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17-丙烯胺-17-去甲氧格尔德霉素对大鼠嗜铬细胞瘤裸鼠移植瘤的抑制作用
目的 通过观察热休克蛋白90(HSP90)抑制剂17-丙烯胺-17-去甲氧格尔德霉素(17-AAG)对大鼠嗜铬细胞瘤裸鼠移植瘤生长的影响,探讨17-AAG对大鼠嗜铬细胞瘤肿瘤生长和血管生成的抑制作用.方法 用大鼠嗜铬细胞瘤细胞PC12接种于裸鼠皮下,建立移植瘤模型,15d后将荷瘤裸鼠随机分为2组,每组12只,分别为实验组(腹腔注射17-AAG 40 mg/kg)和对照组(腹腔注射生理盐水10 mL/kg),用药3周.第4周后测量裸鼠移植瘤的体积变化以及裸鼠的生存时间.采用免疫组化方法检测肿瘤组织中HSP90、血管内皮生长因子(VEGF)的表达,采用Western blotting法检测肿瘤组织中HSP90、VEGF的表达.结果 第4周时,移植瘤体积的对照组和实验组分别为(5 070.13±630.42)mm3和(2 218.80±336.29)mm3,两组移植瘤体积存在显著性差异(P＜0.05);平均生存时间对照组和实验组分别为(26.0±5.1)、(42.7±7.5)d,用Kaplan-Meier、Log-Rank方法分析两组的生存函数的差异有统计学意义(P＜0.05).免疫组化显示HSP90在对照组中呈高表达(10/12,83.3％),在实验组中呈低表达(4/12,33.3％);VEGF在对照组中呈高表达(11/12,91.7％),在实验组中呈低表达(4/12,33.3％);实验组肿瘤组织的HSP90、VEGF表达明显低于对照组(P＜0.05).Western blotting法也显示两种蛋白在实验组上的表达明显低于对照组(P＜0.01).结论 17-AAG对大鼠嗜铬细胞瘤裸鼠移植瘤有明显抑制作用,并可降低肿瘤组织中HSP90和VEGF的表达.
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乳腺癌ER信号途径中HSP90作用之研究进展——一种乳腺癌新的靶向治疗思路的理论基础
由于传统的以他莫昔芬(tamoxifen,TAM)和芳香化酶抑制剂(arimedex)为主的内分泌治疗中存在耐药性,近出现了将热休克蛋白90(heat shock protein 90,HSP90)作为乳腺癌治疗新靶点的独特思路和手段.作为热休克蛋白家族的一员,HSP90影响在乳腺癌疾病进程和耐药机制中起重要作用的蛋白的稳定性和功能,在经典的乳腺癌雌激素信号途径中起独特作用,影响雌激素受体(estrogen receptor,ER)的量和结合激素的能力.本文综述了将HSP90作为乳腺癌治疗靶点的理论基础和实践.
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SLE患者外周血单个核细胞ER和HSP90基因的表达
目的 探讨系统性红斑狠疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)中雌激素受体(ER)和热休克蛋白90(HSP90)基因的表达情况.方法 分离58例SLE患者和28例正常人新鲜外周血单个核细胞,提取总RNA,利用半定量RT-PCR方法逆转录并扩增ER和HSP90,通过凝胶图像扫描系统对PCR产物的电泳条带进行扫描分析.结果 SLE患者组PBMC中ER和HSP90 mRNA表达明显高于正常对照组(P均＜0.05),且活动期患者的表达高于稳定期患者(P均＜0.05).结论 SLE患者中存在ER和HSP90基因的过度表达,并与疾病活动性有关.
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银屑病皮损组织中HSP60,HSP90与IL-2,IL-6的检测分析
目的 探索银屑病皮损组织中热休克蛋白60(HSP60)、热休克蛋白90(HSP90)与IL-2和IL- 6的相关性.方法 采用免疫组化法检测银屑病患者皮损组织中HSP60,HSP90,IL-2和IL- 6的表达,并进行相关性分析.结果 银屑病皮损组织中HSP60,HSP90,IL-2和IL- 6均有明显表达;HSP60与IL-2相关系数r=0.44715,P=0.1951,HSP60与IL- 6相关系数r=0.70999,P=0.0214,HSP90与IL-2相关系数r=0.52172,P=0.1219,HSP90与IL- 6相关系数r=0.72386,P=0.0175.结论 银屑病皮损组织中HSP60,HSP90与IL- 6的表达有明显的正相关性,与IL-2的表达无相关性,HSP60和HSP90可能在银屑病发病和病程演变中起一定作用.
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体外17-AAG对人RPE细胞VEGF及其受体的影响
目的:体外观察17-AAG对人RPE细胞中VEGFA,VEGFB,VEGFR1,VEGFR2基因表达的调控. 方法:体外培养人RPE细胞株加入17-AAG并作用不同浓度及时间梯度后,收集细胞,抽提RNA进行反转录.同时根据VEGFA,VEGFB,VEGFR1,VEGFR2的基因序列,设计相应的引物,进行RT-PCR,琼脂糖凝胶电泳用于分析引物的特异性,再利用ABI 7300PCR仪和SYBR Green,建立实时荧光PCR反应条件,通过比较Ct进行基因表达的相对定量分析. 结果:17-AAG可以下调VEGFA,VEGFB和VEGFR1基因的表达,而VEGFR2只有再高浓度17-AAG作用时才下调.结论:17-AAG可抑制RPE细胞VEGF及其受体基因.
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实时荧光PCR检测17-AAG对人RPE细胞Akt等基因表达的调控
目的:建立检测17-AAG对人RPE细胞不同处理条件下mRNA的SYBR Green实时PCR方法,观察17-AAG对人RPE细胞中Akt,Raf,Hsp90,Hsp70基因表达的调控.方法:体外培养人RPE细胞株.当加入处理因素17-AAG并作用不同浓度及时间梯度后,收集细胞,抽提RNA进行反转录.同时根据Akt,Raf,Hsp90,Hsp70的基因序列,设计Akt1,Raf1,Hsp90,Hsp70的引物,利用ABI 7300PCR仪和SYBR Green,建立实时荧光PCR反应条件,通过比较Ct进行基因表达的相对定量分析.结果:熔解曲线分析和琼脂糖凝胶电泳结果证明了PCR反应的特异性;相对定苗结果显示,17-AAG可以下调Akt及Raf基因的表达,上调Hsp90及Hsp70基因表达.结论:应用SYBR Green实时荧光PCR可以特异、准确地分析RPE细胞相关增殖基因表达差异,为系统研究17-AAG治疗PVR的复杂调控机制创造有力条件.
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17-AAG对人RPE细胞PDGFR和EGFR基因表达的调控
目的:通过检测17-AAG对人RPE细胞不同处理条件下mRNA的SYBR Green实时PCR方法,观察17-AAG对人RPE细胞中PDGFR和EGFR基因表达的调控.方法:体外培养人RPE细胞株.当加入17-AAG并作用0,2,5,10μmol/L及0,16,24,48h后,收集细胞,抽提RNA进行反转录.同时根据PDGFR、EGFR的基因序列,设计PDGFR、EGFR的引物,利用ABI 7300PCR仪和SYBRGreen,建立实时荧光PCR反应条件,通过比较Ct值进行基因表达的相对定量分析.结果:熔解曲线分析和琼脂糖凝胶电泳结果证明了PCR反应的特异性;相对定量结果显示,17-AAG可以下调PDGFR基因的表达(P<0.05),上调EGFR基因表达(P<0.05).结论:SYBR Green实时荧光PCR可特异、准确地分析RPE细胞相关增殖基因表达差异,为系统研究17-AAG治疗PVR的复杂调控机制创造有力条件.
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缺氧条件下 Hsp90抑制剂17-AAG对 RPE细胞整联蛋白连接激酶表达的影响
目的：研究热休克蛋白(heat shock protein 90,Hsp90)抑制剂17-AAG对缺氧诱导的视网膜色素上皮( retinal pigment epithelial,RPE)细胞整联蛋白连接激酶( integrin - linked kinase,ILK)表达的影响。
方法：利用200μmol/L氯化钴( cobalt chloride, CoCl2)建立体外RPE细胞的化学缺氧模型。不同浓度的Hsp90抑制剂17-AAG预处理RPE细胞1 h后给予12 h缺氧处理。实验分为缺氧对照组、二甲基亚砜( DMSO)对照组和17-AAG预处理组。其中17-AAG预处理组根据浓度不同又分为6组：0.01,0.10,0.50,1.00,5.00,10.00μmol/L。应用RT-PCR和Western blot 方法检测ILK表达变化情况。
结果：缺氧对照组、DMSO对照组和17-AAG预处理组ILK mRNA与内参β-actin mRNA 光密度比值分别为1.32依0.04,1.29依0.03,0.93依0.06,0.70依0.05,0.53依0.03,0.44依0.04,0.32依0.04,0.30依0.03；ILK 蛋白与内参β-actin蛋白光密度比值分别为2.16依0.04,2.13依0.04,1.65依0.04,1.13依0.05,0.74依0.03,0.41依0.06,0.35依0.04,0.35依0.03。与缺氧对照组比较,17-AAG预处理组ILK mRNA和蛋白的表达明显降低( P<0.05),呈浓度依赖性。
结论：Hsp90抑制剂17-AAG能够降低缺氧条件下RPE细胞ILK的表达。 -
热休克蛋白90与肿瘤的研究进展
热休克蛋白(Heat Shock Protein,HSP)是主要作为分子伴侣参与蛋白质的合成、折叠,维持细胞的蛋白质空间构象和保护细胞免受损伤等重要生物学功能的一种蛋白质.HSP90在维持分子伴侣结构、调控细胞周期及凋亡、协调激素信号传递、促进创面愈合方面发挥重要作用.并且HSP90在肿瘤的发生和演进中也发挥重要的作用.近年来,HSP90抑制剂针对恶性肿瘤进行相关研究,在分子靶向治疗方面取得一定的成果,但在临床应用还需进一步的研究.本文以热休克蛋白90为靶标对肿瘤的相互关系研究现状进行综述.
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热休克蛋白90、Bcl-2在卵巢上皮癌中的表达及意义
目的 探讨热休克蛋白90(Heat shock protein90,HSP90)、Bcl-2(B-cell lymphoma-2)在卵巢上皮癌组织中的表达及临床意义.方法 采用SP免疫组织化学法检测47例卵巢上皮癌组织中HSP90、Bcl-2的表达情况,以25例交界性卵巢上皮性肿瘤组织和13例良性卵巢上皮性肿瘤组织作对照,对结果 进行综合分析.结果在卵巢上皮癌组织中HSP90、Bcl-2的阳性表达比良性和交界性卵巢上皮性肿瘤组织中的表达显著增高;在卵巢上皮癌组织中HSP90、Bcl-2的阳性表达随卵巢上皮癌的FIGO临床分期升高,组织分化降低阳性表达增强,并与有无淋巴结转移密切相关;提示二者联合检测对卵巢上皮癌的发生、发展、评估预后及降低肿瘤耐药的发生有重要意义,有助于对患者治疗和预后的监测.结论 联合检测卵巢上皮癌中HSP90、Bcl-2的表达可以成为卵巢上皮癌的早期诊断,监测肿瘤耐药,指导免疫治疗和靶向治疗及判断预后可靠的实验室指标之一.
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热休克蛋白在肿瘤免疫方面的研究进展
热休克蛋白(HSP)是细胞在应激条件下产生的一类高度保守的蛋白质,已被证实是一个强有力的免疫佐剂,在肿瘤免疫中充当了多重角色,对研制临床上有实用价值的肿瘤疫苗有重要的意义.此文综述了热休克蛋白及其在肿瘤免疫中的作用机制和在临床肿瘤疫苗研发中的应用前景.
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不育男性外周血T、AR、HSP 90表达及其对睾丸生精功能的影响
目的 探讨不育男性外周血睾酮(T)、雄激素受体(AR)、热休克蛋白90(HSP 90)的表达及其对睾丸生精功能的影响.方法 选择105例患者,其中正常精子30例,严重少精子症30例,无精子症45例,抽取外周静脉血,采用化学发光法测量促卵泡激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、T浓度;采用ELISA法测量AR、HSP 90浓度,采用输精管分离钳钝性分离技术行睾丸活检.根据精液结果和睾丸穿刺有无精子以及FSH值分为A(正常精子)、B(严重少精子症)、C(无精子症,睾丸穿刺有精子,FSH 8 IU·L-1)、D(无精子症,睾丸穿刺无精子,FSH 8IU,L-1)、E(无精子症,睾丸穿刺无精子,FSH＞ 8I U·L-1)5组,比较5组间FSH、LH、T、AR、HSP 90的差异性,分析T、AR、HSP 90的变化趋势.结果 FSH的E组高于A、B、C、D4组(P＜0.05);T的A组较B、C2组高(P＜0.05),B组较E组低(P ＜0.05);AR的A组高于B、C、D、E4组(P＜0.05),B组高于C、D、E3组(P＜0.05),C、D2组较E组低(P ＜0.05);HSP90的A组较B、C2组高(P＜0.05),较D、E2组低(P＜0.05),B组较A、C、D、E4组低(P＜0.05),C组较D、E2组低(P＜0.05),D组较E组低(P＜0.05).T的A组高,B组低,B、C、D、E4组渐次升高;AR的A、B、C3组渐次降低,而C、D、E3组渐次升高,A组高,C组低;HSP90的B、C、D、E4组渐次升高,E组高,B组低.结论 睾丸体积正常的无精子症患者,随着睾丸精子生成能力的下降,外周血T、AR、HSP90呈现先下降再升高的趋势,且三种指标的变化趋势基本一致.
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热休克蛋白70、cyclin D1、p21在胃癌组织芯片表达及临床病理联系
目的：通过检测热休克蛋白70(HSP70)、cyclin D1、p21在胃癌组织、癌旁正常组织的表达及其与临床病理参数之间的关系,探讨HSP70、cyclin D1、p21在胃癌发生、发展中的作用。方法应用高通量的组织芯片技术建立组织芯片,免疫组织化学SP法检测75例无术前放化疗史的胃癌手术标本和癌旁正常胃组织中HSP70、cyclin D1、p21蛋白的表达情况,并分析蛋白表达与临床病理参数之间的相互关系,并对随访患者进行生存分析。结果 HSP70蛋白在胃癌中阳性表达率为84%,在癌旁正常组织表达率为21.33%,差异有显著性。 cyclin D1、p21蛋白在胃癌中阳性表达率为64.00%、34.67%,在癌旁正常组织表达率为5.33%、73.33%,在癌与癌旁组织的表达差异有显著性；HSP70蛋白表达与肿瘤TNM分期和淋巴结转移相关,cyclin D1、p21蛋白表达与肿瘤分化程度、TNM分期和淋巴结转移相关。 HSP 70与cyclin D1之间呈正相关( r=0.506,P=0.000)；cyclin D1与p21之间呈负相关(r=0.388,P=0.001)。 HSP70(+)组生存率(17.8%)与HSP70(-)组(66.7%)相比,差异有显著性(χ2=4.052,P=0.044)。结论在胃癌的演变中,p21的失活和cyclin D1、HSP70等的过表达,可能引起细胞异常增殖和分化失控,终导致肿瘤发生与发展。
关键词： 组织芯片 胃癌 热休克蛋白90 cycling D1 p21 -
热休克蛋白90与肿瘤的生物学特性
引言:热休克蛋白(Heat Shock Proteins,HSPs)早发现于受热刺激的果蝇体内,具有保护细胞的功能,随后的研究证实热休克蛋白是普遍存在于原核及真核生物细胞内的一种应激蛋白,在细胞受外界环境刺激下可高表达,目前的研究表明其可作为分子伴侣帮助蛋白质分子正确折叠、转运、陪伴跨膜、稳定构象并参与细胞的信号转导、激素应答及保护细胞免受损伤等作用[1-4],根据分子量的不同,HSP可分为6类:HSP110,HSP90,HSP70,HSP60及小分子HSP.HSP90是HSPs家族中重要的一员,近来发现其在多种实体肿瘤中高表达[5],HSP90的“客户蛋白”在肿瘤中突变或高表达,如AKT,C-Met,HER2,CDK4,EGFR,AR等[6],这些“客户蛋白”在肿瘤细胞增殖、抗凋亡、迁徙及侵袭相关通路中起到了关键性的重用,这些证据表明HSP90与肿瘤的这些生物学特性密切相关,本文就HSP90参与的肿瘤生物学特性进行综述.
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组蛋白去乙酰化酶抑制剂LBH589体外诱导人多发性骨髓瘤细胞株U266凋亡及其机制
目的 研究新一代组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂LBH589单药或联合中药禹州漏芦含药血清对人多发性骨髓瘤(MM)细胞株U266诱导凋亡作用及其机制.方法 利用免疫印迹技术(Western blot)分析不同浓度LBH589作用HDAC6特异底物α-微管蛋白乙酰化水平;采用免疫沉淀(IP)法检测不同浓度LBH589作用后热休克蛋白90(HSP90)与其客户蛋白的亲和力.结果 Westernblot分析显示不同浓度LBH589(0、20、50 nmol/L)单药及50 nmol/L与禹州漏芦含药血清(1g/ml)联合均能够抑制U266细胞增殖,随着药物浓度的增加和作用时间的延长,α-微管蛋白乙酰化水平、HSP90乙酰化的程度逐渐上调,变化呈剂量依赖性(P＜0.05),且LBH589与禹州漏芦含药血清联合组抑制作用较单药组明显(均P＜0.05).结论 LBH589能够抑制MM细胞增殖,阻滞细胞周期,诱导人MM细胞株U266凋亡.
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热休克蛋白90调节大鼠脑缺血/再灌注后海马CA1区c-Jun的稳定性
目的 观察热休克蛋白90调节大鼠脑缺血/再灌注损伤后海马CA1区c-Jun的稳定性.方法 免疫印迹法观察不同处理组c-Jun蛋白的表达变化,免疫沉淀法检测Hsp90与c-Jun的关系以及c-Jun泛素化水平的变化,焦油紫染色研究海马CA1区神经元的丢失.结果 1.在脑缺血再灌注后c-Jun与Hsp90形式免疫复合物.2.给予GA后c-Jun表达与I/R6h组比较有显著差异(P<0.05).结论 GA通过抑制hsp90的分子伴侣活性,使其客户蛋白c-Jun稳定性降低发生经由泛素-蛋白酶体系统降解,从而产生减少海马神经元迟发型死亡的作用.
