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实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠发病高峰期外周及中枢淋巴细胞亚群的变化
目的:观察髓鞘少突胶质细胞糖蛋白MOG_(35-55)诱导的实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠发病高峰期中枢及外周淋巴细胞亚群的变化,探讨EAE发病高峰期细胞与体液免疫学的变化.方法:用MOG_(35-55)免疫诱导雌性C57BL/6小鼠制作EAE模型,记录小鼠行为学变化,HE染色观察CNS炎症组织病理变化,使用流式细胞仪检测小鼠中枢及外周脾脏淋巴细胞中CD3~+CD4~+、CD3~+CD8~+、CD4~+CD25~+、B220~+细胞亚群变化情况.结果:EAE组小鼠中枢神经系统有CD3~+CD4~+、CD3~+CD8~+、CD4~+CD25~+、B220~+淋巴细胞的浸润, CFA阴性对照组中枢神经系统未检测到淋巴细胞浸润.EAE组小鼠外周脾细胞中CD3~+CD4~+、CD3~+CD8~+细胞较CFA阴性对照组减少(P＜0.05), B220~+细胞较CFA阴性对照组明显升高(P＜0.01),CD4~+CD25~+细胞较CFA阴性对照组升高但无统计学差异.结论:小鼠在EAE发病高峰期,外周脾细胞中CD3~+CD4~+、CD3~+CD8~+阳性细胞明显减少,B220~+明显升高, CD4~+CD25~+也开始有升高趋势,表明EAE发病高峰期细胞免疫及体液免疫共同调控了EAE的病理过程,T淋巴细胞与B淋巴细胞都起了很重要的主导作用.
关键词： 实验性自身免疫性脑脊髓炎 淋巴细胞亚群 多发性硬化 T淋巴细胞 B淋巴细胞 -
降纤药治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的机制
目的:研究降纤药巴曲酶对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠的预防及治疗作用,初步探讨纤维蛋白沉积在多发性硬化(MS)中的作用机制.方法:采用MOG35-55免疫的C57雌性小鼠,诱发EAE动物模型,分别在免疫后立即(预防组)及免疫后出现症状(治疗组)隔日连续给予降纤药巴曲酶注射至实验结束,观察发病情况并进行临床症状评分.于免疫后30天、40天及60天分别将预防组、治疗组及EAE对照组小鼠脊髓与小脑组织取材后进行组织病理学与免疫组化染色分析,Western blot及实时荧光定量PCR技术观察药物干预对炎性浸润、脱髓鞘、纤维蛋白沉积及胶质细胞活化的影响.结果:降纤预防组及治疗组均可明显减轻EAE小鼠的发病症状、降低临床评分.预防组和治疗组较EAE未用药对照组小鼠炎性细胞浸润明显减少、髓鞘脱失及胶质细胞活化减轻,但轴索损害的改善作用不明显.免疫组化及免疫荧光显示,预防组和治疗组较EAE未用药对照组的髓鞘碱性蛋白(MBP)表达升高而胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达降低,Western blot结果示MBP蛋白表达升高而p-Akt表达降低.实时荧光定量PCR技术也证实了预防及治疗组MBP的mRNA表达升高,组织型纤溶酶原激活物(t-PA)的mRNA表达也升高.结论:在EAE的发病过程中纤维蛋白沉积发挥了重要作用,巴曲酶通过有效降低EAE小鼠体内的纤维蛋白从多个方面改善临床症状和发病过程.
关键词： 实验性自身免疫性脑脊髓炎 多发性硬化 纤维蛋白 巴曲酶 -
右归丸对EAE小鼠Th17细胞分化的影响
目的 探讨右归丸对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)Th17细胞分化的影响.方法 建立髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(myelin oligodendrocyte glycoprotein peptide 35-55,MOG35-55)诱导C57BL/6小鼠EAE模型,随机分为模型组、泼尼松龙组,右归丸组,并设正常对照组.观察小鼠的发病情况、神经功能评分及体重变化,HE染色观察CNS病理损伤程度,ELISA法检测外周血IL-4、IL-6、TGF-β、IL-17含量.结果 与正常对照组比较,模型组IL-6、IL-17含量升高(P＜0.05或P＜0.01);IL-4、TGF-β含量降低(P＜0.05或P＜0.01);泼尼松龙及右归丸组小鼠IL-6、IL-17含量降低(P＜0.05或P＜0.01);IL-4、TGF-β含量升高(P＜0.05或P＜0.01).结论 右归丸能够抑制EAE小鼠Th17细胞分化而起到抗感染治疗作用.
关键词： 多发性硬化 实验性自身免疫性脑脊髓炎 右归丸 Th17细胞 -
补肾解毒通络方对 EAE 大鼠 CD4＋、CD8＋T 细胞和 IL－17的影响
目的：探讨补肾解毒通络方对实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）大鼠外周血 CD4＋、CD8＋T 细胞和脑组织内白细胞介素（IL）－17的影响。方法将60只雌性 Wistar 大鼠按照随机数字表法分为空白对照组（正常）、模型对照组（EAE＋生理盐水）、低剂量组（ EAE＋15 g? kg－1?d－1）、中剂量组（EAE＋30 g? kg－1? d－1）及高剂量组（EAE＋60 g? kg－1? d－1）。模型建立后持续灌胃14 d。治疗结束后，采用流式细胞术检测大鼠外周血 CD4＋、CD8＋T 细胞水平，采用免疫组织化学方法和阳性细胞计数检测各组大鼠侧脑室周围组织内 IL－17水平。结果（1）与空白对照组相比，模型对照组大鼠 CD4＋、CD4＋／CD8＋明显偏高，CD8＋明显偏低（P＜0.05）；与模型对照组、低剂量组及中剂量组相比，高剂量组大鼠 CD4＋、CD4＋／CD8＋明显偏低，CD8＋明显偏高（P＜0.05）；高剂量组与空白对照组间比较差异无统计学意义（P＞0.05）。（2）与空白对照组相比，模型对照组大鼠 IL－17阳性细胞数明显偏高（P＜0.05）；与模型对照组、低剂量组相比，中剂量组和高剂量组明显偏低（P＜0.05）；高剂量组与空白对照组间比较差异无统计学意义（P＞0.05）。结论补肾解毒通络方60 g ／kg 剂量能更好地升高 EAE 大鼠外周血 CD8＋T 细胞同时降低 CD4＋T 细胞和 IL－17阳性细胞数。
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ERK1／2在实验性自身免疫性脑脊髓炎发病过程中的组织特异性作用
目的：建立实验性自身免疫性脑脊髓炎（ EAE）模型，探讨ERK1/2途径在EAE发生发展中的作用。方法以鼠源的 MOG35-55多肽为抗原诱导C57BL/6小鼠，通过病程观察、神经功能评分及病理学分析确定EAE模型。取发病前期及发病高峰期小鼠的脊髓及淋巴结，采用免疫印迹的方法，检测P-ERK1/2、ERK1/2、P-MEK1/2及MEK1/2的表达情况。结果 EAE小鼠均有发病，为单相病程，临床符合典型 EAE 模型表现。EAE小鼠在免疫后（13.6±2.1） d起病，在免疫后（17.0±2.8）d病情发展到高峰，高峰期临床评分为（2.8±1.1）分。无论是发病前还是在发病高峰期，EAE组小鼠淋巴结中的 ERK1/2的磷酸化表达均被明显抑制，但MEK1/2磷酸化表达无明显差异。无论是发病前还是在发病高峰期，EAE组小鼠脊髓中的ERK1/2磷酸化表达无明显差异。结论成功建立了MOG35-55多肽为抗原诱导的EAE小鼠模型。 ERK1/2的表达在EAE发病过程中存在组织特异性。
关键词： ERK1/2途径 实验性自身免疫性脑脊髓炎 多发性硬化 -
雌激素受体α对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠TIMP-1及TIMP-2表达的影响
目的 以实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)作为多发性硬化(multiple sclerosis,MS)的动物模型,初步探讨雌激素和雌激素受体α(estrogen receptor α,Erα)在EAE中的抗炎作用及其作用机制.方法 在小鼠侧脑室立体定位注射Erα重组慢病毒,鉴定Erα重组慢病毒在体感染中枢神经系统(central nervous system,CNS)的佳剂量.将雌二醇及Erα重组慢病毒干预EAE小鼠与对照组比较,观察 各组小鼠的临床症状及体重的变化,通过H&E染色及Luxol fast blue-H&E染色对比各组炎症反应及脱髓鞘情况,以实时荧光定量PCR及Western blot方法检测金属蛋白酶组织抑制因子-1(tissue-inhibitors of matrix metalloproteinase-1,TIMP-1)及TIMP-2.结果 15μl Erα重组慢病毒能感染小鼠CNS.与对照组相比,雌二醇及过表达Erα可以降低EAE小鼠的发病率、体重丢失及临床症状,减轻脑和脊髓中炎性细胞浸润和神经纤维的髓鞘脱失,在发病急性期增加TIMP-1及TIMP-2,减轻在缓解期TIMP-1、TIMP-2的病理性表达增高.结论 雌激素及Erα可以抑制EAE的炎症反应,该作用机制可能是通过增加EAE小鼠急性发病期脑组织中TIMP-1及TIMP-2实现的.
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载脂蛋白E拟肽对EAE小鼠的髓鞘和轴突损伤的影响
目的 探讨载脂蛋白E(ApoE)拟肽对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠中枢神经系统髓鞘脱失和轴突损伤的影响.方法 以髓鞘少突胶质细胞糖蛋白多肽(MOG35-55)为抗原建立EAE模型.将40只雌性C57BL/6J小鼠随机分为4组,即正常组、EAE组、正常治疗组和EAE治疗组,两个治疗组皮下注射ApoE拟肽.免疫组化法检测髓鞘碱性蛋白(MBP)和神经丝轻链(NF-L)的表达.结果 EAE治疗组中脑和脊髓的MBP和NF-L的表达均高于EAE组(P＜0.05).结论 ApoE拟肽可能对EAE的髓鞘和轴突的损伤有保护作用.
关键词： 载脂蛋白E 多发性硬化 实验性自身免疫性脑脊髓炎 髓鞘碱性蛋白 神经丝轻链 -
Foxp3和HO-1在实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠脊髓中的相关性表达及依达拉奉保护作用的研究
目的 探讨叉头样转录因子-3(Foxp3)和血红素加氧酶(HO-1)在实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)发病中的相关性及依达拉奉对EAE的保护机制.方法 建立大鼠EAE动物模型,观察依达拉奉干预前后动物发病情况,应用Real-time PCR方法检测脊髓组织中Foxp3 mRNA和HO-1 mRNA的含量变化;应用免疫组化染色观察脊髓组织Foxp3和HO-1阳性表达.结果 依达拉奉能降低EAE的发病率,延迟发病,改善神经功能评分,减少脊髓中炎性细胞浸润和“血管袖套”的形成,促进脊髓中Foxp3和HO-1的转录.结论 依达拉奉对EAE和MS具有保护作用,这种作用在病程早期更明显,是通过促进HO-1的表达上调和CD4+ CD25+ Foxp3+T调节型淋巴细胞(CD4+ CD25+ Foxp3+ Tregs)的发育和功能实现的,具有抗炎和抗氧化的双重作用.
关键词： 多发性硬化 实验性自身免疫性脑脊髓炎 FOXP3 HO-1 依达拉奉 -
载脂蛋白E对EAE星形胶质细胞的影响
目的 探索载脂蛋白E(apolipoprotein E,apoE)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)模型小鼠病灶星形胶质细胞的影响.方法 采用MOG35-55诱导apoE基因敲除的C57BL/6小鼠(apoE-/-EAE组)及野生型C57BL/6小鼠(普通EAE组),建立EAE模型.取免疫后35 d的EAE小鼠的大脑及脊髓切片,行HE染色,免疫组织化学染色法观察各组小鼠水通道蛋白4(AQP4)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达.结果 apoE-/-EAE组和普通EAE组大脑和脊髓AQP4、GFAP的表达量均高于正常对照组,差异均有统计学意义(P＜ 0.05);apoE-/-EAE组大脑和脊髓AQP4、GFAP表达量均高于普通EAE组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 EAE中存在星形胶质细胞水肿、增生,apoE缺乏可以加重这一病变.
关键词： 载脂蛋白E 实验性自身免疫性脑脊髓炎 水通道蛋白4 胶质纤维酸性蛋白 -
JAK2抑制剂AG490对EAE小鼠C57BL/6的Th17/Treg细胞平衡的影响
目的 探讨AG490对EAE小鼠Th17/Treg平衡的影响及其治疗作用.方法 以MOG33-35多肽免疫C57BL/6小鼠建立EAE模型,观察AG490干预前后EAE组、AG490组和对照组小鼠脊髓组织炎性细胞浸润情况及p-STAT5、Foxp3和IL-17免疫组化染色阳性细胞数目.结果 AG490组较EAE组小鼠炎症细胞浸润及IL-17阳性细胞数目减少(P＜0.05),AG490组小鼠p-STAT5和Foxp3阳性细胞数目较EAE组增多(P＜0.05),两组小鼠发病高峰期较发病初期炎症细胞浸润及IL-17阳性细胞数目增多,而p-STAT5和Foxp3阳性细胞数目减少(P＜0.05).结论 (1)AG490通过抑制JAK2-STAT3信号通路抑制炎症反应和免疫应答;(2) JAK2抑制剂可以通过JAK2-STAT3信号通路调节Th17/Treg细胞平衡.
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胸腺切除对EAE大鼠发病影响及机制的探讨
目的 通过对比胸腺切除前后实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental allergic encephalomyelitis,EAE)大鼠(regulatory T cells,Treg)细胞含量变化,探讨胸腺在EAE发病中的作用.方法 手术切除胸腺建立去胸腺大鼠模型,并对其免疫建立EAE模型.于发病不同时期进行HE染色观察炎症变化,并应用免疫组化及流式细胞学技术,分别检测脊髓和脾脏Treg细胞的含量.结果 在发病不同时期去胸腺组EAE大鼠临床症状、神经功能损伤评分及炎症程度均重于EAE组,其脊髓及脾脏Treg细胞含量均较EAE组大鼠减少,差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论 在EAE大鼠发病过程中,胸腺能诱导分化产生Treg细胞,并通过输出到外周免疫环境和靶器官中,抑制炎症进展,促进疾病恢复,发挥免疫调节作用.
关键词： 实验性自身免疫性脑脊髓炎 FOXP3 去胸腺模型 流式细胞术 脾脏 -
牛脊髓髓鞘碱性蛋白的提取及初步鉴定
目的探索一条从牛脊髓中提取牛髓鞘碱性蛋白(MBP)的行之有效的方法,为实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)动物模型的建立及研究工作奠定基础.方法组织匀浆器将新鲜的牛脊髓捣碎,用London法抽提,考马司亮蓝法鉴定粗提品的含量,SDS-PAGE观测其分子量,MBP免疫Wistar大鼠,以鉴定其抗原性.结果粗提品蛋白含量达10mg/ml,粗提品诱导EAE症状典型,发病率高.结论采用London法可从牛脊髓中获取大量的MBP,与其它方法比较产量高,诱导EAE效果好,且本法简便,所以有一定的推广价值.
关键词： 髓鞘碱性蛋白 实验性自身免疫性脑脊髓炎 多发性硬化症 -
苦参素对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠脑内神经干细胞增值的影响
目的：观察苦参素对实验性自身免疫性脑脊髓炎（ EAE ）大鼠的治疗作用及对脑内神经干细胞标志物-巢蛋白Nestin、转录因子Sox-2表达的影响，探讨苦参素对EAE大鼠的治疗机制。方法将60只雌性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组和治疗组，每组20只。用新鲜豚鼠全脊髓匀浆免疫诱导建立EAE模型，自免疫后第11天（发病初期）起，治疗组大鼠每日腹腔注射苦参素6．70 ml／kg（250 mg／kg），同时正常组与模型组注射等量生理盐水。每天观察并记录大鼠的体重变化及神经功能学评分。给药1w后将大鼠处死，取脊髓和大脑，免疫组织化学法检测脑内Nestin的表达，RT-PCR法测定脑内SOX-2含量的变化。结果与模型组相比，治疗组大鼠神经功能评分明显降低，Nestin阳性细胞数和SOX-2的表达均显著增加（P＜0．05）。结论苦参素对EAE大鼠有治疗作用，其机制可能与增加中枢神经系统中神经干细胞的数量有关。
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重组水蛭素对EAE小鼠脑组织MMP-9表达和NO含量影响的研究
目的 探讨重组水蛭素(Recombinant hirudin)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠脑组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达和一氧化氮(NO)含量的影响.方法 48只雌性C57BL/6小鼠随机平均分为3组,EAE组运用MOG35-55构建EAE小鼠模型,CFA组由生理盐水代替MOG35-55构建模型,水蛭素组在EAE基础上给予重组水蛭素腹腔注射,CFA组、EAE组给予生理盐水腹腔注射.HE染色和LBF染色观察炎症及脱髓鞘情况,免疫组化检测MMP-9表达,ELLISA检测小鼠脑组织中NO含量,RT-PCR检测MMP-9和诱导型一氧化氮合酶(iN-OS) mRNA表达.结果 水蛭素组小鼠临床症状、炎症及脱髓鞘程度减轻,与EAE组间的差异有统计学意义(P＜0.05).水蛭素组小鼠脑组织MMP-9蛋白表达和NO含量与EAE组间差异有统计学意义(P＜0.05),重组水蛭素组小鼠脑组织iNOS mRNA和MMP-9 mRNA表达与EAE组间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 重组水蛭素缓解EAE临床症状机制之一可能与抑制EAE小鼠脑组织中MMP-9和iNOS mRNA表达,从而减少MMP-9和NO含量有关.
关键词： 多发性硬化 实验性自身免疫性脑脊髓炎 重组水蛭素 一氧化氮 基质金属蛋白酶-9 -
雄激素对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠星形胶质细胞的影响
目的 研究外源性雄激素对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠中枢神经系统星形胶质细胞的影响.方法 用豚鼠全脊髓匀浆免疫Wistar大鼠诱导建立多发性硬化动物模型实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE),应用胶原纤维酸性蛋白免疫组化的方法观察丙酸睾酮对EAE大鼠星形胶质细胞数量和形态影响的变化.结果 60％的大鼠成功建模；雄激素干预组发病率降低,该组大鼠的大脑、脑干、脊髓星形胶质细胞数量明显较模型组减少,胞体较正常对照组大,但较模型组明显减小(P＜0.05).结论 雄激素可减轻EAE中星形胶质细胞反应.
关键词： 实验性自身免疫性脑脊髓炎 雄激素 星形胶质细胞 -
FTY720对EAE小鼠脑组织NO含量和iNOS表达影响的研究
目的 探讨芬戈莫德(fingolimod,FTY720)对试验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠脑组织中一氧化氮(NO)含量和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响.方法 48只雌性C57BL/6小鼠随机平均分为3组EAE组运用MOG35-55构建EAE小鼠模型;CFA组由生理盐水代替MOG35-55构建模型;FTY720干预组在EAE基础上给予FTY720腹腔注射,CFA组、EAE组给予生理盐水腹腔注射.HE染色和LBF染色观察炎症情况和脱髓鞘情况,ELLISA检测小鼠脑组织中的NO含量,RT-PCR检测的诱导型一氧化氮合酶(iNOS) mRNA表达.结果 FTY720组EAE小鼠较EAE组临床症状减轻,炎症程度和脱髓鞘程度减轻(P＜0.05).FTY720组小鼠脑组织NO含量较EAE组降低(P＜0.05),iNOS mRNA表达量降低(P＜0.05).结论 FTY720能抑制EAE小鼠脑组织中iN-OS mRNA表达,从而减少NO含量.
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实验性自身免疫性脑脊髓炎发病过程中淋巴细胞相关因子及转录因子的表达
目的 探讨实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)发病过程中淋巴细胞相关因子及转录因子的表达情况.方法 将C56BL/6小鼠分为免疫髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55 (myelin oligodendrocyte glycoprotein 35-55,MOG35-55)特异性免疫乳剂的EAE组与免疫未加MOG35-55多肽的免疫乳剂的CFA组,每组16只,分别取100μl免疫乳剂,经腋窝皮下免疫小鼠,于免疫当天及第2天经小鼠尾静脉注射200 ng百日咳毒素(pertussis toxin,PT),建立实验动物模型,并于免疫后进行临床评分;分别于免疫后第7、14和21天取小鼠的淋巴结和脾脏,RT-PCR法检测淋巴细胞相关因子及转录因子IL-17、IFNγ、RAR相关孤核受体γ(RAR-relatedorphan receptor gamma,RORγ)和T盒子转录因子bet(T-box transcription factor bet,T-bet)基因mRNA转录水平的变化.结果 成功建立EAE模型,从免疫后第7天起出现临床症状,EAE组临床评分明显高于CFA组(P均＜0.05);免疫后第7、14和21天,EAE组淋巴结和脾脏淋巴细胞中IL-17、IFNγ、RORγ、T-bet基因mRNA转录水平均明显高于CFA组.结论 IL-17、IFNγ、RORγ和T-bet参与EAE疾病的发生发展,且表达量的增加与疾病加重有相关性.
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B细胞在MOG35-55诱导的小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎中的作用
目的 探讨B细胞参与MOG35-55诱导的实验性自身免疫性脑脊髓炎(Experimental autoimmune encelphalomyelitis,EAE)小鼠模型的可能机制.方法 采用MOG35-55肽段免疫C57BL/6小鼠建立EAE模型；采用临床评分检测EAE模型建立情况,HE和快蓝染色观察脊髓炎性细胞浸润和脱髓鞘状况,流式细胞术检测B细胞活化程度,免疫组化法检测脾组织生发中心的形成,ELISA法检测IgG1、IgG2a和IgG2b的分泌水平.结果 成功建立了MOG3-55诱导的EAE小鼠模型,EAE组临床评分明显高于弗氏完全佐剂(Complete Freund adjuvant,CFA)组(P＜0.001),EAE组小鼠脊髓可见明显的炎性细胞浸润和脱髓鞘斑块；在EAE组发病起始期(免疫后第5天和第8天),外周免疫器官活化B细胞表达水平明显高于CFA组(P＜0.01)；在发病高峰期(免疫后第15天)EAE组小鼠脾中形成生发中心,而CFA组未见生发中心形成,且外周血抗MOG35-55抗体分泌水平明显高于CFA组(P＜0.005).结论 MOG35-33肽段可以诱导B细胞活化,进而可能通过发挥体液免疫作用介导EAE疾病的发生.
关键词： B淋巴细胞 实验性自身免疫性脑脊髓炎 多发性硬化 -
骨化三醇对实验性自身免疫性脑脊髓炎的治疗作用及相关机制
目的 探讨骨化三醇( Calcitriol)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(Experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)的治疗作用及相关机制.方法 用含200 μg髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55肽段(Myelin oligodendrocyte glycoprotein 33-35,MOG33-35)、250 μg结核菌素的50μl弗氏不完全佐剂(IFA)皮内免疫C57BL/6小鼠,并分别于免疫当天和第2天注射百日咳毒素,建立EAE实验性动物模型(EAE组)；骨化三醇组从免疫当天起隔日腹腔注射骨化三醇100 ng进行治疗,观察两组小鼠临床评分的差异；于EAE发病高峰期处死小鼠,取脊髓及淋巴结,通过HE及LFB染色观察脊髓中炎细胞浸润及髓鞘脱失；采用流式细胞术检测两组淋巴细胞CD4+T细胞亚型的分布.结果 与EAE组比较,骨化三醇组发病延缓且发病较轻,临床评分差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01或P＜0.001)；骨化三醇组较EAE组小鼠脊髓白质炎性细胞浸润明显减少,脱髓鞘斑块明显减轻；骨化三醇组与EAE组相比,Th17细胞亚群明显受到抑制(P＜0.05),而Th2和Treg细胞水平明显升高(P均＜0.05).结论 骨化三醇可以延缓EAE发病,减轻临床症状及病理改变,并能够通过调节CD4+T细胞亚群平衡,即抑制Th17细胞,上调Th2和Treg细胞水平发挥对EAE的预防和治疗作用.
关键词： 骨化三醇 实验性自身免疫性脑脊髓炎 治疗 抗原 CD4 -
IL-17对髓鞘碱性蛋白诱导鼻黏膜免疫耐受治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎的影响
目的 探讨IL-17对髓鞘碱性蛋白(MBP)68-86诱导鼻黏膜免疫耐受治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的影响.方法 将大鼠分为5组,分别经鼻黏膜滴注PBS、MBP68-86-MBP68-86+IL+17(0.01 μg/d)、MBP68.86+IL-17(0.05 μg/d)和MBP68.86+IL-17(0.1μg/d)诱导其发生免疫耐受,并在此基础上建立EAE动物模型,观察各组大鼠发病情况;通过3H掺入试验检测特异性抗原MBP 68-86多肽诱导T淋巴细胞增殖活性;HE染色观察脊髓淋巴细胞浸润情况,免疫组化方法检测脊髓中单位面积IL-17+胞数.结果 PBS组和IL-17 0.1 μg/d组与MBP组相比,大鼠免疫后出现进食减少、体重减轻、尾瘫、后肢瘫痪等临床症状,IL-17 0.01μg/d组和0.05 μg/d组大鼠临床症状较轻或无症状.淋巴细胞增殖试验结果显示,PBS组和IL-170.1 μg/d组与MBP组相比,特异性淋巴细胞增殖反应显著增高,IL-17 0.01 μg/d组和0.05μg/d组与MBP组相比,差异无显著意义,与IL-17 0.1μg/d组相比差异有显著意义;PBS组、IL-17 0.1 μg/d组与MBP组、IL-17 0.01 μg/d组和0.05 μg/d组相比,脊髓切片中淋巴细胞浸润面积较大且细胞数量较多,IL-173细胞数也显著增多.结论 MBP68-86特异性肽段可诱导EAE免疫耐受的形成,预防EAE的发生;鼻黏膜给予IL-17可以打破MBP诱导的特异性免疫耐受,且存在剂量依赖性.
