实验方法.
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清火栀麦片中化学成分的SPE-HPLC-ESI-MSn快速识别与鉴定
目的:建立一种固相萃取-高效液相色谱-电喷雾串联质谱(SPE-HPLC-ESI-MSn)分析方法,对清火栀麦片中主要的化学成分进行快速识别与鉴定.方法:根据HPLC-ESI-MSn负离子模式下的分子离子峰以及碎片离子获得化合物的结构信息,并通过与文献数据或对照品对照,确定化合物可能的结构.结果:通过对清火栀麦片及其组方药味进行比较分析,归属并鉴定了其中的39个化学成分,包括7个咖啡酰奎尼酸、7个环烯醚萜、6个二萜内酯、5个高异黄酮、13个甾体皂苷以及1个黄酮类成分.结论:该研究为鉴别清火栀麦片中的化学成分提供了一种简便、快速的方法.
关键词： 高效液相色谱-电喷雾串联质谱 固相萃取 清火栀麦片 化学成分鉴定 -
固相萃取-高效液相色谱法快速测定血中6种苯二氮(艹卓)类药物浓度及其临床应用
目的建立SPE-HPLC法同时测定血清中6种苯二氮(艹卓)类药物(地西泮、硝西泮、氯硝西泮、三唑仑、艾司唑仑、阿普唑仑)浓度.方法用固相萃取技术处理含药血清,色谱柱为Nova-pak C18柱,3.9 mm×150 mm,4μm;流动相为0.01 mol/L磷酸盐缓冲液(pH 2.15):乙腈(71:29);检测波长223nm;流量1 ml/min,柱温30℃.结果6组分分离良好,在0.01～10.00μg/ml峰面积与浓度呈良好的线性关系(r＞0.999),相对回收率为96%～104%,日内、日间RSD均小于9%.结论该色谱条件可同时测定血清中此类药物,具有快速、简便、准确可行等特点,非常适用于此类药物中毒患者的快速鉴定,提高急诊救治水平和指导癫痫治疗用药.
关键词： HPLC 固相萃取 苯二氮(艹卓)类药物 血药浓度 -
超高效液相-串联质谱法同时检测孕产妇血清中18种抗生素
目的 建立液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)同时检测血清中六大族类18种抗生素浓度的方法并对其进行方法学评价.方法 采用Waters Oasis HLB μElution Plate固相萃取结合超高效液相色谱-串联质谱(SPE-LC-MS/MS)技术一次前处理和进样定量检测18种抗生素;参考化学药物临床药代动力学研究技术指导原则对方法进行特异性、标准曲线和定量范围、准确度和精密度等基本性能进行验证.结果 特异性表明空白血清中的基质构成不影响目标抗生素的检测;标准曲线选取7个不同的浓度点定量,各浓度点的实测值与标示值之间低浓度点的偏差在±20％以内,其余浓度点的偏差在±15％以内;添加回收率、准确度均在可接受范围内,RSD＜ 15％.结论 建立的SPE-LC-MS/MS方法的精密度、准确度、重现性均较好,结果准确,可用于临床实验室检测孕产妇血清中的目标抗生素残留.
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阴离子交换固相萃取GC-MS/MS方法检测鱼肉制品中的河豚毒素
目的 建立高灵敏度的检测鱼肉制品中河豚毒素的阴离子交换固相萃取(SPE)气相色谱-串联质谱法.方法 采用直接碱解的样品处理方法,将鱼肉制品中的河豚毒素转化为C9碱,经阴离子交换(SAX)固相萃取柱净化、双三甲基硅基三氟乙酰胺(BSTFA)硅烷化衍生后,在气相色谱-串联质谱仪上以选择反应监测(SRM)模式进行检测.结果与结论 在优分析条件下,染毒的鱼肉样品中河豚毒素的线性范围为10～1000 μg/kg,检测限为8 μg/kg.该方法专属性强、灵敏度高,操作相对简便.
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同位素稀释气相色谱-串联质谱法定量测定人体尿液中的硫二甘醇
目的 建立定量测定人体尿液中芥子气生物标志物硫二甘醇(TDG)的同位素稀释气相色谱-串联质谱法(GC-MS/MS).方法 样品中的TDG,经过HLB柱固相萃取(SPE),五氟苯甲酰氯(PFBC)衍生化后,采用GC-MS/MS选择反应监测模式分析,以氘代硫二甘醇(Ds-TDG)为内标进行定量测定.结果 方法在1～150 μg/L范围内线型关系良好(r =0.9997),低检出限和定量限分别为0.1、0.5 μg/L,回收率为99.5％～108.8％,相对标准偏差小于10％.结论 所建方法专属性强、灵敏度高.该法曾在国际禁止化学武器组织(OPCW)举办的两次生物医学样品分析国际实验室间的盲样比对测试中,取得了良好的定性定量结果.
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固相萃取-气相色谱-串联质谱法检测粮食作物中的T-2与HT-2毒素
目的 建立粮食作物中T-2与HT-2毒素的高灵敏度气相色谱-串联质谱(GC-MS/MS)检测方法.方法 染毒的粮食样品以柱淋洗方式用甲醇提取后,采用C18固相萃取柱净化富集,再经七氟丁酰咪唑衍生化后,在气相色谱-串联质谱仪上采用选择反应监测(SRM)模式进行检测.结果 在染毒大米、小米、糯米和玉米样品中,T-2与HT-2毒素在0.5~100 μg/kg范围内均呈现良好的线性关系.在优分析条件下,两种毒素的低检出限均在0.05~0.5 μg/kg.在2、30 、60 μg/kg 3个加标浓度下,T-2与HT-2毒素的方法回收率均在47.2% ~110.8%.结论 该方法操作简便,灵敏度高,适用于各类粮食样品中T-2与HT-2毒素的检测.
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分子烙印聚合物对神经性毒剂降解产物固相吸附行为研究
目的:本研究以神经性毒剂降解产物为模板分子,在不同反应条件下合成了系列分子烙印聚合物(MIP)作为固相萃取(SPE)填料,以评价和研制一种神经性毒剂降解产物的选择性吸附剂,并研究其吸附机制和影响因素.方法:分别以VX的水解产物甲基膦酸乙酯(EMPA)、俄罗斯VX的水解产物甲基膦酸异丁酯(i-BuMPA)和梭曼的水解产物甲基膦酸片呐酯(PMPA)为模板分子合成MIP,并填充自制MIP-SPE小柱,气相色谱检测,考察功能单体、交联剂、溶剂、温度及MIP粒子的大小等因素对MIP吸附性能的影响.结果:实验表明功能单体和交联剂的种类和用量及模板分子的结构是影响MIP吸附性能的重要因素.以丙烯酰胺为功能单体、乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂合成的MIP适用于对神经性毒剂降解产物吸附行为的考察.以神经性毒剂降解产物为模板分子合成的MIP对各降解产物均呈现较强的吸附,其吸附率与降解产物的结构呈一定相关性.结论:合成的系列MIP可作为通用的神经性毒剂降解产物的选择性吸附剂,用于对样品中神经性毒剂降解产物的萃取.
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高通量分离纯化技术在天然产物化学中的应用
天然产物具有极大的化学多样性和复杂性.加快天然产物的纯化速度对快速建立天然产物库及新药研发具有重要意义.采用各类色谱技术快速制备天然产物库以满足高通量筛选的需要,利用色谱与光谱联用技术,将分离纯化及结构信息联系在一起,终达到高效、快速地从天然产物资源中发现新型结构的活性天然产物的目的.本文对几种高通量技术做一综述.
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分子印记聚合物技术在固相萃取中的应用及影响因素
分子印记聚合物(MIP)技术是一种具有预定选择性的新型技术,固相萃取技术(SPE)是样品分离的一种有力手段.两种技术的结合成为纯化、富集和分析样品中的待测物质的有力手段.本文讨论了MIP和SPE的原理、应用、发展及影响因素.
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固相萃取-高效液相色谱法测定珍菊降压片中盐酸可乐定的含量
目的 采用固相萃取-高效液相色谱(SPE-HPLC)联用技术建立珍菊降压片中盐酸可乐定的含量测定方法.方法 以Cleanert SCX-SPE阳离子固相萃取小柱对样品进行前处理,色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18 (4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相为乙腈-0.05％磷酸溶液(10∶ 90),流速1.0 m]/min,柱温30℃,检测波长为220 nm.结果 珍菊降压片中盐酸可乐定含量测定的回归方程为y=2.9662x+0.0485(r=0.99999),在1.234 ～ 123.4 ng的测定范围内线性关系良好;低、中、高3个剂量的平均回收率为98.56％,RSD为0.68％,方法的重复性、中间精密度和准确度良好,符合含量测定对方法的要求.结论 该方法有效地消除了阴性干扰,专属性、灵敏度、重现性和准确度良好,为珍菊降压片中盐酸可乐定的检测提供了可靠的技术手段.
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固相萃取RP-HPLC法测定西达本胺血药浓度
目的建立测定西达本胺血药浓度的固相萃取RP-HPLC法.方法采用Kromasil KR100-5C18(4.6mm×250mm,5μm)分析柱:柱温为室温;以0.6%醋酸水溶液-乙腈(0～6min,81∶19和6～13min,76∶24,v/v)为流动相,梯度洗脱;流速为1.0ml/min;紫外检测波长为260nm;以MS-275为内标,血浆样品用Waters OASIS固相萃取(SPE)小柱提取纯化,乙腈洗脱,吹干,用流动相复溶后进样分析,进样量20μl.结果西达本胺血药浓度在0.04～10μg·ml-1范围内线性关系良好(r=0.998 1),低定量浓度为0.04μg·ml-1.低、中、高3个浓度的日内RSD为5.79%～10.16%,日间RSD为2.01%～14.81%;RE为-0.85%～4.39%;平均回收率为74%.结论此方法较简便、准确、精密度好,可以用做西达本胺的毒代动力学研究,并为临床前药代动力学研究打下了方法学基础.
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灯盏乙素在兔体内药代动力学
目的建立测定灯盏乙素血浆浓度的固相萃取-高效液相色谱(SPE-HPLC)法,并研究家兔iv灯盏花素的药代动力学.方法采用甲醇-水-磷酸为流动相,Nucleosil C18色谱柱为固定相,紫外检测波长335 nm,外标法定量.给家兔分别iv灯盏花素10,20和40 mg*kg-1,SPE-HPLC法检测血浆药物浓度.结果线性范围0.02～10.0 mg*L-1,低检测浓度0.02 mg*L-1,方法回收率96.15%～99.31%,日内、日间RSD值均小于10%.家兔iv灯盏花素时,灯盏乙素血浆浓度变化符合三房室模型.灯盏乙素低、中剂量组的主要药代动力学参数无显著性差异,而高剂量组与低、中剂量组比较差异显著.结论该法准确、灵敏、简便,适用于灯盏乙素血浆浓度的测定.灯盏花素经兔iv后的药代动力学符合三房室模型,剂量为10～20 mg*kg-1时,药物的体内变化为线性动力学过程,而40 mg*kg-1时未表现线性动力学特征.
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固相萃取-核磁共振氢谱法研究乙哌立松的代谢产物
目的探讨用固相萃取-核磁共振氢谱法研究乙哌立松体内药物代谢产物的可能性.方法用两次固相萃取除去大鼠尿液中的内源性物质,并将药物及其代谢产物分配到几个组分中,然后进行核磁共振氢谱检测.结果共检测到4个代谢产物,其中2个代谢产物未见文献报道.结论用固相萃取与核磁共振谱技术结合的方法,在不完全分离代谢产物的情况下,根据核磁共振谱提供的特征峰和化学位移变化可以解析乙哌立松代谢产物结构,也可依据发现的结构片段推测它在体内发生的生物转化过程.
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用固相萃取-核磁共振氢谱法研究大鼠尿液中R-(-)-布洛芬光活代谢产物
目的用固相萃取-核磁共振氢谱法研究大鼠尿液中R-(-)-布洛芬代谢产物及异构体的转化.方法将服用R-(-)-布洛芬后0～24 h大鼠尿液经固相萃取柱处理、核磁共振氢谱测定代谢产物的结构.结果尿液中含有4个主要代谢产物:2'-羟基-布洛芬及其葡糖苷酸结合物、1'-羧基-布洛芬葡糖苷酸和布洛芬葡糖苷酸.后两者为非对映异构体混合物.结论 R-(-)-布洛芬在大鼠体内发生了异构体转化,异丁基侧链中末端甲基的氧化代谢具有立体选择性.
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固相萃取结合HPLC-MS测定人血浆中奥曲肽的浓度及相对生物利用度
目的建立人血浆中奥曲肽浓度的HPLC-MS测定法,研究国产奥曲肽注射剂的人体生物利用度.方法血浆样品用HPL 1cc固相萃取小柱萃取,经Waters Xetrra C18MS分离后测定.18名健康志愿受试者采用随机交叉试验设计,分别im奥曲肽试验制剂和参比制剂200μg,不同时间点采血,比较两者的生物利用度.结果线性范围0.5～40μg·L-1,方法回收率为97.1%～100.5%.日内、日间RSD分别为1.1%～1.6%,2.9%～4.8%.单剂量im奥曲肽200μg后两种制剂的Cmax分别为(19±10)μg·L-1和(19±11)μg·L-1,Tmax分别为(0.50±0.15)h和(0.52±0.20)h;AUC0-7h分别为(50±25)h·μg·L-1和(50±25)h·μg·L-1,T1/2分别为(1.5±0.8)h和(1.5±0.8)h.二者之间均无显著性差异,以进口奥曲肽为参比制剂,国产奥曲肽注射液的相对生物利用度为101%±10%.结论该方法灵敏、准确度高,可用于奥曲肽体内过程研究.两注射剂为生物等效性制剂.
关键词： 奥曲肽 固相萃取 高效液相色谱质谱联用 生物利用度 -
中药材三七中农药多残留分析的样品前处理方法
建立了中药材三七中农药残留分析的两种样品前处理方法,在样品前处理方法Ⅰ中,样品经正己烷与二氯甲烷(体积比为6∶4)混合溶剂超声提取,提取液经Envi-carb/NH2 SPE小柱净化;在样品前处理方法Ⅱ中,采用基质固相分散萃取净化法对样品进行提取净化.两种方法所得到的洗脱液,于旋转蒸发仪上浓缩近干,二氯甲烷定容后于气相色谱-质谱(GC-MS)检测.采用GC-MS的选择离子监测(SIM)方式和外标法定量.在优化的样品前处理条件和GC-MS分析条件下,方法简便、快速,添加水平为0.01、0.5和2.0 mg·kg-1进行加标回收率实验时,采用方法Ⅰ时的回收率为81.90％～102.10％,相对标准偏差(RSD)为3.60％～7.10％；采用方法Ⅱ时的回收率为96.26％～104.20％,RSD为3.52％～7.94％;检出限在0.48～1.34 ng.g-1之间.两种前处理方法的各项技术指标满足农药残留检测要求,适合三七样品中痕量农药残留的分析.
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固相萃取-多波长超高效液相色谱法同时测定咳喘宁中5种生物碱类成分的含量
建立咳喘宁中罂粟壳和麻黄所含5种主要生物碱类成分的含量测定方法.样品经固相萃取后用超高效液相色谱法测定,色谱柱为Acquity UPLC BEH C<,18>(100mm×2.1mm ID,1.7μm),流动相为乙腈与0.1%磷酸溶液梯度洗脱,检测波长为210nm(吗啡、磷酸可待因、盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱)与251nm(盐酸罂粟碱),流速0.4 mL·min<'-1>,柱温30℃.结果显示,吗啡、磷酸可待因、盐酸罂粟碱、盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱分别在0.375 0～12.50、0.064 32～2.144、0.03006～1.002、1.126～37.52、0.287 8～9.592 μg·mL<'-1>内具有良好的线性关系(r=0.999 7),平均回收率分别为(n=9)99.26%、100.6%、95.29%、100.1%和97.48%.该方法快速、准确、重复性好,可为咳喘宁的质量控制提供快速准确的检测.
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UPLC-MS/MS法测定注射自微乳大鼠体内熊果酸血药浓度及其药动学研究
建立注射自微乳大鼠体内熊果酸血药浓度的超高效液相色谱-串联质谱测定方法,并研究其在大鼠体内的药动学.血清中加入内标并经C18固相小柱萃取后进行测定分析.采用Acquity UPLC BEH C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7 μm)分离;流动相:乙腈(A)-0.1％氨水(B),梯度洗脱;流速:0.2 mL.min-1,检测波长210 nm,柱温40℃;采用电喷雾离子源(ESI)以负离子方式检测;扫描方式为多反应离子监测方式(MRM)检测.熊果酸血药浓度在1.19～3 815.00 ng·mL-1内线性关系良好(r=0.999 0);不同浓度的提取回收率在87.42％～89.95％之间;日内、日间精密度均小于11％.建立的方法灵敏度高、简单快速,可用于大鼠血清中熊果酸的药动学研究.
