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PR、Fasl与HSP90在子宫内膜息肉中的表达及作用
目的 研究子宫内膜息肉组织中孕激素受体(PR)、Fas配体(Fasl)及热休克蛋白90(HSP 90)的表达,并探讨其在本病发生中的作用.方法 采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)来检测正常增生期内膜和子宫内膜息肉(包括置器和未置器患者)中PR、Fasl与HSP90的转录水平.结果 子宫内膜息肉中PR表达降低(P＜0.05),Fasl与HSP90表达升高(P<0.05);在放置不含激素和抗炎药物宫内节育器的息肉患者所检出的息肉组织中,HSP90表达高于未放置节育器的患者.结论 在子宫内膜息肉中PR表达降低,Fasl和HSP90表达增高,尤其在放置宫内节育器的息肉中HSP90呈高表达,说明炎症和内分泌因素共同参与了本病发生.
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热休克蛋白90与不良妊娠结局的相关性研究
近年来，不良妊娠的发生率越来越高，对于不良妊娠的影响因素众说纷纭，包括妊娠期高血压、肥胖、过度紧张、年龄较高等，而对于其发生机制尚无定论。热休克蛋白（ heat shock protein ，HSP）是所有生物细胞在应激原刺激后，发生热休克反应时产生的一类细胞伴侣蛋白的总称。研究证实， HSP对于肿瘤细胞的分化及凋亡的调控有重要作用。本课题以不良妊娠患者为研究对象，观察比较正常妊娠组及不良妊娠组孕妇外周血及胎盘组织中HSP90的表达情况，为探讨热休克蛋白90与不良妊娠发生的关系，试图探索不良妊娠期发病机制，以便为更好的防治本病，降低不良妊娠奠定理论基础。
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门脉高压患者血浆刺激血管内皮细胞Hsp90表达的试验研究
目的:研究肝硬化门静脉高压症患者血浆对血管内皮细胞热休克蛋白(Hsp90)表达的影响,以了解Hsp90在肝硬化门脉高压形成中的作用.方法:应用免疫组织化学染色法检测Hsp90在正常人血浆和肝硬化门静脉高压症患者血浆刺激人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)中的表达情况.结果:通过组织化学染色图像定量分析显示肝硬化患者血浆处理的HUVEC表达的Hsp90平均灰度值为1.925,正常人血浆处理为1.416,经统计学分析肝硬化患者血浆处理HUVEC表达的Hspg0高于正常人血浆处理组(P＜O.05).结论:肝硬化门脉高压血浆可以刺激血管内皮细胞使Hsp90表达增加,Hsp90可能促进肝硬化门脉高压的形成.
关键词： 门脉高压症 血浆 人脐静脉血管内皮细胞 热休克蛋白90 -
Hsp90抑制TNFα诱导的细胞凋亡及线粒体细胞色素c的释放
目的应用热休克蛋白90(Hsp90)过表达系统探讨Hsp90是否抑制肿瘤坏死因子α(TNFα)诱导的细胞凋亡及线粒体细胞色素c的释放.方法采用电穿孔技术建立稳定过表达Hsp90的细胞克隆,应用激光共聚焦显微镜和流式细胞仪观察TNFα和放线菌酮(CHX)诱导的细胞凋亡.应用Western blotting方法检测细胞色素c的变化.结果相差显微镜观察Hsp90过表达细胞与对照细胞相比悬浮细胞较少(分别为18%和41%),PBS冲洗后剩余黏附细胞较多.应用共聚焦显微镜进行TUNEL测定结果显示大部分对照细胞发生凋亡,相对较少的Hsp90细胞发生凋亡.Western blotting检测Hsp90细胞中细胞色素c的表达与对照组相比明显减少.结论 Hsp90过表达抑制TNFα诱导的细胞凋亡及线粒体细胞色素c释放,提示其在凋亡信号传导通路线粒体水平发挥抑制作用.
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热休克蛋白90和凋亡抑制蛋白Livin在病理性瘢痕中的表达
背景:近年来研究表明热休克蛋白90 和凋亡抑制蛋白Livin 在细胞的凋亡过程中扮演着非常重要的角色,而两者在病理性瘢痕形成过程中的作用研究至今鲜有报道.目的:从基因和蛋白水平分别检测热休克蛋白90 和凋亡抑制蛋白Livin 在病理性瘢痕中的表达情况及两者之间的关系.方法:分别采用RT-PCR 方法和免疫组织化学方法检测热休克蛋白90 和Livin 在24 例瘢痕疙瘩、26 例增生性瘢痕、22例非病理性瘢痕和20 例正常皮肤组织中的表达水平.结果与结论:瘢痕疙瘩,增生性瘢痕中热休克蛋白90 和Livin的阳性表达水平高于非病理性瘢痕及正常皮肤组织(P < 0.05).病理性瘢痕中热休克蛋白90 和Livin表达呈正相关(rs
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拉喹莫德抑制成骨细胞中缺氧诱导因子2α的表达及其功能
背景：由于骨折会诱导骨细胞缺氧，使骨细胞中的氧张力明显下降，现已证明，其中低氧诱导因子2α是机体在低氧状态下调剂机体功能的一种重要氧依赖转录激活因子，其介导骨折发生时多种炎性因子的释放。
目的：探讨拉喹莫德对成骨细胞中缺氧诱导因子2α的表达和功能的影响。
方法：缺氧处理前分别在蛋白酶体抑制剂MG132或N-乙酰基-亮氨酰-亮氨酰-正亮氨酸存在和不存在的情况下，用10-100μmol/L的拉喹莫德处理小鼠成骨细胞MC3T3-E1(克隆14)。然后分别在体积分数1%或21%氧张力下进行1-24 h的预处理。
结果与结论：①缺氧诱导因子2α在成骨细胞缺氧中表达明显增高。而拉喹莫德可以抑制成骨细胞中缺氧诱导因子2α及其目标基因在小鼠成骨细胞(MC3T3-E1细胞)中的表达。②拉喹莫德以蛋白酶依赖、von Hippel-Lindau(VHL)蛋白不依赖的方式促进缺氧诱导因子2α的降解，可打断缺氧诱导因子2α和它的分子伴侣热休克蛋白90之间的相互作用，促进缺氧诱导因子2α和激活的蛋白酶C受体之间的相互作用。③结果显示拉喹莫德可能通过影响缺氧诱导因子2α蛋白的折叠和成熟从而促进其降解，可通过改变与伴侣蛋白热休克蛋白90和RACK1的功能性相互作用来抑制成骨细胞中的缺氧诱导因子2α。 -
热休克蛋白90在抑制细胞凋亡中的作用
目的:探讨热休克蛋白90(HSP90)是否能够抑制肿瘤坏死因子α(TNF-α)和放线菌酮(CHX)协同诱导的细胞凋亡.方法:采用电穿孔技术建立稳定过表达HSP90的细胞克隆,应用激光共聚焦显微镜和流式细胞仪观察TNF-α/CHX协同诱导的细胞凋亡.结果:在稳定过表达HSP90的小鼠成纤维细胞系NIH3T3中,HSP 90能够抑制TNF-α/CHX协同诱导的细胞凋亡;在TNF-α/CHX协同诱导的细胞凋亡中,HSP 90持续稳定存在12 h以上.结论:HSP 90能够抑制TNF-α/CHX协同诱导的细胞凋亡.
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热休克蛋白27,60和90在胃癌中表达及其临床价值
目的：：探讨HSP-27、-60和-90在胃癌中的表达及其临床意义。方法：采用免疫组织化学检测66例胃癌组织中HSP-27、-60和-90的表达情况,并结合临床病理特征、肿瘤增殖能力和患者生存期分析三种热休克蛋白表达的临床意义。结果：HSP-27、-60和-90在胃癌组织中异常高表达。 HSP-27表达与肿瘤大小(pT,P=0.026)、器官转移(pM,P=0.046)及病理分期( P=0.041)相关,而 HSP-27染色强度与淋巴腺状态明显相关( pN, P=0.042)。 HSP-60表达与患者性别相关( P=0.011),而HSP-60染色强度与患者年龄(P=0.027)和肿瘤病理组织学分级(P=0.031)相关。 HSP-90表达与本研究分析的临床病理参数无相关性；但是,HSP-90染色强度与肿瘤大小存在着显著关系(pT,P=0.020)。单因素分析表明HSP-90高表达与生存期更长显著相关(P=0.033),多因素分析证实HSP-90高表达是胃癌独立预后因素(P=0.026)。结论：HSP-27、-60和-90与某些临床病理参数有关,这些参数对于胃腺癌患者的治疗至关重要。胃腺癌患者HSP-90高表达是独立预后指标。
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原发性肾病综合征中HSP90与糖皮质激素抵抗关系的研究
目的:观察原发性肾病综合征(INS)患者外周血单个核细胞(PBMC)内热休克蛋白90(HSP90)的表达、分布及其与糖皮质激素受体(GR)之间的关系,以揭示HSP90在INS发病、糖皮质激素抵抗及治疗效应中的作用本质.方法:采用RT-PCR和激光共聚焦免疫荧光技术,分别检测PBMC中HSP90、GR的mRNA表达水平及HSP90的亚细胞分布状况.结果:发现INS患者与健康对照者PBMC中的GR表达无明显差异(P＞0.05);HSP90的表达较健康对照组明显增高,并且激素抵抗组INS患者HSP90 mRNA表达显著高于激素敏感组INS患者( P＜0.05).INS患者的HSP90/GR比值明显高于健康对照组(P＜0.05).HSP90亚细胞分布研究发现,健康对照组的HSP90主要分布在PBMC的胞浆中,核内含量极微;INS患者增加的HSP90则明显趋向细胞核内分布(P＜0.001).结论:HSP90的异常表达及亚细胞分布变化可能是导致内源性、外源性糖皮质激素抵抗的重要机制,其一方面通过影响糖皮质激素对免疫系统的自身反馈调节,参与INS发病;另一方面则可能干预患者对外源性激素的治疗反应,影响临床疗效.
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催乳素刺激Jurkat细胞热休克蛋白90的表达及地塞米松的干预作用
目的:探讨催乳素刺激下Jurkat细胞的热休克蛋白(HSP90)的表达状况以及地塞米松对这种表达的影响.方法:以四组不同浓度催乳素(25、50、100、200 ng/ml)刺激Jurkat细胞,采用RT-PCR和Western blot检测刺激前后HSP90的表达水平;另将四种不同浓度的地塞米松(10-9～10-6 mol/L)和高浓度催乳素(100 ng/ml)与Jurkat细胞共同孵育,同法检测地塞米松干预后HSP90的表达水平.结果:所有浓度催乳素刺激Jurkat细胞在mRNA和蛋白质水平表达的HSP90均显著高于空白对照组(P＜0.05),且表达水平随刺激浓度增加而升高,但当浓度高于100 ng/ml以上时升高不明显.加入不同浓度地塞米松和高浓度催乳素孵育的Jurkat细胞表达HSP90水平与对照组比较有显著下降(P＜0.05),且随地塞米松浓度升高而降低.结论:催乳素可刺激Jurkat细胞HSP90的表达,而地塞米松可抑制此效应且有剂量依赖关系.
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人脑胶质瘤中核转录因子-κB及热休克蛋白90的表达及意义
目的 探讨核转录因子-κB(NF-κB)与热休克蛋白90(HSP90 )在人脑胶质瘤中的表达及意义.方法 采用免疫组织化学法检测11例脑外伤内减压切除正常脑组织和57例不同级别脑胶质瘤组织中NF-κB和HSP90的表达强度.结果 在57例胶质瘤组织中,NF-κB及HSP90的表达阳性率分别为75.4%(43/57)和68.4%(39/57),显著高于正常对照脑组织中的表达水平(4/11和3/11,P＜0.05).胶质瘤组织恶性程度越高,NF-κB及HSP90表达越强(P＜0.05).胶质瘤组织中NF-κB与HSP90的表达水平呈正相关性(r=0.719,P＜0.001).结论 NF-κB与HSP90蛋白在脑胶质瘤的发生、发展中起重要作用.
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缺氧复氧心肌细胞中HSP90对AKT表达的调控作用
目的:研究新生大鼠缺氧复氧心肌细胞中热休克蛋白90(HSP90)的表达时AKT表达的影响,探讨HSP90在P13K/AKT信号通路中的作用.方法:建立新生大鼠心肌细胞缺氧复氧模型,通过运用HSP90阻断剂Geldanamycin(GA),分别以MTT法检测心肌细胞的活力、透射电镜观察心肌细胞超微结构改变、Western印迹法分析大鼠心肌细胞中HSP90表达变化与总AKT蛋白的相关性.结果:缺氧复氧心肌细胞中HSP90和AKT表达量均有明显升高,阻断HSP90后,AKT表达量明显下降,此时心肌细胞活力明显下降,细胞超微结构受损明显.结论:AKT对缺氧复氧引起的心肌细胞损伤有内源性保护作用,此作用的发挥与HSP90和AKT的结合密切相关,HSP90对缺氧复氧中的心肌细胞AKT表达有显著影响.
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慢病毒介导的GFP-Hsp90αE47A基冈在HepG2细胞表达及对细胞增殖性影响的研究
目的:建立真核细胞表达的GFP-Hsp90α FA7A基因重组慢病毒栽体三质粒包装细胞系统,并检测其对细胞增殖性的影响,为进一步研究HSP90分子伴侣功能奠定基础.方法:制备完整的重组慢病毒载体三质粒系统:转移质粒(Hsp90αE47A/psin-GFP),包装质粒(△NRF)及包膜蛋白质粒(VSV-G).磷酸钙法将三质粒共转染293T包装细胞,48 h后收集病毒上清.将制备好的慢病毒颗粒感染HepG2细胞,在荧光显微镜下观察报告基因GFP的表达情况,Western blot检测HepG2细胞GFP-Hsp90α表达.MTT法检测细胞增殖情况.结果:转染后的293T和感染后的HepG2细胞能观察到较强的绿色荧光,培养液上清病毒滴度约为3.0× 103ifu/μl,HepG2细胞中有GFP-Hsp90α蛋白的表达.内源性Hsp90α表达无明显上升(为对照组的1.05±0.15倍,P<0.05,t检验),有明显外源性GFP-HspgoaFA7A蛋白的表达,为对照组内源性Hspgoa的0.68±0.12倍.外源性GFP-Hsp90αE47A蛋白的表达HepG2细胞增殖活性于第4d有明显抑制.(1.051±0.03 vs 1.349± 0.05,P<0.05,t检验).结论:成功建立重组慢病毒载体的三质粒包装细胞系统,并将GFP-Hsp90αE47A基因在HepG2细胞中稳定表达,且并未引起细胞明显的热休克反应而导致的内源性Hsp90α增高:且能明显抑制细胞增殖,为后期Hsp90α分子伴侣功能进行研究奠定基础.
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热休克蛋白90对血小板源衍生因子诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的影响
目的:研究热休克蛋白90(HSP90)对血小板衍生因子(Platelet derived growth factor,PDGF)诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的影响.方法:采用胶原酶消化法原代培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞,应用脂质体细胞转染siRNA的方法抑制HSP90的表达,定量PCR和western blot的方法检测抑制效率.利用PDGF-bb诱导刺激平滑肌细胞增殖,CCK8法检测细胞增殖能力的变化,流式细胞术检测细胞生长周期的改变.结果:平滑肌细胞中转染HSP90的siRNA后,HSP90的mRNA和蛋白水平明显降低,分别为对照组的65.3％和57.6 ％(P＜0.05);PDGF-bb刺激明显促进平滑肌细胞生长,而降低HSP90水平显著影响PDGF-bb诱导的细胞增殖(P＜0.05);流式细胞术检测发现降低HSP90水平引起平滑肌细胞生长停滞,分布在细胞周期G1期的细胞比例明显增多(P＜0.05).结论:HSP90通过调控平滑肌细胞的生长周期参与调节细胞增殖过程.
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热休克蛋白90在缺氧心肌细胞中表达的初步研究
目的:观察热休克蛋白90(HSP90)在缺氧心肌细胞中的表达变化规律,并初步阐明HSP90在早期心肌缺氧损害中的作用.方法:原代培养SD大鼠乳鼠心肌细胞,随机分为正常对照组、缺氧组和加HSP90阻断剂格尔霉素(geldanamycin,GA)预处理后再缺氧组(GA+缺氧组),蛋白免疫印迹法(Western blot)及间接免疫荧光法检测缺氧1、3、6、12、24h后心肌细胞中HSP90蛋白分布表达情况,并检测细胞上清中肌酸激酶同工酶(CK-MB)及乳酸脱氢酶(LDH)的含量变化.结果:心肌细胞缺氧3h后HSP90蛋白在胞浆内表达量升高,持续到12h达到峰值.与单纯缺氧组相比,GA+缺氧组中LDH,CK-MB含量在不同时相点均有显著升高.结论:缺氧早期即可引起心肌细胞胞浆中HSP90蛋白表达增强,HSP90可能在早期心肌缺氧损害中发挥其内源性抗损伤机制.
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急性肺血栓栓塞患者血浆对内皮细胞eNOS及HSP90表达的影响
目的探讨急性肺血栓栓塞(PTE)患者血浆刺激血管内皮细胞对eNOS及HSP90表达的影响,进一步了解NO产生的机制.方法分别用正常人血浆和PTE患者血浆刺激人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC),哥尔德霉素(Geldanamycin)抑制HSP90的作用后,以硝酸还原酶法测定各组细胞培养上清NO浓度,免疫组织化学法测定脐静脉内皮细胞eNOS及HSP90表达水平.结果加入PTE患者血浆处理HUVEC组eNOS及HSP90表达水平较加入正常人血浆处理组增强;PTE患者血浆处理HUVEC组NO浓度为(16.62±3.14)μmol/L,正常人血浆处理组NO浓度为(5.16±1.98)μmol/L,经统计学分析两组差异有统计学意义(t=13.2,P＜0.05).哥尔德霉素处理组NO浓度为(9.34±1.09)μmol/L,明显低于PTE患者血浆处理组,差异有统计学意义(t=15.6,P＜0.05).结论PTE患者血浆可以刺激血管内皮细胞eNOS及HSP90表达上调;HSP90的抑制剂哥尔德霉素可以通过抑制HSP90从而下调NO的产生.
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HSP90与垂体腺瘤侵袭性关系的研究
目的 分析HSP90在垂体腺瘤中的表达,探讨HSP90与垂体腺瘤侵袭性之间的关系,研究以HSP90的表达水平作为判断垂体腺瘤侵袭性和预后指标的可能性.方法 取经手术切除且病理诊断为垂体腺瘤、具有完整内分泌资料的患者60例,根据Hardy-Wilson及Knosp分级、分期标准,结合病理活检判断其肿瘤侵袭性,将实验患者分作非侵袭性垂体腺瘤组和侵袭性垂体腺瘤组；用免疫组化方法分别检测每例肿瘤HSP90的表达水平.统计分析各组间及组内关于HSP90表达水平结果；检验两组之间差异的显著性采用X2检验；等级资料相关性的统计方法采用两两之间Spearman等级相关分析.结果 60例患者中HSP90蛋白表达的阳性率为85% (51/60),PRL腺瘤和无功能腺瘤之间的HSP90蛋白表达阳性率在统计学上无显著性差异(P＞0.05)；HSP90蛋白表达水平与垂体腺瘤侵袭性之间的关系在统计学上存在正相关关系(P＜0.05).结论 HSP90的表达水平与垂体腺瘤侵袭性有关,其表达水平有可能作为判断垂体腺瘤侵袭性和预后的指标.
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热休克蛋白90在门静脉高压症内脏高动力循环中的作用
目的:研究热休克蛋白90(heat shock protein 90,HSP 90)在门静脉高压症(portal hypertension,PHT)内脏动脉中的表达变化,探讨其在高动力循环形成中的作用及可能的机制.方法;检侧四氯化碳(CCl4)诱导的肝硬化PHT组(n=7)和对照组(n=7)大鼠的门静脉血流速度(portal vein blood flow velocity,PBV)、门静脉直径、门静脉血流量(portal vein blood flow,PBF)和门静脉压力(portal vein pressure,PP),离体肠系膜微动脉对去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)的反应性、HSP 90特异性抑制剂格尔德霉素(geldanamycin,GA)对离体肠系膜微动脉收缩反应的影响以及肠系膜动脉内HSP 90和内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)的蛋白表达变化.结果:①PHT组大鼠PBV和PBF明显低于对照组,门静脉直径在PHT组与对照组之间无统计学差异.GA对PHT组PBV及PBF无明显改善；②PHT组大鼠PP明显高于对照组,GA对PHT组PP并无明显降低作用；③PHT组大鼠肠系膜微动脉对NE的收缩反应性明显降低,50％作用浓度明显增大,GA能部分改善这种低反应性；④PHT组大鼠肠系膜动脉内HSP 90和eNOS的蛋白水平较对照组明显上调,GA明显降低PHT组肠系膜动脉HSP 90表达的同时,也降低了eNOS的表达.结论:CCl4诱导肝硬化PHT肠系膜动脉中过度生成的HSP 90可能是通过增加eNOS的表达降低肠系膜动脉对NE的反应性参与内脏高动力循环的形成.
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热休克蛋白90在人精子冻融前后的表达及其意义
目的研究热休克蛋白90(HSP90)在人精子中的定位及其在冻融前后的变化.方法应用间接免疫酶细胞化学技术定位HSSP90在人精子中的部位,联合使用计算机图像分析技术对20例正常男性的精液进行冻融前后精子HSSP0表达的定量差异研究.结果HSP90定位于人精子的体部与尾部.图像分析共识别冻融前精子436个,冻融后精子484个.冻融前精子HSSP0表达的平均灰度值和积分灰度值分别为69.29±11.16和6 925.73±3 184.84,冻融后精子HSP90表达的平均灰度值和积分灰度值分别为61.36±10.72和5 757.41±2 315.24,两者相比均有极显著差异(P＜0.01).结论冻融后精子HSSP0的表达量出现较为明显的下降,这种下降可能是精子在冻融后运动特性改变的基础.
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HIF-1α、HSP90在胰腺癌组织芯片中的表达及其临床意义
背景与目的:胰腺癌是预后差的恶性肿瘤之一,因此胰腺癌的基础研究对指导临床诊治具有重要意义.本研究旨在探讨缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)与热休克蛋白90(heat shock protein 90,HSP90)在胰腺癌中的表达及其与胰腺癌临床病理参数的相关性,并探讨其作为预后指标的意义.方法:应用高通量的组织芯片技术和免疫组织化学方法检测88例无术前放化疗史的胰腺癌手术标本和11例非肿瘤性胰腺组织中HIF-1α和HSP90蛋白的表达情况,运用Spearman秩相关分析两者的相关性,并对随访2个月～6年的53例患者进行生存分析.结果:88例胰腺癌组织中,HIF-1α和HSP90高表达率分别为76.1%(67例)、73.9%(65例).HIF-1α高表达与肿瘤大小、TNM分期和淋巴结转移相关(P
