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349 附子及含有附子的汉方方剂中乌头碱的定量分析
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通脉四逆汤毒性分析
目的:测定通脉四逆汤中乌头类生物碱的煎出量及变化规律.方法:采用RP-HPLC法,Hypersil-BDS柱(250mm×4.6mm,5μm),以甲醇-水-氯仿-三乙胺(100:50:3:0.15)为流动相,流速为1mL·min-1,波长为234nm,柱温:30℃.结果:乌头碱、中乌头碱和次乌头碱在(0.0025~0.0800)μg、(0.0028~0.0880)μg和(0.0023~0.0760)μg范围内线性关系良好,r分别为0.9997、0.9996、0.9996.结论:该方在煎煮过程中,同煎的其他药物对乌头类生物碱在汤中的含量产生影响,文火滚煎约70min后,药汤中乌头碱和次乌头碱成分基本消失,中乌头碱消失过半.
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HPLC同时测定附子乌头碱、中乌头碱、次乌头碱的含量
目的:建立高效液相色谱(HPLC)同时测定附子及其炮制品在不同提取溶剂中的乌头碱、中乌头碱及次乌头碱3种双酯二萜型生物碱含量的方法.方法:采用Agilent Eclipse plus C18柱(4.6mm×150mm,5μm),以乙腈和碳酸氢铵(10mmol/L,pH=9.8±0.2)作为流动相进行梯度洗脱;流速1mL/min;进样体积200μL;检测波长240n m;柱温30℃.结果:乌头碱、中乌头碱、次乌头碱分离良好,各成分在0.78-50.00μg/mL内均呈良好的线性关系(r>0.999);平均加样回收率(n=6)为91.4-103.4%,RSD在2.41-4.20%.结论:本方法简便、准确、灵敏,可用于附子及其炮制品中乌头碱类化合物的提取以及定量分析,为附子及其炮制品的质量控制奠定基础.
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附子贮藏过程中相关生化指标的变化分析
附子为毛茛科乌头Aconitum carmichaeli Debx.的子根的加工品[1].附子含乌头碱(aconitine)、次乌头碱(hypaconitine)和中乌头碱(mesaconitine)等主要成分,具有回阳救逆、补火助阳、散寒除湿的功效[2].附子主产四川江油、安县、北川、青川及陕西汉中地区等,以四川的"江油附子"为著名.国内外对附子的研究多集中于资源、有效成分及其药理药效等方面,而贮藏生理还缺乏系统研究,一定程度上影响了附子GAP和产品质量.本研究对附子采用室内自然堆放、麻袋覆盖、沙藏、冷藏4种常见贮藏方法,通过对含水量、呼吸速率等指标的变化分析,初步探讨了附子贮藏期间的生理变化,为附子产地贮藏与加工提供一定的理论依据.
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乌头碱中毒的抢救与治疗
乌头碱(aconitum)是毛莨科乌头属草本植物的主要成分,为一种毒性剧烈的生物碱.乌头药用其块根,主根为乌头,旁根为附子.我国四川栽培的称为川乌,产于其他地区的统称为草乌,同根野生的还有雪上一枝蒿、落地金钱、搜山虎、铁棒锤、黄花乌头等.乌头性热,味辛苦,全株有毒,以根毒,次为种子和叶,主要有毒成份为二萜类生物碱,如乌头碱、中乌头碱、次乌头碱、异乌头碱、乌头原碱、塔拉第胺等生物碱,以双酯型乌头碱毒性为强烈.
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UPLC-MS/MS方法研究中乌头碱的大鼠CYP450代谢产物及途径
采用大鼠微粒体与中乌头碱体外孵育,确定中乌头碱经大鼠肝微粒体P450代谢的主要产物.具有高分辨功能的超高效液相色谱-串联质谱联用(UPLC-MS/MS)方法用于分析鉴定中乌头碱的代谢产物.在孵育体系中发现中乌头碱原形和6种代谢产物(M1~M6),利用串联质谱进行结构表征,确定分别为中乌头碱的去甲基、去乙酰基、脱氢及羟基化产物.利用CYP450亚型酶(CYP2C、CYPlA2、CYP2D、CYP3A、CYP2E1)的特异性抑制剂,结合UPLC-MS/MS的多反应监测(MRM)方法,确定了中乌头碱在大鼠肝微粒体中的代谢途径.CYP3A为中乌头碱的主要代谢酶;各代谢产物还可由CYP2C、CYP2D所代谢.CYP2El和CYPlA2对中乌头碱无代谢作用.
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HPLC-ESI-MSn法研究中乌头碱在水中的化学反应
目的:用高效液相色谱-电喷雾-质谱/质谱(HPLC-ESI-MSn)方法研究中乌头碱在水中发生的化学反应.方法:液相用梯度洗脱,质谱用正离子模式.结果:在水解液中发现了5种水解产物,其准分子离子[M+H]+分别为590,486,514,618,572.结论:通过对水解产物的准分子离子和碎片离子的初步分析,可以推测其水解产物为中乌头次碱、中乌头原碱和3个初步确定结构的化合物,并推测在水中可以发生脱乙酰基反应同时脱水的反应;脱N上的甲基或16位C上的甲基反应;脱苯甲酰基反应同时脱16位C上的甲基或脱N上的甲基.
关键词: 水解产物 中乌头碱 高效液相色谱-电喷雾-质谱/质谱 -
高效液相色谱法测定草乌类药用植物活性成分含量
目的 采用高效液相色谱测定草鸟类药用植物中中乌头碱、乌头碱、次乌头碱的含量,对草鸟类植物进行质量与资源评价.方法 建立高效液相色谱方法,采用Phenomenex ODS色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),以乙腈-醋酸铵缓冲溶液(pH10.5)(54:46)为流动相,流速为1.0 mL·min-1;检测波长为240 mm.结果 中乌头碱在0.28~2.80μg内呈良好的线性关系(r=0.9991),平均回收率为98.9%(n=5),RSD=0.93%;乌头碱在0.136~1.36μg内呈良好的线性关系(r=0.999 2),平均回收率为97.4%(n=5),RSD=1.18%;次乌头碱在0.248~2.48 μg内呈良好的线性关系(r=0.999 1),平均回收率为98.4%(n=5),RSD=1.11%.北乌头、乌头与小白掌含有中乌头碱、乌头碱、次乌头碱3种生物碱;多根乌头含有中乌头碱、乌头碱2种生物碱;其他的样品含微量或几乎没有.多根乌头的3种生物碱总量高.结论 本方法分离效果好,分析速度快,方法稳定,结果准确.
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"人参四逆汤"药效物质及其作用机制和软电离质谱对复方物质基础研究
主要完成如下几方面的工作.1.从人参四逆汤中分离鉴定了有明显正性肌力作用的有效成分丙三醇-二-呋喃半乳糖甙和尿嘧啶;有明显负性肌力作用的有效成分:人参皂甙-Rb1、-Rb2、-Rc、-Rd、-Re、-Rg1、-Rg2.同时从干姜中分离鉴定了与附子乙醚精提物对原代培养内皮细胞释放PGl2有协同作用有效成分3,5-二羟基-1-(3-甲氧基4-羟基苯基)癸烷(Gl-a)、5-羟基-1-(3-甲氧基4-羟基苯基)癸酮-3(Gl-d)、5-羟基-1-(3-甲氧基苯基、癸酮-3(Gl-e)、1-(3-甲氧基4-羟基苯基)-癸酮-3(Gl-h);也从附子中分离鉴定了与干姜乙醚精提物有协同作用的乌头碱(Fl-a、中乌头碱(Fl-d)、苯甲酰中乌头碱(Fl-e)和总脂肪酸酯生物碱(Fl-h).
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基于HPLC-Q-TOF-MS研究6种乌头生物碱类成分的裂解途径
目的 研究6种乌头类生物碱(乌头碱、次乌头碱、中乌头碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、苯甲酰中乌头原碱)的质谱裂解途径.方法 采用高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱(HPLC-Q-TOF-MS)对该类化合物进行分析.结果 在正离子模式下,乌头类生物碱的主要裂解途径是连续丢失CH3OH与H2O.双酯型生物碱也可以在C-8位置断裂,失去CH3COOH分子形成明显的特征碎片离子,从而实现与单酯型生物碱的区分.结论 此质谱裂解途径可为乌头类生物碱的结构鉴定提供依据,采用HPLC-Q-TOF-MS技术可以高效地分析中药中乌头类生物碱类化学成分,有利于化合物的分析和鉴定.
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草乌叶总生物碱对小鼠免疫功能的影响
草乌叶Folium Aconiti Kusnezoffi系蒙古族习用药材,为毛茛科植物北乌头Aconitum kusnezoffii Reichb.的干燥叶,收载于<中国药典>2005年版.草乌叶性平,味辛、涩,有小毒,具清热解毒、止痛、抗炎等功效.几百年来,蒙医临床上常用草乌叶复方制剂治疗心绞痛、慢性胃炎、乙型肝炎、胰腺癌、再生障碍性贫血、流行性腮腺炎、卵巢囊肿、结核等疾病,均有较好的疗效[1].由于传统中医药均使用草乌即北乌头的块根,因此对草乌块根的化学成分及药理作用的研究较多,而对常用蒙药品种草乌叶的化学成分及药理作用的研究报道较少.现代药理学证明草乌叶总生物碱有抗炎和镇痛作用[2],其中乌头碱还具有降血糖[3]和抗癌等作用[4],但草乌叶总生物碱的免疫作用尚未见报道.本实验以ICR小鼠为实验动物,主要研究了草乌叶总生物碱对小鼠免疫功能的影响.
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基于荧光光谱的硫酸阿托品拮抗中乌头碱毒性的机制研究
目的 研究模拟生理条件下中乌头碱(MA)与牛血清白蛋白(BSA)的键合作用,以及硫酸阿托品(AS)对其相互作用的影响.方法 主要采用荧光光谱法及紫外吸收光谱法进行研究.结果 MA对BSA有较强的荧光猝灭作用,猝灭机制为动态猝灭.MA与BSA表观结合常数(Kb)和结合位点数(n)均随着温度升高而增大,二者之间的相互作用力类型主要为疏水作用,结合距离为4.44 nm,该反应是自发进行的.同步荧光光谱图的信息表明MA对蛋白微环境有影响.AS使MA和BSA的Kb和n均减小:抑制MA对BSA构象的改变.结论 MA与BSA能发生相互作用,AS与MA间存在竞争作用,能够增加游离型MA浓度,通过减少MA在生物体内的积累,加快代谢,发挥解毒作用.
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HPLC测定草乌与瓜蒌配伍前后6种毒性成分量的变化
目的 研究草乌Aconiti Kusnezoffi Radix与瓜蒌TrichosanthisFructus按照13个不同比例配伍后,苯甲酰新乌头碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、中乌头碱、乌头碱、次乌头碱成分量的变化.方法 草乌与瓜蒌的干燥粉末,混匀,分别用10倍量蒸馏水和75%乙醇浸润1h,提取2次,每次1h,合并提取液,离心,取上清液.HPLC采用Welch Xtimate C18 (250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,乙腈-40 mmol/L乙酸铵(氨水调pH 10.0)梯度洗脱;体积流量1mL/min,检测波长235nm.结果 草乌与瓜蒌配伍后,随瓜蒌比例增加,药液pH值逐渐降低,单酯型生物碱总量变化不明显,而双酯型生物碱总量增加.结论 草乌与瓜蒌配伍后,从化学成分来看,双酯型生物碱类成分增加导致毒性增加.
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海马补肾口服液中乌头碱含量测定
海马补肾口服液是天津乐仁堂药厂在丸剂配方的基础上,应用先进的提取技术将有效成分提出精制而成的口服液剂型.
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炭肾血液灌流成功抢救重症乌头碱中毒的4例报告
乌头为茛科植物,药用其块根,主根名乌头、旁根为附子,别名五毒根,雪上一枝蒿等,含有乌头碱及中乌头碱,水解后产生乌头次碱及乌头原碱.其毒性很强,一般外用治疗风湿关节疼,内服0.2 mg即可中毒,3~4 mg可致死,易溶于乙醇等有机溶剂,故含乌头的药酒吸收快,主要经唾液和肾脏排泄.乌头碱中毒采用中西医结合方法抢救的报告已较多,但重症的抢救成活率不很高,用炭肾血液灌流吸附方法抢救的报道也很少.我院使用活性炭吸附器作血液灌流,抢救乌头碱中毒4例获得显著疗效.
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HPLC法测定嘎日迪五味丸中的乌头碱、中乌头碱和次乌头碱的含量
目的 建立测定嘎日迪五味丸中的乌头碱、中乌头碱和次乌头碱含量的方法.方法 采用HPLC法测定,色谱柱为Symmetry C18(4.6mm×150mm,5μm);流动相为甲醇-水-氯仿-冰醋酸-三乙胺 (50:50:2:1:0.6);柱温为25℃,流速为1.0mL/min,检测波长为254 nm.结果 乌头碱、中乌头碱和次乌头碱在30~150mg/L范围内呈良好的线性关系,RSD分别为0.73%,0.84%和0.92%.结论 本方法 简便、快速、准确,适应于嘎日迪五味丸中的乌头碱、中乌头碱和次乌头碱的含量测定.
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浅谈附子的药理作用及应用
附子为毛莨科植物乌头的子根,其性热,味辛,有毒.具有回阳救逆,温阳,散寒止痛的功效.现代药理证明生附子含乌头碱、次乌头碱、中乌头碱等.附子经过炮制后,生物碱含量减少,其毒性亦大为降低.
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诃子对草乌水煎液双酯型二萜类生物碱溶出率的影响
为验证蒙医理论“诃子可解乌头毒”,本文对草乌以及草乌配以诃子的水煎液进行定性、定量的研究,采用双波长薄层扫描法.以氯仿-乙酸乙酯氨水(15:20:1)为展开系统,λs=232nm,λR=370nm,测定水煎液中乌头碱、中乌头碱、次乌头碱的含量,单煎与共煎时,三种物质的平均回收率分别为99.2%、100.5%、98.3%、100.6%、100.8%、101.5%.实验结果表明:草乌配以诃子较草乌单煎对比,乌头碱、中乌头碱、次乌头碱溶出率分别降低22.7%(P<0.05)、66.3%(P<0.01)98.4%(P<0.01),从而初步说明:诃子解草乌毒可能是由于降低草乌中双酯型二萜类生物碱所效.
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反相离子对高效液色法同时测定蒙成药嘎日迪-5中3种双酯类乌头碱的含量
目的:本文建立了嘎日迪-5中所含3种双酯类乌头碱的反相离子对高效液相色谱测定法.方法:采用Shim-packCLC -ODS柱为分离柱,以甲醇-水-冰醋酸-三乙胺(65:35:0.06:0.2)作流动相(PH6.5),检测波长235nm,同时分离和测定了蒙成药嘎日迪-5中3种双酯类乌头碱.结果:3种双酯类生物碱均在0.5~20ug/ml之间呈良好线性关系,回收率均高于95%,RSD均小于4%.结论:该方法分离条件较温和(pH6.5),分离快,选择性好,可以作为该药品的质量标准之一.
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高效液相色谱法同时测定中药附子中乌头碱、中乌头碱和次乌头碱的含量
目的:探讨中药附子中乌头碱、中乌头碱和次乌头碱的高效液相色谱测定方法.方法:采用HypersilC18(4.6mm×250mm,5.0μm),以甲醇:0.05%磷酸溶液(三乙胺溶液调节pH值6.2)=60:40,检测波长为252nm,柱温为35℃,流速为0.8mL/min.结果:乌头碱回归方程为Y=1.285×103+0.324×102(r=0.9997),在0.261~1.559μg范围内呈较好的线性关系;中乌头碱回归方程为Y=3.354×103+0.015×102(r=0.9996),在0.526~2.031μg范围内线性关系良好;次乌头碱线性回归方程为Y=1.329×103-0.426×102(r=0.9999),在0.152~1.352μg范围内线性关系良好.结论:高效液相色谱法对中药附子中3种有效成分进行测定,方法简单易行,重现性好,精密度高,可作为附子质量控制的方法.