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左归丸和右归丸对自身免疫性脑脊髓炎大鼠中枢神经系统淋巴细胞亚群免疫组化表达的影响
目的 通过观察左归丸与右归丸对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型大鼠脑、脊髓组织淋巴细胞亚群免疫组化表达的影响,探讨滋阴补肾法与温阳补肾法治疗EAE作用机制.方法 应用髓鞘碱性蛋白与完全福氏佐剂,按体积比1∶1制成抗原并于Lewis大鼠双后足垫下注射,建立EAE模型.120只Lewis大鼠随机分为正常组、模型组、激素组、左归丸组及右归丸组,每组24只,正常组和模型组给予生理盐水灌胃,3 mL/(只·d);激素组免疫后给予生理盐水灌胃,3 mL/(只·d),发病后改为醋酸泼尼松混悬液灌胃,5 mg/(kg·d);左归丸组免疫后给予左归丸混悬液,2 g/(kg·d);右归丸组免疫后给予右归丸混悬液,3 g/(kg·d).直至处死.分别于急性期(免疫后15 d)和缓解期(免疫后27 d)随机选取各组大鼠,取脑和脊髓组织切片进行CD4+、CD8+、CD3+、CD19+免疫组化染色.结果 造模后第15日及第27日,模型组脑和脊髓组织中CD4+免疫组化表达均较正常组升高(P＜0.01),CD8+表达降低(P＜0.05),CD4+/CD8+比值升高(P＜0.01);同模型组比较,左归丸组、右归丸组、激素组CD4+免疫组化表达均降低(P＜0.01),且在造模后第27 日,左归丸组和右归丸组脊髓组织CD4+表达较激素组显著降低(P＜0.01);造模后第15日,右归丸组和激素组CD8+表达较模型组升高(P＜0.01),造模后第27日,左归丸组和激素组CD8+表达较模型组升高(P＜0.01);不同时点激素组、左归丸组及右归丸组CD4+/CD8+比值均显著低于模型组(P＜0.05);造模后第15日及第27日,模型组中枢神经系统CD19+免疫组化表达均较正常组升高(P＜0.01),急性期左归丸组、右归丸组、激素组脊髓组织CD19+表达较模型组降低(P＜0.01),缓解期则见左归丸组和右归丸组CD19+表达减少(P＜0.01).结论 EAE大鼠CD4+/CD8+比值升高,这在EAE发病中发挥重要作用.滋阴补肾法和温阳补肾法可下调CD4+表达,下调CD4+/CD8+比值来治疗EAE.
关键词： 实验性自身免疫性脑脊髓炎 左归丸 右归丸 多发性硬化 -
甲基维生素B12对大鼠自身免疫性脑脊髓炎的治疗及溶血磷脂酸水平的影响
研究实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)及甲基维生素B12治疗中溶血磷脂酸(LPA)水平的变化.通过注射豚鼠脊髓匀浆和完全弗氏佐剂诱导大鼠发生EAE.用有机溶剂提取、并进一步分离,终用定磷方法测定甲基维生素B12治疗的EAE大鼠血浆及脑溶血磷脂水平,未经治疗的EAE大鼠为对照组.发现甲基维生素B12治疗组EAE大鼠与未经治疗EAE大鼠比较,恢复期脑与血浆LPA水平增高,分别为 30.23±11.59μmol/L血浆、245.45±144.89 nmol/g 脑和9.27±3.25μmol/L血浆、56.33±5.66 nmol/g 脑(P＜0.05); 急性期血浆的LPA增高,分别为10.05±1.70μmol/L血浆和1.87±0.59 μmol/L血浆(P＜0.05).溶血磷脂酸可能参与自身免疫性脑脊髓炎髓鞘的恢复过程.
关键词： 溶血磷脂酸 实验性自身免疫性脑脊髓炎 甲基维生素B12 -
骨髓间充质干细胞异体移植对小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎的治疗作用
目的 探讨大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)异体移植对小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的治疗作用.方法 全骨髓贴壁培养法获得大鼠BMSCs,流式细胞术检测细胞免疫表型,并诱导成骨方向分化.取雌性C57BL/6小鼠,随机分为3组:正常对照组、PBS组和大鼠BMSCs组,用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)35～55联合完全弗氏佐剂诱导建立EAE模型.小鼠免疫后38d和48d腹腔注射PBS或大鼠BMSCs进行治疗,神经功能评分观察各组小鼠神经功能变化.二次治疗12d后取各组小鼠脊髓、脾脏和外周血.HE染色及Luxol fast blue染色观察脊髓炎性细胞浸润及髓鞘脱失情况;脾脏制成单细胞悬液,细胞CFSE标记后10mg/L刀豆球蛋白(ConA)和MOG3s ～55刺激培养3d,观察脾细胞增殖情况.ELISA检测大鼠BMSCs移植后外周血细胞因子干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素17(IL-17)含量.结果 流式细胞术显示,大鼠BMSCs第3代(P3)细胞表达抗原CD29、CD90、CD106,不表达CD45.体外诱导其能向成骨分化.小鼠发病后,大鼠BMSCs组小鼠神经功能缺损症状较PBS组减轻,评分降低.HE染色和Luxol fast blue染色结果显示,大鼠BMSCs组脊髓炎细胞浸润和脱髓鞘比同时间点PBS组减轻(P＜0.05).ConA和MOG35-55刺激培养后,PBS组和大鼠BMSCs组脾细胞增殖增加,而大鼠BMSCs组又较PBS组降低.与PBS组相比,大鼠BMSCs组血浆细胞因子IFN-γ、IL-17含量降低(P＜0.05).结论 全骨髓贴壁培养法能有效分离纯化BMSCs,大鼠BMSCs异体移植对小鼠EAE模型有治疗作用.
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自身免疫性脑脊髓炎大鼠脑血管内皮细胞 VCAM-1和MHCⅡ类分子表达
目的探讨实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠脑血管内皮细胞表面分子的改变.方法用免疫组织化学方法检测EAE大鼠脑血管内皮细胞上血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)和主要组织相容性复合体(MHC)Ⅱ类分子的表达.用MTT(四甲基偶氮唑盐)法检测不同发病级别大鼠血清TNF和IFN-γ的水平.结果EAE大鼠脑血管内皮细胞较对照有诱导表达的VCAM-1和MHCⅡ类分子,血清中存在TNF和IFN-γ活性. 结论中枢神经系统炎症状态下,脑血管内皮细胞表面分子发生改变,提示它们在EAE发病中可能起重要作用.
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采用流式细胞术分选EAE模型小鼠小胶质细胞
目的：获取实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）模型小鼠小胶质细胞，并检测其特性。方法取8周龄，雌性 C57BL/6小鼠行 EAE造模，待至发病高峰期（第15天）时以 PBS灌注后取小鼠后脑和脊髓，切碎后加胰酶消化，消化完成后通过100μm滤网滤过，而后采用 Percoll密度梯度离心法分离获取单个核细胞，进一步利用 CD11b与 CD45抗体染色，通过流式细胞仪分选 CD11b+CD45high和 CD11b+CD45low细胞，即分别得到相对活化和静息的小胶质细胞，后对流式分选获取的小胶质细胞行 qPCR检测。结果通过形态比较，获得了高纯度的小胶质细胞。FIZZ-1基因行qPCR检测，结果显示在 EAE急性期 M2型小胶质细胞明显增多，符合文献报道。结论该方法能从 EAE小鼠体内分离获取高纯度的小胶质细胞，可用于相关目的基因后续检测。
关键词： 小胶质细胞 流式细胞术 实验性自身免疫性脑脊髓炎 -
髓鞘碱性蛋白(MBP)特异的Wistar大鼠T细胞系的建立
目的建立特异的大鼠T细胞系,为T细胞疫苗的研制打下基础. 方法采用足垫皮内注射豚鼠全脊髓匀浆(GPSCH)-福氏完全佐剂(CFA)混合乳剂和百日咳疫苗,诱导Wistar大鼠EAE模型.腹股沟淋巴结细胞经豚鼠髓鞘碱性蛋白(GPMBP)反复刺激,3H-TdR掺入法筛选针对GPMBP特异增殖的T细胞.FACS检测T细胞表型.RT-PCR测定T细胞的细胞因子格局. 结果一次性足垫皮内注射GPSCH-CFA混合乳剂可诱导Wistar大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型,并证实了同时注射百日咳疫苗能提高发病率和发病程度.EAE大鼠脑、脊髓组织HE染色见大量淋巴细胞浸润,在血管周围形成淋巴鞘,但未见脱髓鞘改变.T细胞对GPMBP呈特异性增殖,为CD4+表型.RT-PCR结果显示T细胞IL-2和IFN-γ mRNA表达水平较高,TNF-α亦低水平表达. 结论 Wistar大鼠可用于制备EAE动物模型.GPMBP特异性T细胞系为CD4+表型,呈TH1类细胞因子格局.
关键词： 实验性自身免疫性脑脊髓炎 豚鼠髓鞘碱性蛋白 T细胞系 -
胸腺五肽治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎的实验研究
目的 应用胸腺五肽(thymopentin,TP-5)干预实验性自身免疫性脑脊髓炎(experiment autoimmue encephalomyelitis,EAE)大鼠,探讨该药物对EAE的治疗作用及其机制.方法 以豚鼠全脊髓匀浆(guinea pig spinal cord homogenate,GPSCH)与完全弗氏佐剂(CFA)为抗原免疫Wistar大鼠建立EAE模型.Wistar大鼠随机分为正常对照组、EAE组、地塞米松(dexamethasone,DXM)组、TP-5小剂量组、TP-5大剂量组.采用双抗体夹心ELISA法检测Wistar大鼠免疫后7、14、21 d不同时间点血清中IL-12、IL-10的含量.结果 与EAE组和TP-5大剂量组比较,TP-5小剂量组和DXM组大鼠的发病率和临床评分显著性降低(P＜0.01);DXM组大鼠的发病率和临床评分低于TP-5小剂量组(P＜0.01).各个时间点EAE组、DXM组、TP-5小剂量组、TP-5大剂量组IL-12含量均较正常对照组明显升高(P＜0.01),免疫后14、21 d DXM组和TP-5小剂量组IL-12水平比EAE组低(P＜0.01);免疫后14、21 dDXM组、TP-5小剂量组IL-10水平与其余3组比较明显升高(P＜0.01).结论 TP-5对EAE有保护作用,其作用机制可能与上调IL-10水平以及下调IL-12水平有关,通过双向调节作用逆转TH1/TH2失衡.
关键词： 实验性自身免疫性脑脊髓炎 胸腺五肽 IL-12 IL-10 -
可溶性MOG35-55对实验性自身免疫性脑脊髓炎的作用分析
目的 探讨可溶性髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG35-55)预防和治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的机制.方法 通过临床评分、免疫组化、细胞计数等方法,评价腹腔注射可溶性MOG35-55的治疗效果,卵清白蛋白(OVA)作为对照;运用过继转移试验、Transwell试验、流式细胞术,分析体内、体外MOG35-55、OVA对MOG-T细胞迁移、脾脏抗原提呈细胞(APCs)活化的作用.结果MOG35-55抑制中枢神经系统(CNS)淋巴细胞浸润,预防EAE;MOG35-55抑制MOG-T细胞向CNS迁移,抑制外周淋巴器官萎缩;MOG35-55诱导脾脏APCs活化,活化APCs可招募MOG-T细胞、影响MOG-T细胞迁移.结论 MOG35-55通过诱导脾脏APCs活化、APC-T相互作用,抑制MOG-T细胞向CNS迁移,预防EAE.
关键词： 实验性自身免疫性脑脊髓炎 免疫耐受 抗原提呈细胞 细胞迁移 -
Fasudil 对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠模型巨噬细胞的免疫调节作用研究
目的：探讨Fasudil（法舒地尔）介导的细胞治疗对实验性自身免疫性脑脊髓炎（ exper-imental autoimmune encephalomyelitis， EAE）巨噬细胞的免疫调节作用。方法雌性C57BL／6小鼠，采用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55（MOG35-55）诱导建立主动免疫EAE模型，免疫后第9天制备脾脏单个核细胞（ MNCs），在添加／或无Fasudil条件下体外培养。72 h后收集上述细胞，应用流式细胞术检测巨噬细胞亚群的变化，Griess法检测NO含量，ELISA法检测Arg-1水平；并以5×107个细胞／只小鼠腹腔注射诱导建立被动转移EAE模型，分为PBS-MNCs组和Fasudil-MNCs组，观察各组小鼠临床评分和体重变化。结果主动免疫第9天EAE小鼠脾脏MNCs可诱导被动转移EAE模型的建立，而体外Fasudil处理72 h的MNCs可影响EAE的发生、发展。体外实验显示，Fasudil可部分逆转M1表型至M2表型，即M1型标志CD16／32、iNOS、IL-12降低，而M2型标志CD206、IL-10、CD23升高。 Fasudil还可抑制NO产生，促进Arg-1分泌。结论 Fasudil通过转化炎性M1型巨噬细胞为抗炎的M2型巨噬细胞影响EAE的发生、发展。
关键词： Fasudil 实验性自身免疫性脑脊髓炎 巨噬细胞 抗炎作用 -
C57BL/6小鼠EAE模型的建立及Foxp3、CD4~+CD25~+调节性T细胞检测
目的 以髓鞘少突胶质细胞糖蛋白细胞外免疫球蛋白样结构域(MOG~(Igd))为抗原免疫C57BL/6小鼠,建立实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型,并检测CD4~+CD25~+T细胞、Foxp3 mRNA等指标的表达.方法 采用分子克隆技术诱导表达MOG~(Igd)-TrxA融合蛋白,纯化后以此融合蛋白为抗原于侧腹壁皮下多点注射免疫C57BL/6小鼠作为实验组(MOG组);同时以硫氧还蛋白(TrxA)、豚鼠脊髓匀浆(GPSCH)、生理盐水免疫小鼠分别作为阴性、阳性及正常对照组.双盲法连续早晚观察30 d,通过评估动物的临床神经功能、组织病理(HE染色和Kluver-Barrera法髓鞘染色、免疫组化法)情况,评价模型的质量.流式细胞仪(FACS)检测小鼠脾脏中CD4~+CD25~+调节性T细胞;real-time PCR检测Foxp3 mRNA的相对表达水平,并分析两者相关性.结果 MOG组及GPSCH组小鼠均呈慢性非缓解型病程,两组在发病时间、达峰时间、临床神经功能评分等方面差异均无统计学意义(P>0.05).TrxA组及正常对照组无一动物发病.模型组(包括MOG组和GPSCH组)动物HE染色可见血管周围炎性细胞浸润,胶质结节形成,髓鞘染色可见斑片状髓鞘脱失,大脑、小脑、脑干和脊髓均有不同程度受累.免疫组化定性和半定量分析显示MOG组和GPSCH组病灶周围炎症浸润处AQP-4表达与TrxA组相比明显增高(P<0.05);MOG组CD4~+CD25~+T细胞占CD4~+T细胞比例为(4.71±1.61)%,GPSCH组为(1.44±0.65)%,均明显低于TrxA组和正常对照组(P<0.01),且MOG组和GPSCH组之间的差异亦具有统计学意义(P<0.01).MOG组标准化Foxp3 mRNA的表达量为2.26±1.97,GPSCH组为1.44±1.20,均低于TrxA组的8.58±3.34(P<0.01);但MOG组和GPSCH组间的差异无统计学意义(P>0.05).相关性分析显示,模型组小鼠CD4~+ CD25~+调节性T细胞与Foxp3 mRNA表达水平间存在相关性(r=0.849,P<0.05).结论 用MOG~(Igd)免疫C57BL/6小鼠诱导EAE模型稳定,发病率高,为今后进一步研究多发性硬化的免疫发病机制和采取有效治疗措施打下基础.
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雷公藤多甙对实验性自身免疫性脑脊髓炎的治疗及炎症浸润细胞凋亡的影响
目的 观察雷公藤多甙(TWP)能否抑制实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型的发病、病变程度以及对中枢神经系统(CNS)炎症浸润细胞凋亡的影响,为临床应用提供实验依据.方法 将雌性豚鼠随机分为对照组、EAE组和喂服TWP组,EAE组和TWP组豚鼠采用颈背部皮下多点注射完全弗氏佐剂-豚鼠全脊髓匀浆(CFA-GPSCH),并辅以注射百日咳疫苗(BPV),诱导豚鼠建立EAE模型.观察各组EAE的发病情况,在光学显微镜下计数中枢神经系统炎症细胞浸润程度,并用3'末端脱氧核糖核苷酸转移酶(TdT)介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)检测其凋亡情况.结果 TWP治疗组豚鼠发病数较EAE对照组减少,起病时间相对延迟,临床表现明显减轻,炎性细胞浸润明显减少.与EAE对照组相比,TWP治疗组的中枢神经系统炎症浸润细胞的凋亡率明显增高.结论 TWP可有效地抑制EAE的发病,其机制可能与其抑制中枢神经系统炎症细胞的浸润及增加炎症细胞的凋亡有关,提示该药有临床应用前景.
关键词： 实验性自身免疫性脑脊髓炎 豚鼠 雷公藤多甙 炎症浸润细胞 凋亡 -
Th22细胞在多发性硬化免疫发病机制中作用的大鼠实验研究
目的 探讨新型Th22细胞在多发性硬化(MS)免疫发病机制中的作用.方法 Lewis大鼠后足跖皮下注射髓鞘碱性蛋白(MBP)制备实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)动物模型,应用BD FACSAria高速流式细胞分选仪无菌分选其脾脏Th22细胞,分析EAE病程不同阶段脾脏Th22细胞分化情况;应用ELISA试剂盒检测EAE病程不同阶段外周血单个核细胞和脾脏单个核细胞中IL-22的分泌水平.结果 EAE发病高峰期Th22细胞的比率(15.23 ± 4.74%)显著高于对照组(1.87 ± 0.89%)、无症状诱导期(7.51 ± 2.66%)、缓解期(8.47 ± 3.39%)和缓解后期(3.56 ± 2.30%),差异均有显著性(P <0.05),表明大鼠致敏后Th22细胞分化逐渐增加,至病程高峰期分化亦达高峰,进入缓解期后则逐渐下降.大鼠外周血单个核细胞及脾脏单个核细胞中IL-22的分泌水平在EAE病程不同阶段呈规律性变化,发病高峰期IL-22分泌水平显著高于其他各期(P <0.05),而对照组及缓解后期则几乎检测不到IL-22分泌.结论 Th22 细胞及其效应因子IL－22 介导EAE发病,揭示了MS发病机制及治疗的新靶点.
关键词： Lewis大鼠 多发性硬化 实验性自身免疫性脑脊髓炎 Th22细胞 -
磷酸化p38MAPK在实验性自身免疫性脑脊髓炎轴索损伤中的作用
目的 观察p38MAPK在实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE )中的活化及其与早期神经元轴索损伤的关系和变化规律,以及p38MAPK阻滞剂SB203580对轴索损伤的调节作用.方法 使用SJL雌性小鼠建立EAE模型,分别对模型组、SB203580组和对照组各时间点取脑和脊髓,行HE和Luxol Fast Blue(LFB)染色,并行磷酸化p38MAPK抗体染色;对相邻脑组织切片同时行淀粉样前体蛋白(APP)免疫组化检测.用图像分析系统对脑白质病灶内神经元胞浆阳性信号数目、覆盖面积及阳性信号平均密度值进行测量.结果 PLP肽段免疫的小鼠发病具有缓解-复发的特点,局部白质区域出现脱髓鞘改变.与模型组比较,SB203580组改变较轻,符合其行为学观测结果,且小鼠的体重增加明显高于模型组( P<0.01).除对照组,其余各组在各时间点均有APP蛋白表达.与模型组相比,SB203580组干预后APP蛋白表达较轻,阳性细胞数目与强度均明显下降( P<0.01);磷酸化p38MAPK在EAE小鼠免疫后第7天就有明显表达.与模型组相比,SB203580组p38MAPK表达较轻,阳性数目与强度均明显下降( P<0.01).结论 p38MAPK阻滞剂SB203580不仅能够抑制EAE中p38MAPK活化,而且可以有效下调EAE轴索损伤的标志性指标APP的表达;p38MAPK可能参与了EAE的轴索损伤过程.
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EAE大鼠血清中TNF-α、IFN-γ的检测及意义
目的 探讨干扰素-γ(IFN-γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)的作用.方法 Wistar大鼠通过局部注射豚鼠全脊髓匀浆和完全弗氏佐剂制成的抗原乳剂诱导EAE模型,应用双抗夹心ELISA、放射免疫分析法分别检测实验大鼠血清IFN-γ和TNF-α的表达,并观察两种细胞因子的改变与EAE症状之间的关系.结果 诱导EAE后,伴随着大鼠EAE症状的出现和进行性加重,其血清中IFN-γ和TNF-α表达较正常组分别升高了173.86％和166％.结论 IFN-γ和TNF-α在EAE的发生和发展密切相关,这两种细胞因子在EAE发病机制中的重要作用为探索新的有效治疗多发性硬化症(multiple sclerosis,MS)的手段提供了重要理论依据.
关键词： 实验性自身免疫性脑脊髓炎 肿瘤坏死因子-α 干扰素-γ -
临床型MR观察多发性硬化模型大鼠中枢神经系统
目的 探索临床型MR扫描仪配备临床应用型线圈进行多发性硬化(MS)模型大鼠脑和脊髓病灶成像研究的可行性.方法 选用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白多肽35～55致敏Lewis大鼠制备MS模型动物10只.以1.5T MR扫描仪配用小肢端表面柔线圈,分别对大鼠脑和脊髓行T1WI和T2WI扫描,层厚1～2 mm;以3.0T MR扫描仪配用正交腕关节线圈,分别对大鼠脑和脊髓行T1WI、T2WI和Gd-DTPA增强T1WI三维容积扫描,体素0.06～0.08 mm~3.利用工作站专业软件获得脑和脊髓多方向重组图像. 结果 3.0T MR T2WI和T1WI显示MS大鼠脑内病灶具有较高的空间分辨力和对比度,脊髓病灶的对比度较弱.1.5T MR设备显示大鼠MS病灶的空间分辨力较低.MS模型大鼠的中枢神经系统病灶分布在脑和脊髓,斑片状,呈T2高信号、T1低信号,Gd-DTPA增强后部分病灶强化.结论 临床型3.0T MR设备能清晰显示MS模型大鼠脑以及脊髓内部的病灶,为小动物中枢神经系统疾病的实验研究提供了一种能广泛应用的无创性手段.
关键词： 磁共振成像 大鼠 多发性硬化 实验性自身免疫性脑脊髓炎 -
急性脑梗死患者血浆单核细胞趋化蛋白-1和组织因子的变化
单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)是趋化和激活单核细胞和某些T细胞亚群,促进多种细胞因子和炎症介质分泌,参与脑缺血再灌注损伤、实验性自身免疫性脑脊髓炎等疾病的病理生理学过程 [1].组织因子(TF)启动外源性凝血途径,是凝血和止血的主要调节因子.为探讨这两个因子与脑梗死的关系,我们检测了56例急性脑梗死患者血浆MCP-1和TF的水平变化,并就其与急性脑梗死患者临床特征的关系进行了初步研究.
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活菌卡介苗对支气管哮喘小鼠白细胞介素-17和辅助性T淋巴细胞17的影响
支气管哮喘(以下简称哮喘)是严重威胁人类健康的一种慢性疾病,其发病机制复杂,迄今尚未完全明确.随着研究的深入,人们发现单纯用Th1/Th2失衡理论不足以解释哮喘发病的免疫学机制,尤其是发现调节性T细胞和Th17与自身免疫病和哮喘等慢性炎症的发生密切相关.Lee等[1]发现,在实验性自身免疫性脑脊髓炎等动物模型中,活菌卡介苗接种能抑制Th17所致的炎症反应.也有研究发现,IL-17与气道高反应性密切相关,且卡介苗接种组和结核菌培养上清液接种组小鼠血清IL-17水平远远低于正常组和哮喘组[2].本研究通过观察卡介苗干预对哮喘小鼠IL-17分泌及Th17的影响,探讨其可能的作用机制,从而为哮喘防治提供一些参考.
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Th17细胞在HIV合并结核分枝杆菌感染免疫中的作用研究进展
Th17细胞是新发现的CD4+ T淋巴细胞亚群,因能够特异性地产生白细胞介素17(Interleukin 17,IL-17),遂得名Th17.其发现源于对类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,CIA)和实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)这两种自身免疫性疾病的研究.将CIA、EAE小鼠IFN-γ或IL-12基因敲除后,小鼠自身免疫性炎症并未好转反而加重.进一步研究发现,EAE模型小鼠的中枢神经系统存在可产生IL-17的CD4+ T细胞的浸润,将此类细胞转移到健康小鼠体内可导致严重的EAE,进行抗IL-17治疗后可在一定程度上缓解小鼠的自身免疫性炎性反应[1].除IL-17外,Th17细胞还可分泌IL-21和IL-22,通过这些促炎性因子而在抗胞外菌、真菌等感染中发挥作用.通过上述促炎性因子,Th17还可促使IL-6、粒-巨噬细胞集落刺激因子、炎症趋化因子(CXCL1、CXCL2、CXCL5和CXCL8)以及金属蛋白酶类的分泌.近年研究发现,Th17在HIV和结核分枝杆菌的感染免疫中都发挥重要作用,而HIV合并结核分枝杆菌感染是艾滋病防治工作中面临的主要挑战之一,现将Th17在HIV和结核分枝杆菌感染免疫中的作用综述如下.
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黄芩苷预处理对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠的神经保护作用及机制
目的 探讨黄芩苷(BAC)预处理对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠神经元凋亡及核因子(NF)-κB P65蛋白和mRNA表达的影响,探讨神经元凋亡的调节机制.方法 健康Wistar大鼠随机分为对照组、EAE组、地塞米松(DXM)组、BAC组.各组于EAE模型制作当日分别给予预处理,每日1次,共7 d.观察各组发病率,记录神经功能评分.分别于第7、14、21天处死大鼠,留取脊髓行NF-κB P65免疫组化染色,TUNEL法检测神经元凋亡,提取总RNA检测NF-κB P65 mRNA的表达.结果 (1)对照组大鼠无发病,DXM组和BAC组发病率分别为56.25%、50.00%,较EAE组(87.50%)明显降低,差异有非常显著性(P＜0.01).DXM组、BAC组神经功能评分分别为1.56±0.34、1.46±0.20,与EAE组(2.78±0.31)相比明显降低,差异有非常显著性(P＜0.01).(2)对照组各时间点凋亡神经元少见,EAE组3个时间点神经元凋亡指数(AI)分别为23.25±1.82、63.00±4.66和31.50±3.63,DXM组为16.75±1.28、33.88±1.46及22.00±2.45,BAC组为15.25±1.67、34.25±3.28及21.88±3.09,差异有非常显著性(P＜0.01).(3)对照组偶见NF-κB P65阳性神经元.在3个时间点,EAE组、DXM组和BAC组脊髓内神经元NF-κB P65阳性率均较EAE组明显减低,差异有显著性(P＜0.05).(4)在3个时间点,对照组脊髓内NF-κB P65 mRNA灰度比值变化不明显.DXM组和BAC组脊髓内神经元NF-κB P65 mRNA灰度比值均较EAE组明显下降,差异均有非常显著性(P＜0.01).结论 BAC预处理能明显抑制大鼠脊髓内NF-κB P65的活化,减少神经元的凋亡,起到神经保护作用.
关键词： 凋亡 黄芩苷 实验性自身免疫性脑脊髓炎 核因子-κB -
MBP刺激下IL-3和IL-4对树突状细胞前体定向分化的影响
目的 观察在髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)刺激下,不同细胞因子对树突状细胞(dentritic cell,DC)前体定向分化的影响.方法 分离实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)易感性BALB/c小鼠脾脏DC.在体外不同培养条件下与MBP共培养.用流式细胞仪检测DC荧光抗体标记的CD11c和CD8α表达.结果 (1)在MBP和粒巨嗜细胞集落刺激因子(GM-CSF)培养条件下,白细胞介素-4(IL-4)能明显刺激DC CD11c表达,IL-4组其平均荧光强度为856.93±2.45,对照组为708.58±21.25,两组比较差异有统计学意义(P＜0.01);(2)在GM-CSF和MBP培养条件下,ID3能明显上调DC CD8α的表达,IL-3组平均荧光强度为7751.70±296.63,对照组为7279.17±176.77,两组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 IL-4可进一步促进BALB/c小鼠脾脏DC前体向DCl分化,而IL-3则促进DC前体向DC2分化.
