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细丝蛋白A和热休克蛋白90在乳腺癌中的表达及其临床意义
目的 探讨细丝蛋白A(FLNa)和热休克蛋白90(HSP90)在乳腺癌组织中的表达及其与乳腺癌临床生物学行为的关系.方法 应用免疫组织化学法检测69例乳腺癌组织和癌旁组织中FLNa和HSP90的表达水平.结果 FLNa在乳腺癌组织中表达率为68.12％,在癌旁组织中表达率为10.14％,两者差异有统计学意义(P＜0.01),FLNa表达水平与乳腺癌组织学分级、TNM分期、淋巴结转移明显相关(P＜0.05);HSP90在乳腺癌组织中表达率为44.93％,在癌旁组织中表达率为8.70％,两者差异有统计学意义(P＜0.01),HSP90表达水平与乳腺癌肿瘤大小、组织学分化程度、TNM分期、淋巴结转移等明显相关(P＜0.05).结论 同时检测FLNa和HSP90有助于评估乳腺癌的恶性程度、判断其转移潜能.
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结肠癌转移相关基因1和热休克蛋白90在胃癌组织中的表达及其临床意义
目的 观察胃癌组织中结肠癌转移相关基因1(MACC1)和热休克蛋白90(HSP90)的表达,探讨两者与胃癌临床病理学指标之间的关系.方法 应用免疫组织化学法检测56例胃癌患者手术切除的癌组织和癌旁组织中MACC1和HSP90表达水平.结果 MACC1在胃癌组织中表达率为69.64％(39/56),在癌旁组织中的表达率为7.14％(4/56),两者差异有统计学意义(P＜0.01)；HSP90在胃癌组织中表达率为64.29％(36/56),在癌旁组织中的表达率为5.36％(3/56),两者差异有统计学意义(P＜0.01).MACC1表达水平与胃癌浆膜浸润、肿瘤大小、TNM分期、淋巴结转移有关(P＜0.05),HSP90表达水平与胃癌浆膜浸润、TNM分期、淋巴结转移有关(P＜0.05).结论 MACC1和HSP90有可能成为判断胃癌生物学行为的参考指标.
关键词： 结肠癌转移相关基因1 热休克蛋白90 胃癌 免疫组织化学 -
新生霉素抑制K562细胞增殖与阻断Hsp90伴侣功能的关系
目的 研究新生霉素(novobiocin,NB)对K562细胞的作用,并探讨该作用是否与热休克蛋白90(Heat shock protein 90,Hsp90)分子伴侣的功能有关.方法 用蛋白免疫印迹法检测Bcr-Abl的含量,采用免疫共沉淀的方法 研究Hsp90分子伴侣的功能.先将Bcr-Abl与其分子伴侣共沉淀下来,然后用免疫印迹法检测沉淀物中与Bcr-Abl结合的Hsp90和Hsp70含量变化.结果 NB能降低K562细胞中Bcr-Abl的蛋白水平,使Bcr-Abl与Hsp90和Hsp70的结合减少.结论 本研究首次证明干扰Hsp90伴侣功能,减少Bcr-Abl与Hsp90和辅伴侣的结合与NB抑制慢性粒细胞白血病(chronic myelog enous Leukemia,CML)相关.
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热休克蛋白70、90与卵巢上皮癌发生发展的相关性
目的 探讨热休克蛋白70(heat shock protein70,HSP70)、热休克蛋白90 (HSP90)与卵巢上皮癌的发生、发展中的相关性.方法 采用免疫组织化学法检测HSP70、HSP90在47例卵巢癌组织、18例交界性卵巢上皮性肿瘤组织中的表达情况,以6例正常卵巢组织、11例良性卵巢上皮性肿瘤组织作对照,分析两者与卵巢上皮癌的发生、发展中的相关性.结果 HSP70在交界性卵巢上皮性肿瘤组织中呈中度表达,在卵巢癌组织中呈高表达,与肿瘤的组织分化、临床分期及有无淋巴结转移密切相关;HSP90在卵巢癌组织中呈高表达,与肿瘤的组织分化、临床分期和年龄密切相关;两者表达呈正相关.结论 HSP70、HSP90联合检测对监测卵巢癌的发生、发展、治疗和评价预后有积极意义.
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热休克蛋白90抑制剂对视网膜色素上皮细胞增生的抑制作用
目的:探讨热休克蛋白90(heat shock protein 90 ,Hsp90)抑制剂对培养的视网膜色素上皮(Retinal pigment epithelial,RPE)细胞端粒酶活性以及RPE细胞增生的影响.方法:用分子原位杂交方法分别检测对照组和Hsp90抑制剂组RPE细胞端粒酶活性;末端缺口标记(terminal UTP nick-end labeling,TUNEL)法分别检测上述2组细胞中凋亡细胞的比率 ;在上述2组细胞中分别用甲基偶氮唑蓝(metheltetrazolium,MTT)法检测细胞增生状况 .结果:与RPE细胞对照组相比,加入Hsp90抑制剂组RPE细胞端粒酶活性显著降低,凋亡细胞的比率明显增高,RPE细胞生长抑制率升高.结论:Hsp90抑制剂可抑制RPE细胞中端粒酶的活性,从而抑制RPE细胞的增生并引起RPE细胞的凋亡.
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肾脏移植后慢性移植物肾病相关基因C-H-ras、TGF-β1、 HSP70和HSP90的表达
目的 探讨肾脏移植后慢性移植物肾病(CAN)相关基因C-H-ras、TGF-β1、HSP70及HSP90的表达及其意义. 方法 实验分为3组:正常对照组10例,为正常肾脏标本;术中穿刺组10例,为肾脏移植术中复流40～60 min后的移植肾穿刺标本;CAN组8例,为术后1～7年CAN患者肾组织穿刺标本.采用免疫组织化学及原位杂交法对每例标本行C-H-ras、TGF-β1、HSP70及HSP90蛋白和mRNA表达水平检测.结果 术中穿刺组HSP70表达水平高,CAN组C-H-ras、TGF-β1及HSP90表达水平高.结论 C-H-ras和TGF-β1 两种基因的共同高表达与CAN的发生发展关系密切.调控相关基因的表达可能有助于延缓和治疗CAN.
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热休克蛋白90在系统性红斑狼疮外周血单个核细胞中的表达
目的探讨热休克蛋白90(HSP90)在系统性红斑狼疮(SLE)发病中的作用.方法使用免疫组化SP法和细胞原位杂交技术检测45例SLE患者外周血单个核细胞(PBMC)中HSP90蛋白、HSP90 Mrna的表达情况,另取15例健康血样进行正常对照.结果45例SLE患者PBMC中HSP90蛋白阳性表达17例(37.78%),15例正常对照组中未见明显阳性细胞.半定量分析:SLE活动组PBMC中HSP90蛋白表达的平均吸光度(A)值为(0.412±0.230),显著高于正常对照组(0.117±0.033)和SLE非活动组(0.187±0.019)(均P<0.01);SLE非活动组也显著高于正常对照组(P<0.05).45例SLE患者中HSP90 Mrna阳性表达20例(44.44%),15例正常对照组中未见阳性细胞.半定量分析:SLE活动组PBMC中HSP90 Mrna表达的平均A值为(0.350±0.225),显著高于正常对照组(0.114±0.009,P<0.01)和SLE非活动组(0.221±0.040,P<0.05);SLE非活动组与正常对照组比较也显著升高(P<0.05).SLE中抗心磷脂抗体阳性患者HSP90水平明显高于阴性患者.结论SLE患者中存在HSP90的过度表达,且在抗心磷脂抗体阳性的患者中尤其明显,并与疾病的活动性相关.提示HSP90可能在SLE的发病机制中起着重要作用.
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HSP90对低氧诱导因子的调节作用
低氧诱导因子(hypoxia-inducible factor 1,HIF-1)是一种调节细胞和机体氧稳态的转录因子.在低氧时.HIF-1蛋白得以稳定,并活化一系列基因如促红细胞生成素、血管内皮生长因子、糖酵解酶等来增强细胞供能供氧能力,促使细胞在低氧环境下存活或增殖.在这一过程中,热休克蛋白90(heat shock protein 90,HSP90)对HIF-1起着重要的调节作用,它能与活化蛋白激酶C受体竞争结合HIF-1α,使其免于非氧依赖方式的降解从而维持其稳定,并影响低氧时HIF-1α的核转位、与HIF-1α的异二聚化及转录活性等.此外,HIF-1也能通过增强热休克因子的转录水平来上调热休克蛋白家族,进而加强自身的稳定.
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热休克蛋白90在心血管系统中的作用
热休克蛋白90作为一种应激性蛋白和伴侣蛋白,参与体内多种信号蛋白的成熟、折叠、活化、稳定及定位.热休克蛋白90在心血管疾病中的作用涉及eNOS和MAPK家族.热休克蛋白90对eNOS的作用主要通过与eNOS结合影响NO的合成,并调节NO与O2-之间的平衡;通过调节NO的产生而影响血小板的聚集;此外,热休克蛋白90还对NO的下游蛋白sGC有直接作用.热休克蛋白90和MAPK之间存在相互调节机制.
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产前缺氧程序控制6周龄兔颈动脉内皮依赖性舒张功能及其相关分子机制
目的 研究产前缺氧对6周龄新西兰兔颈动脉内皮依赖性舒张功能的影响及相关分子机制.方法 同期怀孕的新西兰母兔随机分为常氧对照组(n=5)和缺氧组(12％ O2,n=5),于妊娠第10天开始相应的干预,至妊娠第29天结束,自然分娩.每窝随机留1只雄性新生兔饲养,共得10只雄性新生兔,母乳喂养至6周.检测6周龄兔离体颈动脉内皮依赖性舒张功能;利用同位素方法测定内皮型一氧化氮合酶活性;利用Western blot、免疫组织化学法检测颈动脉内皮型一氧化氮合酶、热休克蛋白90表达.结果 产前缺氧损伤6周龄兔颈动脉内皮依赖性舒张功能,降低内皮型一氧化氮合酶活性,下调热休克蛋白90表达(P＜O.05).结论 产前缺氧通过下调6周龄兔颈动脉热休克蛋白90表达,降低内皮型一氧化氮合酶活性,从而损伤颈动脉内皮依赖性舒张功能.
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血清-葡萄糖剥夺抑制热休克蛋白90致心肌细胞损伤
目的 探讨热休克蛋白90(HSP90)表达下调是否参与血清-葡萄糖剥夺(SGD)引起的心肌细胞损伤.方法 用血清-葡萄糖剥夺处理H9c2心肌细胞,建立缺血性心肌细胞损伤的体外模型;在血清-葡萄糖剥夺处理前,应用HSP90选择性抑制剂17-AAG预处理心肌细胞60 min;CCK-8比色法检测细胞存活率;Fluo-3AM染色结合荧光显微镜照相术检测细胞内游离钙水平;Western blot检测HSP90和葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的表达.结果 血清-葡萄糖剥夺处理24h可明显抑制H9c2心肌细胞内HSP90的表达,诱导细胞内钙超载及上调内质网应激蛋白GRP78的表达.选择性HSP90抑制剂17-AAG预处理不仅可以加重血清-葡萄糖剥夺引起的心肌细胞存活率降低,而且进一步加重血清-葡萄糖剥夺引起的H9c2心肌细胞内钙超载及内质网应激蛋白GRP78的表达上调.结论 抑制HSP90可能是血清-葡萄糖剥夺损伤心肌细胞的重要机制之一.
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热休克蛋白90对氧化应激激活的大鼠血管平滑肌细胞细胞外信号调节激酶的作用
目的 探讨热休克蛋白90对氧化应激激活的细胞外信号调节激酶的作用.方法 取SD雄性大鼠胸主动脉做原代平滑肌细胞培养.用1 μmol/L可溶性鸟苷酰环化酶抑制剂6-Anilinoquinoline-5,8-quinolinedione (LY83583)处理4～12代大鼠血管平滑肌细胞不同时间,蛋白免疫印迹检测细胞内热休克蛋白90、磷酸化和未磷酸化细胞外信号调节激酶1/2.用格尔德霉素(热休克蛋白90的特异性阻断剂)预处理细胞30 min,再用LY83583处理120 min,免疫共沉淀和蛋白免疫印迹检测热休克蛋白90与细胞外信号调节激酶及磷酸化的细胞外信号调节激酶的结合,免疫荧光检测细胞核内磷酸化的细胞外信号调节激酶.结果 LY83583处理120 min时细胞内热休克蛋白90表达达高峰,较0 min时增加9倍,与细胞外信号调节激酶1/2的第二个活化高峰一致.LY83583处理血管平滑肌细胞120 min后,热休克蛋白90与磷酸化的细胞外信号调节激酶1/2结合较对照组升高了5.5倍(P＜0.01),磷酸化的细胞外信号调节激酶1/2的量增加了6.1倍(P＜0.01),而细胞核内的磷酸化的细胞外信号调节激酶1/2也明显增加;5 μmol/L 格尔德霉素预处理后,LY83583的这些效应则被阻断.结论 氧化应激增加大鼠血管平滑肌细胞内热休克蛋白90,并增加其与细胞外信号调节激酶1/2及磷酸化的细胞外信号调节激酶1/2的结合,促进磷酸化的细胞外信号调节激酶1/2核转位.这可能是氧化应激激活大鼠中膜血管平滑肌细胞内细胞外信号调节激酶1/2信号通路活性的重要机制之一,为抗氧化应激引起的血管中膜平滑肌细胞增殖提供新的分子靶点.
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肝硬化门静脉高压患者血浆HSP90在NO合成过程中的作用
目的 研究肝硬化门静脉高压患者血浆热休克蛋白90(HSP90)在一氧化氮(NO)合成中的作用.方法 通过利用HSP90的抑制剂格尔德霉素(Geldanamycin,GA)对HSP90的抑制作用,分别以硝酸还原酶法和放射免疫法,测定GA存在条件下肝硬化门静脉高压患者组、未用GA的肝硬化门静脉高压患者组和正常对照组的血浆处理人脐静脉内皮细胞(HUVEC)培养液上清中NO浓度和内皮细胞中cGMP浓度.结果 用肝硬化门静脉高压患者血浆处理HUVEC,产生的NO和cGMP显著高于正常对照组(P＜0.01).而存在GA的情况下,产生的NO较未用GA患者组显著减少(P＜0.01),cGMP也显著减少(P＜0.01). 结论 肝硬化门静脉高压患者血浆HSP90具有显著促进NO合成的作用.
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重症肌无力患儿外周血单个核细胞中热休克蛋白90的表达
目的 重症肌无力(myasthenia gravis,MG)是一种自身免疫性疾病,发病机制自今仍未完全清楚.在其他自身免疫性疾病研究中发现热休克蛋白90(heat shock protein 90,HSP90)表达有异常,该研究探讨MG儿童外周血单个核细胞(PBMC)中HSP90亚型mRNA表达水平和血清皮质醇的水平,以了解机体的应激状态.方法 对新发MG患儿36例及健康儿童19例(作为对照组)留取新鲜血液,取其上清液用化学发光法测定血清皮质醇水平;从其血细胞中分离出PBMC,采用RT-PCR方法检测HSP90a和HSP90β亚型mRNA.结果 MG患儿HSP90a(0.7329±0.2120)、HSP90β(0.7193±0.2869)mBNA表达水平比对照组(分别为0.5574±0.2084,0.4892 ±0.2104)明显升高(P<0.01);MG患儿血清皮质醇(285.04±146.39 nmol/L)水平比对照组(196.25±64.52 nmol/L)升高(P<0.05).结论 HSP90a和HSP90β mRNA表达水平升高可能与MG疾病本身有关;而血清皮质醇水平升高表明机体处于高应激状态或可能与患儿糖皮质激素受体异常有关.
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热休克蛋白90在胃癌患者外周血中的表达及其临床意义
本研究通过对比胃癌者和健康志愿者在血清热休克蛋白90(HSP90)含量方面的差异、评价血清HSP90胃癌诊断价值、分析胃癌患者血清HSP90表达与胃癌临床病理特征关系,以探讨HSP90对胃癌患者的诊断价值.结果发现胃癌组血清HSP90显著高于健康志愿者,工作特征曲线下面积0.754,约登指数大值0.429,灵敏度80.00％、特异性62.86％,而血清HSP90与胃癌患者性别、年龄、肿瘤直径、临床分期、浸润深度、组织分化、淋巴结转移等均无显著相关,由此可见,血清HSP90对于胃癌诊断有一定参考价值,但与肿瘤分期、转移度等无相关.
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热休克蛋白90在胃癌研究中的进展
胃癌(GC)是我国常见的消化道肿瘤.热休克蛋白90(HSP90)被称为分子伴侣,其在合成多肽、控制蛋白质数量、蛋白折叠、活性和降解过程中发挥重要作用.HSP90在胃癌组织中高表达,并通过调节癌细胞生长、粘附、侵袭、转移、血管生成和细胞凋亡等,在胃癌发展过程中起重要作用.近年来HSP90抑制剂成为重要的胃癌分子治疗靶点,但在抗肿瘤方面和临床应用上有待深入研究.本文就HSP90在胃癌发生发展中的作用机制与表达意义,及HSP90抑制剂在胃癌中的研究作一综述.
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急性胰腺炎患者血清HSP70、HSP90水平与应激性溃疡的相关性
目的 探究急性胰腺炎患者血清热休克蛋白70(HSP70)、热休克蛋白90(HSP90)水平与应激性溃疡的相关性.方法 将急性胰腺炎患者按照是否发生应激性溃疡分为阳性组84例(发生)与阴性组51例(未发生),应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清炎症因子及HSP70、HSP90水平.结果 阳性组血清C-反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6),白介素-8(IL-8)、HSP70、HSP90水平显著高于阴性组(P＜0.05);HSP70与HSP90间呈显著正相关(P＜0.05);患者血清HSP70、HSP90水平与应激性溃疡发生分别呈显著正相关;HSP70预测价值较HSP90高,HSP70界值为6.35 ng/mL,此时灵敏度为92.90％、特异度为86.30％、约登指数为0.792,HSP90界值为0.07 ng/mL,灵敏度为91.70％、特异度为76.50％、约登指数为0.682;年龄、CRP、TNF-α、IL-6、IL-8、HSP70、HSP90是影响应激性溃疡发生的危险因素(P＜0.05).结论 急性胰腺炎患者血清HSP70、HSP90水平与应激性溃疡密切联系,呈显著正相关,其中HSP70预测应激性溃疡价值更高.
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热休克蛋白在肿瘤免疫方面的研究进展
热休克蛋白(HSP)是细胞在应激条件下产生的一类高度保守的蛋白质,已被证实是一个强有力的免疫佐剂,在肿瘤免疫中充当了多重角色,对研制临床上有实用价值的肿瘤疫苗有重要的意义.此文综述了热休克蛋白及其在肿瘤免疫中的作用机制和在临床肿瘤疫苗研发中的应用前景.
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热疗中热休克蛋白90对26S蛋白酶体的调控机制
目的 探讨热疗中热休克蛋白90(HSP90)对26S蛋白酶体的调控机制.方法建立42℃热疗的HepG2肝癌细胞系模型,评价不同热疗持续时间(0、3、6、12、24 h)对细胞内活性氧簇(ROS)和细胞增殖的影响;并对热疗导致Hsp90α和26S蛋白酶体的影响进行分析.结果热疗后细胞内ROS的含量增加(F=28.958,P<0.001),且热疗对细胞的增殖抑制程度随着时间的延长显著增强(F=621.704,P<0.001);热疗导致胞内Hsp90α表达量增加(F=27.403,P=0.035),26S蛋白酶体表达量明显降低(F=164.174,P<0.001),活性也下降(F=133.043,P<0.001);干扰HSP90α后,26S蛋白酶体也减少(F=180.231,P<0.001).结论随着热疗时间延长,细胞内ROS含量增加,热应激和ROS共同导致蛋白持续变性而消耗HSP90,使没有足够的HSP90对26S蛋白酶体组装和稳定导而导致变性蛋白蓄积发生未折叠蛋白反应使细胞死亡.
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Hsp90抑制剂槚如酸对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、侵袭、迁移的影响
目的：探讨热休克蛋白90(Hsp90)抑制剂槚如酸对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、侵袭、迁移的影响。方法采用体外malachite green-molybdate显色反应和ATP-琼脂糖凝胶结合实验检测槚如酸对Hsp90抑制活性；MTT法检测药物对MDA-MB-231增殖抑制效应；Transwell小室法检测药物对细胞侵袭和迁移影响；免疫印迹法检测药物对相关蛋白基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、基质金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-1）、Hsp90、热休克蛋白70（Hsp70）表达的影响。结果槚如酸为特异性的Hsp90抑制剂，其抑制IC50值为82.5μmol/L。MTT结果显示，槚如酸具有明显抑制细胞增殖的作用，且呈现浓度依赖关系，其IC50值为29.3μmol/L。不同浓度的槚如酸（12.5，25.0，50.0μmol/L）处理36 h后，与对照组相比，药物对细胞侵袭抑制率分别为：23.6%、56.6%、67.0%，P<0.05。槚如酸（12.5，25.0，50.0μmol/L）处理24 h后，与对照组相比，药物对细胞迁移抑制率分别为：30.0%、45.5%、77.5%，P<0.05。免疫印迹法结果显示，槚如酸随着浓度的增加，诱导MMP-9降解越明显，而对Hsp90和Hsp70蛋白表达均没有影响。结论槚如酸能明显抑制乳腺癌细胞增殖、侵袭、迁移能力，其机制可能是通过抑制Hsp90 ATPase活性以及导致下游的顾客蛋白的MMP-9表达下调有关。
