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6-姜酚治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎的免疫学机制
目的 研究6-姜酚治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎的可能性及有效性.方法 应用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(myelinoligodendrogliaglycoprotein,MOG)免疫C57BL/6小鼠,诱发慢性复发-缓解型EAE模型,观察6-姜酚对EAE小鼠模型的淋巴细胞浸润及TNF-α、IFN-γ、IL-1和IL-6等细胞因子分泌的作用,通过神经功能评分及病理分析等探索6-姜酚治疗EAE的有效性.结果 6-姜酚可抑制MOG诱导的免疫应答反应,通过改变TNF-α、IL-6等细胞因子的分泌,显著改善EAE小鼠神经功能评分,使发病时间延迟(P<0.05).结论 6-姜酚可有效缓解EAE,为6-姜酚用于临床多发性硬化的治疗提供实验依据.
关键词： 6-姜酚 实验性自身免疫性脑脊髓炎 炎症反应 -
黄芪糖蛋白对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的免疫调节作用
目的 探讨黄芪糖蛋白(HQGP)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠的治疗效果及可能机制.方法 用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(MOG35-55)诱导C57BL/6雌性小鼠建立EAE模型.分为黄芪糖蛋白治疗组和EAE对照组,隔天记录小鼠临床评分和体质量变化.HE染色和免疫荧光技术检测脊髓组织炎细胞浸润;MTT法检测细胞活性;Griess法检测一氧化氮(N0)释放;ELISA测定肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)分泌,γ干扰素(IFN-γ)释放;流式细胞术检测CD4+T细胞亚群变化.结果 HQGP处理可减轻EAE症状,抑制中枢神经系统炎细胞浸润.抑制脾淋巴单核细胞活性、NO和TNF-α、IL-6分泌,促进IFN-γ的分泌.增加CD4+ CD25+、CD4+ IL-10+、CD4+ IFN-γ+T细胞亚群的比例.结论 HQGP通过调节T细胞亚群比例,抑制炎症细胞因子释放,减轻EAE炎症反应.
关键词： 黄芪糖蛋白 实验性自身免疫性脑脊髓炎 脾单个核细胞 -
冬凌草甲素减轻实验性自身免疫性脑脊髓炎病变的免疫机制
目的 观察冬凌草甲素(ORI)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的预防作用,并探讨其可能机制.方法 EAE小鼠发病前给予ORI治疗,以PBS为阴性对照,观察各组小鼠发病情况.通过对EAE小鼠临床评分和脊髓病灶病理学检测判断ORI的预防效果;通过5,6-羧基荧光素二乙酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记检测CD4+T细胞增殖,流式细胞术检测白细胞介素17(IL-17)阳性细胞占CD4+T细胞的百分比、γ干扰素(IFN-γ)阳性细胞占CD4+T细胞的百分比,ELISA检测IL-1β水平.结果 ORI能显著改善EAE的临床评分、减少脊髓病变部位炎性细胞浸润;ORI能抑制EAE小鼠髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)反应性T细胞增殖;与PBS组相比,ORI组IFN-γ+ CD4+T细胞和IL-17+ CD4+T细胞减少;ORI抑制脾脏肿大、淋巴细胞增殖和IL-1β分泌.结论 ORI能减轻EAE严重程度,与减少IL-1β水平、抑制T细胞增殖及辅助T细胞分化有关.
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髓系来源的Gr-1+CD11b+抑制细胞参与实验性自身免疫性脑脊髓炎的免疫调节
目的 探讨Gr-1+ CD11b+髓系来源的抑制细胞(MDSC)在实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)中的数量变化及功能.方法 30只健康雌性C57BL/6小鼠随机分为EAE诱导组和对照组,借助MOG35-55多肽免疫诱导制备EAE小鼠模型,采用HE染色和Luxol快蓝染色评估发病动物的脊髓病理变化.流式细胞分析和免疫荧光染色技术确定2组小鼠脾脏和脊髓组织中Gr-1+CD11b+ MDSC的数量变化,体外细胞共培养检测来自EAE小鼠的Gr-1+ CD11b+ MDSC对CD4+T细胞及CD8+T细胞体外增殖能力的影响.结果 EAE造模成功率为80％(12/15),HE染色显示炎症细胞广泛浸润于EAE小鼠脊髓组织,Luxol快蓝染色在炎性浸润灶内发现多处脱髓鞘区域.EAE诱导组小鼠脊髓组织切片中可见大量Gr-1+CD11b+ MDSC,而对照组未发现任何阳性细胞.EAE小鼠的脾质量显著大于对照组[(146.5 ±12.4) mg vs (67.2±8.7) mg,P＜0.01],其中Gr-1+ CD11b+ MDSC比率明显增高(P＜0.01).与免疫荧光染色结果一致,流式细胞术分析在EAE小鼠脊髓中亦可见明显增多的Gr-1+ CD11b+ MDSC.体外细胞共培养实验显示,EAE小鼠脊髓中Gr-1+ CD11b+ MDSC可显著抑制CD4+T细胞和CD8+T细胞的分裂增殖.结论 EAE诱导了Gr-1+ CD11b+ MDSC在脾脏和脊髓中的扩增和聚集,后者参与了EAE疾病的免疫调节过程.
关键词： 实验性自身免疫性脑脊髓炎 髓系来源的抑制细胞 免疫调节 多发性硬化症 -
Th17细胞和调节性T细胞失衡参与实验性自身免疫性脑脊髓炎的发病
目的 探讨Th17细胞和调节性T细胞(Treg)失衡在实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)发病过程中的作用.方法 建立EAE小鼠模型,在EAE发病的不同时期运用流式细胞术检测小鼠脾脏Treg比例变化,用实时定量PCR(qRT-PCR)分别检测小鼠脾淋巴细胞Foxp3、视黄酸相关的孤儿受体γt(RoR-γt)以及脑组织IL-17 mRNA表达,ELISA检测小鼠外周血IL-6、转化生长因子β(T℃F-β)及IL-17A含量变化.结果 与佐剂对照组比较,CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg比例和Foxp3 mRNA的表达,在EAE发病初期及高峰期明显下降,而在慢性期明显升高(P＜0.05);RoR-γt mRNA表达量在发病初期与佐剂对照组比较显著增加(P＜0.05),而高峰期及慢性期与佐剂对照组比较则无显著差异(P＞0.05).EAE组小鼠外周血中TGF-β、IL-6浓度在发病初期和高峰期明显升高(P＜0.05);随病情发展,IL-6浓度逐渐降低,在发病慢性期与佐剂对照组比较无明显差异(P＞0.05),而TGF-β浓度在发病慢性期仍较高,与佐剂对照组比较明显升高(P＜0.05).EAE组小鼠外周血中IL-17A含量在EAE不同时期均有明显升高,且高峰期升高明显(P＜0.05).结论 Th17细胞/Treg失衡参与了EAE发病过程.
关键词： 实验性自身免疫性脑脊髓炎 Th17 调节性T细胞 -
地塞米松对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的抗氧化损伤作用
目的 探讨地塞米松(DXM)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠氧化应激水平及抗氧化酶系统的影响.方法 应用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(MOG35-55)诱导C57BL/6小鼠建立EAE模型.随机分为正常对照组、EAE组、DXM组,观察各组临床症状.于小鼠免疫后第13、20、30天,采用硫代巴比妥酸法检测脑组织MDA含量；应用免疫组织化学染色、免疫印迹法检测脑组织Nrf2、NADP(H)醌氧化还原酶l(NQO1)蛋白表达水平.结果 DXM组小鼠发病率、高神经功能评分均显著低于EAE组(P＜0.05).免疫后各时间点,EAE组小鼠脑组织MDA含量较正常对照组明显增高(P＜0.05)；DXM组MDA含量较EAE组明显降低(P＜0.05).免疫后各时间点,EAE组和DXM组小鼠脑组织Nrf2、NQO1表达水平均较正常对照组明显增加(P＜0.05)；DXM组Nrf2、NQO1表达水平较EAE组明显增加(P＜0.05),且Nrf2蛋白呈明显核内移现象.结论 地塞米松减轻EAE小鼠氧化损伤的作用部分通过上调Nrf2表达、增加抗氧化酶水平而实现.
关键词： 实验性自身免疫性脑脊髓炎 多发性硬化 地塞米松 核因子E2相关因子2 氧化应激 -
Fasudil对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠小胶质细胞和星形胶质细胞的作用
目的:确认法舒地尔(Fasudil)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的治疗效果,观察法舒地尔对小胶质细胞和星形胶质细胞的作用.方法:成年雌性C57BL/6小鼠用MOG35-55肽免疫制作慢性EAE模型,分别随机在免疫后第3天(Fasudil早期治疗组)和发病时给予Fasudil(Fasudil晚期治疗组),以同样方式给予生理盐水作为对照.观察临床症状和体质量变化;采用免疫荧光组织化学染色、Western blot 法检测脊髓小胶质细胞和星形胶质细胞iNOS和p-NF-κB/p65的表达,ELISA测定脊髓匀浆中IL-1β和TNF-α水平.结果:Fasudil推迟EAE起病,减轻EAE症状,抑制脊髓中小胶质细胞iNOS以及星形胶质细胞p-NF-κB/p65表达,并伴随炎性因子IL-1β和TNF-α释放降低.结论:Fasudil可抑制EAE小鼠小胶质细胞和星形胶质细胞炎性分子的释放.
关键词： Fasudil 实验性自身免疫性脑脊髓炎 小胶质细胞 星形胶质细胞 炎性反应 -
雷公藤内酯醇抑制小鼠EAE与其下调脾细胞INF-γ表达和上调IL-10的分泌有关
目的:探讨雷公藤内酯醇(triptolide,Tri)治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的有效性和可能机制.方法:雌性C57BL/6小鼠随机分为EAE组(28只)、 Tri治疗组(20只)和佐剂组(18只).EAE组和Tri治疗组用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55多肽(MOG35-55)免疫建立EAE模型,佐剂组以等量生理盐水代替.Tri治疗组于免疫后5 d开始按100 μg/(kg·d)腹腔注射Tri,EAE组和佐剂组等量的生理盐水作为对照.观察3组小鼠的发病情况以及病理变化,免疫后18～20 d无菌分离脾淋巴细胞,分2组,分别为对照组(只加200 μL的细胞悬液)、实验组(细胞悬液中加入MOG35-55每孔终浓度为10 mg/L),并将各组细胞悬液接种于96孔板中置于37℃、 50 mL/L CO2条件下孵育48 h.用MTT法检测MOG35-55刺激前后各组脾淋巴细胞的增殖情况,ELISA检测各组细胞培养上清液中细胞因子INF-γ、 IL-17、 IL-10和IL-4的水平.结果:Tri能够显著改善EAE的发病,减轻炎性浸润,并且可抑制MOG35-55诱导的脾淋巴细胞增殖反应(P<0.01)及INF-γ的分泌(P<0.05),促进IL-10的分泌(P<0.05),而对IL-17和IL-4的分泌没有显著性影响.结论:Tri可以有效抑制小鼠EAE,这种抑制可能与其对脾细胞中INF-γ表达的下调及对IL-10分泌的上调作用密切相关.
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经鼻黏膜给予MBP68-86和87-99协同免疫预防Lewis大鼠EAE的实验研究
目的:探讨鼻黏膜给予MBP68-86和87-99协同免疫预防Lewis大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的作用.方法:合成3条不同的碱性髓鞘蛋白(MBP)多肽(MBP68-86、87-99和非致脑炎性肽段110-128),在用豚鼠MBP(gp-MBP)加弗氏完全佐剂免疫Lewis大鼠前的11、10、9、8和7 d,经鼻黏膜分别给予MBP多肽,观察其对EAE的保护作用.结果:致脑炎性肽段MBP68-86和87-99都有保护作用,其中MBP68-86的保护作用更强; 而MBP110-128没有保护作用.鼻黏膜给予MBP68-86+87-99的混合物,在相对低的剂量可完全阻断gp-MBP引发的EAE.淋巴细胞增殖实验和IFN-γ ELISPOT检测显示,与鼻黏膜给予大鼠MBP110-128组相比,鼻黏膜给予大鼠MBP68-86+87-99可降低T细胞对于MBP的反应性,淋巴结单核细胞中表达IFN-γ和TNF-αmRNA的细胞数减少,而两组表达TGF-β及IL-4 mRNA的淋巴细胞数都低.结论:鼻黏膜给予致脑炎性MBP多肽能够导致抗原特异性T细胞耐受,对gp-MBP引发的EAE提供不完全的保护,MBP68-86和MBP87-99具有协同作用.鼻黏膜给予多肽引发的免疫耐受与非调节机制有关.
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白藜芦醇治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎的作用及其机制研究进展
多发性硬化(MS)是一种中枢神经系统脱髓鞘疾病,由于其病因和发病机制未完全明确,目前尚无有效根治方法.白藜芦醇(RE)是葡萄皮坚果中富含的一种多酚类化合物,具有抗真菌、抗癌、抗氧化、抗炎、心血管保护及神经保护等多重生物学功能.RE在治疗自身免疫性疾病中取得了显著疗效,但关于其在MS治疗中的效果目前尚无定论.考虑到RE在免疫调节、神经保护和血管舒张三方面的作用,本文对RE在治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎中的作用及机制的相关研究进行综述,并对影响其实验治疗效果的关键因素进行了总结.
关键词： 多发性硬化 实验性自身免疫性脑脊髓炎 白藜芦醇 综述 -
小胶质细胞的活化在实验性自身免疫性脑脊髓炎中的作用
多发性硬化( multiple sclerosis,MS)是一种常见的以中枢神经系统(central nervous system,CNS)炎性脱髓鞘病变为特征的自身免疫性疾病.MS的病因和发病机制非常复杂,由于病理取材的困难性,在体外建立了该病的动物模型-实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE).人MS及其动物模型EAE发病过程中大量炎性细胞入侵CNS并产生多种致炎因子,脑内微环境受到影响.诸多研究表明在EAE或MS发病中静息态小胶质细胞在浸润的T细胞及释放的细胞因子刺激下发生活化,但它们在EAE中的作用目前尚无统一意见.兹将小胶质细胞在EAE中的活化机制及其在炎症/免疫反应中的作用作一综述.
关键词： 小胶质细胞 实验性自身免疫性脑脊髓炎 多发性硬化症 -
盐酸法舒地尔对EAE小鼠脑中ROCK-II表达的影响
目的:探讨盐酸法舒地尔(Fasudil hydrochloride)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠脑中Rho激酶-Ⅱ(ROCK-Ⅱ)表达的影响.方法:雌性C57BL/6小鼠,分为EAE组、治疗组和佐剂组.用MOG35-55多肽诱导EAE模型.治疗组于d6p.i.开始腹腔注射盐酸法舒地尔液,连续14天.观察和比较各组临床表现,于d18-20p.i.取脊髓和脑,行HE染色、Western blot法检测各组ROCK-II的表达.结果:盐酸法舒地尔能够显著改善EAE的症状,减轻中枢神经系统(CNS)炎性浸润等病理变化.各组小鼠脑中均有ROCK-Ⅱ的表达,EAE组ROCK-Ⅱ表达量较佐剂组要高(P<0.05),治疗组与EAE组相比显著减低(P<0.05).结论:盐酸法舒地尔可以有效抑制小鼠EAE,这种抑制可能与其抑制ROCK-II的活化有关.
关键词： 实验性自身免疫性脑脊髓炎 多发性硬化 盐酸法舒地尔 ROCK-II -
Rho/ROCK信号途径与EAE的相关性研究
目的:研究盐酸法舒地尔(Fasudil
关键词： 盐酸法舒地尔 ROCK-II 实验性自身免疫性脑脊髓炎 多发性硬化 -
地塞米松对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠髓鞘保护作用的研究
目的:分析地塞米松对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠炎症反应、髓鞘脱失及髓鞘再生的影响,探讨地塞米松治疗多发性硬化的新作用.方法:应用MOG35-55免疫C57BL/6小鼠建立EAE模型.小鼠随机分为正常对照组、EAE组及地塞米松组,观察各组临床症状；采用HE染色、LFB染色、透射电镜扫描及免疫组化染色方法,检测免疫后第13、20、30 d各组小鼠脊髓组织炎症反应、髓鞘脱失及髓鞘再生情况.结果:地塞米松显著降低EAE小鼠发病率、延缓起病时间、减轻疾病严重程度.各个时间点地塞米松组脊髓组织炎性细胞浸润、髓鞘脱失及轴索变性程度较EAE组明显减轻.免疫后第20、30 d,EAE组Olig2阳性细胞数较正常对照组明显增加；免疫后各时间点,地塞米松组Olig2阳性细胞数较正常对照组均明显增加,第13、20 d较EAE组明显增加.结论:地塞米松可增加脊髓组织Olig2表达、促进髓鞘再生,这可能为地塞米松治疗EAE及多发性硬化的效应途径.
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白芍总苷对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠的疗效观察及组织病理的影响
目的 观察白芍总苷(TGP)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的疗效及中枢神经系统组织病理的影响.方法 建立大鼠EAE模型,将大鼠随机分为6组.TGPⅠ组及TGPⅡ组从免疫第1d起,灌服TGP悬浊液0.2g/Kg.d.其余组予生理盐水.对照Ⅰ组、EAEⅠ组、TGPⅠ组第28d停药,观察病情到第120d.对照Ⅱ组、EAEⅡ组和TGPⅡ组第17d处死,观察组织病理改变.结果 TGP Ⅰ组与EAEⅠ组比较,临床症状减轻.TGPⅡ组与EAEⅡ组相比,其髓鞘及轴索损伤减少.结论 TGP抑制EAE中枢神经系统炎症浸润细胞的浸润,减少脱髓鞘及轴索损伤,减轻EAE的病情.
关键词： 白芍总苷 实验性自身免疫性脑脊髓炎 炎症浸润细胞 -
盐酸奥芬米洛对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴功能的影响
目的 观察盐酸奥芬米洛对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型大鼠的下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA轴)功能的影响.方法 以1.0 mg/kg盐酸奥芬米洛治疗EAE Lewis大鼠和肾上腺切除的EAEWistar大鼠,检测各组EAE Lewis大鼠和肾上腺切除的EAE Wistar大鼠的皮质醇水平,同时观察肾上腺切除的EAE Wistar大鼠的神经症状和Th1,Th2分泌型细胞因子水平.结果 1.0 mg/kg盐酸奥芬米洛可显著提高肾上腺切除的EAE Wistar大鼠的血清皮质醇水平(P＜0.01),可显著降低Wistar大鼠血清γ-干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-4(IL-4)水平和IFN-γ/IL-4比值(P＜0.01).结论 盐酸奥芬米洛抑制EAE发生的作用途径可能是通过增强HPA轴的功能,提高大鼠皮质醇水平来抑制Th1分泌型细胞因子,从而调节Th1/Th2的失衡.
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Ad-shRNA-NgR转染EAE大鼠脑组织安全性评估
目的 观察NgR特异性RNA干扰的重组腺病毒(Ad-shRNA-NgR)转染实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)脑组织后,EAE大鼠的存活情况,为EAE干预实验提供依据.方法 80只大鼠建立EAE大鼠模型后,将其随机分成高、中、低、对照组,每组20只.实验组分别用滴度为1×1011 pfu/mL、1×1010 pfu/mL、1×109 pfu/mL的Ad-shRNA-NgR注入EAE大鼠侧脑室.观察注射后第3天、第7天EAE大鼠的存活情况.结果 Ad-shRNA-NgR转染EAE脑组织后,高滴度组在第3天和第7天时EAE大鼠的存活率显著低于中、低滴度组,差异具有统计学意义(P<0.05).中、低滴度组和对照组EAE大鼠的存活率无显著性差异(P>0.05).结论 Ad-shRNA-NgR转染EAE大鼠实验时,滴度从1×1010 pfu/mL到1×109 pfu/mL范围是安全的.
关键词： 腺病毒 实验性自身免疫性脑脊髓炎 转染 安全性 动物模型 -
实验性自身免疫性脑脊髓炎豚鼠模型的建立
目的:探索建立实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)豚鼠动物模型,为多发性硬化(MS)实验性治疗研究提供实验依据.方法:采用注射完全福(氏)佐剂(CFA)-大鼠全脊髓匀浆,并辅以注射百日咳疫苗(BPV),诱导豚鼠EAE模型,观察其临床发病情况以及其病理改变.结果:豚鼠出现MS症状,发病率高.脑、脊髓组织可见血管周围炎细胞呈袖套样浸润并有白质脱髓鞘.结论:采用全福(氏)佐剂(CFA)-大鼠全脊髓匀浆并辅以注射BPV诱导的EAE模型简单、经济、可靠,并具有发病率高的特点,其病理特点是血管周围炎性浸润,白质脱髓鞘.
关键词： 实验性自身免疫性脑脊髓炎 豚鼠 病理
