首页 > 文献资料
-
四逆汤中乌头类生物碱的研究进展
中药复方是中医治病的主要临床应用形式,复方中的有效成分是中药发挥药效作用的物质基础.进行复方有效成分的研究,在阐明中医的方药理论,揭示中药的配伍规律和作用机制,优化制剂工艺,制定质控标准,实现中医药现代化并走向国际市场等方面均具有重要意义.四逆汤是东汉张仲景所创名方,由附子、干姜、炙甘草组成,具有回阳救逆之功效,临床常用于阳虚欲脱、脉微欲绝等证.四逆汤主要含乌头类生物碱,包括乌头碱(Aconitine)、新乌头碱(Mesaconitine)、次乌头碱(Hypaconitine)及其水解产物,对其进行研究对于阐明四逆汤回阳救逆的物质基础具有重要的意义.
-
不同比例甘草诃子配伍制草乌对其次乌头碱含量的影响
目的 建立制草乌中毒性成分次乌头碱的HPLC定量测定方法,研究和探讨不同配伍比例下甘草和诃子对制草乌药材中次乌头碱含量的影响.方法 采用Alltima C18柱(4.6 mm×150 mm,5μm),以甲醇-5％三乙胺水溶液(72:28,V/V)为流动相,流速1.0ml.min-1,柱温30℃,检测波长235 nm,测定追踪草乌单煎及草乌-甘草、草乌-诃子合煎液中次乌头碱含量的变化.结果 次乌头碱回归方程Y=15.669X +0.180 2(r =0.999 3),在0.2 ～8.0μg·ml-1范围内,呈良好的线性关系,平均加样回收率95.31％,RSD5.14％.草乌-甘草、草乌-诃子合煎后其次乌头碱含量均低于草乌单煎,且在相同配伍比例下,草乌-诃子合煎液中的次乌头碱含量低于草乌-甘草合煎液.结论 甘草、诃子与草乌共煎均有减轻草乌毒性的作用,两个配伍药对具有一定的合理性.
-
不同配比乌头汤组方中两种生物碱含量变化
目的 研究乌头汤不同配比组方中新乌头碱和次乌头碱含量的变化.方法 采用高效液相色谱法,将乌头汤中制川乌与其余各药以不同量配比,考察对新乌头碱、次乌头碱的影响.结果 所建立的新乌头碱、次乌头碱线性回归方程分别为Y=4.253X+30.98(r=0.999 4),Y=3.713X+96.02(r=0.999 3);线性范围分别为4.95～79.20,12.18～194.80 μg·L-1.乌头汤中制川乌与其余各药不同配比对新乌头碱和次乌头碱含量影响很大,当制川乌、麻黄、黄芪、白芍和炙甘草组方为6,5,13,7,13 g时,新乌头碱和次乌头碱含量之和大.新乌头碱和次乌头碱在线性范围内线性关系良好.结论 以新乌头碱和次乌头碱含量变化研究乌头汤组方配比,能更好地保证乌头汤的疗效,降低其毒副作用.
-
HPLC梯度洗脱法同时测定活血镇痛膏中防己诺林碱、粉防己碱、新乌头碱、乌头碱和次乌头碱
目的:建立同时测定活血镇痛膏中的防己诺林碱、粉防己碱、新乌头碱、乌头碱和次乌头碱含量的HPLC梯度洗脱法. 方法:采用 Dikma-C18色谱柱(200 mm×4.6 mm,5 μm),以甲醇-乙腈(3∶1)(A)与0.06%二乙胺水溶液(B)为流动相,进行梯度洗脱,检测波长分别为280 nm(防己诺林碱和粉防己碱)、235 nm(新乌头碱、乌头碱和次乌头碱),流速1.0 ml·min-1,柱温30 ℃,进样量为10 μl. 结果:防己诺林碱、粉防己碱、新乌头碱、乌头碱和次乌头碱5个成分的质量浓度分别在7.490~149.800、14.610~292.200、4.150~83.000、5.250~105.000、5.140~102.800 μg·ml-1范围内呈良好线性关系,r分别为0.999 9,0.999 8,0.999 2,0.999 6,0.999 9;平均加样回收率(RSD)分别为99.87%(0.49%),97.79%(1.11%),96.97%(1.75%),98.60%(1.50%),97.94%(0.98%)(n=6).结论:本文建立的HPLC梯度洗脱法能同时测定活血镇痛膏中的5个成分,该方法简便、稳定、可靠,可作为活血镇痛膏全面可靠的质量控制方法.
-
芍药苷对附子的双酯型生物碱体内脏器蓄积的影响
目的:研究芍药苷对附子中双酯型生物碱体内蓄积的影响.方法:大鼠分别灌胃乌头碱、新乌头碱、次乌头碱以及这3种乌头碱分别与芍药苷的混合物,采用LC-MS分别测定乌头碱、新乌头碱、次乌头碱3种生物碱在大鼠心、肝和肾脏组织中的含量,并比较与芍药苷配伍前后乌头碱、新乌头碱、次乌头碱3种生物碱在组织中的含量变化.结果:与芍药苷配伍后,乌头碱和次乌头碱在心脏组织中的蓄积量减少,新乌头碱配伍芍药苷后,在心、肝和肾脏组织中的蓄积量均减少.结论:与芍药苷配伍,能减少附子中3种双酯型生物碱的在心、肝、肾等脏器的蓄积,从而降低附子双酯型生物碱的毒性,尤其是对心脏的毒性,这可能是附子、白芍配伍减毒的机制之一.
-
液-质联用法同时测定大鼠血浆中的乌头碱、新乌头碱、次乌头碱及其药动学
目的:建立HPLC-MS分析方法同时测定大鼠血浆中的乌头碱、新乌头碱、次乌头碱含量,并用于研究大鼠口服附子煎液后乌头碱、新乌头碱、次乌头碱的药动学.方法:血浆经氨水碱化后用醋酸乙酯进行液-液萃取.色谱柱为Alhima C18柱(250 mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇- 10 mmol·L-1醋酸铵水溶液(75:25).质谱检测方式为选择性离子监测,选择监测的离子为m/z 646.45(乌头碱),m/z 632.38(新乌头碱),m/z 615.64(次乌头碱)和m/z 336.60(盐酸小檗碱,内标).结果:血浆中乌头碱在0.05～5 μg·L-1、新乌头碱在0.5～50 μg·L-1、次乌头碱在2.5～250μg·L-1范围内线性关系良好,定量限为 0.05 μg·L-1,血浆中的平均提取回收率高于90%,批内和批间精密度均小于15%.结论:本法灵敏、可靠、简便,适用于乌头碱、新乌头碱、次乌头碱的药动学研究.
-
高效液相色谱法在康复新胶囊中新乌头碱、次乌头碱和乌头碱含量测定中的应用分析
目的:创建高效液相色谱法并对康复新胶囊中新乌头碱、次乌头碱和乌头碱含量进行测定.方法:在氨水的基础上进行乙醚提取,利用OasisMCX固相萃取柱纯化提取液,分析柱是ZORBAX SB-C8(250mm×4.6mm,5μm),流动相是0.04mol·L-1三乙胺(磷酸调pH=3)-甲醇(50:50),柱温是40℃,检测波长是235nm.结果:在0.002～1μg的范围里,新乌头碱、次乌头碱、乌头碱的线性关系相对较好,回收率超过90％,RSD在2％以下.结论:高效液相色谱法操作相对简便,准确率高,分离效果好,能有效测定康复新胶囊中新乌头碱、次乌头碱和乌头碱含量.
-
HPLC法测定中药饮片制川乌、制草乌中乌头碱、次乌头碱的含量
目的:建立中药饮片制草乌、制川乌中次乌头碱、乌头碱的含量测定方法.方法:采用Kromasil C18(5μm,4.6mm×250mm)作为色谱柱,甲醇-水-氯仿-三乙胺作为流动相,检测波长为230nm,柱温为室温.结果:乌头碱在9.63～96.26μg/mL范围内呈良好的线性关系,次乌头碱在24.2～242μg/mL范围内呈良好的线性关系,加样回收率大于96%(RSD＜2%).结论:该法操作简便,结果可靠,可用于中药饮片制川乌、制草乌中乌头碱、次乌头碱的含量测定.
-
乌头类双酯型生物碱HPLC分析方法研究进展
乌头类中药主要包括川乌、草乌和附子等,是历史悠久的临床经典药物,常应用于治疗风湿病、跌打扭伤等各类处方及中药制剂中,其特征成分和生物活性成分主要足生物碱,按结构主要分为单酯型、双酯型和胺基醇型[1],其中双酯型毒性大[2].双酯型生物碱主要有乌头碱、次乌头碱和新乌头碱,因这三种生物碱含量高、特征性强,既是有效成分又是毒性成分,所以在含乌头类制剂中常被列为含量测定的目标物.高效液相色谱法具有操作简便、样品用量少、分析重现性好、精密度好、回收率高等特点,能同时对乌头碱、次乌头碱和新乌头碱进行准确定量,分析效率高,故多为药物分析工作者采用.乌头碱、次乌头碱及新乌头碱均属二帖类生物碱,性质不太稳定,易被水解,先水解成焦乌头类生物碱,进而再水解为苯甲酰乌头原碱类生物碱口],为此增加了提取分析的难度,不少学者对其HPLC色谱条件进行了研究,以期提高对双酯型乌头碱分析的准确性.
-
定痛膏的质量标准提高研究
目的:完善和提高定痛膏的质量标准.方法:采用薄层色谱法(TLC)对定痛膏中木香、大黄、黄连进行定性鉴别.采用高效液相色谱法对定痛膏中有毒成分次乌头碱进行限量检测:色谱柱为Benetnach C18,以乙腈-四氢呋喃(25∶15,V/V)为流动相A,以0.1 molL醋酸铵溶液为流动相B,流速为0.8 mL/min,检测波长为235 nm,柱温为30℃,进样体积为10μL.结果:木香、大黄、黄柏的TLC图斑点清晰,分离度好,阴性对照均无干扰.次乌头碱检测限为1.25×10-2 μg,定量限为3.75×10-2 μg,HPLC法所测3批定痛膏中次乌头碱含量均未超出规定限度.结论:完善和提高的标准有利于定痛膏的质量控制.
-
指纹图谱测定四逆汤6种有效成分的含量
目的:建立同时测定四逆汤中次乌头碱、新乌头碱、苯甲酰新乌头原碱、甘草苷、甘草酸及6-姜酚含量的方法.方法:采用反相高效液相色谱法,色谱柱为Agilent C18(2)(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1％磷酸水梯度洗脱,流速为0.8 mL·min-1,检测波长分别为230 nm,柱温为30℃.结果:次乌头碱、新乌头碱、苯甲酰新乌头原碱、甘草苷、甘草酸及6-姜酚的线性范围分别为:1.496～14.96,2.340～23.40,2.628～26.28,36.00～360.0,68.640～686.40,7.008～70.08 g·L-1,相关系数r分别为0.9999,0.9999,0.9999,0.9999,0.9997,0.9996;平均加样回收率分别为96.13％,97.72％,100.96％,99.80％,98.98％,95.93％;RSD％分别为4.32％,1.76％,1.78％,1.16％,2.32％,2.41％.结论:建立的该高效液相色谱法简便、准确,适用于同时对四逆汤中次乌头碱、新乌头碱、苯甲酰新乌头原碱、甘草苷、甘草酸及6-姜酚含量的测定.
-
甘草与附子配伍对乌头碱、新乌头碱、次乌头碱大鼠药动学的影响
建立HPLC-MS同时测定大鼠血浆中的乌头碱、新乌头碱、次乌头碱含量的方法,并用于研究大鼠口服3种含附子煎液后乌头碱、新乌头碱、次乌头碱的药动学变化.方法:3组大鼠分别灌胃附子煎液（A液）、甘草附子单煎合并液（B液）、甘草附子合煎液（C液）,附子剂量均为1.5 g/kg,HPLC-MS法测定乌头碱、新乌头碱、次乌头碱的血药浓度,用DAS 2.0数理统计软件分别计算其药动学参数.结果:甘草与附子配伍后,三种乌头碱的Cmax、AUC均降低,MRT、t1/2均延长,Tmax无明显变化.甘草附子合煎液相比于甘草附子单煎合并液,Cmax、AUC更低,MRT、t1/2更长.结论:甘草能够显著影响附子中三种乌头碱的药动学.
-
UPLC/Q Exactive MS检测家兔血浆中乌头碱、次乌头碱、新乌头碱血药浓度的方法研究
目的:建立UPLC/Q Exactive MS快速检测家兔血浆中乌头碱、次乌头碱和新乌头碱的方法.方法:采用UltiMate 3000系列高效液相色谱仪和Q Exactive四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱系统检测.家兔血浆用2％甘油甲醇溶液沉淀蛋白后,以甲醇-水(0.2％甲酸,0.015％三乙胺)(80: 20)为流动相,DIONEX-C18色谱柱分离,通过高分辨质谱的全扫描/选择离子监测(Full MS/SIM)模式进行定性筛查和定量检测,以利血平为内标进行内标法定量.结果:乌头碱、次乌头碱、新乌头碱3种物质的线性关系良好,定量下限为0.02 ng/mL;血浆的萃取回收率及方法回收率高,分别在84.39％～89.14％、91.14％～99.12％范围内;3种成分的日内、日间精密度RSD均小于6.43％.结论:该方法适用于急性草乌中毒患者的血药浓度监控研究.
关键词： 乌头碱 次乌头碱 新乌头碱 UPLC/Q Exactive MS -
HPLC同时测定人血浆中新乌头碱、乌头碱、次乌头碱和苯甲酰新乌头原碱的含量
目的:采用HPLC建立附子中4种生物碱类成分在人血浆中含量测定方法.方法:色谱条件为迪马钻石C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相:A为乙腈-四氢呋喃(62∶ 38),B为10 mmol/L醋酸铵水溶液,梯度洗脱;流速:1.0 mL/min;检测波长:240 nm;柱温:30℃.结果:新乌头碱、乌头碱、次乌头碱和苯甲酰新乌头原碱的线性范围分别为1.69～1 690 μg/mL、1.58 ～1 582 μg/mL、2.56 ～2 563 μg/mL和3.60 ～3 597 μg/mL(r ＞0.9985),加样回收率RSD＜ 4.5％.结论:该方法灵敏度高、精密度好,可用于附子中4种生物碱成分的药物动力学研究.
-
附子双酯型生物碱的提取工艺研究
目的:探讨附子中3种双酯型生物碱提取的影响因素,确定适宜的提取条件.方法:采用HPLC法测定中乌头碱、乌头碱和次乌头碱的含量,采用单因素试验法,对附子双酯型生物碱的提取工艺进行研究.结果:佳双酯型生物碱提取工艺为:在15℃条件下,将附子粗粉置于10倍无水乙醇中冷浸3次,每次1d,双酯型生物碱收率为0.57％,质量分数为18.81％,其中中乌头碱、乌头碱和次乌头碱收率分别为0.16％、0.032％和0.38％.结论:该提取方法高效、低毒、经济、操作方便,适合工业化生产.32％和0.38％.结论:该提取方法高效、低毒、经济、操作方便,适合工业化生产.
-
高效液相色谱法测定祛风通络散中次乌头碱的含量
应用HPLC方法测定祛风通络散中次乌头碱的含量.色谱柱为Nucleodur C18 Gravity, 5 μm,4.6×250 mm;流动相为0.2%冰醋酸(用三乙胺调pH 6.25)-乙腈(65∶ 35);流速:1.0 ml/min;柱温:室温.线性范围:次乌头碱在0.07 μg～1.184 μg,r＝0.9997,加样回收率为97.95%,RSD为1.43%.
-
不同干燥方法对附子提取物中双酯型生物碱的影响
目的:了解不同干燥方法对附子提取物中双酯型生物碱的影响,确定适宜的干燥方法.方法:采用高效液相色谱方法,对冷冻干燥、烘箱干燥、真空干燥和喷雾干燥等不同干燥方法所得附子提取物中的中乌头碱、乌头碱和次乌头碱等3种双酯型生物碱的含量进行测定.结果:不同干燥方法所得附子提取物中的中乌头碱、乌头碱和次乌头碱的损失率为:冷冻干燥分别为7.14％、5.71％、5.41％；烘干分别为56.43％、31.43％、32.43％；真空干燥分别为29.29％、34.29％、10.81％；喷雾干燥分别为14.29％、11.43％、8.11％.结论:喷雾干燥对附子提取物中的中乌头碱、乌头碱和次乌头碱3种双酯型生物碱的影响较小,可低成本地进行工业化生产,是附子合适的干燥方法.
-
HPLC法测定舒痹宁颗粒中次乌头碱、新乌头碱的含量
目的 建立舒痹宁颗粒中次乌头碱及新乌头碱的含量测定方法.方法 采用反相高效液相色谱法.色谱条件:色谱柱:Akasil C<,18>(4.6 mm×250 mm,5μm);以甲醇-0.1%三乙胺(70∶30)为流动相,流速1.0 mL·min-1;检测波长:230 nm.柱温:30℃.结果 该法可用于测定舒痹宁颗粒中次乌头碱、新乌头碱的含量.乌头碱、次乌头碱、新乌头碱在0.22～4.4μg、0.126～2.520μg、0.152～3.04μg范围内成良好线性关系,平均回收率次乌头碱为101.12%;新乌头碱为99.68%.结论 该测定方法简便可行、重复性好,可用于本制剂中有效成分次乌头碱、新乌头碱的含量测定.
-
高效液相色谱法测定舒络灵酊剂中次乌头碱的含量
目的 建立舒络灵酊剂中次乌头碱的含量测定方法.方法 采用高效液相色谱法,色谱柱为DiamonsilTM C18,流动相为乙腈-体积分数0 2%冰醋酸(用三乙胺调节pH 5.80)(体积比29∶71),流速1.0 mL/min,检测波长230 nm.结果 次乌头碱在10.2～102.0 μg/mL范围内线性关系良好(r= 0.9999),次乌头碱的平均回收率为99.2%,方法精密度RSD值为2.56%(n=6).结论 该法可用于舒络灵酊剂的质量控制.
-
附子的安全应用
附子为临床回阳救逆之要药,其主要成份为乌头碱、次乌头碱、中乌头碱等.其中,以乌头碱(口服0.2mg可中毒,3 ～ 4mg致死)毒性大,但经炮制和合理配伍后,毒性减弱.附子传统的炮制品有白附片、熟附片、黑顺片、黄附片、盐附子和胆附子等.各类炮制方法是用较长的时间浸泡或煮制,使乌头碱结构中的两个酯键水解,首先失去乙酰基,生成单酯类生物碱苯甲酰乌头原碱,再继续水解,失去苯甲酰基,生成乌头原碱.乌头原碱几乎丧失了麻辣的味感,而带有苦味.苯甲酰乌头原碱的毒性约为乌头碱的1/200,而乌头原碱的毒性仅为乌头碱的1/2000.次乌头碱和中乌头碱也能水解,它们首先水解成苯甲酰次乌头碱和苯甲酰中乌头碱,继而水解得次乌头胺和中乌头胺,从而毒性下降.临床上有很多本身具一定毒性、药理作用与附子相似,与之配伍具协同作用而增强毒性的中药,因此要引起注意*"①慎与蟾酥合用:蟾酥为强心固醇混合物,有效成份蟾酥精,药理作用与附子相似,可通过兴奋迷走神经中枢直接作用于心肌,与附子配伍,对心脏作用大大加强,结果导致附子中毒.②慎与罗布麻合用:罗布麻含有强心甙即罗布麻甙及毒毛旋花子甙元等,有强心利尿作用,与附子合用药效增强,严重中毒时,可抑制心脏的传导系统和兴奋异位自律点而发生各种心律失常.③慎与麻黄合用:麻黄碱具有拟肾上腺素作用,能促进肾上腺,神经与肾上腺髓质嗜铬细胞释放去甲肾上腺素,而间接发挥拟肾上腺素的作用;同时麻黄碱的结构与肾上腺素的结构类似,可与α,β受体结合,直接兴奋肾上腺,兴奋心脏,使血压升高,心律加快,可增加附子对心脏的毒性.④慎与山楂合用:山楂的主要成分为有酸和黄酮类化学物,有增强心肌收缩力,增加心输出量,减慢心律作用,与附子有协同作用,致其毒性增强.
