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海马背侧注射β-淀粉样蛋白25～35激活胶质细胞和 p38丝裂原活化蛋白激酶诱导神经元凋亡
目的：探讨海马背侧注射β-淀粉样蛋白25～35（ Aβ25～35）后胶质细胞与p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）激活的关系，及Aβ25～35诱导神经元凋亡的可能机制。方法采用免疫组织化学及免疫印迹方法观察海马背侧注射Aβ25～35后不同时段小胶质细胞（ MG）、星形胶质细胞（ AS）的激活和磷酸化p38MAPK（ p-p38MAPK）在海马组织中的表达；酶联免疫吸附法检测肿瘤坏死因子-α（ TNF-α）及白细胞介素-1β（ IL-1β）在海马组织中的含量；Nissl染色法观察海马神经元存活；TUNEL染色观察海马神经元凋亡。结果注射Aβ25～35后海马内抗特异性标记小胶质细胞（ox-42）、胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）、和p-p38MAPK的表达与TNF-α、IL-1β的含量同步增加，于7d达到高峰，而Nissl阳性神经元数量逐渐减少，TUNEL阳性神经元数量则逐渐增多，亦于7d达到高峰。结论海马背侧注射Aβ25～35可能通过激活胶质细胞和p38MAPK，使TNF-α，IL-1β含量增加导致海马神经元凋亡。
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黑米花色苷提取物在小鼠哮喘模型中对p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路的影响
目的 探讨黑米花色苷(AEBR)提取物对哮喘小鼠气道炎症和 Thl/Th2 类细胞因子变化的影响及其可能机制.方法 雄性 BALB/c 小鼠32只随机分成4组,即正常对照组、哮喘模型组和黑米花色苷提取物低、高剂量干预组.分别采用酶联免疫吸附法 (ELISA) 和免疫印迹法检测支气管肺泡灌洗液 (BALF) 中白细胞介素-4、白细胞介素-5、白细胞介素-13(IL-4、IL-5、IL-13) 及干扰素-γ(IFN-γ) 含量以及肺组织中磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)的变化,并观察 BALF 中炎症细胞和肺组织病理学改变.结果 哮喘模型组小鼠支气管肺泡灌洗液中炎症细胞计数、白细胞介素-4、白细胞介素-5、白细胞介素-13水平升高和干扰素-γ水平降低;肺组织中磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶表达水平升高,与正常对照组比较,差异有显著性(P<0.05).黑米花色苷提取物低、高剂量干预组小鼠BALF中炎症细胞计数、白细胞介素-4、白细胞介素-5、白细胞介素-13 水平和肺组织中磷酸化 p38丝裂原活化蛋白激酶表达水平均明显降低,IFN-γ水平明显上升,与哮喘模型组比较,差异均具有显著性 (P<0.05).黑米花色苷提取物处理能明显减轻哮喘小鼠肺组织病理学改变,黑米花色苷提取物低、高剂量干预组之间比较,差异不显著 (P>0.05).结论 p38丝裂原活化蛋白激酶可能参与了支气管哮喘的发病过程.黑米花色苷提取物对哮喘小鼠具有保护作用,其机制可能与抑制 p38丝裂原活化蛋白激酶磷酸化、调节白细胞介素-4 / 干扰素-γ平衡失调、减轻炎症细胞浸润有关.
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天麻素通过蛋白激酶B/p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路抑制H9c2心肌细胞凋亡
目的 采用血清剥夺/复灌的大鼠H9c2心肌细胞模拟心肌缺血/再灌注损伤(I/R),从细胞层面探讨天麻素(gastrodin)抗H9c2心肌细胞凋亡的作用及其机制.方法 体外培养H9c2心肌细胞随机分为对照组、血清剥夺(0.5～6 h)处理组、血清剥夺/复灌(2/4 h)处理组、天麻素(10、20和40μmol/L)处理组、天麻素(20 μmoL/L)+渥曼青霉素(wortmannin)(1μmol/L)处理组、wortmannin(1μmol/L)处理组.采用免疫印迹法检测p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)、蛋白激酶B(Akt)、p-Akt以及凋亡相关蛋白cleavedCaspase-3、Bcl-2和Bax的表达变化;采用流式细胞术检测细胞凋亡;通过实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测Caspase-3、Bcl-2和Bax的mRNA表达变化;采用免疫荧光双标记法检测细胞内p-Akt蛋白水平表达的变化.结果 血清剥夺(0.5～6 h)和血清剥夺/复灌(2/4 h)处理诱导细胞凋亡水平增加;加入不同浓度天麻素处理,与血清剥夺(0.5～6 h)和血清剥夺/复灌(2/4 h)处理组比较,凋亡相关蛋白cleaved Caspase-3表达降低,Bcl-2/Bax蛋白表达的比值上调(P＜0.05),基因转录水平检测的Caspase-3和Bax表达量降低,Bcl-2表达量上调((P＜0.05),流式细胞术凋亡检测结果也同样显示,天麻素能抑制血清剥夺/复灌(2/4 h)诱导的细胞凋亡(P＜0.05);同时,血清剥夺(0.5～6 h)和血清剥夺/复灌(2/4 h)处理能抑制Akt/p38MAPK信号通路;加入不同浓度的天麻素(10、20和40μmol/L)处理后,p-Akt的表达水平增多,p-p38MAPK蛋白表达减少(P＜0.05).加入Akt的特异性抑制剂wortmannin(1μmol/L)处理后,天麻素对上述因子的调控作用被反转(P＜0.05).结论 在H9c2心肌细胞中,天麻素通过激活Akt/p38MAPK信号通路,抑制血清剥夺/复灌诱导的细胞凋亡,从而发挥抗心肌I/R损伤的保护作用.
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羌活提取物对哮喘小鼠Th1/Th2细胞平衡的影响及其对p38信号通路的作用
目的 探讨羌活提取物(EN)对哮喘小鼠ThL/Th2细胞平衡的影响,以及p38信号通路在其中的作用.方法 60只雄性清洁级BABL/c小鼠,随机分为6组,每组10只,分别为正常对照组;卵蛋白(OVA)哮喘组;羌活低剂量组;羌活高剂量组、SB203580组和地塞米松组.在末次激发24 h后小鼠肺组织行HE染色.分别用ELISA检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素(IL)-4、IL-5、IL-13和γ-干扰素(IFN-γ)含量以及Western blotting检测肺组织IL-4、IFN-γ、P38蛋白表达.结果 哮喘组小鼠与对照组小鼠相比较,BALF中炎症细胞计数、IL-4、IL-5、IL-13水平增高,而IFN-γ的表达明显降低(P＜0.05),肺部炎症浸润明显(P＜0.05);肺组织IL-4和磷酸化P38蛋白表达水平显著高于对照组(P＜0.05),而肺组织IFN-γ的表达明显低于对照组(P＜0.05).羌活低、高剂量组、SB203580组和地塞米松组与哮喘模型组相比较,BALF中炎症细胞计数、IL-4、IL-5、IL-13浓度以及肺组织IL-4和磷酸化P38蛋白表达水平均显著降低(P＜0.05);肺部炎症明显减轻(P＜0.05);BALF和肺组织中IFN-γ明显升高(P＜0.05).结论 羌活提取物具有明显的抗哮喘作用,其机制可能是通过抑制P38信号通路,影响Th1／Th2细胞平衡实现的.
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P38丝裂原活化蛋白激酶在紫外线诱导角质形成细胞凋亡中的作用
目的 探讨中波紫外线(UVB)诱导角质形成细胞凋亡机制.方法 使用0、20、30、40、60、70、90 mJ/cm2 UVB辐射人角质形成细胞(HaCaT),辐射后0、1、2、3、4、6、24、48 h收集细胞和上清.流式细胞仪检测细胞周期和凋亡;ELISA检测上清液中TNF-α水平;Western blot检测P38丝裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)和磷酸化P38丝裂原活化蛋白激酶(p-P38MAPK)的表达.结果 UVB(30 mJ/cm2)辐射后,HaCaT细胞分泌TNF-α逐渐增加,24 h达高峰;P38抑制剂SB203580完全抑制TNF-α的分泌,部分阻止了细胞凋亡;以不同剂量UVB辐射HacaT细胞,在30 mJ/cm2时p-P38 MAPK表达量高,且辐射后即可检测到p-P38 MAPK的表达,1 h时达高峰,以后逐渐下降,而P38MAPK表达量没有明显变化.结论 紫外线可通过激活P38 MAPK途经,促进TNF-α分泌来诱导角质形成细胞凋亡.
关键词： 角质形成细胞 中波紫外线 凋亡 p38丝裂原活化蛋白激酶 -
p38丝裂原活化蛋白激酶抑制剂SB203580对支气管哮喘小鼠气道炎症的影响
目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂SB203580对支气管哮喘(简称哮喘)小鼠气道炎症的影响.方法 48只BALB/c小鼠按随机数字表法随机分为对照组、哮喘组、地塞米松(2 mg/kg)组及SB203580(5 mg/kg)干预组各12只.末次激发24 h后,采用动物肺功能仪对各组小鼠的气道反应性进行测定;收集支气管肺泡灌洗液(BALF),离心后计数细胞总数及白细胞分类数量;酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组小鼠血浆总IgE、OVA-特异IgE水平和BALF上清液中IL-4、IL-5、IL-13和IFN-γ水平;肺组织HE和AB-PAS染色;免疫组化法和Western blot法分别检测肺组织中p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)的蛋白质表达.结果 (1)哮喘组小鼠具有典型的哮喘发作样症状,各药物干预组小鼠上述反应较轻.(2)在乙酰甲胆碱剂量分别为0.050 mg/kg、0.100 mg/kg、0.200 mg/kg激发时,地塞米松组和SB203580组的肺阻力(RL)显著低于哮喘组(P<0.05),而肺顺应性(Cdyn)显著高于哮喘组(P<0.05).(3)地塞米松组和SB203580组血浆IgE、OVA-特异IgE水平低于哮喘组(P<0.05).(4)地塞米松组和SB203580组BALF中细胞总数及嗜酸性粒细胞、淋巴细胞和中性粒细胞计数均低于哮喘组(P<0.05).(5)地塞米松组和SB203580组小鼠BALF中IL-4、IL-5和IL-13水平低于哮喘组(P<0.05),而BALF中IFN-γ的水平显著高于哮喘组,差异有统计学意义(P<0.05).(6)地塞米松组和SB203580组较哮喘组相比,气道黏膜充血水肿减轻,气道壁及管周炎症细胞浸润减少,气管上皮杯状细胞化生减少.(7)免疫组化分析,地塞米松组和SB203580组肺组织p-p38 MAPK蛋白的表达明显低于哮喘组(P<0.05),各组之间p38 MAPK蛋白的表达差异无统计学意义(P>0.05).(8)Western blot法检测,地塞米松组和SB203580组肺组织p-p38 MAPK蛋白的表达明显低于哮喘组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 SB203580通过抑制p38 MAPK信号通路活化,调节Th1/Th2平衡,从而减轻哮喘气道炎症反应.
关键词： 支气管哮喘 p38丝裂原活化蛋白激酶 细胞因子 气道炎症 小鼠 -
全身炎症反应综合征与多器官功能障碍综合征患者外周血单核细胞COX-2与p38MAPK的关系
目的 了解环氧化酶-2(COX-2)与p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)在全身炎症反应综合征(SIRS)与多器官功能障碍综合征(MODS)患者发病机制中的作用.方法 选择2004年6月～2005年6月广州中山大学属第一医院EICU、SICU与急诊观察区患者符合美国胸科医师协会/危重病医学会(ACCP/SCCM)SIRS和MODS诊断标准的患者28例,其中SIRS 13例,MODS 15例;与患者年龄、性别相区配的健康正常对照组11例.采用淋巴细胞分离液密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(PBMCs).用酶联免疫测定法(EIA)检测PBMCs的COX-2与p38MAPK含量;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测PBMCs中COX-2与p38MAPK的mRNA的表达.用方差分析和简单相关分析法进行统计学分析.结果 MODS组患者PBMCs的COX-2与p38MAPK含量及两者的mRNA表达均显著高于正常对照组和SIRS组(P均＜0.05),正常对照组与SIRS组间差异无统计学意义;死亡患者高于存活患者(P＜0.05);三组PBMCs中COX-2与p38MAPK含量呈正相关关系(r=0.663,P＜0.01).死亡患者的外周血白细胞、淋巴细胞、氧合指数与存活患者比较差异无统计学意义;血糖、血肌酐则明显高于存活患者(P＜0.05);二氧化碳总含量(TCO2)、pH明显低于存活患者(P＜0.01).结论 COX-2与p38MAPK参与了MODS的发病过程,而且可作为判断SIRS与MODS预后的参考指标之一.
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p38丝裂原活化蛋白激酶对大鼠肾脏分泌单核细胞趋化因子-1的影响
目的 动态观察单核细胞趋化因子-1(MCP-1)在单侧输尿管结扎(UUO)大鼠肾小管的表达,探讨它与p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、核转录因子-кB(NF-кB)及肾损害之间的关系. 方法 雌性SD大鼠共36只,体质量150～170 g.随机分为2组:假手术组作为对照组;手术组根据梗阻时间分3组,每组6只.皮下注射水合氯醛(4 mg/kg)麻醉,开腹后结扎右侧输尿管,缝合腹腔,即制备UUO模型.假手术组开腹后不结扎输尿管,缝合腹腔.采用免疫组织化学检测NF-кB、MCP-1,Western印迹分析法检测p38MAPK的磷酸化水平和lVICP-1蛋白水平,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测MCP-1 mRNA的表达.光镜检查肾组织的形态改变.生化方法测定血尿素氮、血肌酐. 结果 与对照组比,随着梗阻时间的延长,MCP-1蛋白表达明显上调,[对照组:0.401±0.039,UUO组8h:0.894±0.137;24 h:1.416±0.135;72 h:1.894±0.143,与对照组相比,P<0.05],MCP-1 mRNA表达明显上调,[对照组:50.08±3.210,UUO组8 h:108.25±4.325;24 h:179.34±3.237;72 h:230.12±3.026,与对照组相比,P<0.05],同时NF-кB、p38MAPK蛋白活性增高,[p38MAPK蛋白对照组:110.65±9.734,UUO组8 h:200.15±8.326;24 h:272.74±7.244;72 h:549.11±9.544,与对照组相比,P<0.05],肾小管MCP-1的表达与p38MAPK、NF-кB呈显著正相关(r=0.74、r=0.81,P<0.01). 结论 UUO大鼠.肾小管MCP-1表达增加参与了UUO大鼠.肾小管间质损害的发病机制;p38MAPK可能介导了NF-кB的表达,进而调节MCP-1的表达增多.
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复苏后大鼠转化生长因子-β1和p38丝裂原活化蛋白激酶变化及治疗
目的 探讨窒息至心脏骤停大鼠复苏后心脑TCF-β1和p38mAPK的变化及血必净对其影响.方法 采用呼气末夹闭气管窒息法建立大鼠心脏骤停模型,并心肺复苏成功后生存24 h,将50只健康Wistar大鼠随机(随机数字法)分为5组,分别为:模型组,正常埘照组,小剂量血必净组,中剂量血必净组,大剂量血必净组.复苏24 h后处死大鼠,取心、脑组织标本,电镜下观察心、脑组织的病理改变.采用酶联免疫吸附法(EUSA)榆测心、脑组织巾的TCF-β1和p38MAPK含量变化.结果 心、脑组织病理观察显示,与对照组相比其他组心脑细胞超微结构出现损伤性改变,其中模型组损伤重,大剂量血必净组损伤性改变轻微;心、脑中TGF-β1和p38MAPK含量变化,与对照组相比模型组心、脑TCV-β1和p38MAPK含量升高明显,与模型组相比血必净治疗组心、脑VCF-β1含量升高更明显和P38NAPK含量下降更明显,治疗组中,大剂量较小剂量TCF-β1含量升高更明显和p38NAPK含量下降更为明显.结论 心跳骤停复苏后大鼠心、脑组织内TCF-β1和p38MAPK含量增多,血必净可明显调节心、脑组织中的TCF-β1和p38MAPK含量,而且存在明显量-效关系,从而缓解心跳骤停大鼠复苏中缺氧及再灌注后炎性因子所带来的损伤.
关键词： 心脏骤停 转化生长因子-β1 p38丝裂原活化蛋白激酶 血必净 -
GW3965抑制p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路表达减轻百草枯致小鼠急性肺损伤
目的 研究肝X受体(liver X receptors, LXRs)激动剂GW3965抑制百草枯(paraquat, PQ)诱导的小鼠急性肺损伤的作用及可能的机制.方法 40只雄性c57小鼠随机(随机数字法)分为4组,每组10只小鼠.对照组:0.1 mL生理盐水腹腔注射,10 min后再次0.1 mL生理盐水腹腔注射;百草枯染毒组:百草枯28 mg/kg腹腔注射,10 min后0.1 mL生理盐水腹腔注射;GW3965低剂量处理组:百草枯染毒后10 min给予GW396510 mg/kg腹腔注射;GW3965高剂量处理组:百草枯染毒后10 min给予GW396550 mg/kg腹腔注射.在百草枯染毒后72 h处死小鼠,收集肺组织及血液标本;采用硫代巴比妥酸法(TBA)检测血清中丙二醛(MDA)含量;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清及肺组织中白介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α (TNF-α)含量;肺脏取出后测定小鼠肺湿/干质量比,肺脏切片后HE染色并评估肺组织病理学改变,Western blot方法检测肺组织p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinases, MAPK)、Bax和Bcl-2表达情况;TUNEL法检测肺组织细胞凋亡情况;多组间比较采用单因素方差分析(ANOVA),组间两两比较采用LSD-t法.结果 与对照组比较,百草枯染毒小鼠肺湿/干质量比明显增加(P<0.05),肺组织损伤明显,血液中MDA含量增加(P<0.05),血液及肺组织中IL-1β和TNF-α含量显著增加(P<0.05),p38MAPK表达显著上调(P<0.05),Bax/Bcl-2显著增加(P<0.05),肺组织细胞凋亡明显增加(P<0.05).GW3965处理组小鼠上述改变明显减轻(P<0.05),GW3965高剂量处理组效果更显著(P<0.05).结论 LXRs激动剂GW3965能有效减轻百草枯中毒引起的小鼠急性肺损伤,这一作用可能与LXRs激活后抑制p38MAPK信号通路有关.
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p38信号通路参与呼吸机所致肺损伤大鼠高迁移率族蛋白B1的表达
目的 研究p38信号通路在呼吸机所致肺损伤(ventilator-induced lung injury,VILI)大鼠肺组织表达高迁移率族蛋白BI(high mobility group box 1 protein,HMGB1)中的作用.方法健康sD大鼠24只随机分为3组:对照组(A组)不行机械通气,保留自主呼吸;常规通气组(B组)潮气量(Vt)为8mL/kg;大潮气量通气组(C组)Vt为40 mL/kg.机械通气4 h后处死动物,测定支气管肺泡灌洗液中总蛋白水平、白细胞计数以及肺湿干重比值(W/D)和中性粒细胞髓过氧化物酶(MPO)活性.采用Western blot方法检测肺组织HMGB1蛋白和p38激酶活性变化,采用RT-PCR方法检测HMGB1 mRNA的表达.应用单因素方差分析进行不同组别间的比较.结果 通气4 h后,与A组相比,C组总蛋白水平(1.77±0.68)g/L、白细胞计数(106.55±28.17)×10~7 L~(-1)、肺W/D比值(7.16±1.02)、MPO活性(3.94±1.21)U/g、HMGB1蛋白(0.64±0.17)和mRNA(1.17±0.45)表达以及p38激酶活性(0.51±0.12)均明显增加(P<0.05),而B组上述各项指标的变化均无统计学意义(P>0.05).结论大潮气量机械通气可引起大鼠急性肺损伤,p38参与了机械牵张诱导肺组织HMGB1的表达.
关键词： 机械通气 急性肺损伤 高迁移率族蛋白B1 p38丝裂原活化蛋白激酶 -
p38MAPK和COX-2mRNA在创伤后多器官功能障碍综合征患者外周血中的表达
目的 探讨创伤后多功能障碍综合征(multiple organ dysfunction syndrome,MODS)患者外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)与p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38MAPK)mRNA的表达以及与MODS病情变化的关系.方法 选择符合1995年中华医学会急诊分会危重病专业组制定的MODS病情分期诊断标准和1991年Knaus提出急性生理和慢性健康评分Ⅲ(APACHE Ⅲ)的患者40例,其中男22例,女18例;与患者年龄、性别相匹配的健康对照组40名.用酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测PBMCs培养上清液COX-2与p38MAPK含量;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测PBMCs中COX-2与p38MAPK的mRNA表达.并分析它们的表达与APACHEⅢ评分的相关性.结果 MODS组患者PBMCs的COX-2与p38MAPK含量及两者的mRNA表达均显著高于健康对照组(均P<0.05);MODS死亡患者PBMCs的COX-2与p38MAPK含量及两者的mRNA表达与存活患者比较,差异具有统计学意义(均P<0.05);相关分析显示,PBMCs培养上清液中COX-2与p38MAPK含量呈正相关(r=0.614 7,P<0.01);患者 PBMCs的COX-2和p38MAPK mRNA表达与APACHEⅢ评分呈正相关(r1=0.500 9,P1<0.05,r2=0.531 6,P2<0.05).结论 COX-2与p38MAPK参与了MODS的发病过程,而且可作为判断MODS预后的辅助指标.
关键词： 创伤 多器官功能障碍综合征 环氧化酶-2 p38丝裂原活化蛋白激酶 -
白介素-1β在猪多器官功能障碍综合征中对内皮祖细胞的调控
目的 探讨猪多器官功能障碍综合征(MODS)中p38MAPK介导的白介素(IL)～1β对内皮祖细胞(EPC)的数量与功能的调控,从血管内皮祖细胞分化障碍来研究创伤后MODS的发病机制.方法 将30头家猪随机分为MODS组(n=15,M组)、对照组(n=15,C组),采用失血性休克与内毒素血症的"二次打击法"建立猪MODS模型,在体内Western-blot法检测外周血单核细胞p38MAPK的磷酸化变化;ELISA法测定外周血血浆IL-1β的浓度变化;流式细胞仪检测外周血EPC数量的变化;采用x2检验比较M组与C组的MODS发生率,采用成组t检验比较M组与C组的p38MAPK的磷酸化变化、外周血血浆IL-1β的浓度变化与外周血EPC数量的变化.结果 在MODS中外周血单核细胞p38MAPK的磷酸化增强,导致其外周血IL-1β浓度升高,从而使得外周血EPC数量下降,M组MODS的发生率均明显高于C组(P<0.01);M组的外周血单核细胞p38MAPK的磷酸化与外周血血浆IL-1β的浓度明显高于C组(P<0.01);M组外周血EPC数量明显低于C组(P<0.01).结论 在猪MODS的发病机制中,外周血单核细胞内的p38MAPK的磷酸化使血浆IL-1β浓度升高,使EPC的数量下降,致使MODS的炎症反应加重.
关键词： 多器官功能障碍综合征 p38丝裂原活化蛋白激酶 IL-1β 内皮祖细胞 体内 -
P38丝裂原活化蛋白激酶和核转录因子κBP65在胸部爆炸伤致急性肺损伤中的作用
目的探讨P38丝裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)和核转录因子κBP65(NFκBP65)活化在胸部爆炸伤致急性肺损伤(ALI)中的作用.方法应用胸部爆炸伤致ALI动物实验模型,原位分子杂交技术检测P38MAPK和NFκB P65mRNA表达情况,并与致伤后ALI发病程度进行相关性统计分析.结果肺组织中P38 MAPK和NFκB P65mRNA表达情况与PaO2,P(A-a)O2、TNF-α及IL-6水平呈正相关,与急性肺损伤肺炎症反应的严重程度存在一致性.结论P38MAPK和NFκB P65活化在胸部爆炸伤致急性肺损伤(ALI)中起着重要作用,设法减弱其活化程度可能是防治ALI的有效途径.
关键词： 胸部爆炸伤 急性肺损伤 p38丝裂原活化蛋白激酶 核转录因子κBP65 -
维拉帕米对大鼠创伤失血性休克合并内毒素血症模型干预机制的初步探讨
目的观察钙通道阻滞剂维拉帕米对大鼠创伤失血性休克复合内毒素血症模型的干预作用,及其是否参与调控p38MAPK的激活.方法将18只雄性SD大鼠随机分为对照组、致伤组及维拉帕米干预组.分别于给予内毒素(1.4 mg/kg)后90 min,检测各组大鼠血浆中TNF-α及IL-10的含量,并检测各组大鼠腹腔巨噬细胞内p38MAPK磷酸化水平.另外取6只大鼠分离其腹腔巨噬细胞,体外给予生理盐水、维拉帕米及SB203580预处理30 min后,再予LPS(100 ng/ml)刺激,90 min后收集细胞上清液,检测TNF-α及IL-10的含量,同时检测各组巨噬细胞内p38MAPK磷酸化水平.结果致伤组血浆中TNF-α、IL-10的含量明显较对照组高(P＜0.01),而维拉帕米组血浆中TNF-α的含量则明显低于致伤组(P＜0.01),且IL-10的含量明显高于致伤组(P＜0.01).维拉帕米对致伤组增高了的腹腔内p38MAPK的磷酸化水平无明显影响(P＞0.05).SB203580可明显抑制腹腔在内毒素诱导下生成的TNF-α及IL-10(P＜0.01),并明显抑制p38MAPK的磷酸化(P＜0.01);而维拉帕米不仅可明显抑制腹腔在内毒素诱导下生成TNF-α(Ρ＜0.01),且使内毒素诱导的IL-10生成进一步增加(P＜0.01),但对P38MAPK的磷酸化水平无明显影响(P＞0.05).结论在大鼠创伤失血性休克复合内毒素血症动物模型中,磷酸化p38MAPK在腹腔巨噬细胞内存在较高水平的表达;维拉帕米的干预治疗对该模型的过度炎症反应有明显的抑制作用,但其作用机制并非直接通过影响p38MAPK的激活而实现.
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深刺加电针对兔膝骨关节炎软骨的影响
目的：观察深刺加电针对兔膝骨关节炎软骨组织的影响。方法新西兰兔40只随机分为正常组(A组)10只、造模组30只，后者以Hulth-Telhag法复制兔左膝骨关节炎模型，X线评价造模情况。造模成功后随机分为模型组(B组, n=10)、深刺加电针组(C组, n=10)和普通电针组(D组, n=10)，造模后第6周开始对C组和D组进行治疗，共4周。治疗结束后检测关节液pH值，透射电镜下观察软骨细胞组织结构和病理学改变，检测软骨细胞凋亡指数，Western blotting检测软骨组织中酸离子敏感通道1(ASIC1)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)的磷酸化水平和p53蛋白表达，免疫组织化学法检测软骨组织中ASIC1分布。结果关节液中pH值从高到低依次为A组=C组>D组>B组(P<0.01)；A组、C组、D组膝关节软骨组织形态较B组完整，C组凋亡率低于B组和D组(P<0.01)，与A组无显著性差异(P>0.05)；软骨组织中ASIC1和p53表达由低到高均为A组=C组
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养血清脑颗粒对血管性痴呆大鼠海马CA1区超微结构及p38丝裂原活化蛋白激酶蛋白表达的影响
目的：观察养血清脑颗粒对血管性痴呆大鼠海马CA1区超微结构及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)蛋白表达的影响。方法180只Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组、血管性痴呆模型组(模型组)和养血清脑颗粒治疗组(治疗组)，采用改良的Pulsinelli四血管阻断法制作血管性痴呆模型，分别在术后1、2、4、8周采用透射电镜观察大鼠海马CA1区超微结构变化，免疫组化法和Western blotting法检测海马CA1区p38MAPK水平。结果模型组海马CA1区神经元大量固缩，细胞核溶解，异染色质边集，线粒体肿胀。治疗组海马CA1区神经元核膜较完整，核染色质分布较均匀，胞质内线粒体及其他细胞器基本正常。与假手术组相比，模型组各时间点p38MAPK蛋白表达明显增多(P<0.01)，4周时达高峰；与模型组比较，治疗组各时间点p38MAPK蛋白表达明显减少(P<0.01)。结论养血清脑颗粒可改善血管性痴呆模型大鼠海马CA1区损伤的神经元超微结构，可能与抑制p38MAPK蛋白的表达有关。
关键词： 血管性痴呆 养血清脑颗粒 p38丝裂原活化蛋白激酶 超微结构 大鼠 -
静磁场与游泳运动对鼠膝骨关节炎软骨的作用
目的:观察静磁场、游泳运动对SD大鼠膝骨关节炎软骨的防治效果.方法:选用健康雄性SD大鼠40只,建立左后肢膝关节OA模型,并随机分为对照组(A组)、OA模型组(B组)、静磁场疗法组(C组)、游泳运动疗法组(D组)与综合治疗组(E组).治疗4周后,取股骨内侧髁软骨与软骨下骨作为标本.比较各组软骨的阿尔新蓝染色结果、软骨大体变化、Mankin's分级及IL-1β、磷酸化p38MAPK的免疫组化染色积分光密度(IOD)值.结果:软骨阿尔新蓝着色状况,A组蓝染鲜明;B组呈不均匀淡蓝色;C组不均匀但较明显蓝染;D组略不均匀较鲜亮蓝染;E组着色接近正常.软骨大体评分平均秩值A、B、C、D、E组分别是7.56、30.19、25.63、21.38、17.75(P＜0.05);Mankin评分平均秩值A、B、C、D、E组依次是14.94、103.25、82.44、60.17、41.71(P＜0.05).软骨IL-1β IOD值A、B、C、D、E组分别是5.43±1.63、65.32±36.42、49.77±16.90、28.54±7.44、16.26±3.98(P＜0.05);磷酸化p38 IOD值A、B、C、D、E组依次是0.39±0.31、26.44±5.52、17.60±2.52、9.54±1.57、5.71±1.41(P＜0.05).各组间软骨组织阿尔新蓝着色的程度与均匀性及软骨大体评分秩值、Mankin评分值及软骨IL-1β、磷酸化p38MAPK IOD值均存在着明显差别(P＜0.05).结论:静磁场疗法、游泳运动疗法及综合治疗可不同程度减轻和/或延缓骨关节炎软骨的损害.
关键词： 骨关节炎 静磁场 游泳运动 白细胞介素-1β p38丝裂原活化蛋白激酶 -
脊髓背角p38 MAPK活化在大鼠切口痛形成中的作用
目的:研究切口痛大鼠脊髓背角磷酸化p38有丝分裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)表达的变化和鞘内注射p38MAPK特异性抑制剂SB203580对切口痛大鼠疼痛的影响.方法:雄性SD大鼠随机分为假手术组(SH组)、切口痛组(IP组)、药物组和DMSO组.按Yaksh法施行鞘内置管.按Brennan法建立大鼠切15口疼痛模型.采用Hargreaves法(热痛觉过敏)测定热刺激缩足反射潜伏期(TWL).应用免疫组织化学法检测脊髓背角p-p38MAPK表达的变化.结果:与SH组相对应的时间点和术前值比较,IP组和DMSO组大鼠在术后2 h、3 h、6h、ld、2 d和3 d的TWL均明显缩短(P<0.05或P<0.01),但IP组和DMSO组各相对应的时间点比较无明显差异;与IP组和DMSO组相对应的时间点比较,药物组大鼠在术后2 h、3 h、6 h、1 d和2 d的TWL均明显延长(P<0.05或P<0.01).与SH组比较,IP组和DMSO组P-p38MAPK阳性细胞数增加(P<0.01);与IP组和DMSO组比较,药物组P-p38MAPK阳性细胞数降低(P<0.01或0.05),IP组和DMSO组间差异无统计学意义(P>0.05).IP组和DMSO组p-p38MAPK阳性细胞数在术后6h开始增加,1d达到高峰,然后逐渐下降,5d后逐渐恢复.结论:脊髓背角p38MAPK活化参与切口痛的形成与发展.
关键词： 疼痛 脊髓 p38丝裂原活化蛋白激酶 大鼠 -
P38MAPK在炎性痛大鼠背根神经节中的表达及CCR2对其调控的影响
目的:观察p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinases,MAPK)在炎性痛大鼠背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)中的表达及趋化因子受体2(chemokine receptor 2,CCR2)对其调控的影响.方法:青年雌性SD大鼠72只,150～180 g.随机分为对照组(A组,在右后足底皮下注射100 μl生理盐水)、炎性疼痛模型组(B组,在右后足底注射100μl完全弗氏佐剂CFA制备大鼠炎性痛模型)、拮抗剂组(C组,在右后足底注射100 μl CFA,同时腹腔注射CCR2拮抗剂RS102895 20 mg/kg,连续注射7天).三组分别于制模前和制模后1、3、5、7天测定制模侧后足机械刺激缩足阈值(MWT),在3、5、7天分别处死8只大鼠,取制模侧L4～5 DRG,采用免疫组化与荧光定量PCR方法测定CCR2和p-p38MAPK表达水平.结果:与A组相比,B组与C组制模侧后足MWT显著降低(P＜0.05),制模后3、5、7天CCR2和p-p38MAPK表达水平明显增高(P＜0.05).B组与C组比较,C组大鼠制模后相应时间点MWT显著增高(P＜0.05),CCR2和p-p38MAPK表达水平明显下降(P＜ 0.05).结论:p38MAPK在炎性痛大鼠DRG中表达升高;抑制CCR2活性可以降低p38MAPK在大鼠DRG的磷酸化水平,达到减轻炎性疼痛的作用.
关键词： 背根神经节 趋化因子受体2 炎性痛 p38丝裂原活化蛋白激酶
