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小胶质细胞活化在实验性自身免疫性脑脊髓炎中的作用机制
目的 探讨小胶质细胞活化在实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)发病机制中的作用.方法 利用同种脑脊髓匀浆诱导EAE模型.采用免疫组化法、免疫组织荧光染色观察小胶质细胞对EAE不同病期炎性脱髓鞘病灶的反应,采用免疫组化法、ELISA法观察脑组织及外周血肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达.结果 EAE发病前小胶质细胞即开始激活并持续至高峰期,形态学上表现为从正常的细小分枝状逐渐演变为高度分枝状、阿米巴状.免疫组化染色显示TNF-α阳性细胞多为小胶质细胞.EAE大鼠发病前脑组织中小胶质细胞、TNF-α阳性细胞数及外周血TNF-α水平已升高并持续至高峰期.结论 小胶质细胞活化伴随EAE发病的整个过程.活化后的小胶质细胞可能通过合成和释放多种炎症介导物及细胞因子如TNF-α,进一步扩大炎症反应,进而促使髓鞘病变.
关键词： 实验性自身免疫性脑脊髓炎 小胶质细胞 -
TLR9与实验性自身免疫性脑脊髓炎
Toll样受体9(toll-like receptor 9, TLR9)通过识别细菌和病毒DNA中未甲基化的胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤(CpG DNA)序列激活天然免疫应答和获得性免疫应答,从而促进宿主抵抗感染性疾病.但一定条件下,TLR9活化亦可促发某些自身免疫性疾病如实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE).该文就TLR9的结构、配体、信号转导通路及TLR9在EAE中的作用机制进行综述.
关键词： Toll样受体9 CpG DNA 实验性自身免疫性脑脊髓炎 -
Wistar大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎胶质纤维酸性蛋白变化的研究
目的 通过建立实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型研究Wistar大鼠脑内神经脱髓鞘后星形胶质细胞损伤随时间变化的规律.方法 对Wistar大鼠经足垫注射豚鼠脊髓匀浆制作EAE模型,并于不同时间点将其处死,取脑组织进行免疫组化染色及图像分析检测脑组织中胶质纤维酸性蛋白(GFAP)水平并与健康对照组进行比较.结果 GFAP阳性细胞随损伤时间呈先上升后下降的变化趋势,于发病后第7天表达高,第21天恢复正常.其中发病后第7、14天GFAP阳性细胞突起增长、增粗,染色加深.结论 EAE模型中星形胶质细胞可能参与了脑组织损伤后的修复过程,其标志性蛋白GFAP水平随损伤时间呈规律性改变.
关键词： 胶质纤维酸性蛋白 星形胶质细胞 实验性自身免疫性脑脊髓炎 -
MBP对PBMC产生IFN-γ和NO的影响
目的 探讨T细胞非特异性活化在CNS脱髓鞘性疾病中的作用.方法 分离实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)易感性BALB/c小鼠外周血单个核细胞(PBMC),采用体外细胞培养方法在体外与碱性髓鞘蛋白(MBP)共培养,测定培养上清液中IFN -γ、NO水平.结果 经MBP刺激的PBMC 产生IFN-γ[(43.83±6.06) pg/mL]和NO[(180.76±20.75)μmol/L]明显增加,与对照组产生的IFN-γ[(28.52±2.18 )pg/mL]和NO[(95.61±13.09)μmol/L]相比差异有统计学意义(P＜0.01).结论 在CNS脱髓鞘性疾病发病过程中,活化的T细胞、单核细胞等分泌致炎细胞因子和其他有害物质增多.
关键词： 实验性自身免疫性脑脊髓炎 碱性髓鞘蛋白 外周血单个核细胞 -
黄芩甙治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎的实验研究
目的 研究黄芩甙治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的可能性及有效性.方法 应用髓鞘脂质蛋白(PLP)139-151免疫SJL/J小鼠诱发慢性复发-缓解型EAE模型,研究黄芩甙对PLP139-151诱导的小鼠淋巴结细胞增殖反应及干扰素-γ(IFN-γ)、白介素-4(IL-4)分泌的作用,使用流式细胞技术检测黄芩甙对EAE小鼠淋巴结细胞CCR5表达的影响;通过神经功能评分观察黄芩甙治疗EAE的有效性.结果 黄芩甙可抑制PLP139-151诱导的淋巴结细胞增殖反应及IFN-γ的分泌,提高IL-4的分泌(P ＜0.001),有效降低EAE小鼠淋巴结细胞CCR5的表达;显著改善EAE小鼠神经功能评分(P＜0.01),使发病时间延迟(P＜0.01).EAE小鼠发病数和死亡数较对照组减少,但差异并无统计学意义(P＞0.05).结论 黄芩甙可有效治疗EAE,为黄芩甙用于临床多发性硬化的治疗提供了实验依据.
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左旋咪唑对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠脊髓内CD4 、CD8、CD28和CD152表达的影响
目的 探讨左旋咪唑(Levamisole,LMS)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis, EAE)大鼠脊髓内单个核细胞CD4、CD8、CD28及CD152表达的影响及其意义.方法 采用临床症状评分、病理学检查和流式细胞术,观察LMS处理和非处理条件下豚鼠全脊髓匀浆诱导的Wistar大鼠EAE临床表现、病理改变及脊髓内单个核细胞CD4、CD8、CD28及CD152分子表达水平.结果 LMS同时给药促发组和预处理组EAE大鼠脊髓内单个核细胞CD4、CD28表达水平明显高于非LMS处理的EAE模型组(P＜0.01),病理变化更加明显,而CD8、CD152表达水平差异无统计学意义. 结论 LMS可促进EAE大鼠脊髓内单个核细胞CD4、 CD28的表达,提示LMS上调CD4、 CD28的表达可能与LMS诱发炎性脱髓鞘白质脑病有关.
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钙激活中性蛋白酶抑制剂对实验性自身免疫性脑脊髓炎的保护作用
目的建立豚鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)病理模型,研究钙激活中性蛋白酶(calpain)对EAE的作用.方法将牛脊髓匀浆与等量完全福(氏)佐剂充分混合,注射于豚鼠后肢足底诱发EAE.发病豚鼠分别注射calpain抑制剂与地塞米松,观察其对EAE临床症状及病理变化的影响.结果模型组豚鼠免疫致敏后相继出现明显的EAE症状,表现为行动困难,摄食减少,体重进行性下降,肢体瘫痪,发病率为87.5%(28/32).豚鼠注射calpain抑制剂后可观察到脱髓鞘病变明显减轻,神经元丢失减少,但炎性细胞浸润仍然存在.结论 calpain参与了EAE的神经病理损伤过程,calpain抑制剂对EAE有一定保护作用.
关键词： 钙激活中性蛋白酶 实验性自身免疫性脑脊髓炎 脱髓鞘 -
实验性自身免疫性脑脊髓炎豚鼠模型的建立及其病理和MRI的观察
目的探索建立实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)豚鼠动物模型,了解其病理及磁共振(MRI)的变化特点,为多发性硬化(MS)实验性治疗研究提供实验依据.方法采用注射完全福(氏)佐剂-豚鼠全脊髓匀浆(CFA-GPSCH),并辅以注射百日咳疫苗(BPV),诱导豚鼠EAE模型.分别利用光镜和MRI观察EAE豚鼠中枢神经组织(CNS)的病理与影像改变.结果豚鼠在注射抗原16 d后出现MS症状,发病率达90%以上.脑、脊髓组织可见血管周围炎细胞呈袖套样浸润并有白质脱髓鞘.MRI检查可发现中枢神经系统病变异常信号.结论采用CFA-GPSCH并辅以注射BPV诱导的EAE模型简单、经济、可靠,并具有发病率高的特点.其病理特点是血管周围炎性浸润,白质脱髓鞘.MRI可用于评价EAE豚鼠CNS病变.
关键词： 实验性自身免疫性脑脊髓炎 豚鼠 组织病理 磁共振 -
EAE大鼠中枢神经系统与外周免疫器官细胞凋亡的研究
目的比较实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)大鼠中枢神经系统(CNS)与外周免疫器官中细胞的凋亡情况.方法建立EAE大鼠模型,于病程不同阶段取脊髓与外周免疫器官通过脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)技术检测细胞凋亡情况.结果脊髓中细胞凋亡现象具有明显的时程特异性,凋亡细胞主要为淋巴细胞、巨噬细胞和小胶质细胞;脾和淋巴结中TUNEL阳性细胞数目均较少,且组内与组间差异均无显著性.结论 EAE外周免疫器官与CNS中不同的环境因素可能直接影响浸润细胞的凋亡状况.
关键词： 实验性自身免疫性脑脊髓炎 外周免疫器官 细胞凋亡 -
实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠血-脑脊液屏障功能及动态变化
目的探讨实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠血-脑脊液屏障功能的动态变化及其作用,以求进一步揭示EAE发病机制.方法检测EAE大鼠免疫后第4、6、8、10、12、14、16、18、20天血清和脑脊液(CSF)中清蛋白(ALB)含量,其CSF与血清ALB比值(QA)作为评价血-脑脊液屏障损害的指标.结果 QA值免疫后第8天即出现显著性升高,早于临床症状出现;随免疫时间的延长QA值呈逐渐增高后缓慢下降趋势,并且QA值与EAE大鼠病情评分呈显著正相关(r=0.81,P=0.001).结论血-脑脊液屏障的早期损害在EAE发病过程中具关键作用.
关键词： 实验性自身免疫性脑脊髓炎 血-脑脊液屏障 动态变化 -
T细胞疫苗接种对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠免疫机制的调节作用
目的探讨T细胞疫苗(TCV)接种对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)免疫机制的调节作用.方法取正常及EAE大鼠腹股沟淋巴结细胞,经MBP抗原诱导,制备MBP特异的TCV用于接种,以HE染色观察髓鞘病变,MTT法检测细胞毒反应,FACS方法检测T细胞亚群,ELISA方法检测血清中细胞因子含量.结果接种TCV后,CD8+细胞百分率上升,T细胞对脑细胞的杀伤率下降,血清中IFN-γ与TNF-α含量下降以及脑髓质炎症反应减弱,EAE发病率下降.结论特异性TCV接种可降低自身免疫反应性.TCV通过淋巴细胞亚群的变化及细胞因子的调节,发挥对EAE的免疫预防和治疗效应.
关键词： T细胞疫苗 Lewis大鼠 实验性自身免疫性脑脊髓炎 -
实验性自身免疫性脑脊髓炎中枢神经系统浸润细胞凋亡的研究
目的探讨实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)中枢神经系统(CNS)中浸润细胞的凋亡情况.方法用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)技术动态检测EAE病程不同阶段大鼠CNS中浸润细胞的凋亡变化.结果 TUNEL阳性细胞的数量随病情进展呈单峰曲线,形态学观察支持TUNEL阳性细胞主要为淋巴细胞、巨噬细胞和小胶质细胞.结论细胞凋亡是EAE动物CNS中浸润细胞的重要清除方式.
关键词： 实验性自身免疫性脑脊髓炎 中枢神经系统 细胞凋亡 TUNEL -
实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠小胶质细胞的变化
目的观察活化的小胶质细胞(表达主要组织相容性抗原)在实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠脊髓中的变化,探讨EAE大鼠发病相关生物学机制.方法采用免疫组化法观察豚鼠全脊髓匀浆诱导的Wistar 大鼠EAE过程中脊髓内表达MHC Ⅰ、MHC Ⅱ类抗原的小胶质细胞的变化情况.结果对照组脊髓内未发现表达MHC抗原细胞,实验组脊髓内表达MHC Ⅰ抗原细胞与表达MHCⅡ抗原细胞的分布和形态一致,小胶质细胞变化与EAE大鼠的病程一致.动物临床症状评分2分和3分EAE大鼠脊髓表达MHC抗原的小胶质细胞比评分1分大鼠明显增高(P＜0.01),恢复期EAE大鼠表达MHC抗原的小胶质细胞明显减少(P＜0.01).结论活化小胶质细胞与EAE大鼠的病情相关,提示其可能通过表达MHC抗原在EAE大鼠的发病机制中具有作用.
关键词： 实验性自身免疫性脑脊髓炎 小胶质细胞 主要组织相容性抗原 -
树突状细胞在自身免疫性脑脊髓炎发病及耐受中作用的研究
目的研究树突状细胞(dendritic cells,DCs)在实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental allergicencephlomyelitis,EAE)发病及免疫耐受中的作用.方法诱导EAE和口服耐受EAE模型,采用流式细胞仪和直接免疫荧光法观察EAE不同阶段、不同疾病程度外周淋巴结和中枢神经系统(CNS)中DCs数量的变化.结果免疫后第4、7、9天外周淋巴结DCs数量逐渐增多,第9天脑、脊髓中开始有DCs浸润,第15天DCs数量达高峰,第15、23天DCs数量与疾病症状严重程度相一致.口服耐受组与EAE组差异无显著性.结论外周淋巴结和CNS局部DCs在EAE的发生、发展、转归尤其在触发发病中起重要作用.DCs作为免疫反应的始动者,其数量变化在口服免疫耐受的产生机制中具次要作用.
关键词： 树突状细胞 口服耐受 实验性自身免疫性脑脊髓炎 多发性硬化 -
不同剂量牛型结核杆菌卡介苗对EAE模型的诱导
目的探讨实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune enccphalomyelitis,EAE)非敏感品系Wistar大鼠加用不同剂量牛型结核杆菌卡介苗(mycobacterium bovis bacillus calmette-guerin,M.bovis BCG)对EAE模型诱导的作用.方法将Wistar大鼠分为EAE1、EAE2、EAE3、EAE4共4组,然后分别用含4、8、10、12 mg M.bovis BCG/mL完全福(氏)佐剂(CFA)加豚鼠脑脊髓匀浆(GPSCH)制备不同浓度的完全抗原,分别免疫诱导Wistar大鼠EAE.观察不同剂量M.bovis BCG对诱导EAE模型发病情况、各项临床指标的影响,同时取脑和脊髓制成石蜡切片,行HE染色观察组织形态变化,行单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)mRNA原位杂交(ISH)计数其阳性细胞百分率.结果EAE3、EAE4组的发病率、体重减轻、临床症状评分、MCP-1 mRNA阳性细胞数显著高于EAE1、EAE2组(均P＜0.05).结论M.bovis BCG浓度的高低影响Wistar大鼠EAE的发病率.
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髓磷脂碱性蛋白的提纯及其对PBMC产生TNF和IFN的影响
目的探讨髓磷脂碱性蛋白(MBP)诱导EAE产生的可能原因. 方法通过酸抽提和CM-Sephadex50层析,分离提取牛MBP,观察其致EAE活性,用生物活性法检测MBP刺激的PBMC上清中TNF和IFN的活性. 结果分离纯化得到电泳1条主带的MBP,证明其具有致EAE活性,MBP刺激的PBMC可产生TNF和IFN. 结论 MBP可通过在外周刺激PBMC产生炎性因子TNF和IFN诱导EAE的产生.
关键词： 髓磷脂碱性蛋白 肿瘤坏死因子 干扰素 实验性自身免疫性脑脊髓炎 -
实验性自身免疫性脑脊髓炎动物模型的比较
目的比较两种不同品系大鼠及不同免疫原诱发的EAE模型特点.方法应用MOG35-55、同种脊髓匀浆(DA-SCH)、MBP68-86、豚鼠-MBP为免疫原,分别免疫DA大鼠或Lewis大鼠制备EAE动物模型.观察比较大鼠发病过程、临床评分及病理变化.结果应用MOG35-55或DA-SCH为免疫原致敏的DA大鼠病程呈现缓解-复发的双相病程,应用MBP68-86、豚鼠-MBP致敏Lewis大鼠而诱发的EAE模型为急性单相病程.豚鼠-MBP诱发的EAE模型发病时间匀齐、发病率高、病情也重,应用DA-SCH诱发的EAE模型病情其次重但发病时间不匀齐,MOG及MBP肽段引发的病情相对较轻.各实验组在发病高峰期组织病理变化以炎症反应为主.DA大鼠两个实验组第二次发病期炎症反应相对较轻而脱髓鞘较明显.结论不同免疫原制备的EAE模型具有不同的特点,可根据研究目的不同选取所需模型.
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基质金属蛋白酶-9在实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠的表达
目的探讨基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)在多发性硬化(MS)动物模型一实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)大鼠脑脊髓中的表达和作用.方法应用豚鼠脑脊髓匀浆与完全福(氏)佐剂(CFA)混匀于Wistar大鼠颈背部皮下注射诱导建立EAE模型,同时将单独注射CFA或NS的大鼠设为对照组.采用半定量免疫组化方法检测Wistar大鼠发病后72 h内及7、14 d不同时间段脑脊髓中MMP-9的表达,并与对照组比较.结果经免疫组化方法检测结果显示EAE大鼠脑脊髓内有特异的MMP-9表达,与对照组比较差异有显著性.发病72h内MMP-9表达高于发病后7d(P＜0.05)及发病后14 d(P＜0.01).结论EAE大鼠脑脊髓的单核淋巴样细胞有特异MMP-9表达,且发病早期MMP-9阳性细胞率高于发病后期、恢复期及对照组,提示MMP-9与EAE发病有关.
关键词： 实验性自身免疫性脑脊髓炎 基质金属蛋白酶 免疫组化 -
视神经脊髓炎动物模型制备的研究进展
视神经脊髓炎（neuromyelitis optica，NMO）是一种中枢神经系统（CNS）炎性脱髓鞘性疾病，目前主要认为是由水通道蛋白（aquaporin4，AQP4）抗体（即 NMO-IgG 抗体）所介导的自身免疫应答所致。目前 NMO 病因尚未完全明确，其动物模型的建立将有助于进一步开展发病机制和疾病干预的研究。因此，本文将对 NMO的动物模型，包括 NMO／实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis，EAE）模型、NMO 特异性抗体／补体经颅注射模型、细胞因子经颅注射模型和特异性 AQP4反应性 T 细胞诱导模型的研究进展作一综述。
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辅助T细胞17与多发性硬化的相关性
多发性硬化(MS)是一种由CD+4T细胞介导的,以中枢神经系统白质脱髓鞘炎症改变为主要表现的自身免疫病,迄今为止病因不明,实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)为MS的动物模型.起初,研究者普遍认为由白细胞介素(IL)-12诱导的辅助T细胞1(Th1)是MS发生的主要原因.然而,近来一种新型的CD4+效应T细胞,即Th17细胞的发现动摇了Th1细胞在MS中的核心地位.
