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胃癌患者血清VEGF和MMP-3检测的临床意义
运用ELISA法检测18例健康人、52例胃癌患者术前VEGF和MMP-3的含量.胃癌患者血清VEGF和MMP-3水平明显高于健康者,并与浸润深度、淋巴结转移、远处转移、临床分期密切相关(P＜0.05)；与患者年龄、性别、肿瘤分化程度无关(P＞0.05).健康者血清VEGF和MMP-3含量没有相关性(P＞0.05),但在胃癌患者血清中两者存在明显相关性(P＜0.05).VEGF、MMP-3参与肿瘤的发生发展,与肿瘤的侵袭、转移密切相关,检测血清中VEGF、MMP-3的水平有助于胃癌的临床治疗和预后评估.
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MALAT1、COX-2、β-catenin、MMP-3、MMP-9等基因在结直肠癌发生发展中的意义
目的 探讨人肺腺癌转移相关转录因子1( MALAT1)、环氧合酶-2(COX-2)、β-连环素(β-catenin)、基质金属蛋白酶(MMP)-3 、MMP-9等基因在结直肠癌发生发展中的意义.方法 收集新鲜结直肠癌组织标本及其对应癌旁组织标本各30例,采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)方法检测MALAT1 、COX-2、β-catenin、MMP-3、MMP-9的mRNA表达水平,并与患者性别、年龄、癌胚抗原(CEA)、细胞免疫因子(CD4和CD8)、临床分期、肿瘤侵袭转移程度等进行相关性分析.结果 MALAT1、COX-2、β-catenin、MMPO在癌组织和癌旁组织中的表达差异均有统计学意义(P＜0.05),MMP-3则无统计学意义(P＞0.05).MALAT1、COX-2、MMP-9和β-catenin在癌组织中的表达量分别是癌旁组织表达量的2.22倍、1.86倍、2.16倍、0.58倍(P＜0.01).MALAT1(癌/癌旁)的表达差异与β-catenin(癌/癌旁)的表达差异呈负相关(r=-0.346,P =0.030).MMP-9(癌/癌旁)的表达差异与β-catenin(癌/癌旁)的表达差异则呈正相关(r=0.312,P=0.047).COX-2(癌/癌旁)与MMP-9(癌/癌旁)在男女患者之间的差异均有统计学意义(P=0.047;P=0.018)；COX-2(癌/癌旁)在CEA上升与未见改变的患者之间的差异也有统计学意义(P =0.021).结论 MALAT1 、COX-2、MMP-9、β-catenin在结1肠癌的发生发展中有重要意义,而MMP-3无重要参考价值；MALAT1和β-catenin的负相关性及MMP-9和β-catenin的正相关性说明其在结直肠癌的发生发展中存在一定的相互作用关系；COX-2(癌/癌旁)和MMP-9(癌/癌旁)在男女患者中的差异提示二者影响男女患结直肠癌的概率；检测COX-2可在一定程度上辅助肿瘤标志物CEA对结直肠癌的诊断.
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氯沙坦对动脉粥样硬化兔斑块稳定性的影响
目的 观察氯沙坦对动脉粥样硬化(AS)兔斑块中基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、巨噬细胞数量的影响,探讨其稳定AS斑块的可能机制.方法 应用球囊扩张腹主动脉加高脂饮食建立AS兔模型,将16只雄性新西兰大白兔随机分为2组,每组8只.模型组:饲喂含1%胆固醇高脂饲料;氯沙坦组:饲喂含1%胆固醇高脂饲料加氯沙坦25 mg/(kg·d),连续用药4个月.免疫组化法检测AS斑块中MMP-3的蛋白表达水平及巨噬细胞在AS斑块中的阳性面积;电镜观察两组AS斑块超微结构变化;实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测AS斑块中MMP-3 mRNA的表达.结果 免疫组化显示,氯沙坦组与模型组相比MMP-3蛋白表达显著减少(P＜0.05),巨噬细胞在AS斑块中的数量明显降低(P＜0.05);MMP-3 mRNA的表达明显减少(P＜0.05).结论 氯沙坦可通过下调MMP-3的水平,减少斑块内巨噬细胞的数量来稳定AS斑块.
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半月板损伤并发膝关节滑膜炎患者局部滑膜组织及滑液中基质金属蛋白酶3、9、13的表达观察
目的 观察半月板损伤导致的滑膜炎患者滑膜滑液中基质金属蛋白酶3(MMP-3)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)和基质金属蛋白酶13(MMP-13)的表达变化.方法 128例半月板损伤患者,根据是否有伴有滑膜炎分为半月板损伤诱发滑膜炎者81例(观察组)和单纯半月板损伤者47例(对照组).分别采用荧光定量PCR法和免疫组化法检测两组滑膜组织中MMP-3、MMP-9和MMP-13 mRNA和蛋白,采用ELISA法检测两组滑液MMP-3、MMP-9和MMP-13.结果 观察组滑膜组织中MMP-3、MMP-9和MMP-13 mRNA相对表达量分别为3.12±0.41、2.10±0.24、3.01±0.30,对照组分别为1.53±0.35、0.87±0.18、1.12±0.21,P均<0.05;观察组滑膜组织中MMP-3、MMP-9和MMP-13 蛋白相对表达量分别为394.1±20.6、170.5±14.8、190.7±13.6,对照组分别为204.5±15.3、90.3±8.4、109.3±10.4,P均<0.05.观察组滑液组织中MMP-3、MMP-9和MMP-13 mRNA相对表达量分别为12.5±2.1、15.7±2.4、9.5±1.9,对照组分别为19.4±2.6、17.5±2.3、14.7±2.4,P均<0.05.观察组Ayral滑膜炎评分≤60分者滑液MMP-3、MMP-9和MMP-13水平明显低于Ayral滑膜炎评分>60分者(P<0.05).结论 半月板损伤导致的滑膜炎患者滑膜、滑液存在MMP-3、MMP-9和MMP-13 高表达.MMP-3、MMP-9和MMP-13的异常表达可能与半月板损伤滑膜炎的发生有关.
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大剂量阿托伐他汀对急性脑梗死患者血清炎症因子水平及颈动脉内膜中层厚度的影响
目的：观察大剂量阿托伐他汀（ ATO）对急性脑梗死（ ACI）患者血清炎症因子及颈动脉内膜中层厚度的影响。方法124例ACI患者，根据颈动脉超声检查结果分为易损斑块组62例，稳定斑块组62例。将两组患者分别随机抽出31例患者，给予小剂量ATO（10 mg/d）治疗，各组剩余31例患者给予大剂量ATO（40 mg/d）治疗。对比各组治疗前后患者血清炎症因子[人可溶性CD40配体（ sCD40 L）、溶性细胞间黏附分子1（sICAM-1）、可溶性血管细胞黏附分子1（VCAM-1）以及基质金属蛋白酶3（MMP-3）]水平及颈动脉内中膜厚度（ IMT）变化。结果不同剂量ATO治疗后sCD40 L、sICAM-1、SVCAM-1、MMP-3水平及IMT值均较治疗前低，且易损斑块组及稳定斑块组大剂量治疗的患者较小剂量均低（ P均＜0．05）。大小剂量ATO治疗出现不良反应情况比较差异无统计学意义。结论大剂量ATO治疗ACI可以降低患者血清炎症因子水平，增加斑块的稳定性。
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乳腺癌组织 CD10、MMP-3蛋白表达及其临床意义
目的：观察乳腺癌组织CD10、基质金属蛋白酶3（ MMP-3）表达，探讨其临床意义。方法采用免疫组化SP法检测乳腺癌组织（乳腺导管原位癌23例、微小浸润乳腺癌16例、乳腺浸润性导管癌81例）和对照组乳腺组织（健康人16例、乳腺良性疾病24例） CD10和MMP-3表达，分析乳腺癌组织CD10、MMP-3表达及二者共表达与患者临床病理参数的关系，以及二者的相关性。结果导管原位癌、微小浸润乳腺癌、乳腺浸润性导管癌组织中CD10阳性表达率分别为39．1％、43．8％、92．6％，MMP-3阳性表达率分别为34．8％、37．5％、86．4％，均高于对照乳腺组织的12．5％、10．0％（P均＜0．05）；乳腺浸润性导管癌组织中二者阳性表达率均高于乳腺导管原位癌及微小浸润乳腺癌（P均＜0．05）。乳腺癌组织CD10、MMP-3表达和二者共表达均与患者年龄、淋巴结转移、组织学类型相关（P均＜0．05）。乳腺癌组织中CD10和MMP-3表达呈正相关（r＝0．436，P＜0．05）。结论乳腺癌组织CD10、MMP-3表达增加，二者的表达变化参与乳腺癌的浸润转移。
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MMP-3 mRNA 在左、右半结肠癌组织中的表达及其与患者临床病理参数和预后的关系
目的：探讨基质金属蛋白酶3（MMP-3）mRNA在左半结肠癌（LSCC）、右半结肠癌（RSCC）组织中的表达及其与患者临床病理参数和预后的关系。方法选择结肠腺癌患者80例，以结肠脾曲为界分为LSCC、RSCC各40例。取手术切除的癌组织及其配对的癌旁正常结肠组织，采用Real-time qRT-PCR法检测不同结肠组织中MMP-3 mRNA表达，并分析其表达与患者临床病理参数及预后的关系。结果 LSCC及RSCC组织中MMP-3 mRNA表达均高于其配对的癌旁正常结肠组织，且LSCC组织中MMP-3 mRNA表达明显高于RSCC组织（ P＜0．01）。无论LSCC还是RSCC，MMP-3 mRNA高表达均与患者脉管癌栓、异时性远处脏器转移有关（P均＜0．05）；MMP-3 mRNA高表达与LSCC患者肿瘤浸润深度及癌症相关死亡有关（P均＜0．05）。 Kaplan Meier生存分析显示，MMP-3 mRNA高表达者中位生存时间明显低于低表达者（P＜0．01）；分层分析发现，LSCC患者MMP-3 mRNA高表达者中位生存时间明显低于低表达者（P＜0．05），MMP-3 mRNA表达对RSCC患者预后无明显影响（P＞0．05）。结论 LSCC组织中MMP-3 mRNA表达明显高于RSCC组织；MMP-3 mRNA高表达仅是LSCC患者的不良预后因子。
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金铁锁灌胃对兔膝骨关节炎的治疗作用及其机制探讨
目的 观察金铁锁对兔膝骨关节炎(OA)的治疗作用,并探讨其可能机制.方法 120只兔随机分为4组各30只,模型组、金铁锁组、氨基葡萄糖组均制备OA模型,空白组不制备模型;制模后金铁锁组和氨基葡萄糖组分别灌胃金铁锁、氨基葡萄糖,模型组和空白组给予等量生理盐水.观察各组兔膝关节软骨大体、病理学变化,比较兔膝关节软骨白细胞介素1β(IL-1β)、基质金属蛋白酶3(MMP-3)、基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)的mRNA及蛋白.结果 与空白组比较,模型组膝关节肉眼观及病理学变化明显,且随制模时间变化而变化;与模型组比较,氨基葡萄糖组、金铁锁组上述情况好转,金铁锁组治疗效果更佳.与空白组比较,模型组IL-1β、MMP-3、TIMP-1 mRNA及蛋白表达升高;与模型组比较,氨基葡萄糖组、金铁锁组IL-1β、MMP-3 mRNA及蛋白表达降低,TIMP-1表达升高;与氨基葡萄糖组比较,金铁锁组IL-1β、MMP-3 mRNA及蛋白表达降低,TIMP-1表达升高.结论 金铁锁对兔膝OA有治疗作用,其机制可能与下调膝炎症因子IL-1β、MMP-3表达及上调TIMP-1表达有关.
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补肾壮督散水煎液对大鼠腰椎间盘退变的影响及其机制
目的 探讨补肾壮督散水煎液对大鼠腰椎间盘退变的影响及其可能机制.方法 将40只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、补肾壮督散组、塞来昔布组,各10只.除假手术组外,其余各组均采用腰椎纤维环全层穿刺法制备腰椎间盘退变模型.造模第2天,补肾壮督散组和塞来昔布组分别给予补肾壮督散水煎液、塞来昔布胶囊水溶液灌胃,假手术组、模型组给予等量生理盐水灌胃,连续8周.各组处死后取出椎间盘组织,HE染色后观察病理变化,醋酸铀及枸橼酸铅双重染色后透射电镜观察超微结构,Western blotting法检测椎间盘组织基质金属蛋白酶3(MMP-3)蛋白表达.结果 假手术组椎间盘纤维环层次分明,与髓核界限分明;成纤维细胞呈梭条状,细胞质内细胞器较发达.模型组椎间盘胶原纤维排列紊乱,与髓核界限消失;成纤维细胞细胞质内细胞器不发达.补肾壮督散组椎间盘纤维环层次较分明,与髓核界限分明;成纤维细胞细胞质内细胞器稍不发达.塞来昔布组椎间盘纤维环层次较补肾壮督散组紊乱,与髓核界限欠分明;成纤维细胞细胞质内细胞器较不发达.假手术组椎间盘组织MMP-3蛋白相对表达量为0.198±0.028,补肾壮督散组为0.525±0.056,塞来昔布组为0.809±0.029,模型组为1.065±0.055;各组椎间盘组织MMP-3蛋白相对表达量依次升高,组间两两比较P均<0.05.结论 补肾壮督散水煎液灌胃可延缓大鼠腰椎间盘退变;抑制腰椎间盘组织MMP-3表达可能是其作用机制.
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人肝癌细胞系MHCC-97H干细胞体外培养及其生物学行为观察
目的 培养人肝癌细胞系MHCC-97H中具有干细胞特性的细胞群,探讨其分子生物学特点.方法 将人肝癌细胞系MHCC-97H分别培养于干细胞培养体系及普通培养体系(分别为观察组及对照组).培养10 d后显微镜(100倍及400倍)观察细胞生长情况；免疫荧光法检测细胞表面蛋白CD133、细胞核相关抗原(Ki67)、基质金属蛋白酶9(MMP9)、多药耐药蛋白1(MDR1)表达；West-blot法检测相应蛋白表达.结果 观察组细胞呈半贴壁悬浮生长的克隆球；对照组细胞呈贴壁生长.观察组CD133、MDR1、MMP9呈高表达,对照组未见表达,P＜0.05；两组Ki67均呈高表达.结论 MHCC-97H中存在一定数量的肿瘤干细胞,该群细胞是介导肝癌发生转移和耐药的主要因素.
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超敏C-反应蛋白、MMP-3与TIMP-1在急性冠脉综合征的表达
目的探讨急性冠脉综合征(ACS)患者血清超敏C-反应蛋白(hs-CRP)、基质金属蛋白酶3(MMP-3)、金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP-1)与冠状动脉粥样硬化斑块稳定性的关系.方法对58例ACS患者,12例稳定型心绞痛患者及15例正常体检者外周血血清hs-CRP、MMP-3、TIMP-1水平进行检测并进行相关性分析.结果ACS组血清hs-CRP、MMP-3水平与正常对照组的差异具有显著性(P<0.05,P<0.01),急性心肌梗死组患者ⅡMP-1水平与稳定型心绞痛组、不稳定型心绞痛组、正常对照组的比较有非常显著性差异(P<0.01).ACS组间指标相关分析显示,血清hs-CRP水平与MMP-3水平无相关性(r=0.099,P=0.539),与TIMP-1水平有显著相关性(r=0.415,P=0.007),血清MMP-3水平与TIMP-1水平有显著相关性(r=0.333,P=0.033).结论ACS患者血清hs-CRP、MMP-3、TIMP-1水平升高与ACS的发生关联,提示与动脉粥样硬化(AS)斑块不稳定有关.
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健脾活血方联合盐酸氨基葡萄糖胶囊口服治疗膝骨关节炎
目的:探讨健脾活血方联合盐酸氨基葡萄糖胶囊口服治疗膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)的临床疗效及其作用机制.方法:2014年1月至2017年2月,采用健脾活血方联合盐酸氨基葡萄糖胶囊口服治疗KOA患者46例.男25例、女21例,年龄(57.12±10.09)岁,左侧24例、右侧22例,病程(15.23±4.62)个月.Kellgren-Lawrence分级,Ⅰ级32例、Ⅱ级14例.共治疗8周.分别于治疗前和治疗结束后,测定患者外周血中CD3+、CD3+CD8+淋巴细胞个数,检测患膝关节液中基质金属蛋白酶-3(matrix metalloproteinase-3,MMP-3)、前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)的含量,采用疼痛视觉模拟量表(visual analogue scale,VAS)评分评价患膝疼痛,采用西安大略和麦克马斯特大学(Western Ontario and McMaster universities,WOMAC)骨关节炎指数评分评价患膝功能.治疗结束后,参照《中药新药临床研究指导原则》骨关节炎疗效评定标准评价综合疗效.结果:治疗结束后,46例患者外周血中CD3+、CD3+CD8+淋巴细胞个数均较治疗前增加[(868.17±100.47)个·μL-1,(580.29±106.71)个·μL-1,t=20.331,P=0.033;(287.84±66.21)个·μL-1,(163.78±69.76)个·μL-1,t=21.792,P=0.002];患膝关节液中MMP-3、PGE2含量均较治疗前降低[(5.32±1.97)μg·mL-1,(18.52±2.71)μg·mL-1,t=12.374,P=0.000;(63.92±9.51)μg·mL-1,(130.61±10.34)μg·mL-1,t=70.735,P=0.027];患膝疼痛VAS评分和WOMAC指数评分均较治疗前降低[(2.87±1.39)分,(7.22±1.63)分,t=1.471,P=0.000;(12.52±2.93)分,(30.19±4.67)分,t=28.201,P=0.001].综合疗效评价,本组临床控制14例、显效20例、有效8例,无效4例.结论:健脾活血方联合盐酸氨基葡萄糖胶囊口服治疗KOA,可通过改善机体免疫功能和减轻膝关节炎症反应,缓解患膝疼痛,改善膝关节功能.
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黄芪甲苷对人膝骨关节炎退变关节软骨细胞基质金属蛋白酶-1及基质金属蛋白酶-3mRNA表达的影响
目的:研究黄芪甲苷对人膝骨关节炎退变关节软骨细胞基质金属蛋白酶-1及基质金属蛋白酶-3mRNA表达的影响.方法:取膝骨关节炎患者膝关节软骨进行细胞培养,将培养的软骨细胞分离传代后取第3代细胞,通过HE染色、甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫荧光染色进行软骨细胞鉴定,并进行基质金属蛋白酶-1和基质金属蛋白酶-3免疫荧光染色.观察软骨细胞退变情况后将其分为6组,A组不进行干预；B组加入25 mmol·L-1黄芪甲苷；C组加入50 mmol·L-黄芪甲苷；D组加入75 mmol·L-1黄芪甲苷；E组加入100 mmol·L-黄芪甲苷；F组加入500 mmol·L-1黄芪甲苷.分别于培养开始后4h、8h、24 h、48 h、72 h5个时间点,采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测各组退变软骨细胞内基质金属蛋白酶-1和基质金属蛋白酶-3mRNA表达的情况.结果:①形态观察.原代细胞中梭形细胞和多角形细胞并存,细胞核偏于细胞的一侧而贴近细胞膜,细胞纤丝较长.HE染色细胞质为红色,胞膜呈蓝色；甲苯胺蓝染色细胞质和胞膜均呈深蓝色；Ⅱ型胶原染色阳性为绿色荧光,细胞核采用4',6-二脒基-2-苯基吲哚复染,在不同波段荧光激发下,胞浆和胞膜可见清晰绿色荧光,细胞核区域未见明显绿色荧光,证明培养细胞表达特征性基因Ⅱ型胶原,主要分布在胞浆和细胞膜上,证明所培养的细胞为软骨细胞.基质金属蛋白酶-1和基质金属蛋白酶-3免疫荧光染色可见清晰绿色荧光,软骨细胞以多角形多见.②基质金属蛋白酶-1mRNA表达.不同时间点间软骨细胞基质金属蛋白酶-1mRNA表达水平有差异(F=11.027,P=0.000)；不同组间软骨细胞基质金属蛋白酶-1mRNA表达水平有差异(F=102.345,P=0.000),A组高于B组、C组、D组、E组(P=0.000；P=0.000；P=0.000；P=0.000),F组高于A组、B组、C组、D组、E组(P =0.009；P=0.000；P=0.000；P=0.000；P=0.000)；时间因素和组间因素存在交互效应(F=8.258,P=0.000).③基质金属蛋白酶-3mRNA表达.不同时间点间软骨细胞基质金属蛋白酶-3mRNA表达水平有差异(F=12.316,P=0.000)；不同组间软骨细胞基质金属蛋白酶-3mRNA表达水平有差异(F =66.112,P=0.000),A组高于B组、C组、D组、E组(P=0.008；P=0.000；P=0.000;P =0.000),F组高于A组、B组、C组、D组、E组(P=0.000;P =0.000；P=0.000；P=0.000；P=0.000)；时间因素和组间因素存在交互效应(F=14.846,P=0.000).结论:低浓度的黄芪甲苷能通过抑制退变软骨细胞合成基质金属蛋白酶-1和基质金属蛋白酶-3,延缓软骨细胞退变；浓度过高则会促进退变软骨细胞合成基质金属蛋白酶-1和基质金属蛋白酶-3,加速软骨细胞退变.
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强直性脊柱炎患者外周血miR-17和基质金属蛋白酶3表达及其临床意义
目的 探讨miR-17和基质金属蛋白酶3(MMP-3)在强制性脊柱炎(AS)患者血浆、外周血单个核细胞(PBMC)表达及其临床意义.方法 选取2015年1月-2017年6月AS患者60例作为研究组,同期健康体检者60例作为对照组,qRT-PCR检测血浆及PBMC中miR-17,酶联免疫吸附(ELISA)法检测MMP-3的表达.ROC曲线分析评价其对AS诊断灵敏度及特异度.结果 患者血浆、PBMC中miR-17表达水平降低,其在血浆中表达低于PBMC,两者存在正相关(r =0.736,P＜0.01);MMP-3表达水平显著升高,疾病活动期高于稳定期.miR-17、MMP-3与BASDAI、HLA-B27、CRP及ESR呈正相关(r值分别为-0.698、-0.497、-0.703、-0.662、-0.578,0.654、0.798、0.660、0.763,P＜0.01).ROC曲线分析表明miR-17及MMP-3对AS具有较高诊断灵敏度和特异度,联合检测能提高对AS的诊断能力.结论 miR-17及MMP-3在AS外周血中存在差异表达,有望成为新的临床诊断指标.
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基质金属蛋白酶3在晶状体上皮细胞中的表达及其意义
背景 后发性白内障是现代白内障囊外摘出术后导致视力下降的常见并发症.基质金属蛋白酶(MMPs)是参与降解除多糖以外全部细胞外基质(ECM)的重要蛋白酶,探讨MMP-3对后发性白内障的基因治疗一直是研究热点,而纤连蛋白(FN)是MMP-3的主要降解底物,能间接反映MMP-3的表达情况.目的 构建pEGFP-N1-MMP-3真核重组质粒并转染晶状体上皮细胞(LECs),观察MMP-3在LECs中的表达,探讨后发性白内障基因治疗的可能性.方法 取6只新鲜猪晶状体,将囊膜用组织块法进行原代培养,获得LECs.用E.coli DH5α MMP-3和E.coli DH5α pEGFP-N1质粒构建MMP-3的真核表达重组质粒pEGFP-N1-MMP-3,通过双酶切,DNA测序分析鉴定人MMP-3片段的准确性.将构建的pEGFP-N1-MMP-3转染至猪LECs中,通过绿色荧光蛋白(GFP)间接观察MMP-3在猪LECs中的表达,用Western blot法检测pEGFP-N1-MMP-3真核重组质粒转染后LECs表达产物FN的相对表达量,间接评估MMP-3的表达量. 结果 双酶切鉴定结果符合质粒pEGFP-N1及目的片段MMP-3大小.软件分析测序结果表明,重组质粒pEGFP-N1-MMP-3中的MMP-3基因与GenBank中的人MMP基因序列相似性达99.6％,表示目的片段已正确插入pEGFP-N1载体.原代培养猪LECs,将重组质粒pEGFP-N1-MMP-3转染入猪LECs,荧光显微镜下可见明显的GFP绿色荧光.Western blot检测表明,FN在pEGFP-N1 -MMP-3真核重组质粒转染组的表达量为0.666±0.008,空质粒转染组FN的表达量为0.326±0.071,差异有统计学意义(P=0.000). 结论 成功构建了pEGFP-N1-MMP-3质粒,并能够在猪LECs中表达,为进一步研究该蛋白在LECs中的表达与功能奠定了基础.
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汉防己甲素对翼状胬肉成纤维细胞抑制作用的实验研究
目的观察汉防己甲素对体外培养的翼状胬肉成纤维细胞的抑制作用,寻找治疗翼状胬肉和预防其复发的有效药物.方法用MTT比色法测定不同浓度的汉防己甲素对体外培养的翼状胬肉成纤维细胞增生的抑制作用,并与丝裂霉素C(MMC)进行比较;用荧光定量PCR检测10-5mol/L的汉防己甲素对翼状胬肉成纤维细胞基质金属蛋白酶(MMP)MMP-3 mRNA的表达的影响.结果不同浓度的汉防己甲素对体外培养的翼状胬肉成纤维细胞的增生均有明显的抑制作用(P＜0.01);10-5mol/L的汉防己甲素作用24 h其MMP-3 mRNA的表达量下降了27.12%.结论汉防己甲素对翼状胬肉成纤维细胞具有明显的抑制作用,可望用于对翼状胬肉的治疗.
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牛磺酸对弥漫性脑损伤大鼠脑皮层基质金属蛋白酶3表达的影响
目的 探讨牛磺酸对弥漫性脑损伤大鼠脑皮层基质金属蛋白酶3(MMP-3)表达的影响.方法 雄性SD大鼠24只,随机分为假手术组、脑损伤组和牛磺酸组,实验第1天至第7天,牛磺酸组用50g·L-1牛磺酸生理盐水溶液按200mg·kg-1灌胃,每日1次;假手术组和脑损伤组用4mL·kg-1生理盐水灌胃,每日1次.实验第8天建立大鼠弥漫性颅脑损伤模型,24h后处死大鼠,免疫组织化学检测脑皮层中MMP-3的表达情况.结果 脑损伤组大脑皮层MMP-3阳性表达平均光密度值高于假手术组(P<0.01),牛磺酸组大脑皮层MMP-3阳性表达平均光密度值低于脑损伤组(P<0.05).结论 牛磺酸可通过下调弥漫性脑损伤大鼠脑皮层MMP-3的表达发挥对弥漫性脑损伤的保护作用.
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杜仲补骨脂药对干预去势鼠成骨细胞增殖以及MMP3-OPN通路蛋白表达的研究
目的 探讨杜仲补骨脂药对干预去势鼠成骨细胞增殖和MMP3-OPN-MAPK通路蛋白表达及其作用机理.方法 将10只饲养12周的去势鼠处死,选取股骨胫骨骨髓,进行体外成骨细胞传代培养.将含杜仲补骨脂药对2g生药的药液喂养20只SD大鼠,随机均分为空白对照(A)组(给蒸馏水1ml),低浓度(B)组(给药0.5ml),中浓度(C)组(给药1ml),高浓度(D)组(给药2ml),提取各组处死大鼠含药血清干预成骨细胞,运用MTT法测定成骨细胞增殖能力,RT-PCR法测定通路蛋白MMP3、OPN和MAPK的mRNA水平.结果 术后12周模型组大鼠腰椎及股骨骨密度为(0.163±0.012)g/cm2和(0.152±0.013) g/cm2,假手术组为(0.326±0.015) g/cm2和(0.295±0.006) g/cm2,两组有明显差异(P＜0.05),表明大鼠骨质疏松的模型建立成功.成骨细胞增殖中B至D组均使MTI法检测的光吸收值升高,较A组显著性增加(P＜0.01和P＜0.05),增加幅度与组别关系近似斜线,以D组促增殖作用显著,增值率达到131％.D组中MMP3含量明显低于其余各组(P＜0.01),OPN和MAPK含量高于其余各组(P＜0.05).同时,B、C、D是随着复方含药血清依次增加的三组,B组中MMP3表达多,其余组含量依次下降,三组中OPN含量基本依次增加,而MAPK含量在含药血清药物添加后明显增加,不同于A组(P＜0.01).结论 中药杜仲补骨脂药对含药血清可以促进去势鼠成骨细胞的增殖并且通过MMP3-OPN-MAPK通路激活骨重建.
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青蛾丸对去势鼠成骨细胞增殖以及MMP3-OPN-MAPK通路蛋白表达的影响
目的 探讨青蛾丸对去势鼠成骨细胞增殖和MMP3-OPN-MAPK通路蛋白表达及其作用机理.方法 将15只饲养12周的去势鼠处死,选取股骨胫骨骨髓,进行体外成骨细胞传代培养.将含青蛾丸2g生药的药液喂养40只SD大鼠,随机均分为空白对照(A)组(给蒸馏水1ml),低浓度(B)组(给药0.5ml),中浓度(C)组(给药1ml),高浓度(D)组(给药2ml),提取各组处死大鼠含药血清干预成骨细胞,运用MTT法测定成骨细胞增殖能力,RT-PCR法测定通路蛋白MMP3、OPN和MAPK的mRNA水平.结果 ①术后12周模型组大鼠腰椎及股骨骨密度为(0.153±0.011) g/cm2和(0.162±0.015) g/cm2,假手术组为(0.336±0.016) g/cm2和(0.293±0.005) g/cm2,两组有明显差异(P＜0.05),表明大鼠骨质疏松的模型建立成功.②成骨细胞增殖中B至D组均使MTT法检测的光吸收值升高,较A组显著性增加P＜0.01和P＜0.05),增加幅度与组别关系近似斜线,以D组促增殖作用显著,增值率达到156％.③D组中MMP3含量明显低于其余各组(P＜0.01),OPN和MAPK含量高于其余各组(P＜0.05).同时,B、C、D是随着复方含药血清依次增加的三组,B组中MMP3表达多,其余组合量依次下降,三组中OPN含量基本依次增加,而MAPK含量在含药血清药物添加后明显增加,不同于A组(P＜0.01).结论 我们发现中药复方青蛾丸含药血清可以促进去势鼠成骨细胞的增殖并且通过MMP3-OPN-MAPK通路激活骨重建.
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MMP3、MMP7在腰椎间盘突出组织中的表达及其临床意义
目的:检测腰椎间盘突出症患者突出椎间盘组织中基质金属蛋白酶3(MMP-3)、基质金属蛋白酶7(MMP-7)的表达,为研究椎间盘突出重吸收提供生化依据,以便进一步了解腰椎间盘突出组织重吸收的发生机制.方法:运用免疫组织化学法,通过兔抗人MMP-3、MMP-7的单克隆抗体,对30例突出腰症椎间盘标本进行染色.结果:在突出椎间盘组织中,破裂型比非破裂型MMP-3、MMP-7的阳性表达率更高,其差异有统计学意义.结论:MMP-3、MMP-7与椎间盘突出重吸收可能有关,破裂型比非破裂型更易于重吸收.
