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脉冲场凝胶电泳技术对一起痢疾暴发的分型研究
目的运用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术对痢疾暴发进行分析.方法对辽宁省某市暴发痢疾进行血清学鉴定后,进行PFGE分析,观察引起暴发的菌型是否为同一个分子分型.结果7株暴发菌株的PFGE型别相同.结论此次痢疾的暴发流行为同一菌株引起,PFGE可以作为暴发流行中对细菌进行鉴定的分析技术.
关键词： 痢疾 脉冲场凝胶电泳(PFGE) 鉴定 -
福建省志贺菌PFGE分型研究
目的 了解福建省志贺菌脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型情况,描述基因群的流行及分布特征,探讨优势血清群的变迁规律.方法 收集2005-2010年志贺菌96株,分离自临床患者.选择NotⅠ进行酶切,H9812作为脉冲场凝胶分子量标准.采用脉冲场凝胶电泳技术分析电泳酶切指纹图谱,运用BioNumerics软件进行聚类分析.结果 按照100％的相似度可将34株福氏志贺菌酶切图谱分为27种PFGE型别;将62株宋内志贺菌酶切图谱分为43种PFGE型别.根据TENOVER原则,福氏志贺菌有2个优势基因群G1-G2,宋内志贺菌有4个优势基因群GI-GIV.优势基因群集中分布于7～10月,其他PFGE型别分布比较分散,无明显时间和地区的聚集性.结论 福建省志贺菌分子分型呈现多样性,宋内和F4c的某些基因群可能逐渐演变为福建省优势且稳定的志贺菌流行菌株.
关键词： 志贺菌 脉冲场凝胶电泳(PFGE) 分子分型 基因群 -
一起维尔肖沙门菌食物中毒病原学检测分析
目的 对一起食物中毒事件中分离的维尔肖沙门菌(Salmonella virchow)进行病原学检测分析,为该事件的处置提供实验依据.方法 采集患者肛拭、饭店厨师手拭和肛拭、菜板涂抹样、抹布共10份样品,依照GB/T4789.4 2010《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》进行菌株分离、生化反应、血清学分型、药敏试验等;根据国际食源性疾病分子分型国家电子网络(National Molecular Subtyping Netwok for Foodborne Surveillance,PulseNet)公布的沙门菌脉冲场凝胶电泳分型方案,用BioNu merics软件对酶切图谱进行聚类分析.结果 在4份患者肛拭和1份饭店菜板涂抹样中检出5株维尔肖沙门菌,生化谱均为0017610541566210,血清型为6,7:r:1,2,均对大部分抗生素敏感,但对阿米卡星、妥布霉素和庆大霉素等氨基糖苷类抗生素耐药;对头孢唑啉、头孢替坦等部分头孢类抗生素耐药.经XbaⅠ和Bln Ⅰ两种限制性内切酶酶切,脉冲场凝胶电泳后,菌株带型相似性均达到100％,提示为同脉冲场凝胶电泳(PFGE)带型.结论 病原学检测分析结果结合流行病学调查证实,这是一起因食用被维尔肖沙门菌污染的食物而发生的中毒事件.
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引起一起食物中毒的副溶血性弧菌病原学检测和分子分型溯源研究
目的 对引起一起食物中毒的副溶血性弧菌进行实验室鉴定,分析菌株间的相关性. 方法 按照国标GB4789和有关规范对采自患者的粪便肛拭标本及砧板涂抹标本进行肠道致病菌检测,同时采用实时荧光PCR对耐热直接溶血素(TDH)毒力基因进行鉴定.提取副溶血性弧菌分离株基因组DNA,经限制性内切酶Sfi Ⅰ酶切后进行脉冲场凝胶电泳(PFGE),获得指纹图谱,利用BioNumerics6.6软件进行聚类分析. 结果 从病人和砧板标本共分离出8株O1血清型副溶血性弧菌,其TDH毒力基因为阳性.聚类分析显示,分离自中毒病人和砧板的8株副溶血性弧菌的指纹图谱相似性高达100％. 结论 引起该起食物中毒的病原菌为携带TDH毒力基因的O1血清型副溶血性弧菌,且来自同一污染源.
关键词： 食物中毒 副溶血弧菌 实时荧光PCR 脉冲场凝胶电泳(PFGE) -
应用IRS-PCR对金黄色葡萄球菌分型的研究
目的探讨低频限制性位点聚合酶链反应(infrequent-restriction-site PCR, IRS-PCR)在金黄色葡萄球菌(简称金葡菌)基因分型中的应用价值. 方法建立本实验室IRS-PCR方法.同时用IRS-PCR和脉冲场凝胶电泳(PFGE)对金葡菌进行基因分型.根据49株社区感染分离菌的分型结果计算辨别力指数(ID)值估计分辨力.对其中30株社区感染菌重复实验一次估计重复性.比较两种基因分型方法的分型率、分辨力、重复性、结果的一致率及操作特点. 结果建立IRS-PCR对金葡菌基因分型的方法.70株金葡菌均可被2种方法分型,分型率100%.IRS-PCR分为38个型,21株院内感染菌分为6个型,49株社区感染菌分为32个型,计算ID值为0.981.PFGE分为40个型,21株院内感染菌分为6个型,49株社区感染菌分为34个型,计算ID值为0.983.两种分型方法的重复性均为100%.对院内感染菌,两种方法分型的一致率为100%;对社区感染菌,两种方法分型的一致率为92%(45/49).与PFGE相比,IRS-PCR更简单、省时、易于操作、不需特殊昂贵仪器. 结论 IRS-PCR能对金葡菌简易快速可靠分型,适合检验科对临床标本的快速有效分型,是一种有价值的分子流行病学研究工具.
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11株鼠伤寒沙门菌血清凝集及PFGE的分析
目的 了解江阴市2016年饮食和服务行业从业人员肠道检测中检出的11株鼠伤寒沙门菌的H抗原凝集情况及其同源情况.方法 采用培养基生长特征培养、生化反应、荧光PCR检测、血清学凝集试验及脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis,PFGE).结果 11株菌通过培养基生长培养、生化反应、荧光PCR检测阳性符合沙门菌,血清型均为04,5,12∶ Hi∶ H2,确定为鼠伤寒沙门菌.PFGE检测样本号JY008和JY009同源,其他均不同源.结论 11株鼠伤寒沙门菌血清型相同,且均凝集出H抗原2相.2016年饮食和服务行业从业人员中鼠伤寒沙门菌基因组多样化,同源性低.
关键词： 鼠伤寒沙门菌 血清凝集 脉冲场凝胶电泳(PFGE) 同源性 -
一起金黄色葡萄球菌引起食物中毒的病原溯源
目的 分离鉴定病原菌,查明食物中毒原因;运用基因分型技术对分离菌进行溯源性分析.方法 采用传统细菌学检测方法分离、鉴定病原菌,酶联免疫吸附法(ELISA)检测肠毒素分型,脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行基因分型,用BioNumerics软件进行聚类分析和病原溯源.结果 此次食物中毒共分离到4株金黄色葡萄球菌,从患者肛拭样中分离出3株,从餐厅从业人员肛拭样中分离出1株,均携带同种金黄色葡萄球菌肠毒素(staphylococcal enterotoxin,SE),PFGE分型为同一带型,属同一克隆.结论 此次食物中毒是由产SEA型肠毒素的同一克隆株金黄色葡萄球菌引起.
关键词： 食物中毒 金黄色葡萄球菌 脉冲场凝胶电泳(PFGE) 病原溯源 -
沙门菌血清及脉冲场凝胶电泳分型
目的 分析吉林省食品中分离的沙门菌血清型和脉冲场凝胶电泳(PFGE)型别,探讨吉林省食品中沙门菌污染的同源性.方法 于2011年3月—2012年4月,对从市售生鸡肉和中式凉拌菜中分离出的28株沙门菌进行血清学和PFGE分子分型,采用BioNumerics version 6.0软件分析比较同源性.结果 28株沙门菌血清型分别为15株肠炎沙门菌、4株印弟安纳沙门菌、2株猪伤寒沙门菌、2株亚利桑那菌和5株血清未定型沙门菌；PFGE结果主要分为4个大群,其中1群包括14株,相似度为87.3％～100％；2群包括7株,分为2个亚群,2A亚群包括6株,相似度为91.9％ ～100％,2B亚群1株,相似度为73.6％；3群包括3株,相似度为88.9％～100％；4群包括4株,分为2个亚群,4A亚群包括3株,相似度为84.6％ ～94.7％,4B亚群1株,相似度为72.7％.结论 吉林省食品中沙门菌血清型以肠炎沙门菌为主；PFGE结果显示相同血清型别菌株具有高度同源性.
关键词： 沙门菌 血清学分型 脉冲场凝胶电泳(PFGE) -
水产品中副溶血性弧菌脉冲场凝胶电泳分型
目的 采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对水产品中副溶血性弧菌进行分子分型.方法 采用PFGE技术,对80株分离自11个国家和中国浙江省和山东省的水产品中的副溶血性弧菌进行分子分型;基因组DNA用Not I和Sfi I2种酶进行消化.结果 Not I和Sfi I 2种内切酶均得到68种带型,综合系统树图中分成70种带型;Not I和Sfi I的分辨率分别为78.8％和76.3％;14株来自加拿大的菌株分聚成相似度100％的4组,其中有4株菌和10株菌分别聚成相似度91.8％和93.3％的2组;挪威和新西兰分别有3株和2株菌相似度为100％;其他国家的菌株无与本国相同的菌株.结论 2种酶均适合于副溶血性弧菌的PFGE分型,Not I的效果略好于Sfi I;菌株间的亲缘关系与来源地无明显关联,但具有毒性基因的菌株更易在系统发育树上处于较近的分枝上.
关键词： 副溶血性弧菌 脉冲场凝胶电泳(PFGE) 分子分型 -
大、小鼠绿脓杆菌脉冲场凝胶电泳分型研究
目的 对近年来上海及江苏地区部分单位大、小鼠绿脓杆菌进行分离鉴定,采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型技术作基因型分析,以了解绿脓杆菌流行菌株与宿主之间的相关性.方法 无菌采集上海及江苏地区部分单位实验大、小鼠回盲部内容物进行绿脓杆菌分离培养,采用形态学观察、生化试验对分离菌进行鉴定.提取绿脓杆菌分离株基因组DNA,经XbaI酶切后进行脉冲场凝胶电泳.结果 共分离到67株绿脓杆菌,PFGE图谱可分为39种不同带型,14个基因簇(A-N),优势簇分别为I、H、B和G,分别占17.9％(12/67)、14.9％(10/67)、13.4％(9/67)和11.9％(8/67).同一来源地的分离株大多呈现不同的基因簇. 结论 67株细菌具有很大的基因多态性,呈散在分布,未见明显的流行特征.
关键词： 绿脓杆菌 脉冲场凝胶电泳(PFGE) 分子分型 -
江苏省2010年宋内志贺菌耐药相关整合子分析及分子分型研究
目的：分析江苏省2010年宋内志贺菌的整合子分布及分子分型特征。方法对江苏省2010年分离的33株宋内志贺菌采用 K-B 纸片法检测抗菌药物敏感性，联合 PCR 和限制性片段多态性（RFLP）进行整合子分类和可变区检测，利用测序技术判断整合子可变区耐药基因，应用脉冲场凝胶电泳（PFGE）进行分子同源性分析。结果宋内志贺菌多重耐药率为63.64％，对复方新诺明、四环素、萘啶酸和氨苄西林耐药率较高，分别为84.85％、75.76％、66.67％和63.64％。33株宋内志贺菌中51.52％的菌株检出 I 类整合子，其中4株可变区阳性，携带 dfrA17-aadA5基因盒；81.82％的菌株检出 II 类整合子，携带 dfrA1-sat1-aadA1基因盒；两类整合子同时存在时耐药性更为显著。PFGE 图谱分为13个不同带型，同一带型菌株大多分散于江苏各地。结论整合子在宋内志贺菌中广泛存在，参与其多重耐药机制。多重耐药性在不同地区、不同克隆的菌株间扩散传播。
关键词： 宋内志贺菌 多重耐药 整合子 脉冲场凝胶电泳(PFGE) -
福建省74株霍乱弧菌PFGE分子分型研究
目的 采用脉冲场凝胶电泳技术(PFGE)对福建省霍乱监测点采集的霍乱弧菌进行分型,探讨其分布特征.方法 福建省2008年采集到不同地区、不同来源的霍乱弧菌74株,用PFGE技术分析电泳酶切指纹图谱,用BioN-umerics软件进行聚类分析.结果 按照100％的相似度,可将21株小川型菌株分为20个PFGE型、44株稻叶型菌株分为39个PFGE型;按照90％的相似度,稻叶型菌株出现2个优势PFGE型别簇.结论 福建省霍乱弧菌PFGE型别存在多态性.加强对外环境霍乱菌株的监测,可为霍乱防控提供有用的本底资料和早期预警;PFGE分型结合流行病学调查,是发现霍乱菌株污染传播链的有效手段.
关键词： 霍乱弧菌 脉冲场凝胶电泳(PFGE) 分子分型 -
福建省50株沙门菌PFGE指纹图谱研究
目的 分析福建省鼠伤寒及肠炎沙门菌脉冲场凝胶电泳(PFGE)指纹图谱,研究其分型特征.方法 收集2009年50株沙门菌临床分离株,其中30株鼠伤寒沙门菌分离自婴幼儿腹泻患者,20株肠炎沙门菌分离自感染性腹泻患者.选择XbaⅠ酶对沙门菌染色体DNA进行酶切,H9812作为脉冲场凝胶分子量标准.采用PFGE技术分析电泳酶切指纹图谱,运用BioNumerics软件进行聚类分析.结果 30株婴幼儿腹泻鼠伤寒沙门菌PFGE图谱按照100%的相似度可分为19个PFGE型,P1(Typhi)型有8株,P12(Typhi)型3株,P1(Typhi)为优势型别;20株肠炎沙门菌PFGE图谱按照100%的相似度可分为10个PFGE型,其中P1(Enteri)型6株,P4(Enteri)型有4株,P6(Enteri)型3株,P1(Enteri)型为优势型别.结论 PFGE分型方法分辨率高,重复性好,可广泛运用于沙门菌疫情溯源和早期防控.
关键词： 鼠伤寒沙门菌 肠炎沙门菌 脉冲场凝胶电泳(PFGE) 分子分型 -
延平区2010-2012年致泻性大肠杆菌检测分析
目的 了解延平区感染性腹泻患者致泻性大肠杆菌(DEC)检出情况及菌株特征.方法 用多重和单重PCR方法检测DEC的EPEC/EHEC eaeA基因、EHEC stx基因、EAEC aggR基因、EIEC ipaH和virA基因、ETEC ST和LT基因,对阳性菌株进行API20E系统生化鉴定、血清凝集试验和PFGE试验.结果 2010-2012年DEC监测点共检测腹泻病人粪便标本504份,检出DEC 39株(7.7％),其中EPEC 23株(59.0％,以aEPEC为主,18株),ETEC 14株(35.9％),EAEC 2株(5.1％).ETEC中ST基因阳性9株,LT基因阳性3株,均阳性2株.不同类型的DEC生化反应特性不同;对18株aEPEC进行PFGE,DNA片段得到较好分离.DEC检出率各年龄组差异无统计学意义.结论 DEC是该监测点腹泻患者重要病原菌,以EPEC为主,建立健全基层疾控机构对DEC的检测很有必要.
关键词： 腹泻 致泻性大肠杆菌(DEC) PCR 脉冲场凝胶电泳(PFGE) -
宁夏志贺菌病原学特征分析
目的 探讨宁夏地区志贺菌菌群分布、药物敏感性情况,并通过同源性分析研究其分子流行病学特征,为菌痢防控提供依据.方法 通过系统生化条(API20E)鉴别菌株,用血清玻片凝集鉴定菌型,采用K-B法检测分离菌株对10种常用抗生素的敏感性,并应用脉冲场凝胶电泳技术(PFGE)进行分子分型,所得结果用BioNumericsV4·0软件UPGMA方法进行聚类分析.结果 176株志贺菌中,福氏志贺菌112株,占63.64%,其中福氏2b型52株,占29.55%;宋内志贺氏菌64株,占36.36%.药敏试验显示耐药率高的药物为氨苄西林、萘啶酸、四环素、利福平;其次为阿莫西林、复方新诺明;而敏感性高药物依次为环丙沙星(CIP)、头孢噻肟和头孢噻吩,其中福氏志贺菌和宋内志贺菌对10种抗生素的耐药谱略显不同;112株福氏志贺菌共分为36个带型,其中,JZXN11.NX06、JZXN11.NX07、JZXN11.NX021、JZXN11.NX0025占所有分型菌株的57.14%,为我省主要的暴发型.64株宋内志贺菌分为21个带型,J16X01.NX0011和J16X01.NX0012为两个主要流行带型,分别占分型菌株的31.25%和15.63 %.结论 本省志贺菌流行以福氏为主,其中F2b为优势菌型,F4c和宋内氏菌检出率显著增高;志贺菌对氨苄西林(AMP)、四环素(Te)、阿莫西林(AML)和萘啶酸耐药率高,多重耐药现象严重;PFGE型别呈现多元化流行特点,流行的优势带型减弱、多种型别并存的复杂形态.
关键词： 脉冲场凝胶电泳(PFGE) 志贺氏菌 药敏分析 -
脉冲场凝胶电泳在肠炎沙门菌食源性疾病溯源中的应用
目的 对2006年广州地区食源性疾病中分离的肠炎沙门菌进行分子分型,探讨广州地区肠炎沙门菌的分子型别和多态性,为食源性疾病溯源及致病菌数据库的建立提供依据.方法 采用限制性内切酶Xba I,对2006年分离到的菌株进行PFGE分子分型,使用BioNumerics Version 4.0软件(使用Dice系数和UPGMA法)对菌株进行聚类分析,并与深圳市的肠炎沙门菌PFGE型别进行比较.结果 所有74株肠炎沙门菌均得到一致的PFGE克隆型,表明两次不同的食源性疾病均由同一PFGE型引起.广州与深圳的肠炎沙门菌PFGE图谱的比较表明,两地食源性疾病分离株具有很近的亲缘关系.结论 PFGE分子分型与流行病学资料紧密结合可增强对肠炎沙门菌食源性疾病的溯源和预警.
关键词： 肠炎沙门菌 脉冲场凝胶电泳(PFGE) 分子分型 食源性疾病 -
O157大肠埃希菌食品分离株的特征研究
目的 掌握福建省E.coli O157:H7和O157:H?食品分离株的毒力基因携带状况、PFGE分型特征、抗生素的药敏谱以及产志贺毒素的E.coliO157:H7菌株的细胞毒性状况.方法 分离菌株经VITEK全自动生化系统鉴定;O157和H7单克隆诊断血清凝集;PCR法检测O157、H7抗原基因及毒力因子基因;菌株的分型用PFGE方法进行;采用CLSI推荐的K-B法对菌株进行15种抗生素的药敏试验;对产志贺毒素的分离株用Vero细胞和Cyto Tox 96○R试剂盒进行细胞毒性检测.结果 2株E.coli O157:H7,其O157、H7及Stx2、Hly、eaeA毒力基因均阳性,Stx1基因均阴性;另3株E.coli O157:H?,其O157基因阳性,H7 和Stx1、Stx2、Hly、eaeA毒力基因均阴性; 5株菌的PFGE带型各不相同,2株E.coli O157:H7的同源性较高,达81%;菌株对15种常用抗生素较为敏感,链霉素、甲氧苄啶敏感率稍低为40%,其余敏感率达60%~100%.2株产志贺毒素的菌株对Vero细胞有毒性作用,细菌细胞比位50:1时细胞毒性百分比分别为61.25%和67.80%.结论 本省在外环境动物性食品中存在产志贺毒素的E.coli O157:H7菌株,提示应加强E.coli O157:H7的监测,预防该菌在本省人间的感染和流行.
关键词： 大肠埃希菌O157:H7 毒力基因 脉冲场凝胶电泳(PFGE) 药敏 细胞毒性 -
2株B群脑膜炎奈瑟菌的分子生物学分析
[目的]探讨分离自大连市开发区2005年和2008年外来人口中2例暴发型脑膜炎死亡病例2株B群脑膜炎奈瑟菌的分子生物学特征及其关联性.[方法]2010年,对2株B群流脑菌株进行脉冲场电泳(PFGE)和多位点序列分型(MLST)分型分析.[结果]2株菌PFGE型相似性为100%,应为同一来源;MLST分析结果均为ST5662型.菌株对青霉素、头孢类、阿齐霉素、氯霉素、利福平等多种抗菌药物敏感.[结论]2株B群脑膜炎奈瑟菌分子分型结果一致,为同一科隆.
关键词： B群脑膜炎奈瑟菌 脉冲场凝胶电泳(PFGE) 多位点序列分析 -
宁波地区鲍曼不动杆菌16S rRNA甲基化酶基因研究
目的:调查宁波地区3家综合性医院临床分离鲍曼不动杆菌中介导高水平氨基糖苷类抗生素耐药的16S rRNA甲基化酶基因armA、rmtA、rmtB的分布情况.方法:收集宁波市李惠利医院、宁波市第一人民医院、宁波市第二人民医院氨基糖苷类抗生素高水平耐药鲍曼不动杆菌20株.琼脂稀释法测定5种氨基糖苷类抗菌药物的MIC值;PCR检测ar-mA、rmtA、rmtB 3种16S rRNA甲基化酶基因,克隆测序明确基因型;脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析菌株同源性.结果:对5种氨基糖苷类抗生素全部耐药的20株菌株中,17株检出armA基因;未发现rmtA、rmtB基因阳性菌株.armA基因阳性菌株PFGE分型以A型为主.结论:宁波地区鲍曼不动杆菌检测出16S rRNA甲基化酶基因armA,菌株以克隆播散形式流行.
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江苏省肠出血性大肠杆菌0157∶H7 PFGE分子分型研究
目的:对我省历年分离的不同地区和来源EHEC O157∶H7菌株之间的同源性进行分析.方法:用限制性内切酶XbaI,对分离菌株进行PFGE分型,并使用BioNumerics Version 4.0软件(Dice系数和UPGMA法)进行聚类分析.结果:74株O157∶H7分离株可分为39个型,同一年份同一地区不同来源菌株之间有相同的XbaI酶切带型,同一年份不同地区分离菌株之间有相同酶切带型,不同年份部分菌株之间酶切带型不可区分.结论:我省宿主动物携带多个O157∶H7克隆,来自同一个克隆的O157∶H7已在较广泛的区域内传播,某些在1999年暴发流行的克隆长期稳定存在于我省宿主动物中,并传播给人类.
