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HPLC法测定草乌中新乌头碱、乌头碱和次乌头碱的含量
[目的]建立HPLC法测定草乌中新乌头碱、乌头碱和次乌头碱含量的方法.[方法]采用Agilent C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm)；以甲醇-0.1％氨水(磷酸调pH9.0)梯度洗脱,检测波长235nm,柱温30℃,流速1.0mL/min.[结果]三种生物碱得到有效分离,线性范围分别为新乌头碱0.1944～1.1664μg(r =0.9997)、乌头碱0.9920～5.9520μg(r =0.9998)、次乌头碱0.0792～0.4752μg(r=0.9994)；平均加样回收率分别为98.3％( RSD =0.97％,n=6)、99.2％( RSD=0.84％,n=6)、98.1％ (RSD=1.1％,n=6).[结论]该方法重复性好,可操作性强,能够用于对草乌的质量控制.
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高效液相色谱法测定蒙药草乌花中药效组分的含量
目的:建立以高效液相色谱法同时测定蒙药草鸟花中乌头碱、新乌头碱、次乌头碱含量的方法.方法:Extend-C18(250mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-0.3mol/L三乙胺(65:35),流速为0.8mL/min,检测波长为235nm,柱温为35℃.结果:乌头碱、新乌头碱、次乌头碱分别在1～5μg,0.35～1.75μg,0.5～2.5μg范围内呈良好的线性关系.结论:本方法简便、准确、分离效果好、线性范围宽、灵敏度高,可用于本品的质量控制.
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甘草苷、甘草次酸与次乌头碱配伍的研究
目的:探讨甘草苷、甘草次酸与次乌头碱(HA)配伍对心肌细胞MDA含量及心肌连接蛋白43(Cx43)表达水平的影响.方法:以新生SD乳鼠心肌细胞为研究对象,HA分别单独作用,与甘草苷、甘草次酸、甘草苷+甘草次酸不同浓度按1∶1、1∶2、1∶4比例配伍作用于心肌细胞,检测其MDA活性,根据结果选取配伍效果理想的配伍组,采用RT-PCR测定心肌连接蛋白43(Cx43)基因表达.结果:HA与甘草苷、甘草次酸、甘草苷和甘草次酸配伍组比HA单独作用可以提高Cx43基因的表达,减少MDA含量,其中1∶1次乌头碱甘草次酸组、1∶4次乌头碱甘草苷组、1∶1∶1次乌头碱和甘草次酸、甘草苷组作用可以增加Cx43基因的表达水平.结论:适宜浓度比例的甘草苷、甘草次酸与HA配伍可以减少HA对心肌细胞的氧化损伤及增加43(Cx43)基因表达水平.
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川乌浸膏颗粒剂的质量标准研究
目的:对川乌浸膏颗粒剂进行质量标准研究.方法:采用薄层色谱法对颗粒中的乌头碱、次乌头碱、新乌头碱进行定性鉴别,层析条件为:硅胶G板,石油醚-乙醚-丙酮(5:2:3)(氨蒸气饱和)为展开剂,改良碘化铋钾显色.并对以上3一种双酯型生物碱用HPLC法进行含量测定,色谱条件为:甲醇-水-氯仿-三乙胺(63:37:18:0.45)为流动相;色谱柱YWG-C18H353.9mm×30cm;紫外检测波长254nm;流速1.2ml/min;纸速0.2cm/min.同时用滴定法和分光光度法分别对乌头总生物碱和酯型乌头生物碱进行含量测定.结果与结论:方法简便,结果可靠,可作为控制该制剂质量的方法.
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次乌头碱对脑梗死大鼠神经功能与血清中t-PA,PAI-I含量水平的影响
目的 通过建立脑梗死大鼠模型,探讨次乌头碱对神经功能与脑梗死大鼠血清中t-PA,PAI-I含量水平的影响.方法 大鼠随机分为假手术组(Sham),脑梗死组(CI),次乌头碱低剂量组(HA-L)、中剂量组(HA-M)和高剂量组(HA-H),采用线栓法建立大鼠脑动脉闭塞模型,建模成功后,次乌头碱低剂量组、中剂量组和高剂量组分别给予次乌头碱灌胃0.25 mg/kg,0.75 mg/kg与2.25 mg/kg,每天1次,共给药3 d.给药完成后,对各组大鼠进行神经功能缺损评分,ELISA检测血清中组织型纤溶酶原激活物(t-PA)和纤溶酶原激活抑制物(PAI-I)的含量水平,TTC染色检测脑梗死体积,免疫印迹法检测ICAM-1与VCAM-1蛋白表达水平.结果 与脑梗死组相比,采用次乌头碱给药后,脑梗死大鼠的神经功能缺损评分显著降低,血清中t-PA与PAI-I的含量水平明显下降,脑梗死面积降低,脑组织中ICAM-1与VCAM-1蛋白表达明显下降.结论 次乌头碱能够改善脑梗死大鼠的神经功能缺损状态,可能与其影响纤溶系统以及ICAM-1与VCAM-1因子表达有关.
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高效液相色谱法测定附子及其炮制品中三种双酯型生物碱
本文建立了一种能同时检测附子及其炮制品中乌头碱、新乌头碱和次乌头碱含量的HPLC-DAD检测方法.采用的色谱柱为Hepersil BDS C18分析柱(150 mm x 4.6 mm ID,5μm),流动相为40 mmol/L乙酸铵(浓氨水调pil10.0)(A)-乙腈(B)梯度洗脱,检测波长为240 nm,流速为1 mL/min.乌头碱、新乌头碱、次乌头碱的线性范围分别为0.0232-2.32 μg、0.0216-2.16 μg、0.0214-2.14 μg(r=0.999976、0.999992、0.999994,n=6);加样回收率为96.4-103.5%(n=6),RSD均小于2.3%.测定结果表明7批不同产地附子生品及16批由同一产地生附子制得的炮制品中三种双酯型生物碱的含量差异悬殊,该方法为附子质量标准和炮制工艺规范的制定及进一步的药效学研究提供了可靠的数据和方法学平台.
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生品、制品草乌毒性成份变化分析
草乌为毛莨科植物北乌头及乌头的干燥块根.其性味苦、辛、热、大毒、归心、肝、脾经.其功能温经止痛,祛风除湿,用于寒湿痹痛,肢体疼痛,麻木不仁,心腹冷痛等.其成份以北乌头根为例:含总生物碱0.7%～1.3%,其中主要为剧毒的双酯类生物碱:中乌头碱、次乌头碱、乌头碱等.其制品过程如下:取净草乌,水浸泡至内无干心,取出加水蒸煮至沸4～6 h,取出切片、干燥.制品由于遇水、加热,其毒性成分乌头碱性质不稳定,易水解成毒性小的生物碱:苯甲酰乌头胺、乌头胺及单酯类乌头碱、胺醇类生物碱.
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HPLC法同时测定痹通药酒中4种生物碱成分
目的 建立HPLC法同时测定痹通药酒中4种生物碱的含有量.方法 该药物乙醚提取液分析采用Agilent C1s色谱柱(5 μm,4.6 mm×250 mm);流动相[乙腈-四氢呋喃(25∶15)]-0.1 mol/L醋酸铵,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温30℃;检测波长235 nm.结果 新乌头碱、次乌头碱、乌头碱、苯甲酰新乌头原碱分别在39.87～199.36、99.63 ～498.13、13.87 ～69.33、39.65 ～ 198.27μg/mL范围内线性关系良好(r＞0.999 0),平均加样回收率分别为98.24％(RSD=0.75％)、99.54％(RSD=0.50％)、97.60％ (RSD=1.54％)、99.52％ (RSD=1.32％).结论 该方法简便、准确、可靠,可用于痹通药酒的质量评价和控制.
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地龙舒腰胶囊中有毒生物碱的检查
目的 地龙舒腰胶囊(地龙,穿山龙,制川乌)中有毒生物碱的检查.方法 以制川乌中所含生物碱为研究对象,采用HPLC法,Xtimate C18色谱柱(4.6 mmm×250 mm,5μm),以0.26％醋酸铵(氨水调pH至9.5)-乙腈(55∶45)为流动相,柱温为30℃,检测波长为235 nm,体积流量为0.8 mL/min,对方中双酯型生物碱进行含有量限度测定.结果 所建立方法专属性良好,新乌头碱、乌头碱、次乌头碱的稳定性、精密度、日间精密度良好,新乌头碱、乌头碱、次乌头碱的平均加样回收率在90％ ～ 110％之间,而在胶囊中的3种有毒生物碱未检出.结论 地龙舒腰胶囊中的有毒生物碱符合标准.
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HPLC法测定不同厂家三七伤药片中乌头碱、新乌头碱和次乌头碱
目的 建立HPLC法测定不同厂家三七伤药片(三七、草乌、雪上一枝蒿、红花等)中乌头碱、新乌头碱和次乌头碱.方法 采用Intersil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),以甲醇-0.1%三乙胺为流动相进行梯度洗脱;检测波长235 nm;柱温为35 ℃;体积流量1.0 mL/min.结果 不同厂家三七伤药片中乌头碱、新乌头碱和次乌头碱的含有量差异悬殊.结论 该法灵敏度高,重复性好,能准确测定三七伤药片中乌头碱、新乌头碱和次乌头碱,为乌头碱限量检查提供参考依据.
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LC-MS/MS测定正骨水中3种乌头类生物碱的方法研究
目的 建立高效液相色谱-串联质谱法检测正骨水(九龙川、木香、海风藤、草乌等)中3种乌头类生物碱(乌头碱、次乌头碱和新乌头碱)的定量测定方法.方法 样品经浓缩,乙醚提取,再经1％甲酸萃取,正己烷净化,用XTerraMS(R)C18,5μm,2.1 mm×150 mm柱子分离,以乙腈-10 mmol/L醋酸胺(含0.1％甲酸)(35∶65)作为流动相,柱温35℃,体积流量0.25 mL/min,采用电喷雾离子源(ESI),正离子模式,多反应监测方式检测,外标法定量.结果 在本实验条件下,乌头碱、次乌头碱和新乌头碱的标准曲线及线性范围分别为:Y=47.374 2X-0.136 0(1.14～57.0ng/mL, r=0.99997); Y=78.384 6X-23.14 (1.328 ～66.40 ng/mL, r=0.999 93); Y=66.887 4X-16.69 (0.995 ～49.75 ng/mL,r=0.999 70)；加样回收率均在80％ ～110％之间,回收及重复性的RSD均少于5％；低检出质量浓度均为0.01 ng/mL.结论 该方法操作简单,方法精密度较好、准确度较高,结果满意,可作为正骨水中乌头类生物碱的测定方法.
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HPLC法测定癌痛巴布剂中乌头碱、次乌头碱、新乌头碱
目的 建立癌痛巴布剂(草乌、生天南星、赤芍、乳香、生姜,等)中乌头碱、次乌头碱、新乌头碱的定量测定方法.方法 色谱柱Elipse CDB-C18(4.6mm×150mm,5μm)键合硅胶柱；流动相乙腈-0.2％冰乙酸(加三乙胺调节pH值为6.25)(29∶71)；体积流量1.0 mL/min；柱温30℃；检测波长235 nm.采用HPLC法测定癌痛巴布剂中乌头碱、次乌头碱、新乌头碱.结果 乌头碱、次乌头碱、新乌头碱分别在进样量53.6～321.6 ng、145.2～871.2 ng、326.4～1 598.4 ng范围内线性关系良好,r均为1,在8 h内稳定性良好.平均加样回收率分别为99.26％(RSD为1.83％)、99.71％(RSD为1.52％)、97.82％(RSD为1.15％)(n=6).结论 该方法准确、简便、快速,可以用于定量测定癌痛巴布剂中乌头碱、次乌头碱、新乌头碱.
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四逆泡腾片中3种乌头类双酯型生物碱的HPLC测定
目的 建立四逆泡腾片中3种乌头类双酯型生物碱的高效液相色谱定量方法.方法 采用Hypersil ODS2 C18 (4.6mm×250 mm,5μm)色谱柱,流动相:乙腈-四氢呋喃(25:15)为流动相A,以0.1 mol/L醋酸铵溶液(每1 000mL中加入冰醋酸0.5 mL)为流动相B进行梯度洗脱,体积流量1.0 mL/min,检测波长235 nm.结果新乌头碱、次乌头碱、乌头碱的线性范围分别为1.255～ 62.75 μg /mL,1.215～60.75 μg/mL,0.489～61.125 μg/mL(r=1、0.999 9、0.9999);平均加样同收率分别为98.54％、96.77％、96.38％;RSD分别为0.70％、1.94％、2.62％(n=6).结论 该方法准确、专属、分离效果好、灵敏度高,可用于四逆泡腾片的质量控制.
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RP-HPLC测定镇痛活络酊中3种乌头类生物碱含量
目的:建立镇痛活络酊(川乌、草乌、大黄、半夏、天南星等)中3种乌头类生物碱(乌头碱、新乌头碱和次乌头碱)的含量测定方法.方法:采用ZOBAX Extend.ClB(250 mm ×4.6 mm,5μm)色谱柱,以0.1%二乙胺(磷酸调pH9.0)为流动相A,乙腈为流动相B,进行梯度洗脱:0～20 min A:B(63:37),20-45 min A:B(63→55:37→45),流速为1 mL/min,柱温为30℃,检测波长为232 nm.结果:乌头碱、新乌头碱和次乌头碱的标准曲线及线性范围分别为:Y=1.25X+0.021 2(9.74 ng～974 ng,r=0.999 9);Y=1.24X-1.93(23.86～2 386 ng,r=0.999 9);Y=1.26X-0.561(29.94 ng～2 994 ng,r=0.999 9);乌头碱、新乌头碱和次乌头碱的进样精密度分别为:1.50%、0.68%和0.49%;加样回收率及其RSD分别为:100.2%(RSD为3.2%)、102.9%(RSD为2.2%)和98.2%(RSD为2.0%),其样品测定重复性的RSD分别为1.92%、0.85%和0.72%;溶液在24 h内稳定.结论:方法操作简单、稳定性好,准确度高.
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甘草次酸、甘草苷配伍次乌头碱对慢性心衰大鼠细胞凋亡通路的影响
目的 探讨甘草次酸、甘草苷配伍次乌头碱对慢性心衰大鼠的抗心衰作用及可能机制.方法 60只SD大鼠通过主动脉弓缩窄术造成慢性心衰模型,4周后随机分为假手术组(6只)、模型组(7只)、地高辛组(8只)、次乌头碱组(次乌组,9只)、甘草次酸+次乌头碱组(甘次+次乌组,9只)、甘草苷+次乌头碱组(甘苷+次乌组,9只)、甘草次酸+甘草苷+次乌头碱组(甘次+甘苷+次乌组,9只).连续给药1周后,于第7天处死大鼠,处死前取血并行超声心动图,测得射血分数(EF)及缩短分数(FS)情况;并应用ELISA法检测血清B型钠尿肽(BNP)改变;应用免疫组化法检测心肌细胞凋亡通路Bcl-2、Bax及Caspase-3的表达情况;并应用Western blot法检测Fas、Fas-L蛋白表达情况.结果 与模型组相比,除次乌组外,其它各药物配伍组的Bcl-2表达均高于模型组,同时Bax、Caspase-3、Fas与Fas-L表达及EF、FS及BNP值均低于模型组;其中以甘次+甘苷+次乌组作用效果明显.结论 甘草次酸、甘草苷配伍次乌头碱可下调EF、FS及BNP的水平及促凋亡蛋白表达,上调抑制凋亡蛋白表达,其可能是甘草配伍附子对慢性心衰的抗凋亡作用机制之一.
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甘草与附子配伍减毒的有效成分及作用环节研究
目的:探明甘草酸和甘草次酸是否为甘草中降低附子毒性的有效成分及其作用环节.方法:将附子单煎及附子与甘草、附子与甘草酸、附子与甘草次酸分别合煎,用HPLC法分析各种煎液中乌头碱及次乌头碱的煎出量,同时用动物实验测定各煎液不同给药途径的急性毒性,比较各煎液的LD50.结果:口服给药,甘草、甘草次酸与附子合煎液的毒性明显减小,甘草酸与附子合煎毒性略有减小;腹腔注射给药,甘草酸与附子合煎液的毒性明显增加.合煎时甘草能降低乌头类生物碱的溶出,而甘草酸、甘草次酸均有增加溶出的作用,甘草酸的作用强于甘草次酸.结论:甘草与附子合煎口服可减小附子毒性,部分原因是其可减少附子中有毒生物碱的煎出.但甘草酸及甘草次酸并不能减少附子中有毒生物碱的煎出,而可能与有毒生物碱结合,延缓其在胃肠道吸收,发挥一定的减毒作用.
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透皮促进剂对散结止痛巴布膏中次乌头碱透皮的影响
目的 考察透皮促进剂对散结止痛巴布膏中次乌头碱透皮吸收的影响.方法 建立皮肤渗透液中次乌头碱含量测定的HPLC方法.利用大鼠腹部皮肤和Franz垂直扩散池进行体外透皮扩散试验,比较不同浓度的氮酮和桉叶油对散结止痛巴布膏中次乌头碱透皮速率的影响.结果 不加透皮促进剂的散结止痛巴布膏中次乌头碱的透皮速率为0.65 ng·cm-2·h-1;2%氮酮与10%丙二醇组成的复合透皮促进剂使次乌头碱透皮速率增加9.87倍;2%按叶油增加次乌头碱透皮速率12.23倍.结论 散结止痛巴布膏的透皮促进剂可采用2%桉叶油或2%氮酮与10%丙二醇合用.
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消痛膏中乌头碱、次乌头碱和新乌头碱的HPLC法测定
建立了高效液相色谱法测定消痛膏中的乌头碱、次乌头碱和新乌头碱.使用Hedera ODS-2柱,以乙腈∶四氢呋喃(25∶15)为流动相A,以0.1 mol/L乙酸铵溶液(每1L加冰乙酸0.5 ml)为流动相B,梯度洗脱,检测波长235 nm.乌头碱、次乌头碱和新乌头碱分别在0.07～0.42μg、0.15～0.88 μg和0.05～0.32 μg范围内线性关系良好,回收率分别为92.7％、92.1％和93.0％,RSD分别为3.37％、2.09％和3.14％.
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正交设计多指标综合概率分析法优选散结止痛巴布剂提取工艺
采用HPLC法,以重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、熊果酸和次乌头碱的含量为评价指标,优化了散结止痛巴布剂的醉提工艺条件,通过正交试验设计法考察乙醇浓度、乙醇用量和回流时间对提取工艺的影响,采用多指标综合概率分析法分析数据.结果显示,醇提佳工艺条件为:8倍量70%乙醇提取2次,每次1.5 h.
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元秦止痛注射液中酯型乌头碱的薄层色谱检查法
以硅胶G薄层板,甲苯-乙酸乙酯-三氯甲烷-丙酮-氨水(20:18:3:6:1),甲苯-乙酸乙酯-三氯甲烷-氨水(3:14:8:1),甲苯-乙酸乙酯-三氯甲烷-丙酮-氨水(10.5:12:10:10:1)为展开剂,稀碘化铋钾试液为显色剂,分别建立了元秦止痛注射液中乌头碱、次鸟头碱、新乌头碱的薄层色谱限量检查方法.该法可用于元秦止痛注射液的质量控制.
