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白花丹醌对白血病小鼠生存期的影响
目的 探讨白花丹醌对白血病小鼠生存期的影响,为临床应用提供实验依据.方法 采用急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4、尾静脉接种非肥胖型糖尿病/重症联合免疫缺陷(NOD/SCID)小鼠建立急性白血病模型.腹腔给予白花丹醌2 mg/kg/d共7d,观察小鼠的生存期.结果 治疗组小鼠的生存期为(33.96±5.18)d,比对照组(27.55±4.01)d明显延长,差异有统计学意义(P＜0.01);白花丹醌治疗过程中无明显的毒副作用.结论 白花丹醌能在NOD/SCID小鼠体内起到抗白血病,延长生存期的作用.
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TSA抑制NB4细胞去乙酰化酶活性并促进细胞周期素激酶抑制剂表达
目的研究曲古菌素A(Trichostatin A,TSA)对NB4细胞组蛋白去乙酰化酶HDAC1的作用及细胞周期依赖激酶抑制剂P21WAF1/CIP1的表达,探讨TSA抗白血病的作用机制.方法培养人的急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4,应用TSA在不同浓度和不同时间点处理细胞,提取细胞的总蛋白和mRNA,用Western blot蛋白质印迹技术检测HDAC1和P21WAF1/CIP1蛋白表达,并用RT-PCR技术同时检测P21WAF1/CIP1 mRNA的表达水平.结果①TSA明显抑制HDAC1的活性和表达,在IC50浓度时作用4 h HDAC 1已经降低,持续48 h;在较低浓度(37.5 nmol·L-1)时就对HDAC1有明显的抑制作用,但在75～300 nmol·L-1时HDAC1降低水平未见明显区别;②TSA明显促进P21WAF1/CIP1蛋白和mRNA的表达,在8 h时mRNA已增高,12 h后可见到蛋白增加,在浓度大于150 nmol·L-1时呈明显时间和剂量依赖性.结论 TSA明显抑制HDAC1活性和表达,促进细胞周期依赖性激酶抑制剂P21WAF1/CIP1蛋白和mRNA水平升高,有明显的抗白血病作用.抑制HDAC1活性和促进P21WAF1/CIP1增加可能是TSA抗白血病的机制之一.
关键词： 曲古菌素A 组蛋白去乙酰化酶 细胞周期依赖激酶抑制剂 NB4细胞 -
黄芪总苷诱导NB4细胞凋亡的线粒体通路的研究
目的 研究黄芪总苷(TA)对体外培养的人早幼粒细胞白血病细胞株凋亡的线粒体传导通路的影响.方法 将不同浓度的TA(200、300、400 μg/ml)作用于NB4细胞,体外培养48 h,使用流式细胞仪检测细胞凋亡率及线粒体膜电位的变化;采用RT-PCR测定细胞内Bcl-2和Bax mRNA变化;使用分光光度法测定细胞内caspase-3的活性变化.结果 TA作用于NB4细胞48 h后,各浓度组的凋亡率与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05),在TA(200、300、400 μg/ml)组凋亡率呈浓度依赖性增加,各组之间差异有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,各浓度组Bcl-2 mRNA及线粒体膜电位的表达明显下降,caspase-3的表达明显升高(P<0.05);Bax mRNA的表达无明显差异.结论 TA可以诱导NB4细胞凋亡,具有体外抗白血病效应,并且可能通过线粒体凋亡途径诱导细胞凋亡.
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骨髓基质细胞抵抗三氧化二砷诱导NB4细胞株凋亡的作用
目的 探讨骨髓基质细胞抵抗三氧化二砷诱导白血病NB4细胞株凋亡的作用.方法 采用2.0μmol/L浓度的三氧化二砷及白介素-6(IL-6)抗体分别处理单独培养的NB4细胞、NB4细胞与骨髓基质细胞混合培养组细胞、NB4细胞与骨髓基质细胞非接触性混合培养组细胞48 h,FITC-Annexin V/PI标记流式细胞仪定量细胞凋亡率.结果 在细胞终浓度为1×106/L的NB4细胞中,单独培养的NB4细胞加入三氧化二砷后出现明显凋亡,凋亡率为(82.80±1.24)％.采用骨髓基质细胞与白血病细胞混合培养及非接触性混合培养后,加入三氧化二砷,其凋亡率明显下降,分别为(42.97±1.32)％、(58.54±1.12)％.分别将IL-6抗体加入进行实验,NB4细胞凋亡率较未加入IL-6抗体组有所上升,分别为单独培养组(83.46±1.23)％,接触性混合培养组(48.87±2.17)％,非接触性混合培养组(62.56±0.97)％.结论 骨髓基质细胞能增加NB4细胞对三氧化二砷诱导凋亡的抵抗作用,且这种作用可能通过细胞因子及直接接触产生.
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六神丸诱导NB4细胞凋亡的实验研究
目的:观察六神丸诱导NB4白血病细胞凋亡的作用.方法:应用TUNEL法和Annexin V/PI双染法检测不同浓度和不同时间段六神丸诱导NB4细胞的凋亡率.结果:TUNEL法表明凋亡率与剂量呈正相关性,100 μg/ml六神丸凋亡率高.Annexin V/PI双染法表明50 μg/m l六神丸作用32 h凋亡率高.结论:六神丸可诱导白血病细胞凋亡.
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Hsp90抑制剂HDN-1诱导急性早幼粒细胞白血病NB4细胞凋亡的研究
目的 探讨南极土壤来源真菌的次级代谢产物HDN-1对人急性粒细胞白血病Nt4细胞的增殖抑制,诱导凋亡作用及其机制.方法 采用MTT法检测HDN-1对NB4细胞的增殖抑制作用;DNA结合染料Hoechst 33324染色,Western Blot实验,流式细胞仪检测细胞凋亡以及凋亡相关蛋白的变化.结果 HDN-1能显著抑制NB4细胞的增殖,并呈剂量-时间依赖性;HDN-1作用后,细胞核形态发生明显变化且流式细胞仪分析表明NB4细胞凋亡数量明显增加;HDN-1可引起Caspase-3,8,9激活,bid减少,线粒体中凋亡蛋白Bcl-2,Mcl-1的表达降低,以及γ-H2AX、Parp剪切带增加.但是NB4细胞中融合蛋白PML-RARα的表达不能被HDN-1所抑制.结论 HDN-1诱导凋亡是通过Caspase依赖的线粒体途径和死亡受体途径共同介导的,PML-RARα不是Hsp90的客户蛋白,其诱导凋亡机制可能是通过抑制Hsp90的其他蛋白表达进行的.
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四硫化四砷对荷NB4细胞SCID小鼠生存期的影响
目的:探讨四硫化四砷(As4S4)对荷NB4细胞SCID小鼠生存期的影响.方法:34只荷NB4细胞腹水瘤的SCID小鼠均分为2组:治疗组给予As4S4悬液(100 mg/kg)腹腔内注射,隔日1次,共3次;对照组同法给予5 g/L甲基纤维素溶液.观察2组小鼠的生存期.结果:治疗组小鼠的生存期为(22.44±6.77)d,比对照组((16.27±2.34)d)明显延长(P＜0.01);As4S4治疗过程中无明显的毒副作用,小鼠终死于NB4细胞增殖所致的腹水.结论:As4S4可抑制SCID小鼠体内NB4细胞的增殖,延长荷瘤小鼠的生存期.
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四硫化四砷对急性早幼粒细胞白血病细胞凋亡及Caspase-3活性的影响
目的:探讨四硫化四砷(As4S4)对急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞内Caspase-3活性的影响.方法:2例APL患者给予As4S4(2.5 g/d,分3次口服)治疗,治疗前、治疗后7 d及14 d,分离外周血单个核细胞(PBMNC).NB4细胞与2μmol/L的As4S4共同培养24 h.取APL患者的PBMNC和处理前后的NB4细胞,用流式细胞仪分析亚二倍体细胞数,用荧光分析法检测Caspase-3活性.结果:经As4S4处理的NB4细胞,亚二倍体细胞数(58.9±5.2)%,高于处理前的(1.2±0.5)%(t=23.616,P＜0.05);Caspase-3活性为(21.5±3.1)×106s-1,高于处理前的(8.7±1.2)×106s-1.治疗后APL患者的PBMNC内Caspase-3活性较治疗前升高,2例患者均获血液学缓解.结论:As4S4通过激活Caspase-3诱导NB4细胞凋亡,这可能是As4S4治疗APL的主要机制之一.
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小剂量硒化壳聚糖与全反式维甲酸协同诱导NB4细胞分化和凋亡
目的 研究小剂量硒化壳聚糖(25 mg/L)与全反式维甲酸(ATRA 0.1 μmol/L)联合应用对人急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4分化及凋亡的影响.方法 采用DNA片段化凝胶电泳法检测细胞凋亡;NBT还原法检测细胞分化;流式细胞法检测分化抗原CD11b.结果 25 mg/L硒化壳聚糖没有诱导NB4细胞分化和凋亡的能力,但与0.1 μmoL/L ATRA联合使用同单独使用0.1 μmol/L ATRA相比,CD11b表达阳性率进一步增加,NBT还原能力进一步增强,两药合用DNA电泳呈现出典型的梯带.结论 小剂量硒化壳聚糖与ATRA联合使用可诱导NB4细胞发生凋亡及分化.
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硒化壳聚糖通过下调PML-RARα融合蛋白来对NB4细胞产生抑制增殖和诱导凋亡作用
目的 研究硒化壳聚糖对急性早幼粒白血病细胞株NB4增殖和凋亡的影响,探讨这种影响与PML-RARα融合蛋白表达的关系.方法 应用MTT法检测硒化壳聚糖对细胞增殖的影响,应用AO/EB荧光染色法共聚焦显微镜下观察诱导凋亡作用,应用Western blot的方法检测细胞PML-RARα融合蛋白含量的变化.结果 硒化壳聚糖可对体外培养的NB4细胞产生剂量和时间依赖性的抑制作用,50 mg/L 至 100 mg/L硒化壳聚糖作用NB4细胞24 h可诱导细胞出现明显的凋亡现象,经硒化壳聚糖处理24 h后,NB4细胞内PML-RARα融合蛋白含量明显减少.结论 硒化壳聚糖可通过下调PML-RARα融合蛋白含量对NB4细胞产生抑制增殖和诱导凋亡作用.
关键词： 硒化壳聚糖 NB4细胞 增殖 凋亡 PML-RARα融合蛋白 -
塞来昔布对NB4细胞增殖、凋亡及VEGF表达的影响
目的 探讨塞来昔布对急性早幼粒细胞白血病细胞的抑制作用及可能机制.方法 不同浓度塞来昔布处理急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4,MTT法检测塞来昔布作用后细胞的增殖情况.采用流式细胞术测定NB4细胞周期分布及凋亡；Western blot检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2表达以及RTPCR检测塞来昔布作用对VEGF、HIF-1α在mRNA水平的表达.结果 MTT显示塞来昔布对NB4细胞生长有明显抑制作用.20～80 μmol/L塞来昔布作用24 h,NB4细胞G0/G1期比例明显升高,而S期细胞比例下降(P＜0.05)；塞来昔布处理组细胞凋亡率明显高于对照组,Western blot显示Bcl-2蛋白表达下调(P＜0.05)；RT-PCR显示塞来昔布可抑制VEGF及HIF 1α的mRNA表达.结论 塞来昔布在体外可抑制急性早幼粒细胞白血病细胞增殖并诱导凋亡.
关键词： 急性早幼粒细胞白血病 塞来昔布 NB4细胞 细胞凋亡 细胞周期 -
威灵仙皂苷对急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4细胞的凋亡诱导作用及其机制
目的 探讨威灵仙皂苷对急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4细胞的凋亡诱导作用及其机制.方法 以NB4细胞为实验对象,1.0 μmol/L的三氧化二砷为阳性对照,0.01%DMSO为阴性对照,用不同浓度的威灵仙皂苷作为实验组,利用MTT法观察细胞的增殖抑制状态,瑞氏染色进行细胞形态学观察,流式细胞术检测细胞凋亡率及进行细胞周期测定,Real-time PCR检测威灵仙皂苷干预细胞后PML-RARa mRNA的变化.结果 不同浓度的威灵仙皂苷作用细胞后,均能抑制细胞增殖,具有时间和浓度依赖性,但抑制率低于砷剂组.瑞氏染色可见典型凋亡细胞的形态学改变,与砷剂组有同样的改变.流式细胞术检测发现凋亡细胞随时间延长而增多,组间差异有统计学意义,凋亡率低于砷剂组.细胞周期测定提示G2期细胞增多,G1期细胞明显减少,组间差异有统计学意义(P<0.05).威灵仙皂苷作用后的NB4玢细胞PML-SARa mRNA的表达无统计学意义(P>0.05).结论 威灵仙皂苷可能通过诱导NB4＆细胞凋亡抑制细胞生长,可能的机制是通过细胞周期阻滞,但不影响PML-RARa mRNA的表达.
关键词： 威灵仙皂苷 急性早幼粒细胞性白血病 NB4细胞 细胞凋亡 -
孕酮对白血病细胞的抑制增殖和诱导分化作用
目的 探讨孕酮对K562和NB4白血病细胞系的抑制增殖和诱导分化作用.方法 采用细胞计数,XTT实验观察孕酮对白血病细胞增殖能力的影响,采用Wright-Giemsa染色,联苯胺染色,NBT还原实验和流式细胞术观察孕酮对白血病细胞的诱导分化作用.结果 不同浓度孕酮连续作用白血病细胞5天,液体培养显示细胞数明显减少,第5天处理组的XTT值显著低于对照组,并呈剂量依赖关系;液体培养和XTT均显示孕酮对NB4细胞的增殖并无显著影响.K562细胞联苯胺染色OD值显著升高,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01),NB4细胞NBT还原能力提高(P＜0.01),并呈剂量依赖性.形态学观察孕酮可诱导K562细胞和NB4细胞趋向成熟分化,流式细胞术检测孕酮处理后K562和NB4细胞膜CD71和CD11b分化抗原表达阳性率分别为85.72%和61.28%.结论 孕酮可显著抑制K562白血病细胞增殖,诱导K562和NB4白血病细胞向成熟分化.
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超抗原SEA增强PML-RARα多肽体外诱导特异性CTL杀伤活性的机制
目的 探讨超抗原SEA体外增强PML-RARα多肽诱导特异性CTL杀伤活性的机制.方法 分别将SEA、PML-RARα多肽以及SEA联合PML-RARα多肤与正常人外周血单个核细胞共同培养,利用CCK-8比色法检测诱导后T细胞对NB4和K562细胞株杀伤活性,同时利用流式细胞术测定诱导T细胞表面CD4与CD8表达情况.结果 诱导后第20天,SEA能明显增强PML-RARα多肽特异性杀伤NB4细胞株的作用.诱导后第5、10、20天动态检测表明,多肽及SEA联合多肽组CD4+/CD8+比值逐渐降低,其中SEA联合PML-RARα多肽诱导组降低显著.结论 超抗原SEA能明显增强PML-RARα多肽体外诱导特异性CD8+T细胞的增殖与特异性的杀伤作用.
关键词： 超抗原 PML-RARα多肤 NB4细胞 T细胞 -
三七总甙对NB4细胞核转录因子-κB及组织因子表达的影响
目的通过核转录因子NFκB及其抑制因子IκB的表达探讨三七总甙(Panax notoginseng saponins PNS)对NB4细胞组织因子的调控机制.方法用三七总甙处理NB4细胞,分别于处理后24h、48h、72h、96h、120h收获细胞,半定量逆转录PCR检测TF-mRNA的表达;Western蛋白印迹检测细胞内NFκB的亚单位p65及IκBα的蛋白,以及核蛋白p65的表达.结果三七总甙处理NB4细胞24h,TF-mRNA表达开始下降,120h完全抑制.Westernblot显示三七总甙抑制细胞内IκBα及核蛋白p65的表达.结论三七总甙抑制组织因子的表达,可能是通过抑制NFκB的活化起作用.
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曲古菌素A调节NB4细胞组蛋白乙酰化和p21WAF1/CIP1表达
目的研究去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A(trichostatin A,TSA)对人急性早幼粒细胞白血病细胞NB4组蛋白H3乙酰化水平的调节作用及对细胞周期素依赖性激酶抑制剂p21WAF1/CIP1表达的影响.方法应用300、150、75、37.5、18.75 nmol/L浓度的TSA分别作用NB4细胞4、8、12、24、48 h,提取细胞的总mRNA和总蛋白,采用RT-PCR技术检测p21 WAF1/CIP1mRNA表达情况,并用免疫印迹技术(Western blot)观察组蛋白H3的乙酰化水平变化及p21WAF1/CIP1蛋白的表达水平.结果 TSA对组蛋白H3乙酰化作用随时间改变而变化;在低浓度时就可引起组蛋白H3的乙酰化.TSA对p21 WAF1/CIP1mRNA和p21WAF1/CIP1蛋白表达的影响呈时间和剂量依赖性.结论 TSA能够明显上调NB4细胞组蛋白H3的乙酰化水平,促进细胞周期依赖性激酶抑制剂p21WAF1/CIP1的表达.
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PPARγ激动剂对白血病NB4细胞的诱导凋亡作用及其作用机制
目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂罗格列酮(rosiglitazone,RGZ)对白血病NB4细胞的诱导凋亡作用及其作用机制.方法 以不同浓度的RGZ作用于体外培养的NB4细胞0、24、48及72 h,应用MTT法检测细胞生长抑制率,用Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡,并对细胞凋亡前后P53蛋白的表达水平进行检测.结果 RGZ可显著抑制细胞的生长及诱导细胞发生凋亡,呈现出明显的量-效与时-效关系,在细胞凋亡的同时,P53蛋白的表达水平明显升高.结论 PPARγ激动剂RGZ能显著抑制NB4细胞的生长并诱导细胞发生凋亡,升高促凋亡蛋白P53的表达水平可能是RGZ诱导NB4细胞发生凋亡的重要作用机制之一.
关键词： 过氧化物酶体增殖物激活受体γ NB4细胞 细胞凋亡 白血病 -
PUVA诱导NB4、K562细胞凋亡时对Fas、FasL表达的影响
目的:探讨补骨脂素(PSO)加长波紫外线(UVA)光化学疗法(PUVA)诱导人白血病细胞NB4、K562凋 亡时对Fas、FasL表达的影响.方法:以NB4、K562细胞为研究对象,以细胞凋亡率、电镜下细胞超微结构改变以及细胞Fas、FasL在基因、蛋白水平的表达为检测指标,观察补骨脂中提取的PSO加波长为360 nm的UVA对人白血病细胞诱导凋亡的作用以及部分作用途径,并采用多因素方差分析法进行统计学处理.结果:PSO,UVA照射及PUVA均可诱导NB4、K562细胞发生凋亡,PUVA的作用显著强于前两者.电镜下观察经PUVA处理后的NB4、K562细胞超微结构,可见明显的凋亡形态学改变;PSO、UVA照射及PUVA均可上调NB4、K562细胞Fas在基因、蛋白水平的表达,下调FasL在基因、蛋白水平的表达,PUVA的作用显著强于前两者.结论:PUVA可诱导白血病细胞NB4、K562发生凋亡,其作用强于PSO及UVA照射,作用途径之一为上调细胞Fas基因表达水平,下调FasL基因表达水平.
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WT1基因异构体比例转变对白血病细胞株NB4增殖的影响
背景与目的:WT1基因编码一个锌指转录因子,在白血病细胞中高表达并与预后呈负相关.WT1基因mRNA通过2个可变性的剪切位点产生4种不同的拼接异构体,4种异构体在表达WT1的不同组织中各以其相对稳定的比例表达,白血病细胞中WT1不同异构体表达的意义尚不清楚.本研究拟用WT1基因异构体WTA转导急性早幼粒细胞性白血病细胞株NB4,以探讨WT1基因异构体对NB4细胞增殖的影响及其分子机制.方法:用电穿孔的方法将携带WT1基因异构体WTA(-17AA/-KTS)全长cDNA的重组真核表达载体及其对照质粒pCB6+转导NB4细胞,建立WT1基因异构体表达比例改变的细胞株并用有限稀释法进行单克隆化.采用台盼蓝拒染法、MTT比色法、甲基纤维素集落形成实验及细胞周期动力学检测,了解WT1基因异构体表达比例改变对NB4细胞生长的影响.用半定量RT-PCR检测NB4细胞中p53、p21、Cyclin E、Cyclin D1、Cyclin A1基因表达的改变.结果:WT1基因异构体能够通过电穿孔方法成功转染NB4细胞,外源基因在NB4细胞中稳定整合及表达,并通过有限稀释法将永久表达细胞株单克隆化.用台盼蓝拒染法绘制细胞生长曲线,提示转染WT1基因异构体的细胞NB4/WTA生长明显慢于对照组NB4/CMV细胞及未转染的NB4细胞,NB4/WTA细胞生长曲线平缓,在第3天达平台期(78.7±18.0)×104/ml,对照组NB4/CMV细胞及NB4细胞在第4天出现生长平台期达(146.0±21.0)×104/ml.MTT法检测细胞增殖活性,结果显示,NB4/WTA细胞在各个时间段的抑制率均高于对照组,P＜0.005.甲基纤维素集落形成试验中NB4/WTA克隆形成率明显下降,集落形成抑制率为46.9%.在As2O3(终浓度0.2 μmol·L-1)作用后集落形成抑制更加明显.细胞周期动力学检测提示,NB4/WTA组S期细胞比例升高.RT-PCR检查提示,NB4/WTA细胞p21、Cyclin A1基因的表达较对照组升高.结论:增加外源性WT1基因异构体WTA的表达将WT1基因异构体表达的比例由+17AA/+KTS优势型转变为-17AA/-KTS优势型,能抑制NB4细胞的增殖,使其克隆形成能力明显下降.这可能与p21、Cyclin A1基因表达上调,细胞周期阻滞于S期有关.
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葛根总黄酮体外诱导人早幼粒细胞白血病细胞株NB4凋亡的实验研究
目的 探讨葛根主要成分葛根总黄酮对急性早幼粒细胞向血病(APL)细胞株NB4增殖及凋亡的影响.方法 采用MTT比色法检测葛根总黄酮对NB4细胞增殖抑制率:光学显微镜及荧光显微镜观察细胞形态改变:AnnexinV/PI双染法检测细胞凋亡率;DNA PI染色法分析细胞周期及亚二倍体峰.结果 12.5～200μg/ml葛根总黄酮均能抑制NB4细胞的增殖.光镜及荧光显微镜下可见核固缩、凋亡小体等典型的细胞凋亡改变;AnnexinV~+/PI~-细胞呈时间-剂量依赖性增加;DNA PI染色法发现细胞亚二倍体比例增加,G_1期比例下降、S期比例增高.结论 葛根总黄酮能有效抑制NB4细胞增殖、阻滞细胞周期进程、诱导细胞凋亡.
