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钩藤碱固体脂质纳米粒对TGF-β1诱导大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响
目的 研究钩藤碱固体脂质纳米粒对TGF-β1诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响,并探讨其作用机制.方法 采用组织块培养法进行大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞的原代培养,将细胞按随机数字表法分为对照组,TGF-β1组,TGF-β1+钩藤碱固体脂质纳米粒高、中、低剂量组.除对照组外,其余各组细胞加入20 μg/L的TGF-β1进行干预,TGF-β1+钩藤碱固体脂质纳米粒高、中、低剂量组细胞加入25、50、100 mg/L的钩藤碱固体脂质纳米粒进行干预.培养24 h后,采用MTT法检测各组细胞增殖抑制率,采用流式细胞仪检测各组细胞周期,采用Western blot法检测各组细胞c-myc、c-Fos蛋白表达.结果 与 TGF-β1组比较,TGF-β1+钩藤碱固体脂质纳米粒高剂量组吸光度值[(0.457±0.046)比(0.975±0.049)]降低(P<0.01);TGF-β1+钩藤碱固体脂质纳米粒高、中、低剂量组 S 期细胞[(15.87± 2.47)%、(15.23±1.69)%、(17.02±2.87)%比(38.58±2.68)%]比例降低(P<0.01),c-myc[(48.65±3.65)、(50.69±4.16)、(55.29±3.67)比(68.21±3.25)]、c-Fos[(38.78±4.25)、(43.56±3.69)、(46.58±3.57)比(66.54±4.09)]蛋白表达降低(P<0.01).结论 钩藤碱固体脂质纳米粒可抑制TGF-β1诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖,其作用机制与阻滞血管平滑肌细胞G0/G1期向S期转化及下调c-myc、c-Fos蛋白表达有关.
关键词： 钩藤碱 固体脂质纳米粒 转化生长因子β 原癌基因蛋白质C-FOS类 原癌基因蛋白质C-MYC类 肌 平滑 血管 细胞增殖 大鼠 -
钩藤碱对DAT基因敲除ADHD模型小鼠多巴胺能神经元代谢的影响
目的 研究钩藤碱对多巴胺转运体(dopamine transporter,DAT)基因敲除注意力缺陷多动障碍(attention-deficit hyperactivity disorder,ADHD)模型小鼠多巴胺能神经元及其代谢产物的影响.方法 体外ADHD模型小鼠及正常小鼠神经元细胞,分为4组:健康对照组、DAT模型组、DAT+钩藤碱组、DAT+宁动颗粒组,各组干预后0、1、3、6、12小时收集细胞及细胞培养液,并ELASA法检测细胞培养液中多巴胺(dopamin,DA)、多巴胺代谢产物高香草酸(homovanillic acid,HVA)、代谢酶单胺氧化酶(monoamine oxidase,MAO)及神经营养因子(brain derived neutrophil factor,BDNF)含量.结果 DAT模型组中,在时间上3、6小时作用多巴胺的代谢达到高峰;DA浓度与DAT模型组及健康对照组比较,DAT+钩藤碱组与DAT+宁动颗粒组培养液中含量均明显降低(P<0.05),HVA浓度、MAO浓度、BDNF浓度均显著增高,且DAT+钩藤碱组与DAT+宁动颗粒组间无显著性差异.结论 钩藤碱可以通过调节MAO活性及BDNF活性促进多巴胺能神经元代谢.
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抗心律失常中药的电生理学研究近况
本文概述了近10年来我国抗心律失常的中药有效成分的电生理机理的研究概况.目前我国中药抗心律失常的研究已深入到细胞和分子水平,处于世界领先水平,但涉及面还不够广.结论:利用电压钳、膜片钳等电生理技术,为中药机制的深入研究开辟了新的途径,也是实现中药现代化的关键之一.
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钩藤中钩藤碱、异钩藤碱的提取与含量测定在预后中的应用分析
目的：：探讨钩藤中钩藤碱、异钩藤碱的提取与含量测定在预后中的应用。方法：采取水煎液以及甲醇提取液的方式对钩藤中的钩藤碱及异钩藤碱进行提取,并使用高效液相色谱系统分别对其提取的含量进行测定。结果：在2．5~80μg/mL的范围内钩藤碱的线性关系良好,此时的回归方程为Y=76．7170X-0．0727(r=0．9998),RSD<8．7%；在2．0 ~80μg/mL的范围内异钩藤碱的线性关系良好,此时的回归方程为Y=87．4729X-0．3666(r=0．9997),RSD<7．3%。甲醇提取液的方式所提取钩藤碱和异钩藤碱的含量高于水煎液的方式,并且使用二十倍质量的甲醇量,24 h的冷侵时间以及60 min的超声时间合适。结论：使用甲醇进行提取在用于钩藤中钩藤碱及异钩藤碱中作用优异,对其质量的控制性好,重复性高,操作方法简单,可提高预后,值得在临床上应用推广。
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钩藤属植物部分品种药材钩藤碱成分的分析
目的:探索钩藤属部分品种钩藤碱成分的含量,为评价这些品种药材质量提供试验依据.方法:应用HPLC测定钩藤属攀茎钩藤、侯钩藤、毛钩藤、倒挂金钩、北越钩藤和华钩藤33批不同产地药材钩藤碱含量.采用Gemini C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为甲醇-水(含0.002 mol·L 1三乙胺,用冰乙酸调pH7.5)(64∶36),流速为1.0 mL·min-1,检测波长254 nm.结果:攀茎钩藤和侯钩藤有5批样品可检出钩藤碱,但含量均较低,其余样品均未能检出钩藤碱.结论:试验所用钩藤属不同品种质量有所差异,同一品种质量随着产地不同而异.
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正交试验法优选止颤汤提取工艺
目的:优选复方止颤汤的提取工艺.方法:采用HPLC测定钩藤碱、异钩藤碱、芍药苷含量；以钩藤碱、异钩藤碱、芍药苷提取率为指标,通过L9(34)正交试验考察加水量、提取时间、提取次数对提取工艺的影响.结果:佳提取工艺条件为加10倍量水提取2次,每次1h.结论:优选的止颤汤提取工艺稳定可行,提取率高.
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钩藤碱缓释滴丸的研制
目的:优选钩藤碱缓释滴丸的制备工艺.方法:采用正交设计优化了药液温度、辅料用比例及冷凝液温度和滴速等工艺条件,制备钩藤碱缓释滴丸,并初步研究其成型工艺.结果:所得缓释滴丸在pH 1.2盐酸和pH 6.8磷酸盐缓冲液及模拟胃肠道介质中的体外释药行为相似,不受pH变化影响.
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钩藤碱缓释微球的体外释放考察
目的:优选钩藤碱海藻酸钠凝胶微球的处方工艺并考察其体外释放情况.方法:采用滴制法制备钩藤碱海藻酸钠凝胶微球,通过单因素试验考察海藻酸钠质量分数、海藻酸钠与钩藤碱质量比、氯化钙摩尔浓度及交联时间对药物释放的影响,并拟合其体外释放曲线.结果:优选的处方为海藻酸钠质量分数1.5％,海藻酸钠-钩藤碱1∶1,氯化钙摩尔浓度0.18mol·L-1,制备的凝胶微球外观较好,载药量3.71％,包封率92.45％；在pH 6.8磷酸缓冲盐中2h释放33.14％,6h释放62.11％,12 h释放94.70％,体外释放符合零级释放模型F=6.114 7t+23.47.结论:制得的缓释凝胶微球在pH 6.8磷酸缓冲盐中具有良好的体外释放行为,优选的处方工艺简单、稳定、重复性好.
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天钩降压胶囊中钩藤碱、异钩藤碱在大鼠离体小肠的吸收动力学研究
目的:研究天钩降压胶囊中有效成分钩藤碱、异钩藤碱的大鼠离体小肠吸收动力学.方法:采用外翻肠囊法,用HPLC测定不同取样时间肠内液钩藤碱、异钩藤碱的含量并计算累计吸收量,以钩藤碱、异钩藤碱的累计吸收量对时间作线性回归分析,计算吸收动力学参数.结果:钩藤碱回归方程为Y=0.000 9X-0.008 5(r =0.908 6),Ka=9.0 ×10-4(μg· min-1·cm-2),t1/2=12.8 h,异钩藤碱回归方程为Y=0.008 6X-0.178 2(r =0.909 0),Ka=8.6×10-3(μg· min-1·cm-2),t1/2=1.34h.结论:天钩降压胶囊中钩藤碱、异钩藤碱在大鼠离体小肠的吸收为一级动力学过程.
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天钩降压胶囊中钩藤碱、异钩藤碱大鼠在体肠吸收动力学研究
目的:研究天钩降压胶囊中钩藤碱、异钩藤碱在大鼠肠道的吸收动力学.方法:采用大鼠在体肠灌流试验,利用HPLC测定钩藤碱、异钩藤碱的含量KROMASIL C18色谱拄(4.6 mm×200 mm,5μm),流动相乙腈-水(含0.01 mol· L-1三乙胺,冰醋酸调pH7.5)(45∶55),流速1 mL·min-1,检测波长254 nm,柱温30℃,进样量20 μL,用紫外-可见分光光度法在560nm测定酚红的含量.结果:钩藤碱吸收动力学方程为Y=-0.331 7X-0.771 8(r =0.998 5),Ka=0.331 7(h-1),t1/2=2.09(h)；异钩藤碱吸收动力学方程为Y=-0.687 0X-0.150 4(r =0.985 2),Ka=0.687 0(h-1),t1/2=1.01(h).结论:天钩降压胶囊中钩藤碱、异钩藤碱在大鼠在体小肠的吸收呈一级动力学过程.
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九味熄风颗粒生物碱类成分指纹图谱建立及其多指标成分定量分析
目的:建立九味熄风颗粒的指纹图谱,并同时测定其中钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱.方法:采用Phenomenex Gemini C18色谱柱,以甲醇-0.1％三乙胺为流动相进行梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,柱温35℃,检测波长246nm.对10批九味熄风颗粒进行了指纹图谱及含量测定研究,采用“中药色谱指纹图谱相似度评价软件”(2004A)进行分析.结果:得到分离度、重复性均较好的九味熄风颗粒指纹图谱,共标示出13个共有峰,各批次样品相似度＞0.96;通过对照品比对,确定了4个成分,分别为钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱,并对其进行定量分析.结论:该方法快速、简便、准确,可作为全面评价该制剂质量的有效方法之一.
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超高效液相色谱法测定钩藤中的钩藤碱和异钩藤碱的含量
目的:用超高效液相色谱法同时测定钩藤中的钩藤碱和异钩藤碱的含量.方法:以ACQUITYUPLC<'R>BEH130C<,18>(2.1mm×100mm,1.7μm)为色谱柱,乙腈-0.01mol/L三乙胺水溶液(45:55,冰醋酸调pH7.0)为流动相,检测波长为245nm,流速0.2mL/min.结果:钩藤碱在0.052-0.309μg具有良好的线性关系,r=0.9997,平均回收率为98.3％,RSD为0.88％,异钩藤碱在0.060μg-0.363μg具有良好的线性关系,r=0.9999,平均回收率为97.7％,RSD为1.29％.结论:该方法简便快捷、精密度高、结果准确.可用于钩藤的质量控制.
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钩藤碱脂质体的制备及释放度研究
目的:制备钩藤碱脂质体并考察其体外释放度.方法:采用HPLC测定脂质体中钩藤碱的含量,并进一步考察其在体外的释放度.结果:4h内钩藤碱脂质体中药物累积释放量为30％左右,体外释放曲线拟合优度较好的方程为Weibull方程,相关系数为R=0.9845.结论:钩藤碱脂质体中药物释放具有明显的缓释效果.
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钩藤中乌索酸和钩藤碱对肝癌细胞株HepG2的影响
目的 观察钩藤中乌索酸和钩藤碱对人肝癌细胞株HepG2的影响,探讨其抗肝癌的机制.方法 将50、25、12.5、6.25μmol/L乌索酸、钩藤碱分别与人肝癌细胞株HepG2共同培养24、48、72 h后,以1%DMSO为阴性对照组,CCK-8法检测HepG2细胞增殖,吖啶橙荧光染色观察50μmol/L乌索酸、钩藤碱和1%DMSO作用48 h后HepG2细胞形态.结果 乌索酸对HepG2细胞增殖有明显的抑制作用,并且其抑制率与作用时间、药物浓度呈正相关,钩藤碱对HepG2细胞增殖抑制作用较弱.病理观察结果显示,钩藤碱组大部分细胞出现细胞皱缩、包浆致密、核染色边集等凋亡早期改变,而乌索酸组大部分细胞出现核裂解、凋亡小体等凋亡晚期改变.结论 钩藤中乌索酸和钩藤碱对人肝癌细胞株HepG2增殖有抑制作用,能诱导HepG2细胞凋亡.
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不同时期攀茎钩藤钩藤碱成分的动态积累分析
目的 了解不同时期攀茎钩藤钩藤碱成分的动态积累情况,为确定该药材的佳采收期提供科学依据.方法 采用高效液相色谱法,对同一产地不同时期的攀茎钩藤样品进行钩藤碱含量测定,色谱柱:Gemini C18(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相:甲醇-水(含0.002 mol/L 三乙胺,用冰乙酸调pH 7.5)＝64:36;流速:1.0 mL/min;检测波长:254 nm.结果 不同时期采集的样品钩藤碱含量在0.009%～0.016%范围,其中1～5 月份样品含量较高,6～12月份含量较低.结论 攀茎钩藤药材钩藤碱成分的动态积累随着采集时间的不同而有所差异,该种药材以1～5 月份采集为宜.
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钩藤碱化学分析研究进展
钩藤碱(rhynchophylline)为传统中药钩藤属植物有效成分的主要成分之一,对人体心血管系统、中枢神经系统以及血液系统等具有明确的生物活性作用[1-4],是治疗高血压方剂的常用药源.随着现代分析技术的不断发展,钩藤碱的研究取得了很多新进展.为了加快钩藤属中药材的深入开发应用研究,笔者就近十几年来钩藤碱化学分析的研究进展作一综述.
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HPLC测定钩藤中钩藤碱和异钩藤碱的方法学探讨
目的:探讨钩藤中钩藤碱和异钩藤碱的HPLC含量测定方法.方法:采用RP-HPLC,对钩藤中钩藤碱和异钩藤碱的HPLC含量测定方法学进行考察,同时采用HPLC-ESI-MS研究钩藤碱和异钩藤碱在加热过程中的化学成分转化情况.结果:钩藤碱在0.064～5.100 mg线性关系良好,精密度良好；当样品采用同流提取时,平均加样回收率87.51％～88.83％,提取回收率12.60％；当样品采用超声提取时,平均加样回收率99.48％ ～ 103.2％,提取回收率47.08％.异钩藤碱在0.064～5.110 mg线性关系良好,精密度良好；当样品采用回流提取时,平均加样回收率107.9％～113.9％,提取回收率40.00％,当样品采用超声提取时,平均加样回收率97.00％～99.59％,提取回收率51.03％.质谱分析结果表明回收率不合格的原因是钩藤碱在提取过程中大部分转化为异钩藤碱,有一小部分转化为未知成分；异钩藤碱在提取过程中转化为钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱及22-O-β-D-glucopyranosyl isocorynoxeinic acid4种成分.结论:HPLC测定钩藤中钩藤碱和异钩藤碱宜采用超声提取法,并应注意同收率问题.
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天麻钩藤配伍对天麻素和钩藤碱体内药动学的影响
测定天麻素及钩藤碱体内药动学参数,研究天麻钩藤药对配伍后对天麻素和钩藤碱体内药动学行为的影响.结果天麻钩藤以9∶12配伍后,与二者单味药对照组相比,天麻素和钩藤碱Cmax及AUC均显著增加,钩藤tmax后移1.5 h,天麻tmax后移0.25 h,二者由原来相同的达峰时间改变为前后相差1.25 h,说明配伍可显著改变药物体内药动学行为.从整体组方分析,天麻药性缓和滋补,钩藤寒凉苦降,配伍后天麻达峰较快且Cmax及AUC增加,先发挥滋阴潜阳作用同时弥补钩藤达峰延后损失的药效;之后,在滋阴的前提下钩藤碱继续达峰且Cmax及AUC增加,可弥补天麻半衰期较短的缺点,有利于更好地维持降压作用.二者配伍各自发挥优势互补,避免了单用钩藤苦寒过重累及伤阴,或单用天麻滋补有余,苦寒不足,充分说明钩藤、天麻二者共为君药、标本兼顾的治疗原则具有可靠的药动学依据.该研究通过对天麻钩藤药对配伍后的药动学特征进行研究,发现中医通过天麻、钩藤配伍实现对"肝阳上亢"整体施治目的是具有其药动学基础的,进一步为中医组方用药的科学性、合理性提供药动学依据.
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钩藤生物碱对自发性高血压大鼠胸主动脉成纤维细胞凋亡／增殖及FN、LN的影响
目的 研究钩藤碱、异钩藤碱和钩藤总生物碱对自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rat,SHR)胸主动脉血管外膜成纤维细胞(vascular adventitial fibroblasts,VAF)凋亡、增殖及Bcl-2、Bax、c-Fos、c-Myc、层黏连蛋白(laminin,LN)、纤维层黏连蛋白(fibronectin,FN)的影响.方法 选择8周龄雄性SHR 40只,随机分为模型组、卡托普利组( 17.5 mg/kg)、异钩藤碱组(5.0 mg/kg)、钩藤碱组(5.0 mg/kg)和钩藤总生物碱组(50.0 mg/kg),每组8只.另选取8周龄雄性Wistar大鼠8只作为正常组.模型组和正常组灌胃给予等容量生理盐水.各组给药容积为每次10 mL/kg,每周给药6天,连续8周,随体重变化调整给药量.采用Annexin VFITC结合PI染色、流式细胞术分析胸主动脉VAF凋亡率；免疫组化法检测胸主动脉VAF Bcl-2、Bax、c-Myc、c-Fos、FN及LN蛋白表达；原位杂交法检测胸主动脉VAF转化生长因子-β1(transforming growth factor,TGF-β1)mRNA表达.结果 与模型组比较,各用药组干预4、8周大鼠尾动脉收缩压均降低,胸主动脉VAF凋亡率、Bax蛋白均升高,Bcl-2、c-Fos、FN、LN蛋白及TGF-β1 mRNA均降低,钩藤碱组、异钩藤碱组及钩藤总生物碱组c-Myc蛋白表达均降低,差异均有统计学意义(P ＜0.05,P＜0.01).与卡托普利组比较,钩藤碱组、异钩藤碱组及钩藤总生物碱组大鼠尾动脉收缩压、c-Fos蛋白表达及TGF-β1mRNA差异无统计学意义(P＞0.05)；胸主动脉VAF凋亡率升高,Bcl-2、c-Myc及LN蛋白表达均降低,差异均有统计学意义(P ＜0.05,P＜0.01)；钩藤碱组、异钩藤碱组Bax蛋白表达均升高,差异均有统计学意义(P ＜0.05,P＜0.01)；异钩藤碱组FN蛋白表达降低,差异有统计学意义(P＜0.05).钩藤碱组、异钩藤碱组及钩藤总生物碱组间比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 钩藤碱、异钩藤碱和钩藤总生物碱可能通过调节原癌基因Bcl-2和Bax蛋白表达,促进SHR胸主动脉VAF凋亡,通过下调c-Fos、c-Myc蛋白和TGF-β1 mRNA表达途径抑制SHR胸主动脉VAF增殖,并通过下调FN和LN蛋白表达而减轻细胞外基质的沉积,从而改善胸主动脉外膜重塑,降低尾动脉收缩压.
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气相色谱(GC)法测定钩藤中钩藤碱的含量
目的:建立气相色谱测定钩藤中钩藤碱含量的方法.方法:采用非极性毛细管柱AT.SE-54( 15m×0.25mm×0.33μm)；柱流速1.0ml·min-1；柱箱起始温度150℃,保持15min,以10℃·min-1的速率升至230℃,保持8min;进样口温度:280℃;检测器(FID)温度:280℃；载气为氮气.结果:钩藤碱在0.25442～1.2721 μg范围内,线性关系良好(r=0.9998),平均回收率为99.21％,平均RSD为1.32％.结论:该方法稳定,结果可靠,重复性好,可作为可为钩藤质量控制标准的制定提供相应的依据.
