人源多克隆抗血清识别的HBsAg模拟表位筛选

目的获得与乙肝病毒表面抗原(HBsAg)人源抗血清特异结合的噬菌体呈现模拟多肽,加深对乙肝病毒表面抗原(HBsAg)B细胞表位的了解.方法基于噬菌体小衣壳蛋白(gpⅢ)构建12氨基酸随机肽库.经混合多克隆人源HBsAb阳性血清的三轮筛选,阳性噬菌体经ELISA和竞争实验证实,并测定其对应呈现多肽的插入序列,分析其氨基酸序列与HBsAg的相似性.结果两个噬菌体颗粒在ELISA实验中呈阳性,其中之一被竞争实验证实,此模拟多肽序列与HBsAg135～146相似.结论采用疾病抗原的人源多克隆抗血清筛选噬菌体随机肽库,能获得抗原的模拟表位,从而为了解被人源抗血清识别的抗原表位提供了技术手段.

白细胞与乙肝病毒携带者的关系比较

白细胞(WBC)计数是血液常规检验的项目,而乙肝病毒表面抗原(HBsAg)是肝功能的常规检验之一.笔者就二者的关系做一比较,以探讨影响HBV感染、预后、转归的因素.

AD正态性检验在HBsAg内部质量控制中的应用

目的 利用AD正态性检验建立完善的Levey-Jennings内部质量控制图,实现对HBsAg定量测量系统的全面质量控制.方法 按Levey-Jennings规则绘制控制图并验证其临床适用性,首先用Grubbs法剔除HBsAg各月质控数据离群值;然后借助Minitab软件对各月及月间合并数据进行Anderson-Darlin(AD)正态性检验;其次对符合正态分布的各月质控数据进行均值/标准差(-x/s)合并统计分析(t和F检验),判断月间-x和s是否具有统计学差异;后根据分析结果判断能否计算累积-x和s用于绘制Levey-Jennings控制图.结果 按Levey-Jennings规则仅检出第2个月有1个离群值;第1个月及两月合并数据均呈非正态分布(AD分别为1.777和3.090);两月t检验值为1.62,小于t界值,F检验值为4.81,大于F界值,两月数据不能合并.Grubbs法检出第1个月有3个离群值、第2个月有1个离群值;剔除离群值后第1个月及两月合并数据均呈正态分布(AD分别为0.394和0.604);两月t和F检验值分别为0.11和1.33,均小于相应界值,两月数据可合并.结论 只有当质控数据通过AD正态性检验及x/s合并统计分析后,才能计算累积-x和s,并按照Levey-Jennings规则绘制内部质量控制图.

藻胆蛋白免疫荧光法检测血清HBsAg的初步结果

目的　研制藻胆蛋白荧光标记诊断试剂盒。方法　结合检测乙肝病毒表面抗原(HBsAg),以硝酸纤维素膜作为固相包被载体，采用藻胆蛋白免疫荧光一步法检测和酶联免疫吸附(ELISA)法对定值的标准质控抗原HBsAg样品以及500份血清样品进行同时测定。结果　目前本法用于血清抗原的检测是可行的，与ELISA法比较，无假阳性现象，随机检出率达96.6%。结论　进一步提高该方法的检出灵敏度，使之有望成为一种优良、安全、快速的检测标记方法。

早期乙肝病毒表面抗原及其突变体检测:五种试验方法比较

电化学发光法和酶联免疫法检测低水平HBsAg

目的 比较电化学发光免疫分析(electro-chemiluminescence immunoassay,ECLIA)和酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测低值乙肝病毒表面抗原(HBsAg)的结果,为选择佳临床检测策略提供依据.方法 先以时间分辨免疫荧光(time resolved fluorescence immunoassay,TRFIA)试剂盒进行血清标本HBsAg定量,再分别用ECLIA进口试剂盒、ELISA国产试剂盒做定性检测,并对结果进行统计分析.结果 在348例TRFIA法检测乙肝病毒表面抗原浓度介于(0.5 ～1.0)ng/ml的临床标本中,ECLIA和ELISA 2种方法检测HBsAg皆为阳性的有310例；电化学发光检测阳性有340例,ELISA检测阳性有312例,二者阳性符合率90.8％.对32例二者不符合的标本用时间分辨免疫荧光分析复查,ECLIA(+)ELISA(-)的30例TRFIA复检仍为阳性；ECLIA( -)ELISA(+)的2例TRFIA复检亦为阳性.ECLIA与ELISA在对低水平HBsAg的检出差异有统计学意义(x2=22.781,P＜0.01).结论 ECLIA比ELISA的特异性好和敏感度高.在临床诊治与检测低水平的乙肝病毒携带者建议用具有更高灵敏度和特异性的方法.

血站血液检测实验室设备性能比对方法探讨

目的 探讨血站血液检测实验室不同检测设备性能比对的方法.方法 1)比较不同型号的全自动血型仪的检测性能:采用2台全自动血型仪对1 519(人)份常规献血者血样检测,应用Kappa检验评估2台血型仪检测结果的一致性.2)比较相同型号的全自动生化仪检测性能:采用2台全自动生化仪近7个月的室内质控品检测值计算不精密度,比较2台仪器的比对偏差;同时采用符合既定设计要求的40(人)份献血者标本在2台生化仪上检测,以回归分析比较2台全自动生化仪检测结果一致性.3)比较多台全自动酶免检测系统检测性能:采用4台全自动标本处理系统、6台全自动酶免检测系统和8种ELISA检测试剂,分别检测HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、TP血清盘和80(人)份常规血样,应用x2比检验和Kappa检验,比较4台全自动标本处理系统和6台全自动酶免检测系统检测结果的一致性.结果 1)2台全自动血型仪平行检测猷血者血样结果的一致率为99.0％(1 504/1 519),Kappa检验证明2者一致性为优. 2)2台全自动生化仪低值质控标本(PNU)和高值质控标本(PPU)的比对偏差分别为0.26％和0.86％,均低于分析质量要求(＜6％);40份ALT在(20～60)U/L的标本在2台全自动生化仪上的检测结果经回归分析证明两者一致性为优(P＞0.05).3)4台标本处理系统检测抗-HCV(万泰试剂)一致性100％ (80/80)为优;6台全自动酶免检测系统检测HBsAg除1种试剂(新创)6台仪器结果一致性≥99.2％ (119/120)、抗-HIV 1种试剂(生物梅里埃)6台仪器结果一致性≥99.2％ (119/120)外,其余试剂一致性均为100％ (120/120),经x2检验6台仪器一致性为优(P＞0.05.).结论 对于包含多个结果分类的血型检测系统,至少1周的检测系统间平行试验是需要的;全自动生化仪性能比较适宜采用包含不同浓度的实际血液标本来比较;全自动酶免系统的性能比较适宜采用含有一定数量阴性和阳性的血清盘标本和常规标本.

乙肝基因疫苗系列质粒的构建及其在真核细胞中的表达

目的构建一系列乙肝病毒表面抗原大、中、小蛋白的真核细胞表达质粒，并研究其在真核细胞中的表达情况。方法采用常规PCR法扩增S、前S2-S、前S1-前S2-S片断，利用重叠PCR法扩增出前S1-S片断后，分别插入Rc/CMV及pSG5UTPL/Flag载体质粒中，并在其ATG起始密码前加入KOZAK序列后转染SP2/0细胞，Western-Blot杂交检测所表达蛋白，并用核酸自动分析仪分析所插入片断的核酸序列。结果插入片断的核苷酸序列与相应的大、中、小蛋白和前S1-S 蛋白的编码基因一致，Western-Blot杂交检测出了相应的目的蛋白。结论获得了8个能高效表达乙肝病毒表面抗原大、中、小蛋白和前S1-S蛋白的真核细胞表达质粒。

84例乙型病毒性肝炎临床诊断与病理诊断对照分析

我院于1990年1月至2000年12月对84例血清学检查乙肝病毒表面抗原阳性、临床诊断为乙肝病毒表面抗原携带者及不同类型乙型病毒性肝炎患者进行了肝穿刺活组织检查,发现临床诊断与病理诊断之间存在一定差异.现将临床诊断及病理诊断进行比较分析,报告如下.

不同HBsAg疫苗联合免疫后诱导小鼠细胞和体液免疫应答的研究

目的:了解HBsAg的蛋白疫苗(P)、痘苗病毒疫苗(V)、DNA疫苗(D)联合免疫小鼠诱导的特异性体液和细胞免疫应答.方法:以P 、V或D 疫苗中的一种疫苗初次免疫BALB/c小鼠后,于第2、5、8、11周再用另一种疫苗加强,共产生9种免疫组合:即PP、PV、PD、VP、VV、VD、DP DV及DD.于初免后第2、5、8、11周采血检测血清中抗HBsAg IgG的总滴度及其IgG1和IgG2a亚类,并于每次加强免疫后第7天,检测小鼠脾脏的CTL对P815S细胞的特异性杀伤率.结果:在P、V、D 3种疫苗中,V疫苗诱导产生抗HBsAg抗体的速度快,P疫苗诱导的体液免疫回忆反应强,D疫苗诱导产生的抗体弱.除PP 疫苗组合诱导的抗体明显倾向于IgG1外,其他均无明显的倾向性.各种免疫组合中,VD和DV疫苗组诱导的CTL应答强,对P815S的特异性杀伤率分别为71%和64%.结论:在各种联合免疫组合中,PV、PD、VP和VD疫苗组的抗体应答较好;而DV和VD疫苗组诱导的CTL杀伤效应强.

酶联免疫吸附法测乙肝病毒表面抗原假阳性原因的分析及解决方法

乙肝病毒表面抗原(HBsAg)为乙肝病毒感染的主要的病原标志和直接证据之一.酶联免疫吸附试验(ELISA)法是临床进行乙型肝炎病毒(HBV)诊断的主要方法之一,其试验灵敏度高,特异性好的特点在临床上得到了广泛的应用,但操作中的各个环节对试验的检测结果影响较大.

乙肝病毒表面抗原检测双质控比率质控方法

应用平滑曲线上相近两点近似直线的数学模型建立了一种新的乙肝病毒表面抗原(HBsAg)检测的质量控制方法.既能反映实验误差,又能屏蔽掉影响总体检测结果的实验干扰.使日间质控数据的变异系数降低到10%左右,批内变异系数降低到5%左右.

19856例术前四项检测结果的讨论

目的通过对19586例样本乙肝病毒表面抗原(HBsAg),抗丙肝病毒抗体(抗-HCV)，抗艾滋病抗体(抗-HIV)，抗梅毒螺旋体(抗-TP)检测结果的讨论。了解2012~2014年福建省平潭县医院患者四种病原体的感染情况，探讨进行术前四项检测的重要性。方法应用化学发光微粒子免疫法对19856例样本进行HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP的检测。结果 HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP阳性率分别为17.64%、0.35%、0.02%、2.47%；2012~2014年期间，HBsAg、抗-HCV的阳性率呈现递减趋势，感染人群以》30岁患者为主，抗-HIV、抗-TP的阳性率呈现递增趋势，其中HIV感染人群以≤60岁患者为主，而TP感染人群以≥60岁患者为主。结论进行术前四项检测，有助于了解平潭地区的感染情况，对制定感染的预防及治疗措施，避免院内感染的发生具有十分重要意义。

乙肝病毒表面抗原基因在胡萝卜中的克隆及表达

构建HBV表面抗原(HBsAg)植物表达载体并在胡萝卜植株中表达.采用自行构建adr亚型HbsAg基因克隆T-adr,再次酶切获得860 bp含PreS2的HBsAg基因片段,将其插入到植物表达载体pBPC55,新质粒命名为pBPC91adr.将其与含除草剂抗性基因及GUS蛋白基因的筛选质粒pBPC93共同经基因枪(PDS-1000/He)转化胡萝卜悬浮细胞,经含除草剂(Biolaphos)的培养基筛选及植物激素诱导分化,获得除草剂抗性胡萝卜幼苗.结果为转化后8周,自胡萝卜细胞中分化出除草剂抗性胡萝卜幼苗.提取新分化幼苗总DNA,特异性引物PCR扩增后可见860 bp扩增带;Southern-Blot证明有HBsAg基因整合,胡萝卜蛋白萃取物的Westem-Blot及ELISA检测证实有HBsAg蛋白表达.利用基因枪转化使质粒pBPC91adr中HBsAg基因在胡萝卜幼苗内整合并表达,提示以植物生产疫苗具有可行性.

鱼山镇1岁以上人群不同年龄组乙肝表面抗原携带率与乙肝疫苗接种关系的调查

研究鱼山镇乙肝疫苗接种率不同人群的乙肝病毒表面抗原(HBsAg)携带率的差异.将该镇所有户籍登记在册人员按出生日期分成3组,再按随机抽样法对每个年龄组抽取一定数量的人组成样本,调查乙肝疫苗接种史；对每位参加者采集静脉血5ml,无菌分离血清,使用固相放射免疫试剂和酶联免疫试剂检测乙肝病毒表面抗原和抗乙肝病毒表面抗原抗体(HBsAb,抗-HBs).小年龄组、中年龄组、大年龄组乙肝疫苗接种率依次为80.00%、50.46%、25.36%,差异具有统计学意义(x2=262.24,P＜0.005)；小年龄组、中年龄组、大年龄组HBsAg携带率依次为2.07%、11.93%、17.87%,差异具有统计学意义(x2=77.48,P＜0.005)；小年龄组、中年龄组、大年龄组HBsAb依次为43.38%、24.77%、10.95%,差异具有统计学意义(x2= 107.28,P＜0.005).乙肝疫苗接种率在小年龄组、中年龄组、大年龄组依次降低,HBsAg携带率依次增高,HBsAb阳性率依次降低.因此,接种乙肝疫苗对人群有较好的保护作用,人群乙肝疫苗接种率越高,HBsAb阳性率越高,HBsAg携带率越低.

新生儿国产重组(酵母)乙型肝炎疫苗免疫效果考核

为了考核新生儿接种国产重组(酵母)乙型肝炎(乙肝)疫苗后的免疫效果,并与血源乙肝疫苗效果比较.对1997年出生并接种重组(酵母)乙肝疫苗的新生儿隔年随访一次,采血检测乙肝病毒表面抗原(HBsAg),乙肝病毒表面抗体(抗-HBs)和乙肝病毒核心抗体(抗-HBc),1998年以后对乙肝免疫人群开展急性乙肝发病监测.显示五年期间3次随访检测HBsAg阳性率平均为1.5%,较免前本底的HBsAg阳性率呈较大幅度下降,疫苗保护率为83%(95%可信区间为76.97%～89.02%),无论母亲HBsAg阳性或阴性,使用不同乙肝疫苗的儿童HBsAg阳性率没有统计学差异.接受重组(酵母)乙肝疫苗免疫的对象中,无一例急性乙肝病例报告.重组(酵母)乙肝疫苗有较好的近期保护效果和免疫原性,与以前使用血源乙肝疫苗效果相当.

湖南省HIV患者合并感染HBV及HCV现状调查及风险因素分析

目的 对湖南省人类免疫缺陷病毒(HIV)感染者合并乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)感染的情况进行流行病学调查,统计和分析合并感染发生率及各种影响因素.方法 收集湖南省疾病预防控制中心和衡阳市疾病预防控制中心2006-2008年确诊的HIV阳性患者血样974份,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测乙肝五项(HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc)和HCV抗体;用SPSS软件对不同情况下HIV患者合并感染HBV或HCV的发生率进行统计学分析.结果 974例HIV感染者中,男性756例,女性218例,年龄1.5～85.0岁,平均(37.5±10.0)岁;HBsAg阳性患者185例(18.99%),HBeAg阳性患者34例(3.49%),抗-HBc阳性者673例(69.10%);抗-HCV阳性者597例(61.29%).HIV、HBV和HCV三重感染者115例,约占11.81%.χ2分析显示,男性及青壮年(26～45岁)的HIV/HCV合并感染率以及HIV/HBV/HCV三重感染率显著高于女性和其他年龄组(P<0.01);静脉吸毒史是HIV/HCV感染和三重感染的危险因素,未发现同性或异性性行为与合并感染有直接关联.结论 对湖南省HIV合并HBV、HCV感染的流行现状及相关风险因子进行的大规模调查显示,HIV/HCV合并感染率高于HIV/HBV合并感染率,且易发于26～45岁年龄组男性中,静脉吸毒是HIV合并HCV感染以及三重感染的主要传播途径.应采取积极措施对HIV、HCV和HBV感染者进行治疗、健康教育和行为干预.

安徽省2011年0～6岁儿童乙型病毒性肝炎免疫水平调查

目的 了解安徽省0～6岁儿童乙肝病毒表面抗体(HBsAb)和乙肝病毒表面抗原(HBsAg)阳性率.方法 采用随机抽样方法,在安徽省16个县(市、区)的0～6岁儿童中抽取1783人,开展问卷调查并采集静脉血标本1～2ml,采用酶联免疫吸试验(ELISA)对标本进行HBsAb、HBsAg检测.结果 安徽省2011年O～6岁儿童HBsAb阳性率为64.27％,HBsAg阳性率为0.07％.乙肝疫苗(Hepatitis B Vaccine,Hep B)调查接种率为100.00％,首针HepB及时接种率为91.98％.结论 安徽省0～岁组儿童HBsAb水平保持较高水平,而1～6岁儿童HBsAb水平随年龄增长呈下降趋势.

食品、公共场所从业人员乙型肝炎病毒感染状况调查

目的 分析安庆市食品、公共场所从业人员乙型肝炎病毒感染状况,为控制乙肝流行提供依据.方法 对2003～2008年到安庆市疾病预防控制中心进行健康体检的食品、公共场所人员进行HBsAg检测,用Excel软件进行统计分析.结果 2003～2008年共检测相关从业人员67 080人,其中HBsAg阳性1 956人,年平均阳性率2.92%.年龄以16～19岁组阳性率高,达4.88%;男性HBsAg阳性率3.43%;女性HBsAg阳性率2.61%.结论 安庆市从业人员乙型肝炎病毒表面抗原阳性率处于较低水平,且呈下降趋势.男性人群乙型肝炎病毒表面抗原阳性率高于女性.

8月～4岁儿童乙肝病毒表面抗原和抗体分析

目的:了解陆良县＜5岁儿童血清乙肝病毒表面抗原(Hepatitis B Virus Surface Antigen,HBsAg)和乙肝病毒表面抗体(Antibody to HBsAg,Anti-HBs)情况,为乙型肝炎(乙肝)病毒(Hepatitis B Virus,HBV)的防制提供依据.方法:通过对陆良县十个乡镇按人口数分层整群抽样624名儿童,经过酶联免疫法检测血清HBsAg和Anti-HBs,并统计分析.结果:该年龄段HepB(Hepatitis B Vaccine,HepB)接种率为99.68％,HepB1及时接种率为89.74％;HBsAg阳性率为0.48％,Anti-HBs阳性率为75.48％,两指标的阳性率与地区和性别间差异无统计学意义.结论:HepB1及时和全程接种是阻断HBV感染因素之一,Anti-HBs阳性率随着人群年龄呈现下降趋势.加强＞3岁儿童Anti-HBs监测,对高危人群开展HepB加强免疫.