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Caveolin-1在脂多糖致大鼠肺微血管内皮细胞损伤中作用的初探
目的 观察脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对大鼠肺微血管内皮细胞(rat pulmonary microvascular endothelial cell,RPMVEC)小窝蛋白-1(caveolin-1,Cav-1)表达的影响.方法 体外培养RPMVEC,分别采用RT-PCR、原位杂交及免疫荧光检测Cav-1 mRNA及蛋白的表达,原位杂交检测LPS和蛋白激酶C(PKC)抑制剂双吲哚基顺丁烯二酰亚胺(bis-indolylmaleimide,BIM)对Cav-1 mRNA表达的影响.结果 RT-PCR和原位杂交同步检测出RPMVEC表达Cav-1基因；免疫荧光检测出RPMVEC表达Cav-1蛋白；LPS以浓度依赖方式诱导Car-1 mRNA表达增加:0.1、1、10 mg/L LPS分别孵育RPMVEC 6 h后,Cav-1 mRNA表达量随其浓度增加逐渐升高,与正常组比较差异均有统计学意义(P＜0.05);10mg/LLPS刺激RPMVEC不同时间(1h、2h、3h、6 h)后,RPMVEC中Cav-1 mRNA表达水平呈动态变化:1 h开始上升,2h达峰值,之后逐渐下降,但至6h仍高于正常水平(P＜0.05)；10 μmol/L BIM预孵育RPMVEC 1 h后,可显著下调10 mg/L LPS对Cav-1 mRNA表达的诱导效应(P＜0.05).结论 RPMVEC表达Cav-1,LPS上调RPMVEC Cav-1基因转录,PKC信号通路参与LPS对RPMVEC Cav-1基因转录的调控.
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小窝蛋白-1与P38MAPK信号通路
小窝蛋白-1是肺组织细胞膜上的一个特殊结构，在应力及高氧损伤的调控方面起着十分关键的作用；丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)是哺乳动物细胞中重要的信号转导通路，其中p38MAPK通路在细胞生长、细胞应激、炎症和凋亡等多种病生理过程中起关键作用，引起医学界的广泛关注，本文就p38MAPK信号通路及其与小窝蛋白的相关性做一综述，旨在对小窝蛋白-1在急性肺损伤中的作用进行进一步研究。
关键词： 小窝蛋白-1 p38MAPK信号通路 急性肺损伤 -
小窝蛋白-1的表达与胶质瘤细胞增殖的相关性研究
目的 研究小窝蛋白-1(caveolin-1)在人胶质瘤中的表达,探讨其在胶质瘤的发生、发展及细胞增殖中的作用.方法 应用免疫组化SP法检测80例胶质瘤和9例正常脑组织中caveolin-1与增殖细胞核抗原(PCNA)的表达情况.结果 caveolin-1在正常脑组织中全部阳性表达.80例胶质瘤中39例caveolin-1呈阳性表达,其在低级别胶质瘤中的阳性表达率高于高级别胶质瘤(P＜0.05);PCNA在正常脑组织中未见表达,80例胶质瘤中55例呈阳性表达,其在高级别胶质瘤中的阳性表达率高于低级别胶质瘤(P＜0.05).caveolin-1与PCNA在胶质瘤中的表达呈负相关性(r=-0.368,P＜0.01).结论 caveolin-1在胶质瘤中的表达对肿瘤细胞增殖起抑制作用,为胶质瘤的基因治疗提供了一个新的靶点.PCNA可作为反映胶质瘤细胞增殖、恶性程度及预后的指标之一.
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小窝蛋白-1与疾病
小窝蛋白-1(caveolin-1)是小窝(caveolae)的主要结构蛋白和调节成分,参与囊泡运输和细胞信号转导等多种生理过程,其表达异常与人类某些疾病的发生密切相关,如肺损伤、肿瘤、心血管疾病、感染性疾病等.因此,有关caveolin-1在疾病中的作用及其调控机制已成为国内外研究热点.
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红藻氨酸致痫大鼠海马Cav-1、EphrinA2蛋白的变化及肉桂醛的干预作用
目的：探讨肉桂醛对红藻氨酸（ KA）致痫大鼠海马Cav-1和EphrinA2蛋白的影响。方法60只雄性 Wistar大鼠随机分成正常组、NaCl组、癫痫组、肉桂醛低剂量（25 mg／kg）组、肉桂醛中剂量（37.5 mg／kg）组及肉桂醛高剂量（50 mg／kg）组。癫痫组和肉桂醛治疗组均采用大鼠脑右侧海马CA3区一次性注射1μg／μl KA 1μl诱发癫痫发作，NaCl对照组注射等量NaCl溶液，观察其行为学表现，Western印迹检测各组大鼠海马组织Cav-1和EphrinA2蛋白的表达。结果实验性癫痫大鼠模型制作成功，肉桂醛各剂量组和癫痫组实验动物全部达到点燃标准，肉桂醛治疗组大鼠癫痫发作潜伏期延长，发作时间明显缩短，发作级别降低。海马区Cav-1和EphrinA2蛋白的表达在正常组与NaCl组无差异（ P＞0.05）；与 NaCl组比较，癫痫组大鼠海马Cav-1和EphrinA2蛋白表达均明显增加（ P＜0.01）；肉桂醛各治疗组大鼠海马 Cav-1和 EphrinA2蛋白的表达低于癫痫组（ P＜0.05），且与肉桂醛浓度有关。结论 KA海马区注射可获得稳定的癫痫大鼠模型，肉桂醛通过降低大鼠海马 Cav-1和 EphrinA2蛋白的表达，起到抗癫痫作用。
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小窝蛋白-1反义寡核苷酸在AVP诱导大鼠心肌成纤维细胞增殖erk1/2信号转导中的作用及辛伐他汀的干预效应
目的 研究小窝蛋白-1反义寡核苷酸(cav1-AS ODN)在血管加压素(AVP)诱导的成年大鼠心肌成纤维细胞(CFs)增殖erk1/2信号转导中的作用及辛伐他汀(Sim)对cav1表达的干预效应.方法 采用脂质体导入法将cav1-AS ODN导入离体培养的成年大鼠CFs,用3H-TdR掺入法定量观察CFs增殖,蛋白免疫印迹法分析cav1-AS ODN对AVP诱导大鼠CFs增殖后磷酸化erk1/2 (p-erk1/2)、p21和细胞周期蛋白A(cyclin A)表达变化及Sim对cav1表达的影响.结果 cav1-AS ODN与10-7 mol/L的AVP共同干预组,大鼠CFs内3H-TdR掺入率和p-erk1/2蛋白表达量分别相当于空白对照组的(212±6)% 和(7.9 ± 0.3)%,10-7mol/L的AVP单独干预组的3H-TdR掺入率和p-erk1/2表达量分别相当于空白对照组的(172±4)%和(5.7±0.2)%,两组比较差异非常显著(P<0.01).cav1-AS ODN单独干预或与10-7mol/L的AVP共同干预大鼠CFs 24 h后,两组CFs内p21表达丰度均较空白对照组下降,cyclin A表达丰度升高.β-环糊精、黄体酮或Sim可减少CFs胞膜上cav1蛋白表达.用10、15或20 μg/ml胆固醇分别与10-7 mol/L Sim共同干预CFs 24 h后,CFs胞膜上cav1蛋白表达量分别相当于对照组的(86±3)%、(91±4)%和(94±5)%,与10-7mol/L Sim单独作用CFs组(66±4)%比较,均有显著的统计学差异(P<0.05,P<0.01).结论 cav1-AS ODN可增强AVP促CFs增殖的作用,Sim降胆固醇作用影响CFs胞膜上cav1蛋白表达,从而影响CFs增殖.
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白藜芦醇对同型半胱氨酸损伤的人脐静脉内皮细胞的Akt通路和小窝蛋白的影响
目的：探讨Akt通路和小窝蛋白-1（Cav-1）在白藜芦醇（Res）抗人脐静脉内皮细胞（HUVEC）模型动脉粥样硬化（AS）过程中的作用。方法利用同型半胱氨酸（ Hcy）诱导内皮细胞损伤模型，测定Res对于 Akt蛋白表达的影响。通过哌立福新抑制Akt蛋白表达后，观察 Res对一氧化氮（NO）系统及Cav-1表达的作用。进一步利用siRNA抑制Cav-1的表达后，进一步研究Res对NO系统的影响。结果（1）白藜芦醇可抑制Akt蛋白的表达；（2）在抑制Akt蛋白表达后，NO系统表达明显升高，且与Res浓度呈正相关，而 Cav-1表达无明显变化，但在加入Res后Cav-1表达明显下降；（3）siRNA沉默Cav-1后，NO系统表达明显升高，且与Res无浓度依赖性。结论 Res通过抑制Cav-1的表达，抑制Akt活性，促进NO系统的作用，改善AS。
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COPD大鼠肺组织中小窝蛋白-1的表达及其与气道重塑的关系
目的:探讨小窝蛋白-1(Caveolin-1)在COPD大鼠肺组织中的表达及其与气道重塑的关系.方法:采用10周龄Wister大鼠20只,随机分为对照组与实验组,每组10只,对照组常规饲养,实验组采用烟熏法+内毒素法建立COPD模型.第91天处死全部大鼠,测定肺功能后取肺组织,采用免疫组织化学法检测Caveolin-1的表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组大鼠肺组织匀浆中白细胞介素-8(1L-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β1 (TGF-β1)的含量;分析Caveolin-l的表达与IL-8、TNF-α、TGF-β表达的相关性.结果:与对照组比较,实验组大鼠的肺顺应性明显下降,肺弹性阻力及气道阻力显著升高,肺组织TNF-α、IL-8、TGF-β1的含量明显升高,Caveolin-1的表达明显降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).大鼠肺组织中Caveolin-1的表达与IL-8、TNF-α、TGF-β1含量呈显著负相关(]P＜0.05).结论:Caveolin-1在COPD大鼠肺组织中的表达明显降低,可能通过促进炎性细胞因子的释放与气道重塑参与COPD的发生和发展.
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脂多糖诱导急性肺损伤大鼠肺组织小窝蛋白-1的变化
目的 探讨小窝蛋白-1(caveolin-1,Cav-1)在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS) 诱导急性肺损伤(acute lung injury,ALI)大鼠肺组织中的变化.方法复制LPS致大鼠ALI 模型,40只SD大鼠按随机数字表法分为生理盐水对照组(NS 5 mL/kg,n=8),LPS组(5 mg/kg LPS尾静脉注射,分别观察3、6、24 h,n=8),甲泼尼龙组(5 mg/kg早泼尼龙,LPS刺激后观察6 h,n=8).分别采用Western-blot、RT-PCR、免疫组织化学法检测不同时间点肺组织中Cav-1蛋白及mRNA表达.结果 LPS组大鼠肺组织病理损伤程度重,肺组织Cav-1蛋白表达明显低于对照组,Cav-1 mRNA表达也低于对照组.LPS以时间依赖方式下调Cav-1蛋白(3 h组:2.452±0.179,6 h组:1.863±0.175,24 h组:2.734±0.247)及 mRNA(3 h组:1.073±0.139,6 h组:0.628±0.090,24 h组:1.293±0.376)表达,组间比较差异有统计学意义(F值分别为23.440、47.922,均P<0.01).与LPS刺激6 h组相比,甲泼尼龙组肺组织病理损伤程度减轻,LPS刺激下调Cav-1蛋白(1.863±0.175 vs 2.644±0.333,P<0.01)和mRNA(0.628±0.090 vs 1.527±0.092,P<0.01)表达的效应被部分抑制.结论 LPS诱导ALI大鼠肺组织Cav-1表达下调与ALI发病密切相关,且该效应被甲泼尼龙抑制能有效地减轻肺损伤程度.
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白藜芦醇对衰老的人脐静脉内皮细胞小窝蛋白-1表达的影响
目的:观察小窝蛋白-1(Cav-1)在白藜芦醇(Res)作用于衰老的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)中的变化.方法:体外培养HUVECs,通过传代形成细胞的衰老模型,以衰老相关β-半乳糖苷酶活性、细胞增殖能力和p53、p21蛋白为衰老标志物进行观察.通过不同浓度Res作用衰老的HUVECs后,SA-β-gal法检测β-半乳糖苷酶活性、流式细胞术检测细胞周期来反映细胞增殖能力,Western blot蛋白印迹法检测p53、p21和Cav-1蛋白表达.结果:与衰老组相比,随着Res作用浓度的增加,各用药组蓝染细胞逐渐减少(P<0.05),但与青年组相比,蓝染细胞增多(P<0.01);与衰老组比较,Res不同浓度组G0/G1 期细胞比例均降低(P<0.01),S期细胞比例均明显增多(P<0.01),但与青年组相比,G0/G1 期细胞比例增高(P<0.01);与衰老组比较,Res不同浓度组p53、p21和Cav-1表达均降低,且呈Res浓度依赖性.结论:Res可以延缓HUVECs衰老,其分子机制可能与下调衰老细胞Cav-1表达有关.
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细胞膜微结构域中胆固醇对小鼠巨噬细胞摄取土拉弗朗西斯菌的作用
本文旨在探讨细胞膜微结构域中胆固醇在小鼠巨噬细胞摄取土拉弗朗西斯菌LVS株中的作用.用电穿孔法将穿梭质粒pFNLTP6 gro-gfp导入土拉弗朗西斯菌LVS株;细胞胆固醇用菲律平Ⅲ染色,结合单克隆抗体的小窝蛋白-1用键合了Alexa 594的羊抗鼠二抗显色;用Z轴电动聚焦的荧光显微镜分析土拉弗朗西斯菌LVS株感染;用甲基-β-环糊精干扰富含脂质的胞膜,损耗胆同醇,以评估膜微结构域的损伤对土拉弗朗西斯菌入侵的影响,菲律平Ⅲ用于检测胆固醇损耗的效果.结果显示,细胞胆同醇在早期与摄取的土拉弗朗西斯菌疫苗株共定位,膜微结构域相关成分小窝蛋白-1与两者接触密切;土拉弗朗西斯菌入侵巨噬细胞需要胆固醇丰富的膜结构域.结果提示,胆固醇丰富的膜微结构域和小窝蛋白-1在土拉弗朗西斯菌早期进入巨噬细胞过程中发挥重要作用.
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低强度脉冲超声对兔桡骨骨折愈合及小窝蛋白-1基因表达的影响
目的 探讨低强度脉冲超声(low-intensity pulsed ultrasound,LIPUS)对长管状骨骨折愈合的作用,测定LIPUS作用下兔桡骨骨折部位小窝蛋白-1(caveolin-1)局部表达情况.方法 在24只新西兰白兔双侧桡骨中下1/3处制作宽为3 mm的骨缺损模型,按随机数字表法平均分为4组(n=6).右侧桡骨骨折处给予强度为30 mW /cm2的LIPUS刺激,每天1次,每次20 min,左侧桡骨骨折处给予切断电源的假刺激.各组实验动物分别于术后第7、14、21、28天,采用X线片、HE染色评价骨折愈合情况,免疫组化染色检测小窝蛋白-1水平与定位,实时荧光定量PCR检测小窝蛋白1、软骨和骨特异基因Col2a1、Col10a1及骨钙蛋白(osteocalcin)的mRNA水平.结果 自第14天起,实验侧X线评分和矿化骨痂面积均显著大于对照侧,二者随治疗时间的延长而逐渐增高;HE染色提示实验侧软骨细胞分化、凋亡,形成原始骨小梁和骨小梁的融合等过程均早于对照侧.免疫组化染色显示术后第7、14天,随着软骨细胞的增殖、分化,小窝蛋白-1水平逐渐增加,实验侧显著大于对照侧;第21、28天,迁移至软骨基质表面的间充质细胞开始向成骨细胞分化,小窝蛋白1水平降低,实验侧显著低于对照侧.实时荧光定量PCR结果显示:实验侧小窝蛋白-1mRNA水平在第7天显著高于对照侧,在第21天却显著低于对照侧;实验侧Col2a1,Col10a1及骨钙蛋白mRNA水平在第7、14天显著高于对照侧,在第21天却显著低于对照侧,在第28天实验侧Col2a1和骨钙蛋白mRNA水平显著低于对照侧.结论 LIPUS可通过促进软骨内成骨加速长管状骨骨折愈合,推测可能与先上调软骨细胞,随后下调间充质细胞小窝蛋白-1的表达有关.
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Caveolin-1介导张氏肝细胞X射线诱导的DNA损伤修复的信号转导
已知Caveolin-1 (Cav-1)是胞膜窖的重要结构蛋白,通过介导多条信号转导途径广泛参与细胞的生理和病理过程.引人关注的是,Cav-1的表达通常具有组织特异性和功能多样性,在乳腺癌、肝癌等肿瘤的发生和发展中起到重要的调节作用.近年研究表明,Cav-1参与胰腺癌细胞放射引起的DNA损伤修复过程,从而对放疗产生抵抗.但其是否对其它种类细胞的DNA损伤也存在类似作用并不清楚.本文采用RNA干扰技术建立稳定敲低Cav-1表达的张氏肝细胞系(Chang liver cell line,CHL),即CHL-CAV7细胞,旨在探讨Cav-1在CHL细胞DNA损伤修复中的作用.Western blot结果显示,与转染非靶向质粒的对照细胞(CHL-C细胞)相比,CHL-CAV7细胞Cav-1蛋白表达水平被抑制了60％.采用X射线对细胞进行辐射,并对细胞的存活能力及DNA损伤修复相关蛋白的表达水平进行检测.克隆形成实验结果显示,在8和10 Gy X射线照射下,CHL-CAV7细胞的存活能力相对CHL-C细胞明显降低.Western blot结果显示,与CHL-C细胞相比,CHL-CAV7细胞照射后γH2AX蛋白表达量增加,p-ATM、DNA依赖蛋白激酶催化亚单位(DNA-dependent protein kinase,catalytic subunit,DNA-PKcs)和p53蛋白表达量减少.免疫荧光分析结果显示,CHL-CAV7细胞Mdm2和Cav-1的共定位相对CHL-C细胞显著减少.上述结果提示,Cav-1表达下降后,CHL细胞DNA的损伤加重,这可能与Cav-1与Mdm2相互作用减少,进而导致p53的降解增加有关.本文为了解肝细胞的放疗抵抗作用机制提供了一定的实验依据.
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CD147相互作用蛋白及其细胞生物学功能
CD147(basigin、EMMPRIN、neurothelin、M6、HAb18G等)是一个跨膜糖蛋白家族,广泛表达于各种上皮细胞,但其表达在大鼠、小鼠、鸡和人等不同种属间存在很大差异性.CD147高表达于上皮来源的肿瘤细胞表面,如肺癌、乳腺癌和肝癌等.CD147抗原胞外段有2个IgSF结构域,跨膜区有一个带电谷氨酸(Glu)残基,胞内段含有40个氨基酸.CD147的结构特点提示其可能参与蛋白-蛋白相互作用.由于CD147分子的3D结构信息还没有获得,与其相互作用的分子还没有完全明确,但近来应用黏附、免疫共沉淀等实验方法,一些研究报道提示,CD147可与整合素(integrin)、环亲合素(cyclophilins)、单羧酸转运器(monocarboxylate transporter,MCT)等蛋白相互作用,而这些蛋白可能作为CD147分子的候选配体或受体,通过蛋白-蛋白相互作用,介导广泛的上皮细胞生物学功能.
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磷酸化小窝蛋白-1在食管癌细胞中的表达及意义
目的 检测磷酸化小窝蛋白-1(PY14Cav-1)在食管癌细胞中的表达,探讨其表达的意义.方法 体外培养人食管癌株TE1细胞,检测TE1细胞中PY14Cav-1的表达水平,通过细胞转染技术以Cav-1小干扰RNA转染TE1细胞,使细胞中PY14Cav-1表达水平降低,用Transwell细胞体外侵袭实验观察细胞侵袭情况.结果 转染Cav-1siRNA后,食管癌细胞TE1中Cav-1和PY14Cav-1表达水平均较转染前明显下降(p均＜0.05),而Transwell结果显示,转染Cav-1 siRNA后,细胞侵袭数目为(7.4±1.2)个,较转染前[(49.2±3.6)个]明显减少(P＜0.01).结论 Cav-1在食管癌的发生发展过程中扮演着促癌基因的角色,其机制可能与调节PY14Cav-1的表达有关.
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小窝蛋白-1与食管癌细胞迁移之间的关系
目的 探讨小窝蛋白(Cav)-1在食管癌细胞迁移中的作用,并探讨两者之间的关系.方法 体外培养人食管癌TE13细胞株,采用Cav-1小干扰RNA(siRNA)转染TE13细胞(转染组),以未转染细胞为对照(NC)组.采用蛋白免疫印迹(Western blot)实验检测细胞的Cav-1表达水平,采用划痕实验观察细胞迁移情况,探讨Cav-1和食管癌细胞迁移的关系.结果 Western blot实验结果显示,食管癌TE13细胞高表达Cav-1,转染siRNA后细胞Car-1表达水平较转染前明显下降,转染组和未转染组细胞的灰度值分别为(1.98 ±0.34)和(3.15 ±6.10),两者比较差异有统计学意义(t=4.26,P＜0.05).划痕试验结果显示,未转染组在划痕后24 h痕间距明显缩窄,部分痕区域细胞密集;而转染组细胞在划痕后24 h痕间距未见明显缩窄.表明转染后细胞的迁移能力较转染前明显下降.结论 Cav-1在食管癌的发生、发展过程中扮演着促癌基因的角色,抑制Cav-1表达可能抑制食管癌的进展.
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ROCK抑制剂对人食管癌EC9706细胞迁移能力的影响
目的 研究ROCK特异性抑制剂Y-27632对人食管癌EC9706细胞迁移能力的影响,并探讨其可能的机制.方法 体外培养人食管癌株EC9706,加入20μmol/L的Y-27632溶液(实验组)及等体积的PBS(对照组)培养1h,采用细胞计数、MTT实验检测细胞生长情况,采用Transwell实验观察细胞迁移情况,采用Western blot检测Cav-1的表达水平,并进行两组的比较.结果 细胞计数、MTT、Transwell实验结果显示,Y-27632可以抑制细胞的生长与迁移能力,与对照组比较差异有统计学意义(P均＜0.05).Western blot检测结果显示,Y-27632处理细胞1h后,Cav-1蛋白表达水平明显下降,并明显低于对照组(P均＜0.05).结论 ROCK信号通路参与EC9706细胞生长与迁移的调节,Y-27632可以抑制EC9706细胞的生长及迁移能力,其机制可能与下调Cav-1的表达有关.
关键词： 食管癌 Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶 小窝蛋白-1 Y-27632 -
ROCK抑制剂对TE13细胞生长及迁移能力的影响
目的 通过在体外用Rho相关卷曲螺旋形成的蛋白激酶(ROCK)特异性抑制剂Y-27632处理人食管癌细胞株TE13,观察Y-27632对TE13的生长及迁移能力的影响,并探讨其可能机制.方法 体外培养人食管癌株TE13,分别用不同浓度的Y-27632(2.5、5、10、20 μmol/L)处理细胞24h,对照组加等体积PBS,采用细胞计数、MTT检测细胞生长情况,采用划痕实验观察细胞的迁移能力,采用Western blot检测小窝蛋白(cav)-1的表达水平.结果 Y-27632可以促进细胞的生长与迁移能力,随着时间的增加促进效果越明显,与对照组比较存在明显差异(P＜0.05).Y-27632可以上调cav-1表达水平.结论 ROCK信号通路参与TE13细胞生长与迁移的调节,Y-27632可以增加TE13细胞的生长及迁移能力,其机制可能与上调cav-1的表达有关.
关键词： 食管癌 Rho相关卷曲螺旋形成的蛋白激酶 小窝蛋白-1 Y-27632 -
筛选有效抑制血管内皮细胞小窝蛋白-1表达的小干扰RNA及其毒性检测
目的 筛选有效抑制血管内皮细胞小窝蛋白-1(Caveolin-1)表达的小干扰RNA(small interferenceRNA,siRNA)序列,并检测转染复合物的细胞毒性. 方法 设计合成针对Caveolin-1的siRNA 3条(siRNA422,siRNA548,siRNA710)及1条带绿色荧光标记的通用阴性对照FAM-siRNA.在siRNAFect介导下转染血管内皮细胞.用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)测定转染后血管内皮细胞中Caveolin-1 mRNA的表达,Western blot方法测定干扰后Caveolin-1蛋白表达,比较抑制率,筛选出有效抑制Caveolin-1表达的siRNA.采用磺基罗丹明B法(sulforhodamineB,SRB)分析转染复合物的细胞毒性. 结果 ①在siRNAFect相同剂量下,siRNA 20、30 nmol/L组或40 nmol/L组转染效率均达到85％以上(P＜0.01)；②siRNAFect 1.3μl复合10 nmol/L或20 nmol/L siRNA组细胞存活率均达到80％以上(P＜0.05)；③siRNA548对EA.hy926细胞Caveolin-1基因mRNA抑制效果明显(P＜0.01)；④与阴性对照组及siRNA422、siRNA710相比较,siRNA548干扰血管内皮细胞48 h后,Caveolin-1蛋白的表达量低(P＜0.01). 结论 ①siRNA548对血管内皮细胞Caveolin-1表达的抑制效果大.②siRNA浓度20 nmol/L复合siRNAFect 1.3μl转染效率高,细胞毒性低,适合转染.
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异丙酚对兔离体气管平滑肌舒张作用机制的研究
目的 探讨异丙酚在正常和炎症状态下对气管平滑肌收缩作用的影响及其机制.方法 8只健康新西兰大白兔,每次试验用气栓法处死1只,每只兔制备8个气管平滑肌条,依据悬挂气管平滑肌条的营养液中处理因素不同,采用随机数字表法将气管平滑肌条随机分为8组即(每组8个):a组(0 μmol/L),b组(异丙酚300 μmol/L),c组(环糊精-β10 mmol/L),d组(环糊精-β 10 mmol/L+异丙酚300μmol/L),e组(0μmol/L),f组(异丙酚300 μmol/L),g组(环糊精-β10 mmol/L),h组(环糊精-β10 mmol/L+异丙酚300 μmol/L).e,f,g,h4组气管平滑肌条浸于浓度为50 μg/L肿瘤坏死因子-α溶液里,并通以95％O2和5％CO2在4℃恒温冰箱冷藏12 h以供试验.用Medlab生物采集系统记录平滑肌条不同时间点张力值变化.免疫组化法测定小窝蛋白-1表达.结果 与a组(1.28±0.12、1.25±0.13、1.23±0.16、1.22±0.19)比较,b组(0.86±0.13、0.61±0.11、0.51±0.17、0.51±0.18)、c组(1.18±0.15、1.08±0.13、0.98±0.15、0.89±0.16)、d组(0.98±0.12、0.84±0.14、0.80±0.14、0.78±0.17)T1-4时间点张力值降低,差异有统计学意义(P＜0.05)；与b组比较c、d两组T1-4各时间点张力值高,差异有统计学意义(P＜0.05)；与e组(0.92±0.16、0.91±0.12、0.89±0.13、0.81±0.16)比较,f组(0.41±0.12、0.22±0.14、0.13±0.14、0.12±0.14)、g组(0.80±0.15、0.78±0.13、0.75±0.15、0.72±0.17)、h组(0.79±0.12、0.70±0.12、0.68±0.16、0.68±0.19)T1-4时间点张力值降低,差异有统计学意义(P＜0.05)；与f组比较g、h两组T1-4时间点张力值高,差异有统计学意义(P＜0.05)；a、e两组小窝蛋白-1为高表达；b、f两组小窝蛋白-1为低表达；c、d、g、h4组小窝蛋白-1为阴性.结论 异丙酚直接舒张气管平滑肌的机制可能与其抑制小窝蛋白-1的表达有关.
