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乌头碱、新乌头碱及次乌头碱对心肌细胞钙释放的影响
目的：探讨乌头碱、新乌头碱、次乌头碱对心肌细胞钙释放的影响。方法分离的成年Sprague-Dawley大鼠左心室心肌细胞分别使用0.3、1、3μmol/L乌头碱、新乌头碱、次乌头碱溶液灌流12 min，灌流后4、8、12 min时检测自发性钙释放(SCR)诱发率以及舒张末期钙浓度(F0)、钙瞬变幅度(ΔF)的变化。检测灌流0.3μmol/L乌头碱、新乌头碱、次乌头碱溶液后12 min，心肌细胞发挥正性肌力作用时钙瞬变和收缩功能动力学指标的变化。结果乌头碱、新乌头碱、次乌头碱均可诱发SCR，0.3μmol/L时新乌头碱SCR诱发率高，3μmol/L时乌头碱SCR诱发率高。与对照组比较，给药后12 min，3μmol/L乌头碱、新乌头碱、次乌头碱均可增加 F0[(1.459±0.379)、(1.585±0.493)、(1.213±0.254)比(1.079±0.108)]、ΔF[(1.615±0.455)、(2.210±0.756)、(1.528±0.422)比(1.036±0.125)]，差异有统计学意义(P均＜0.05)；且新乌头碱ΔF高于乌头碱和次乌头碱(P均＜0.05)。与对照组比较，0.3μmol/L乌头碱、新乌头碱、次乌头碱均可增加ΔF[(0.409±0.127)、(0.423±0.107)、(0.414±0.118)比(0.260±0.065)；P＜0.05或P＜0.01]、收缩幅度[(5.464±2.239)%、(7.449±2.548)%、(5.524±1.645)%比(3.428±0.911)%；P＜0.05或 P＜0.01]，延长钙瞬变达峰时间[(0.041±0.016)s、(0.039±0.009)s、(0.038±0.011)s 比(0.032±0.007)s；P＜0.05或P＜0.01]；与乌头碱组比较，新乌头碱和次乌头碱可降低钙瞬变消除时间常数[(0.301±0.054)s、(0.324±0.064)s 比(0.361±0.076)s；P＜0.05或P＜0.01]，缩短舒张期收缩恢复至50%时的时间[(0.124±0.035)s、(0.126±0.040)s 比(0.157±0.056)s；P＜0.05或 P＜0.01]。结论乌头碱、新乌头碱、次乌头碱的正性肌力作用与毒性效应同时存在，表明心肌细胞内钙浓度升高是产生正性肌力作用的有利因素，也是诱发SCR的危险因素。
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浙贝母总生物碱对乌头生物碱在兔体内药动学的影响
目的:探讨"乌头反贝母"的科学内涵.方法:建立血浆固相萃取富集方法及合适的HPLC条件:流动相由甲醇-水-氯仿-三乙胺(70:30:2:0.2)组成,流速1.0mL·min-1,检测波长235nm,柱温40℃;对家兔静脉给药动物血浆中新乌头碱、乌头碱、次乌头碱进行测定.结果:新乌头碱、乌头碱与浙贝母总生物碱配伍应用前后,其药动学参数变化:二种乌头生物碱与浙贝母总生物碱配伍应用后,其消除半衰期均比单用延长(P＜0.05),血浆清除率均比单用减慢(P＜0.05),AUC均比单用增大(P＜0.05);次乌头碱与浙贝母总生物碱配伍应用后,其药动学参数与单用次乌头碱比,主要参数差异不显著(P＞0.05).结论:乌头生物碱与浙贝母总生物碱配伍应用后在动物体内的滞留时间延长和效用时间延长.从药动学角度初步验证了"乌头反贝母"理论的科学性.
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LC-MS-MS法检测附子水提液中新乌头碱、次乌头碱的含量
目的:建立检测附子水提液中新乌头碱、次乌头碱两种双酯型生物碱含量测定的LC-MS-MS方法.方法:应用液质联用技术,Agilent ZORBAX C18SB(2.1 mm×100mm 1.8μm)色谱柱系统,流动相:A水(0.05%FA),B乙腈;采用梯度洗脱方法,A-B(72∶28),0～2 min,28%～34%B;2～6 min,34%～35%B;6～10 min,35%～100%B;流速0.35 mL·min-1;柱温40℃,正离子模式,MRM,新乌头碱m/z 632.3～572.3,次乌头碱m/z 616.3～556.2.建立了附子水提液中新乌头碱和次乌头碱的含量测定方法并进行了方法学验证.结果:建立了同时检测附子水提液中新乌头碱、次乌头碱的含量测定的LC-MS-MS方法.结论:方法准确、简便、快速,可用于附子水提液的质量控制.
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乌头各组织部位生物碱类成分动态差异性研究
目的:比较不同采收期乌头不同组织中乌头总碱和双酯型生物碱(新乌头碱、乌头碱和次乌头碱)的含量,为毒性及药效学研究提供依据.方法:用酸性染料比色法测定乌头不同组织中总生物碱的含量；反相高效液相色谱法测定新乌头碱、乌头碱、次乌头碱的含量,流动相为乙腈-40 mmol· L-1乙酸铵水,梯度洗脱,流速1 mL·min-1,检测波长240 nm,柱温30℃.结果:6月4日之前采收的乌头的不同组织部位总生物碱含量明显小于6月18日和7月3日,乌头佳采收期可确定为6月底至7月初.乌头地上部分乌头类总生物碱的含量小于地下部分,不同采收期乌头各组织部位中乌头类总生物碱和双酯型生物碱含量顺序大体为:须根＞子根＞母根＞叶片≈茎秆.结论:该研究初步了解了乌头各组织部位生物碱类成分的动态变化规律,确认了乌头的佳采收期及各组织部位生物碱类成分的含量差异.
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HPLC测定复脉灵胶囊中乌头碱、新乌头碱、次乌头碱的含量
目的:建立复脉灵胶囊中乌头碱、新乌头碱、次乌头碱的含量测定方法.方法:采用HPLC,流动相甲醇-0.5％的三乙胺(70∶ 30),Aglient TC-C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),检测波长235 nm,流速1.0 mL· min-,柱温室温.结果:乌头碱的进样量在0.0808～0.8080 μg具有良好的线性关系(r=0.999 6),平均回收率98.40％,RSD 2.84％；新乌头碱的进样量在0.866 ～4.330 μg具有良好的线性关系(r=0.999 7),平均回收率98.04％,RSD 2.05％；次乌头碱的进样量在0.089 ～0.890μg具有良好的线性关系(r=0.999 8),平均回收率98.71％,RSD 2.34％.结论:方法操作简便、灵敏度高、结果准确,可作为复脉灵胶囊的含量测定方法.
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附子配伍甘草后对附子生物碱类成分大鼠在体肠吸收特性的影响
目的:研究附子-甘草配伍前后附子中6种生物碱类成分的大鼠在体肠吸收特征.方法:采用大鼠在体肠灌注模型,以紫外分光光度法测定酚红质量浓度,利用LC-MS测定灌注液中乌头碱、次乌头碱、新乌头碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱的质量浓度,分别研究附子单煎液、附子-甘草合煎液、附子-甘草合并液3种配伍方式对上述6种生物碱类成分肠吸收的影响.结果:与附子单煎液相比,苯甲酰乌头原碱在附子-甘草合煎液、附子-甘草合并液中的吸收速率常数(Ka)和单位时间吸收率(A)呈下降趋势;苯甲酰新乌头原碱在附子-甘草合煎液、附子单煎液中的Ka和A相比附子-甘草合并液有所减少;附子-甘草合煎液中次乌头碱的Ka和A相比附子单煎液呈下降趋势,附子-甘草合并液中次乌头碱的Ka和A相比附子单煎液均呈升高趋势,附子-甘草合煎液中苯甲酰次乌头原碱、乌头碱和新乌头碱的吸收相比附子单煎液中均有所降低.结论:附子配伍甘草后6种乌头碱类成分在大鼠十二指肠中的吸收均有一定程度的降低,为阐释“附子得甘草而后缓”的配伍理论提供了实验依据.
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RP-HPLC法测定白附片中乌头碱、新乌头碱和次乌头碱
目的:测定白附片中乌头碱、新乌头碱和次乌头碱3种脂溶性生物碱含量.方法:用反相离子对HPLC法,使用Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18柱(5μm,250 mm×4.6mm);流动相:乙腈-5 mmol·L-1 NaH2PO4 溶液,磷酸调至pH4.5(52:50),内含7 mmol·L-1十二烷基磺酸钠(SDS);检测波长:235 nm;流速:1.0 mL·min-1;结果:以上3种生物碱可以完全分离,准确测定.结论:该方法准确度高,可应用于白附片中生物碱的含量测定.
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UPLC-MS/MS测定十五味乳鹏丸中3种生物碱在大鼠体内的药代动力学
目的:采用超高效液相色谱质谱联用法测定大鼠灌胃十五味乳鹏丸后体内3种生物碱(乌头碱、新乌头碱、次乌头碱)的血浆药物浓度并进行药代动力学参数评价.方法:Welch UPLC XB-C18色谱柱(2.0 mm ×50 mm,1.7 μm),乙腈-0.1％甲酸水溶液梯度洗脱,流速0.35 mL·min-1,柱温40℃,进样量5μL,采用电喷雾正离子化质谱法监测血浆中各成分的浓度.结果:乌头碱、新乌头碱和次乌头碱的线性范围分别为分别在126.56 ～10 125,18.75～1 500,16.32～1 305.5 ng·L-1.3种生物碱在大鼠体内的主要药代动力学参数药峰浓度(Cmax)分别为(0.75±0.14),(0.23±0.03),(0.17±0.02)μg·L-1,消除半衰期(t1/2)分别为(2.93±1.72),(3.02±1.60),(3.70 ±2.63)h,药时曲线下面积AUC0-t分别为(5.03±1.37),(1.51±0.26),(1.14±0.21)h·μg·L-1.结论:该方法快速、准确、灵敏,可用于该类成分的血药浓度测定及其药代动力学研究,为十五味乳鹏丸的体内研究提供参考.
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川乌中总生物碱提取工艺优化研究
目的:优选川乌药材中总生物碱的佳提取工艺.方法:采用L_9(3~4)正交法,以提取物得率和乌头碱、次乌头碱和新乌头碱的含量为考察指标,并用RP-HPLC法测定三种生物碱的含量,流动相为甲醇-水-氯仿-二乙胺(70:30:2:0.1).结果:筛选出的佳提取工艺为药材用氨试液浸润,加入15倍乙醚溶剂,冷浸24h.结论:该实验提取工艺合理、科学.
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蒙药那如-3巴布剂中新乌头碱的透皮速率测定
蒙药那如-3,亦称那如三味丸,现代药理研究证实有抗炎、镇痛、抗菌作用,成分为制草乌、诃子、荜茇.蒙医理论认为该药具有消"粘"、除"协日乌素"、祛风、散寒、止痛等功效,主治风湿、类风湿关节炎,是内蒙古地区治疗风湿性关节病的常用药物.
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HPLC同时测定复方藤乌软膏中6种乌头类生物碱含量
目的：建立高效液相色谱法(HPLC)同时测定复方藤乌软膏中6种乌头类生物碱含量的方法。方法色谱柱为Agilent XDB-C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm)；流动相A为乙腈-四氢呋喃(25∶8),B为0.1 mol/L醋酸铵溶液(每1000 mL加冰醋酸0.5 mL),梯度洗脱；流速：1 mL/min；检测波长：235 nm；柱温：25℃。结果乌头碱在0.072～0.648μg具有良好的线性关系(r＝0.9995),平均回收率为99.29%,RSD＝1.25%；新乌头碱在0.062～0.648μg具有良好的线性关系(r＝0.9995),平均回收率为99.12%,RSD＝0.85%；次乌头碱在0.064～0.384μg具有良好的线性关系(r＝0.9998),平均回收率为99.57%,RSD＝1.07%；苯甲酰乌头原碱在0.056～0.672μg具有良好的线性关系(r＝0.9992),平均回收率为98.11%,RSD＝0.61%；苯甲酰新乌头原碱在0.055～0.993μg具有良好的线性关系(r＝0.9999),平均回收率为99.27%,RSD＝1.10%；苯甲酰次乌头原碱在0.078～0.702μg具有良好的线性关系(r＝0.9998),平均回收率为99.08%,RSD＝1.38%。结论本方法操作简便、灵敏度高、重复性好,结果准确,可作为复方藤乌软膏中乌头类生物碱的含量测定方法。
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那如-3巴布剂质量标准研究
目的 建立那如-3巴布剂的质量标准.方法 用紫外-可见分光光度法鉴别处方中草乌的主要成分,采用高效液相色谱法测定新乌头碱的含量.结果 新乌头碱在0.129 5-2.074 0 μg范围内线性关系良好,加样回收率为99.57%,RSD=1.28%.结论 那如-3巴布荆定性、定量方法能有效控制该制剂的质量.
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液-质联用测定乌头饮片中生物碱的含量
目的 建立乌头饮片中生物碱含量的测定方法 .方法 采用液-质联用方法 ,测定乌头类不同饮片中乌头碱、次乌头碱和新乌头碱的含量.液相色谱采用Inertsil ODS-3色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-醋酸铵缓冲液(60∶40);流速:0.2 mL/min;柱温:30℃.结果 建立了液-质联用方法 测定乌头饮片中生物碱含量的方法 ,并测得了25批乌头不同饮片的结果 .结论 液-质联用方法 具有灵敏、专属性强的特点,适用于微量生物碱的检测.
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X-5大孔树脂纯化新乌头碱和乌头总碱
目的:对影响X-5树脂分离纯化乌头总生物碱和新乌头碱的各种因素进行系统的研究,使分离工艺达到优化.方法:以川乌总碱和新乌头碱的含量为指标,考察X-5型大孔树脂分离纯化乌头总生物碱和新乌头碱的佳吸附及洗脱条件.结果:X-5树脂纯化乌头总生物碱和新乌头碱的佳工艺为上样液浓度含生药1 g·mL-1,药液pH 12,吸附时间为6 h,7 BV pH 8的95%乙醇洗脱效果好.X-5树脂可重复使用5次.经X-5树脂处理乌头总碱提取率可达80%以上,终产品总生物碱纯度可达30%以上.结论:该方法能明显提高新乌头碱和乌头总碱的纯度.
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HPLC测定蒙药材草乌叶中4种双酯型二萜生物碱含量
建立同时测定蒙药草乌叶中4种双酯型二萜生物碱北草乌碱、新乌头碱、次乌头碱和乌头碱含量的色谱方法,用于指导草乌叶的质量控制.以北草乌碱、新乌头碱、次乌头碱和乌头碱为对照品,采用Waters XBridge C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),乙腈(A)-40 mmol·L-1醋酸铵水溶液(B,氨水调pH至10.5)(33:67)为流动相;流速1.0 mL·min-1;检测波长为235 nm;柱温30℃;进样量10μL.12批草乌叶中北草乌碱、新乌头碱、次乌头碱和乌头碱质量分数分别为0.0255～0.0885,0.0391～0.0715,0.0266～0.0810,0.00812～0.0312 mg·g-1.同时考察了不同采收期草乌叶药材中这4种成分含量的影响,随着采收期的推迟,含量先减后增.该研究可用于草乌叶药材中双酯型二萜生物碱的含量测定,为该药材质量标准的完善提供参考,初步阐明了草乌叶毒性和采收期的科学内涵.
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HPLC分离测定四逆汤中3种双酯型生物碱及其6种水解产物
四逆汤为中医的经典名方,由附子(制)、干姜及炙甘草(蜜炙)组成,具有温中祛寒、回阳救逆的功效.现代药理研究表明该药具有强心,抗休克,增加冠脉血流量的作用[1].该方的君药为附子,其主要成分为乌头类生物碱(包括乌头碱、新乌头碱和次乌头碱),此类生物碱属于双酯类生物碱,毒性极大.酯类生物碱分子中的酯键是产生毒性的关键部位,在水中加热易水解,首先生成苯甲酰乌头原碱,进一步反应产生乌头原碱,两类水解产物毒性极小,但仍有药理活性[2].因此,能有行之有效的方法准确检测出该药中的各种活性成分是十分重要的,对确保临床用药的安全性有效性以及四逆汤这一经典药方的新剂型研发都有极为重大的意义.
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HPLC控制参附注射液及附子中3种双酯型生物碱
参附注射液是古方参附汤经剂型改变而来,由人参、附子2味药组成,具有回阳救逆,益气固脱的作用;主要用于阳气暴脱的厥脱证(感染性、失血性、失液性休克等),也可用于阳虚(气虚)所致的惊悸、怔忡、喘咳、胃疼、泄泻、痹证等.虽然附子是由乌头加工炮制并经过了减毒处理,但是附子中仍含有双酯型剧毒生物碱,即乌头碱、新乌头碱和次乌头碱,所以在参附注射液的生产过程中对其又进行了减毒处理,双酯型乌头碱水解成毒性较小的单酯型乌头碱,后又继续水解成毒性更小的不带酯键的乌头原碱[1].
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参附注射液中3种痕量成分乌头碱、次乌头碱、新乌头碱的测定
该文建立了参附注射液中3种痕量附子指标成分的含量测定方法,为评价君药附子的药效学作用提供了依据.样品经中空纤维液相微萃取(HF-LPME)进行纯化富集,采用ACQUITY UPLC BEH C1s色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.7 μm),流动相乙腈-10 mmol·L-1碳酸氢铵溶液(pH 10),流速0.45 mL·min-1,梯度洗脱.电喷雾电离(ESI)、多反应监测(MRM)方式进行含量测定.结果表明,乌头碱、次乌头碱、新乌头碱在0.1 ～100 ng·L-1线性关系良好,r＞0.999,检测限分别为0.03,0.03,0.02ng-L-1,平均加样回收率分别为100.1％,97.4％,97.5％,RSD分别为1.2％,1.1％,1.5％.该方法保证了参附注射液的用药安全,为正确评价附子的君药药效学作用提供了科学依据,为含有附子的中药制剂的质量控制提供了可靠方便而实用的检测手段.
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pH值及皮肤角质层对乌头生物碱直流电离子导入量的影响
目的:比较不同pH及去角质皮肤条件下乌头生物碱的体外透皮吸收情况.方法:成年大鼠28只,随机分4组(n=7):pH4.0完整皮肤组,pH7.0完整皮肤组,pH9.0完整皮肤组,pH4.0去角质层皮肤组.取含乌头生药3g/ml浓度的提取液作为释放液,各组均采用0.1mA/cm2直流电导入作为促透因素,在设定条件下行离体透皮吸收,并均在实验开始后10min、20min、30min、40min、50min于接受液取样.高效液相色谱法建立新乌头碱的峰值-含量标准曲线,并测定不同时间点取样溶液中新乌头碱含量,通过计算新乌头碱累积透过量-时间曲线图求得各组透皮速率.结果:当pH值为4.0、7.0、9.0时,新乌头碱通过完整皮肤的透皮吸收率分别为12.623,4.916,3.121,差异有显著性意义;当pH值为4.0时去角质层皮肤的新乌头碱透皮速率是未去角质层的9.60倍.6%乌头溶液中新乌头碱浓度为0.00319%.结论:在pH4.0-9.0的缓冲条件下,乌头碱的直流电促透皮量随pH的下降而增加;去角质条件下直流电导入的新乌头碱的量明显高于完整皮肤条件下的导入量;临床用6%乌头溶液的透皮吸收安全有效.
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反相离子对色谱法测定附子中生物碱成分
目的测定附子中乌头碱、新乌头碱、次乌头碱、北乌碱、苯甲酰乌头原碱和苯甲酰新乌头原碱等6种生物碱的含量.方法用反相离子对HPLC法,使用AichromBond-1 C18柱(250 mm×4.6 mm ID);流动相:乙腈-5 mmol·L-1NaH2PO4溶液,磷酸调至pH 4.5(50:50),内含7 mmol·L-1十二烷基硫酸钠(SDS);检测波长:235 nm;流速:1.0 mL·min-1;柱温:35℃.结果以上6种生物碱可以完全分离,准确测定.结论该方法准确度高,可应用于附子中生物碱的含量测定.
