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基质金属蛋白酶9在实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠发病过程中的动态表达
目的 通过检测基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在EAE大鼠发病过程中不同阶段外周血和中枢神经系统中的表达水平及动态变化,以探讨其在多发性硬化发病过程中的作用及机制.方法 Wistar雌性大鼠80只,分为模型组(EAE组)、完全福氏佐剂组(CFA组),分别于免疫后6天、8天、10天、12天、14天、16天、18天及20天取视交叉处脑组织和脊髓腰膨大段行HE染色观察炎性细胞的浸润状况;免疫组化法检测脑和脊髓组织中MMP-9的表达,酶联免疫吸附实验测定血清中MMP-9的含量.结果 EAE组大鼠脊髓和脑组织中MMP-9阳性细胞数及血清中MMP-9水平均显著高于同期CFA组(P<0.05);EAE 10天组与EAE 6天、14天、18天及20天组比较,大鼠脊髓腰膨大处MMP-9阳性细胞数较多(P<0.05);EAE 12天组与EAE 6天组、8天组、14天组、16天组、18天组及20天组比较,大鼠脑组织视交叉处MMP-9阳性细胞数较多(P<0.05);EAE 12天组与EAE 6天组、8天组、10天组、14天组、16天组、18天组及20天组相比较,大鼠血清中MMP-9含量较高(P<0.05).结论 在EAE大鼠发病前期即有中枢组织内MMP-9的高表达,且EAE大鼠脊髓中MMP-9的高表达要早于脑组织和外周血,但MMP-9表达的高峰在第12天与病理变化和疾病进展是同步的.
关键词： 实验性自身免疫性脑脊髓炎 多发性硬化 基质金属蛋白酶-9 -
多病程实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠模型的信号转导通路基因芯片研究
目的 用信号转导通路发现者基因芯片寻找多病程实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)大鼠不同病程的基因表达差异,从而寻找与其发病机制相关的基因.方法 采用豚鼠全脊髓匀浆诱导Wistar大鼠建立EAE模型,分别取正常大鼠、发病期大鼠、缓解期大鼠、复发期大鼠的脊髓腰膨大组织,于700℃冰箱保存.提取样品RNA,逆转录反应生成cDNA,标记探针,探针与芯片杂交,加入链亲和素耦联的碱性磷酸酶(AP)及化学发光底物反应.图像采集使用GEArray Expression Analysis Suite软件进行完整的芯片数据分析.结果 发病期,缓解期、复发期EAE大鼠分别与正常大鼠相比,有表达差异的基因数据为19、23,10项;而有10项基因在比较中随病程变化呈现出发病期表达上调,缓解期表达下调,复发期表达再次上调的趋势.结论 实验结果显示EAE大鼠不同发病阶段基因表达有差异,且随病程发展呈一定的趋势变化.这些差异基因与多条信号转导通路有关.
关键词： 多发性硬化 实验性自身免疫性脑脊髓炎 基因芯片 信号转导通路 -
氯喹对 EAE 模型小鼠神经元损伤的影响
目的：观察氯喹对实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）小鼠脊髓神经元存活的影响，并探讨相关机制。方法采用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55（MOG35-55）诱导 C57BL/6小鼠建立 EAE 模型，造模成功后给予氯喹干预。应用 Knoz 法进行临床评分，脊髓腰膨大节段石蜡包埋、冠状切片，行苏木精-伊红、LFB 和 Nissl 染色，分别观察各组小鼠脊髓炎症反应、髓鞘脱失和神经元存活情况。脊髓腰膨大冷冻切片，行免疫荧光双标染色。同时提取脊髓腰膨大组织蛋白检测凋亡相关蛋白表达。结果氯喹缓解 EAE小鼠临床症状，减轻脊髓炎性细胞浸润、髓鞘脱失、以及神经元死亡和损伤。与对照组相比，氯喹治疗组脊髓 Bax 水平降低，Bcl-2水平升高，Bax/Bcl-2比值降低。NeuN 与 Bcl-2荧光共定位明显增强。结论氯喹可能通过调节中枢神经系统前凋亡蛋白水平、上调神经元 Bcl-2表达，从而减轻 EAE 小鼠神经元损伤以及神经功能缺失症状，发挥神经保护作用。
关键词： 氯喹 实验性自身免疫性脑脊髓炎 神经元损伤 凋亡 -
阿托伐他汀对EAE模型髓鞘再生调节的机制研究
目的 观察阿托伐他汀对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠髓鞘再生的作用,并研究相关机制.方法 建立C57BL/6小鼠EAE模型,免疫成功后给予阿托伐他汀干预.应用Knoz评分观察小鼠的临床评分,免疫组化法观察IL-17浸润情况.体外培养少突胶质祖细胞(OPCs),观察其IL-17受体的表达.分别应用IL-17、阿托伐他汀及阿托伐他汀+甲羟戊酸内酯干预OPCs的培养及分化.结果 阿托伐他汀可以减少EAE模型中IL-17在中枢神经系统的浸润.体外研究表明,OPCs表达IL-17受体,IL-17可增强OPCs表达p38 MAPK,从而抑制其增殖和分化;阿托伐他汀可以降低OPCs细胞p38 MAPK的表达,促进细胞的增殖;而甲羟戊酸内酯又可以部分逆转阿托伐他汀的作用.结论 OPCs表达IL-17受体,IL-17可以抑制髓鞘再生.阿托伐他汀可能通过Rho-p38 MAPK通路调控IL-17的表达,进而减轻EAE的髓鞘损伤,有助于髓鞘再生.
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阿托伐他汀通过免疫调节作用治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎
目的：观察阿托伐他汀对实验性自身免疫性脑脊髓炎（ EAE）小鼠的治疗作用，并研究相关机制。方法建立C57BL/6小鼠EAE模型，免疫成功后给予阿托伐他汀干预。应用Knoz评分观察小鼠的临床评分，免疫组化法观察IL-17浸润情况，流式细胞仪观察外周Treg细胞的分化情况，Western blot 观察细胞外调节蛋白激酶/丝裂原活化蛋白激酶通路表达情况。结果阿托伐他汀可以改善EAE小鼠的神经功能缺损评分。免疫组化法显示阿托伐他汀可以减少IL-17在中枢神经系统的浸润，而流式细胞仪则发现阿托伐他汀可以促进外周Treg细胞的分化、降低外周脾细胞pERK的表达。结论阿托伐他汀可能通过ERK/MAPK通路调控TH17/Treg平衡进而改善EAE的神经功能缺损。
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α-硫辛酸对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠脑和脊髓内MMP-9表达的影响
目的 通过 α—硫辛酸(α—LA)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠脑和脊髓内MMP—9表达水平的影响,探讨 α—LA是否具有血—脑脊液屏障(BBB)的保护作用.方法 选取雌性Wistar大鼠45只,随机分为3个组,对照组、EAE组、α—LA组(免疫后第6天开始给予腹腔注射30mg·kg-1),分别于免疫后8d、12d、20d断头取脑与脊髓,取大鼠脑和脊髓腰膨大处组织进行免疫组织化学染色检测脑组织和脊髓中MMP—9的表达.结果 EAE组12d组与对照组12d组比较,大鼠脑组织视交叉和脊髓腰膨大处MMP—9阳性细胞数明显增多;α—LA 12d组与EAE组12d组相比较,大鼠脑组织视交叉处和脊髓腰膨大处MMP—9阳性细胞表达数明显减少(P<0.05).结论 α—LA可以降低EAE大鼠的发病率,能够降低BBB通透性的标志物MMP—9的水平,具有稳定BBB的作用,提示其在防治多发性硬化(MS)方面,具有很好的应用前景.
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二甲双胍抑制Th17细胞反应对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠保护作用
目的 探讨实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠应用二甲双胍(MET)干预,观察MET对EAE小鼠发病情况、神经功能评分的影响及其对小鼠体内Th17细胞反应的作用.方法 以MOG35-55免疫雌性C57BL/6小鼠建立EAE模型.随机分成对照组、EAE组和MET治疗组,比较不同组小鼠神经功能评分.在发病高峰期,比较小鼠脊髓中炎性细胞浸润程度,脾细胞中Th17细胞比例,脾细胞培养上清及血清中IL-17A含量以及小鼠脾及脊髓中IL-17A、RORγt mRNA转录水平.结果 与EAE组相比,MET治疗组发病率减低(P<0.05),疾病严重程度减轻(P<0.01);脾细胞中Th17细胞比例降低(P<0.01),脾细胞培养上清及血清中IL-17A含量减少(P<0.01);脾及脊髓组织中IL-17A、RORγt mRNA转录水平均降低(P<0.01).结论 MET通过抑制外周免疫器官及中枢神经系统的Th17细胞反应而对EAE小鼠起到保护作用.
关键词： 二甲双胍 实验性自身免疫性脑脊髓炎 Th17细胞 RORγt IL-17A -
iNOS和OPN在EAE中动态表达及依达拉奉保护作用研究
目的 研究诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和骨桥蛋白(OPN)在实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)中的动态表达以及依达拉奉治疗和保护作用机制的探讨.方法 将EAE大鼠随机分为实验组和依达拉奉治疗组,根据发病时间又分为发病前组、高峰期组和缓解期组.光镜下观察脊髓HE染色炎性细胞浸润情况,观察免疫组化染色iNOS和OPN阳性细胞数目.结果 依达拉奉治疗组与实验组比较,发病时间延迟、发病率降低及神经功能评分减低(P＜0.05).依达拉奉治疗组脊髓炎症细胞浸润较实验组减少.免疫组化染色iNOS和OPN阳性细胞在EAE发病前期上升,高峰期达到峰值,缓解期随疾病好转而下降,依达拉奉组均较同时期实验组阳性细胞表达数目减少(P＜0.05).结论 依达拉奉可以减轻EAE大鼠临床发病程度和病理炎症损害,并降低不同发病时期iNOS和OPN表达程度.推测依达拉奉通过抗氧化和抗炎的双重机制发挥神经保护作用.
关键词： 实验性自身免疫性脑脊髓炎 依达拉奉 诱导型一氧化氮合酶 骨桥蛋白 -
多发性硬化症发病机制研究进展
多发性硬化症(Multiple sclerosis,MS)是一种原发于中枢神经系统的脱髓鞘性疾病.20世纪初Ollivier和Cruveilhier分别描述了MS的临床和病理特点[1].在西方社会MS是造成青壮年神经性残疾中仅次于外伤的第二大因素[2].
关键词： 多发性硬化症 实验性自身免疫性脑脊髓炎 动物模型 细胞因子 血脑屏障 -
Wistar大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型的建立
目的研究用牛的髓鞘碱性蛋白(MBP)诱导Wistar大鼠发生实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE).方法一次性给Wistar大鼠双后腿足垫皮内注射牛MBP-福氏完全佐剂(CFA)混合乳剂,同时辅以百日咳杆菌.结果实验组大鼠全部发病,对照组无一发病.结论用牛脊髓MBP的粗提品可成功地诱导Wistar大鼠发生EAE.
关键词： 髓鞘碱性蛋白 大鼠 实验性自身免疫性脑脊髓炎 多发性硬化症 -
左归丸与右归丸对EAE大鼠血浆Th1/Th2平衡的影响
目的 探讨左归丸、右归丸对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)大鼠病程及其血浆Th1/Th2(IFN-γ/IL-4)的影响.方法 用MBP免疫Lewis大鼠诱导EAE模型,随机分为模型组、激素组、左归丸组、右归丸组及正常对照组,研究各组间发病率、死亡率、神经功能评分的差异,并分别在急性期(免疫后第15天)和缓解期(免疫后第27天)采集血样,检测血浆细胞因子水平.结果 右归丸组发病率低于其他各处理组(P<0.05);急性期神经功能评分左归丸组和右归丸组均低于模型组和激素组(P<0.05);急性期左归丸组血浆Th1/Th2水平低于模型组(P<0.05);缓解期模型组、激素组Th1/Th2水平均低于对照组(P<0.05),左归丸组、右归丸组Th1/Th2水平均高于模型组和激素组(P<0.05),右归丸组Th1/Th2水平高于对照组(P<0.05);模型组Th1/Th2水平在缓解期下降(P<0.01),左归丸组和右归丸组Th1/Th2水平均在缓解期升高(P<0.01).结论 右归丸可降低EAE发病率;左归丸和右归丸均能减轻EAE疾病严重程度,治疗效果优于醋酸泼尼松;左归丸可下调EAE急性期血浆Th1/Th2水平;左归丸和右归丸均能上调EAE缓解期血浆Th1/Th2水平.
关键词： 自身免疫性疾病 实验性自身免疫性脑脊髓炎 细胞因子 左归丸 右归丸 -
EAE与细胞凋亡
凋亡是细胞的一种主动死亡形式,与神经系统自身免疫性疾病的发生、发展和转归密切相关.实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)中凋亡的细胞主要为MBP-反应性T细胞,此外还有巨噬细胞、少突胶质细胞;它们凋亡的机制可能与内源性皮质醇释放和/或激活诱导的细胞凋亡等有关,外源性皮质醇对细胞凋亡有促进作用.
关键词： 细胞凋亡 实验性自身免疫性脑脊髓炎 T细胞 皮质醇 -
白芍总苷对EAE大鼠外周免疫器官及中枢神经系统NF-κB p65表达的影响
目的：观察白芍总苷( TGP)对实验性自身免疫性脑脊髓炎( EAE)大鼠外周免疫器官及中枢神经系统NF-κB p65表达的影响。方法采用后肢足掌皮内注射弗氏完全佐剂-豚鼠全脊髓匀浆,并辅以皮下注射百日咳疫苗,建立Lewis大鼠EAE模型。将大鼠随机分为对照组、模型组、TGP组,免疫后第1天起TGP组每天经口灌服白芍总苷悬浊液0.2 g/kg,对照组及模型组经口灌服等体积的生理盐水,各组第14天处死。观察各组EAE发病率、潜伏期、神经功能评分、中枢神经系统病理改变,免疫组化检测脾、淋巴结、中枢神经系统NF-κB p65的表达。结果 TGP组与模型组EAE发病率无差异(P>0.05)。与模型组相比, TGP组潜伏期延长(P<0.05),临床症状减轻(P<0.05),中枢神经系统炎症浸润细胞减少(P<0.05),脾、淋巴结、中枢神经系统NF-κB p65的表达下降(P<0.05)。结论 TGP可能通过抑制外周免疫器官及中枢神经系统NF-κB p65的表达,减轻EAE的病情。
关键词： 实验性自身免疫性脑脊髓炎 多发性硬化 白芍总苷 NF-κB P65 -
右归丸对实验性自身免疫性脑脊柱炎小鼠IL-23/IL-17炎性轴的影响
目的:探讨右归丸对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE) IL-23/IL-17炎性轴的影响.方法:建立髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(myelin oligodendrocyte glycoprotein 35-55,MOG35-55)诱导C57BL/6小鼠EAE模型,随机分为模型组、泼尼松组,右归丸组,并设正常对照组.观察小鼠的发病情况、神经功能评分及体重变化,HE染色观察CNS病理损伤程度,实时荧光定量PCR法检测小鼠脑组织IL-23 p19、IL-17 mRNA表达.结果:与正常对照组比较,模型组脑组织IL-23 p19、IL-17mRNA表达显著升高,泼尼松及右归丸组小鼠脑组织IL-23 p19、IL-17的mRNA表达比模型组低(P＜0.01).结论:右归丸能够抑制IL-23/IL-17炎性轴而起到抗炎治疗作用.
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益肾达络饮对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠神经功能评分和病理特征的影响
目的:研究益肾达络饮对复发-缓解型EAE小鼠发病率、发病时间、复发率、神经功能评分及病理特征的影响.方法:用HE染色和Luxol fast blue染色观察EAE小鼠的病理特征.结果:中药组EAE小鼠的复发率(14.27％)低于模型组(62.5％)；免疫后第21天神经功能评分,中药组(1.86±0.40)低于模型组(3.13±0.69)；免疫后第61天神经功能评分,中药组(0.86±0.55)低于模型组(2.75 ±0.73),差异有统计学意义(P＜0.05).结论:益肾达络饮能降低EAE小鼠的复发率、神经功能评分,减轻炎性细胞浸润和髓鞘脱失,但其作用机制需要进一步研究.
关键词： 益肾达络饮 实验性自身免疫性脑脊髓炎 神经功能评分 病理特征 -
实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠中枢神经系统不同部位病理变化比较
目的:探索实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠中枢神经系统不同部位间的病理变化,为疾病机制探索及治疗研究提供实验取材依据.方法:采用PLP139-151和百日咳毒素诱导SJL小鼠建立EAE模型,至发病高峰期分别取小鼠的大脑、小脑、脑干、颈髓、胸髓、腰髓进行HE染色及LFB髓鞘染色观察,比较各部位组织病理变化和髓鞘脱失情况.结果:脑干和大脑的病理变化显著,具有明显的血管袖套样炎性细胞浸润,小脑病理变化较小.三段脊髓均呈现出明显的病理变化,并以颈段和腰段显著,出现明显的炎性细胞浸润和神经元细胞空泡状坏死.结论:在评判SJL小鼠EAE模型的病理特征时,脑干、大脑、颈髓和腰髓是具特征的病变部位.
关键词： 实验性自身免疫性脑脊髓炎 多发性硬化 脑 脊髓 病理变化 -
火把花根片对EAE大鼠脑和脊髓L-选择素表达的影响
目的:探讨火把化根片对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠的治疗作用及L-选择素的影响.方法:模型组采用豚鼠髓鞘蛋白匀浆和福氏完全佐剂诱发大鼠急性EAE;治疗组在模型组基础上予以火把化根(600mg·kg-1·d-1)治疗,观察临床表现并评分；HE染色和Loyez氏髓鞘染色观察病理和髓鞘改变；免疫组化技术测定脑和脊髓的L-选择素水平.结果:治疗组未出现临床症状,L-选择素为1.88±0.64,与模型组比较P＜0.05；脑和脊髓小血管周围炎症细胞浸润明显减少；髓鞘结构完整.结论:火把化根片对EAE有治疗作用,其机制与抑制L-选择素表达有关.
关键词： 实验性自身免疫性脑脊髓炎 火把化根 L-选择素 -
黄连素对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠影响的研究
目的:探讨黄连素(Ber)对大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的影响.方法:Lewis大鼠24只随机分为3组:正常对照组、EAE组和Ber组.采用动物行为学、常规HE染色和Kluver&Barrera髓鞘染色观察大鼠的发病情况与中枢神经系统(CNS)的病理变化.结果:EAE组8只大鼠全部出现典型的EAE行为学改变,CNS炎性细胞浸润和髓鞘脱失.Ber组有3/8只大鼠出现EAE行为学改变,临床症状减轻,潜伏期延长,CNS内炎性细胞浸润减少和髓鞘脱失减轻.对照组未见动物行为学和CNS病理学改变.结论:Ber能降低大鼠EAE发病率,延长潜伏期和减轻临床症状,对EAE具有神经保护作用.
关键词： 黄连素 实验性自身免疫性脑脊髓炎 多发性硬化 -
火把花根片对EAE大鼠治疗作用及VCAM-1影响的实验研究
目的:探讨火把化根片对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠的治疗作用及VCAM-1的影响.方法:模型组采用豚鼠髓鞘蛋白匀浆和福氏完全佐剂诱发大鼠急性EAE;治疗组在模型组基础上予以火把化根片(600mg·kg-1·d-1,日2次口服),观察临床表现并评分;HE染色和Loyez氏髓鞘染色观察病理和髓鞘改变;免疫组化技术测定脑和脊髓的VCAM-1水平.结果:治疗组未出现临床症状;VCAM-1为(2.13±0.99),与模型组比较P<0.05;脑和脊髓小血管周围炎症细胞浸润明显减少;髓鞘结构完整.结论:火把化根片对EAE有治疗作用,其作用机制与抑制VCAM-1表达有关.
关键词： 实验性自身免疫性脑脊髓炎 火把化根 血管细胞黏附分子-1 -
β-榄香烯对自身免疫性脑脊髓炎小鼠早期炎性损伤的治疗作用及其免疫学机制
目的 探讨β-榄香烯对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)小鼠早期炎性损伤的治疗作用及可能的免疫学机制.方法 6～8周龄健康雌性野生型C57BL/6小鼠(SPF15)共64只,均分为对照组、模型组和β-榄香烯治疗组.采用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(myelin oligodendrcyte glycoprotein peptide35-55,MOG35-55)多肽作为抗原诱发EAE小鼠模型.于免疫后15日剥离脊髓组织进行病理学研究,MTT实验检测EAE小鼠MOG抗原特异性增殖反应及β-榄香烯(β-elemene)对MOG抗原特异性增殖反应的影响,定量PCR技术分别检测各组小鼠脊髓及淋巴结细胞白细胞介素17( interleukin-17,IL-17)、转录因子孤儿核受体(retinoid acid-related orphan receptors -γt,RORγt)、白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素23(interleukin-23,IL-23)、转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)以及叉头蛋白3(Foxp3)的mRNA的表达.结果 模型组的神经功能评分高于治疗组(P＜0.05),治疗组小鼠脊髓炎症及轴索损伤较模型组减轻.免疫后11d,与模型组比较,治疗组小鼠脊髓IL-17、RORγt、IL-6、IL-23的mRNA的表达减少(P＜0.05),Foxp3 mRNA的表达增加(P＜0.05),并持续至免疫后15d.体外研究发现模型组T淋巴细胞增殖较对照组更明显(P＜0.05),治疗组β-榄香烯对T淋巴细胞增殖抑制呈现明显的量效关系(P＜0.05)；与模型组比较,治疗组体外培养的淋巴细胞IL-17、RORγt、IL-6、IL-23mRNA表达水平增加,Foxp3 mRNA表达水平减少(P＜0.05).结论 β-榄香烯减轻EAE小鼠早期炎性损伤,可能与其抑制髓鞘少突胶质细胞糖蛋白多肽反应性T细胞的激活以及维持Th17细胞/调节T细胞亚群的平衡密切相关.
关键词： β-榄香烯 实验性自身免疫性脑脊髓炎 Th17细胞 调节T细胞 小鼠
