046黄芪提取物对白介素1β诱导人羊膜炎症的防护作用

胚胎干细胞源性表皮干细胞对小鼠全层皮肤缺损的修复

目的 研究129小鼠胚胎干细胞(ES cell)源性表皮干细胞在同种小鼠全层皮肤缺损的生长和分化,探讨Es细胞源性表皮干细胞对全层皮肤缺损的修复作用.方法 以生物膜为载体,将羊膜诱导后带有核荧光标记的ES细胞源性表皮干细胞直接覆盖小鼠全层皮肤缺损创面.术后1～8周连续取材,HE染色,β1整合素、CK15、CK19、CK10、CEA免疫组织化学和荧光双标显色.结果 术后2周,创面完全长合,较厚的新生皮覆盖创面,基底层细胞增生,形成许多大小不一的细胞柱伸向真皮层,真皮层中可见管腔样结构,免疫荧光双标显示,1～3周新生表皮中可见核标记的细胞呈β1整合素、CK15阳性,真皮层中带有核标记的管状或泡状结构呈β1整合素、CK15阳性;4周后新生表皮开始变薄,基底层细胞呈CK19、CK10阳性,汗腺样结构呈CEA阳性,6～8周新生表皮下可见毛囊样、汗腺样、皮脂腺样等结构.结论 ES细胞源性表皮于细胞植入小鼠全层皮肤缺损创面,可修复缺损的表皮,并在其下真皮层内具有分化为汗腺样、毛囊样和皮脂腺样结构的潜能.

人羊膜上皮细胞分离的正交法研究

目的:研究人羊膜上皮细胞(hAECs)分离的适宜条件.方法:采用正交试验的方法.以L9(34)正交表安排影响hAECs分离的几个主要因素.每组实验所得细胞计数并培养24h后,收集悬浮细胞计算细胞贴壁率.培养7d计算扩增细胞数,以此为指标分析各因素对hAECs分离的影响.结果:胰蛋白酶的浓度及消化次数对细胞得量均有显著影响(P<0.05).结论:应用正交试验法得出hAECs分离的适宜条件为:胰蛋白酶液与羊膜组织体积比为1:1,胰蛋白酶浓度0.25%,消化时间10min/time,消化4次.

单层人羊膜对颜面创面保护作用的临床观察

目的:为了探讨经γ射线辐射的单层人羊膜作为生物敷料用于颜面创伤创面的临床治疗的有效保护作用. 方法我们对颜面105个创伤创面对照贴敷人羊膜和油纱条,进行临床观察治疗. 结果我们发现颜面浅II度创面用人羊膜治疗侧比用油纱条治疗侧平均提前愈合4天~5天;颜面深II度创面用人羊膜治疗侧比用油纱条治疗侧平均提前愈合5天~6天. 结论我们认为将新鲜人羊膜去除绒毛膜后,再将羊膜层干燥,修剪成型,制成不同规格的单层薄膜,再经γ射线辐射而成的单层辐射人羊膜(简称羊膜),在用于颜面创伤创面的临床治疗时,在防止创面感染,缩短创面的愈合时间,降低颜面瘢痕畸形的发生,保护颜面皮肤的正常弹性和美观等诸多方面都比使用油纱条要优越、有效,具有良好的颜面创伤创面保护作用和治疗作用.

人羊膜生物敷料对鼠烫伤创面保护作用的疗效观察

目的:研究单层辐射人羊膜对模型鼠烫伤创面敷盖治疗的疗效及愈合各阶段创面的组织学变化.方法:观察了40只wistar鼠深11°烫伤创面.将单层辐射人羊膜和油纱对照贴敷创面进行观察,采用了活杀取材及电镜扫描检查法.结果:模型鼠创面用人羊膜贴敷侧比对照侧提前愈合.而且愈合创面外观是毛发规则丛生,皮肤具有弹性,表皮各层均为正常皮肤组织像.结论:经动物实验,此膜无免疫排斥现象,无毒、无菌、无刺性.而且能防止创面水份、电解质和蛋白质的丢失,增强模型鼠的抵抗能力,避免感染,加速愈合.是治疗鼠烫伤创面的良好敷料.

人羊膜负载小鼠阴道黏膜干细胞生长特点及鉴定

目前,生物组织工程和干细胞技术日益成为医学界关注的热点.利用生物组织工程原理构建人类组织器官以替代病变或缺如的组织器官,达到医学治疗的目的,是干细胞技术发展的重要目标.

人羊膜移植治疗复发性翼状胬肉

翼状胬肉是眼科的一种常见病和多发病,其发病机制尚不清楚.病理学研究表明,其形成的主要成分为大量增生的成纤维细胞,并由其导致相应的病变[1].目前仍以手术治疗为主.我们采用羊膜移植联合显微手术切除局部病变组织的方法治疗复发性翼状胬肉,取得了较好的疗效,现报告如下.

羊膜移植联合结膜角膜移植治疗严重眼化学伤

目的 探讨羊膜移植联合结膜角膜移植对严重眼部化学烧伤的临床治疗效果.方法 对严重眼部化学烧伤患者26例(32眼)采用羊膜移植联合结膜角膜移植,术后随访2～14月(平均6月).结果 术后3～7天,眼部炎症控制,羊膜移植片未见免疫排斥反应或融解吸收,24眼角膜恢复透明,5眼角膜白斑,3眼全角膜浑浊,全部患者保存了眼球,眼表稳定,角膜和结膜融解未继续进展.结论 人羊膜移植可以有效地促进上皮细胞分化移行,抑制局部的炎症反应,阻止新生血管和瘢痕形成,阻止烧伤的病理发展.

治疗翼状胬肉不同手术方式的疗效观察

目的 比较自体角膜缘干细胞移植术、人羊膜移植术与自体角膜缘干细胞移植联合人羊膜移植术治疗翼状胬肉的临床疗效.方法 69例初发性和复发性翼状胬肉患者共71眼,根据采用手术方式不同,随机分为A、B、c三组.其中A组27眼行自体角膜缘干细胞移植术;B组21眼行人羊膜移植术;C组23眼行自体角膜缘干细胞移植联合人羊膜移植术.术后随访6～12个月,观察复发情况.结果 术后12个月,A组4眼复发.复发率为14.8%;B组3眼复发,复发率为14.3%;C组1眼复发,复发率为4.3%.结论 自体角膜缘干细胞移植联合羊膜移植术是治疗翼状胬肉防止术后复发的理想手术方式.

人羊膜组织及羊膜干细胞的研究进展

一、人羊膜组织的基础研究及临床应用1.人羊膜的基本结构:人羊膜(human amnioticmembrane,HAM)为半透明薄膜,无血管、神经及淋巴管,有一定的弹性,厚度为0.02～0.50mm,光镜下分为5层,即上皮层(占整个羊膜结构的2%～3%)、基底膜层(1%～2%)、致密层(90%以上)、纤维母细胞层及海绵层.

人羊膜在牙种植术中的临床应用研究

目的：观察人羊膜联合生物骨粉（Bio-Oss）引导骨再生术应用于牙种植的临床疗效。方法：将32例骨量不足的患者按随机数字表法分为A、B两组各16例。两组植入种植体同时植入Bio-Oss与自体骨的混合物，A组表面覆盖人羊膜，B组表面覆盖金属钛膜。术后1、3、6、12个月通过临床检查及X线检查评价临床疗效。结果：两组植骨区新骨形成均良好，牙槽嵴外形丰满，种植体无松动脱落，均完成了冠修复。长期随访示A组骨吸收量更小，与B组比较差异有统计学意义（P<0.01）。结论：人羊膜及金属钛膜联合引导骨再生术应用于种植区骨量不足的患者均可取得较好的疗效，但人羊膜组效果更佳。

拔牙创使用人羊膜的临床研究

目的:观察人羊膜植入临床拔牙创后对牙槽骨愈合的影响.方法:选用来本院需拔除双侧下颌第二前磨牙正畸治疗的患者20例,右侧拔牙创植入人羊膜作为试验组,左侧拔牙创作为空白对照.术后1、2、3个月拍口腔全景片,观察新骨形成情况及牙槽嵴吸收评价拔牙创愈合情况.结果:术后1周牙龈愈合及术后1、2、3个月拔牙创新骨形成量试验组优于对照组,术后1、2、3个月牙槽嵴吸收高度试验组均明显低于对照组(P<0.01);每月牙槽嵴吸收量第1、2个月试验组均低于对照组(P<0.01),第3个月两组无明显差异(P>0.01).结论:临床拔牙创植入人羊膜能促进拔牙创的早期愈合,保存牙槽嵴高度.

人羊膜负载人羊膜间充质干细胞对SD大鼠皮肤创面愈合的影响

目的 观察人羊膜(HAM)负载人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)对SD大鼠皮肤创面愈合的影响.方法 采用胰酶消化HAM的上皮细胞,将hAMSCs接种于HAM上培养,然后贴覆于大鼠创面,观察创面大体变化,采用HE染色和免疫组织化学染色法检测创面愈合情况,并与单纯羊膜组和对照组进行比较.结果 HAM负载hAMSCs组大鼠创面的平均愈合时间为(18.3±0.9)d,明显快于对照组的(26.4±0.7)d(P＜0.01)和单纯羊膜组的(21.5±1.2)d(P＜0.05)；术后11d和14 d,HAM负载hAMSCs组大鼠的创面愈合率分别为(81.5±7.2)％和(94.3±3.6)％,明显高于对照组的(48.5±3.2)％和(74.3±4.3)％及单纯羊膜组的(68.5±4.5)％和(86.8±4.8)％(P均＜0.01).皮肤切片HE染色结果证实,HAM负载hAMSCs组大鼠的伤口愈合质量明显优于单纯羊膜组和对照组.免疫组织化学染色结果显示,术后14 d,HAM负载hAMSCs组大鼠皮肤CK19阳性表皮干细胞数为48.2±3.2,明显高于单纯羊膜组的37.7±3.1(P ＜0.05)和对照组的29.6±2.4(P＜0.01)；血管内皮生长因子阳性颗粒表达数为64.5±4.5,也明显高于单纯羊膜组的52.6±3.8(P ＜0.05)和对照组的40.7±3.1(P ＜0.01).结论 HAM负载hAMSCs可能是通过促进表皮干细胞和毛细血管再生,促进皮肤损伤修复.

人羊膜的研究进展

通过大量查阅国内外有关人羊膜的基础和临床应用研究文献并总结这些研究成果。可以人了解羊膜的来源广，价格低、与细胞相容性好、抗原性低，羊膜上皮层具有上皮细胞及成纤维细胞生长因子等多种细胞生长因子，而基底膜含有Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ等多种类型胶原、纤维桥接蛋白及多种糖蛋白，由于这些结构的特殊性，使其能够促进多种细胞的生长。近年来随着组织工程生物工程对羊膜的进一步研究，人羊膜在临床中的应用会更加被重视。

联合丝裂霉素C和人羊膜移植治疗复发性翼状胬肉的护理

我科于1999～2007年,在显微镜下切除复发性翼状胬肉后应用联合丝裂霉素C和人羊膜移植治疗复发性翼状胬肉97例,效果良好,现将手术方法及护理方法报告如下.

三种组织工程鼓膜支架材料的生物相容性

背景:自体组织修复鼓膜穿孔存在增加手术创伤、取材有限等缺点,构建组织工程鼓膜是鼓膜穿孔治疗的发展方向.目的:构建3种不同材料的组织工程鼓膜支架材料,并评价其生物相容件.设计、时间及地点:随机对照动物实验,细胞学体内观察,于2004 08/2005 02在解放军第四军医大学组织工程中心完成.材料:将健康小猪的硬脑膜、真皮及人羊膜进行脱细胞处理.方法:将颅先培养的豚鼠鼓膜成纤维细胞种植于 3种材料表面,观察成纤维细胞的生长状态;18只豚鼠随机分为3组,于右侧背皮下分别埋植制各的脱细胞硬脑膜、真皮及人羊膜.主要观察指标;3种脱细胞生物支架材料的显微结构及组织相容性.结果:3种脱细胞材料均为网状结构,无仟何细胞及细胞残核存在;豚鼠鼓膜成纤维细胞能够很好地贴附于3种脱细胞材料生长,无细胞毒性;将3种组织材料分别埋植于豚鼠皮下后,无埋植材料排出现象,1周时植入材料周围有较明显炎症反应,其中以脱细胞真皮周围组织反应较轻,4周时炎症反应消失.结论:通过脱细胞方法可以成功建立具有良好生物相容性的组织工程鼓膜支架材料;3种材料中以脱细胞猪真皮的生物相容性佳.

人羊膜间质细胞转化为膀胱平滑肌细胞

背景:目前国内外寻找膀胱平滑肌细胞替代细胞的研究均处于摸索阶段,间质干细胞移植是比较理想的选择,人羊膜间质细胞不仪有分化心肌细胞样特性,而且还可以分泌神经生长因子等,促进局部结构修复.目的:探讨人羊膜间质细胞植入大鼠冻伤膀胱后向平滑肌细胞的分化情况,及其对膀胱肌层本身修复的影响.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2006 10,2007-04在日本信州大学完成.材料:人羊膜取自健康足月妊娠产妇.清洁级雌性SD大鼠18只,随机分为正常膀胱细胞移植组、冻伤膀胱对照组、冻伤膀胱细胞移植组,6只,组.方法:羊膜剪碎后,与含胰蛋白酶的DMEM培养基混合,去除上皮细胞,加入含胶原蛋白酶、DNA酶的DMEM培养基,分离获取人羊膜间质细胞备用.冻伤膀胱对照组、冻伤膀胱细胞移植组大鼠用-70℃干冰制冷的铁棒冻灼膀胱顶部后侧,3d后膀胱壁冻伤处出现血肿,前者向血肿内.沣射DMEM培养液100μL,后者向血肿内注射等量人羊膜间质细胞悬液(105个细胞).正常膀胱细胞移植组直接将人羊膜间质细胞移植入正常膀胱肌层中.3周后切取含部分尿道的膀胱组织,制备膀胱切片标本.主要观察指标:采用苏木精-伊红染色观察膀胱平滑肌修复情况,荧光免疫组织化学检测膀胱壁中人羊膜间质细胞的分化.结果:与正常膀胱细胞移植组比较,冻伤膀胱细胞移植组膀胱壁肌层结构趋于正常,纤维化少见,平滑肌细胞增殖良好;冻伤膀胱对照组膀胱壁修复缓慢.肌层结构紊乱,出现不同程度的纤维化,呈瘢痕样,且有炎症细胞存在.3周后正常膀胱组织内未找到人羊膜间质细胞,冻伤膀胱细胞移植组膀胱肌层中仍有大量人羊膜间质细胞存活,且少量已分化为膀胱平滑肌细胞.结论:人羊膜间质细胞具有分化为膀胱平滑肌细胞的潜能,同时可以促进损伤膀胱壁肌层自身修复.

人羊膜负载猪骨髓间充质干细胞体外生长的形态特点

背景:人羊膜含胶原、糖蛋白、蛋白多糖、整合素和板层体等多种成分,表达多种生长因子及其mRNA的相关蛋白,能为细胞的增殖、分化提供丰富的营养成分,有利于细胞的生长繁殖,其能否负载培养猪骨髓间充质干细胞良好生长值得研究.目的:建立人羊膜负载培养猪骨髓间充质干细胞生长的组织工程方法,观察骨髓间充质干细胞生长增殖的形态特点.设计:随机对照观察.单位:创伤、烧伤和复合伤国家重点实验室,解放军第三军医大学预防医学院全军复合伤研究所.材料:实验于2003-01/11在解放军第三军医大学预防医学院全军复合伤研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室完成.选用3只出生二三个月的贵州小香猪,雌雄不拘,体质量6～8 kg,由解放军第三军医大学实验动物中心提供.主要试剂:IMDM培养基(Hyclone,USA);优质胎牛血清PAA(Germany);Eosin B(Sigma,USA);OCT包埋剂(USA).主要仪器:BX51立式荧光显微镜(Olympus,Japan);IX70型倒置荧光显微镜(Olympus,Japan);恒冷切片机(2700-Frigcut,德国);骨髓穿刺针(江苏);超净工作台(苏净集团安泰公司);CO2恒温培养箱(QUEUE,USA).方法:按文献所述方法准备人羊膜,将按文献所述方法分离、培养的贵州小香猪骨髓间充质干细胞贵州小香猪的骨髓间充质干细胞原代培养、传代扩增后,以不同密度(0.84×105 /cm2,1.54×105 /cm2,2.75×105 /cm2)接种于人羊膜基质面,倒置显微镜及扫描电镜下观察不同培养密度骨髓间充质干细胞的生长增殖变化情况;将第2、3代骨髓间充质干细胞以1.54×105 /cm2的密度作为合适种植密度接种到由聚酯环支撑的人羊膜的基质面,长培养至18 d,逐日经卷膜、切片、苏木精-伊红染色光镜下观察人羊膜负载骨髓间充质干细胞生长情况,同时给予扫描及透射电镜.主要观察指标:不同培养密度及不同时间点骨髓间充质干细胞在人羊膜上的生长情况.结果:①不同种植密度人羊膜促进骨髓间充质干细胞生长比较:倒置显微镜下,以0.84×105 /cm2细胞密度接种的骨髓间充质干细胞,细胞排列不规则、稀疏,间距大;以1.54×105 /cm2细胞密度接种的骨髓间充质干细胞,细胞生长排列规则,密度适中,24 h前细胞轮廓清楚,细胞活性好;以2.75×105 /cm2细胞密度接种的骨髓间充质干细胞,细胞拥挤生长,12 h后不见细胞轮廓,多见非贴附细胞,随时间的推移,细胞老化快,细胞碎屑多见.扫描电镜下,以0.84×105 /cm2细胞密度接种的骨髓间充质干细胞,胞体肥大,呈不规则的长多边形扁平状,见粗细突起,细胞间距大;以1.54×105 /cm2细胞密度接种的骨髓间充质干细胞,细胞密度适中,胞体肥大,呈不规则的长多边形扁平状,粗细突起较多,突起相互连接交织.细胞边缘有重叠现象;以2.75×105 /cm2细胞密度接种的骨髓间充质干细胞,细胞拥挤重叠生长,周围突起不明显,边缘卷折,细胞碎屑多见.②不同时间点人羊膜负载骨髓间充质干细胞生长情况:倒置显微镜下,骨髓间充质干细胞接种在人羊膜的基质面后很快贴附生长,30 min 内就可见到骨髓间充质干细胞在人羊膜基质面上的贴附生长象.24 h后可见几乎全部骨髓间充质干细胞贴附生长,细胞活力好,折光度强,48 h后融合为单层,第4～18天可见骨髓间充质干细胞在人羊膜的基质面密集生长.苏木精-伊红染色可见骨髓间充质干细胞在人羊膜的基质面呈放射状、漩涡状或平行生长,胞体较大,呈梭形,胞核居中、深染、大而清晰,细胞形态较为一致;扫描电镜下,骨髓间充质干细胞在人羊膜的基质面生长4 d,排列密度适中,胞体肥大呈不规则的长多边形扁平状,粗细突起丰富,部分突起相互连接交织成网,胞膜形成突起牢固粘附于人羊膜基质上;透射电镜下,骨髓间充质干细胞在人羊膜的基质面生长4 d切面,骨髓间充质干细胞在人羊膜上大多呈双层生长,细胞呈纺锤状,胞核两端胞浆突起较长,互相重叠,染色质以常染色质为主,核仁明显,可见丰富细胞器,如粗面内质网,线粒体.结论:人羊膜对骨髓间充质干细胞有明显的促增殖作用,骨髓间充质干细胞可以人羊膜为载体在体外进行培养,人羊膜是骨髓间充质干细胞的良好载体.

人羊膜植入术治疗关节僵硬的疗效研究

目的植入人羊膜防止关节僵硬术后再粘连 , 恢复关节活动功能 . 方法 41例膝、踝、肘关节僵硬患者手术松解后在剥离的骨质、肌肉、肌腱、瘢痕等创面植入人羊膜覆盖并缝合固定 . 随访 1～ 4年 . 结果优 35例 , 良 3例 , 可 3例 , 优良率 92.7% , 无排斥反应 , 无感染 . 结论本法有效防止再粘连 , 疗效好 . 人羊膜易获得 , 保存期长 , 是理想的植入生物组织 , 并可用于预防性术后粘连 , 临床很有实用价值 .