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HSP 90在原发性肾病综合征发生和治疗中的意义
[目的] 热休克蛋白90(HSP90)是糖皮质激素受体(GR)的伴侣蛋白,本研究探讨HSP90在原发性肾病综合征(INS)发生和糖皮质激素(GC)在治疗中的作用本质.[方法] 以INS患者和GC敏感、抵抗的细胞株为研究对象,分析其HSP90、GR表达水平及HSP90的亚细胞分布;并采用HSP90特异性阻断剂研究HSP90对GC反应性的影响.[结果] 与对照组比较,INS患者HSP90 mRNA表达水平明显增高;而且INS患者中GC抵抗组HSP90 mRNA表达显著高于GC敏感组(P＜0.05).深入研究发现对照组的HSP90主要分布在细胞浆中,核内仅有微量分布;INS患者的HSP90表达有所增加,并且GC抵抗组与敏感组比较,HSP90明显趋向细胞核内分布(P＜0.001).用HSP90特异性阻断剂后发现激素敏感细胞株的GC反应性也显著下降(P＜0.01).[结论] 研究表明HSP90的异常表达及亚细胞分布变化可能是导致GC抵抗的重要机制,其一方面可能影响内源性GC对神经-内分泌-免疫网络的功能调节,进而影响机体免疫内环境的稳定,从而参与INS等免疫损伤性疾病的发病;另一方面则可能干预患者对外源性GC的治疗反应,影响临床疗效.
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热休克蛋白90在大鼠糖尿病肾病中的作用及机制
目的 研究热休克蛋白90(Hsp90)在糖尿病肾病肾脏中的表达变化,探讨其在糖尿病肾病中的作用及可能的机制.方法 应用链脲佐菌素腹腔注射建立糖尿病大鼠模型,通过尿蛋白水平及血糖检测将实验动物分为正常对照(CTR)组、糖尿病(DM)组、糖尿病肾病(DN)组.PAS染色评价各组肾组织的病理变化,免疫荧光检测各组肾小球中内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、小凹蛋白(Caveolin-1)、Hsp90α和Hsp90β表达,Western bolt法和RT-PCR法分别检测各组肾小球中eNOS、Caveolin-1、Hsp90α和Hsp90β的蛋白及mRNA表达水平,免疫共沉淀检测各组肾小球中eNOS与Caveolin-1、Hsp90α与eNOS、Hsp90β与eNOS结合水平,Western bolt法检测各组eNOS Ser1177磷酸化蛋白水平表达,eNOS分类检测试剂盒测定eNOS活性.结果 与CTR组和DM组相比,DN组大鼠肾小球普遍肥大,系膜基质增加明显;各组肾小球内的eNOS、Cave-olin-1、Hsp90α和Hsp90β的免疫荧光强度无明显差异.各组肾小球内eNOS、Caveolin-1、Hsp90α和Hsp90β的mRNA表达无明显变化.各组肾小球内eNOS、Caveolin-1、Hsp90α和Hsp90β的蛋白表达无明显差异.与CTR组和DM组相比,DN组Hsp90α与eNOS的相互作用明显减弱,eNOS与Caveolin-1的相互作用明显增强,eNOS Ser1177的磷酸化蛋白水平明显下降,eNOS的活性明显降低.各组中Hsp90β与eNOS的相互作用无明显变化.结论 在早期糖尿病肾病中,Hsp90α通过与eNOS相互作用减少,使eNOS与Caveolin-1解离障碍,降低eNOS Ser1177磷酸化蛋白水平,降低内皮细胞eNOS酶活性.
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冠心病患者血清热休克蛋白90水平变化及意义
目的:探讨冠心病患者外用血清热休克蛋白90(HSP90)的水平,比较不同冠心病类型及不同冠脉病变程度血清HSP90的水平差异.方法:选择冠脉造影确诊并分层的冠心病患者65例[稳定性心绞痛23例,急性冠脉综合征(ACS)42例,包括不稳定性心绞痛27例,急性心肌梗死15例];其中冠脉1支病变组20例,冠脉2支病变组23例,冠脉多支病变组22例;以正常人20例作为对照组.采用酶联免疫吸附分析(ELISA)方法检测血清HSP90水平.结果:Acs组血清HsP90水平较正常对照组与稳定性心绞痛组显著增高(P＜0.05),冠脉造影2支及多支病变组血清HsP90水平较1支病变组显著增高(P＜0.05).结论:血清HSP90水平在各种冠心病类型间差异存在显著性且与冠脉病变程度有关.
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热休克蛋白90抑制剂格尔德霉素对人肝癌BEL7404细胞株凋亡作用的研究
目的:研究热休克蛋白90 (heat shock protein 90,HSP90)抑制剂格尔德霉素(geldanamycin,GA)对人肝癌细胞株BEL7404的凋亡作用,并探讨其用于肝癌治疗的可行性.方法:体外培养BEL7404细胞株,以GA作用处理;噻唑兰比色(MTT)法检测GA对BEL7404细胞株的增殖抑制作用;吖啶橙荧光染色法及Annexin V-EGFP/PI双染法、透射电镜等方法研究GA对BEL7404细胞株的凋亡作用;流式细胞仪检测BEL7404细胞株的细胞周期变化.结果:GA对BEL7404细胞株具有增殖抑制作用,呈时间剂量依赖关系;GA各剂量组作用24 h凋亡率均明显高于阴性对照组(6.31±0.82)%;流式细胞仪检测各剂量组GA均可使BEL7404细胞株细胞周期阻滞于G0/G1期.结论:抑制HSP90的功能可引起肝癌细胞增殖抑制和凋亡,HSP90有可能成为肝癌治疗的新靶点.
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热休克蛋白90与病理性瘢痕形成的关系研究进展
病理性瘢痕是创伤后组织异常修复,由成纤维细胞异常增殖导致大量胞外基质沉积而形成,因其复发率高而成为治疗难题.热休克蛋白(HSP)是细胞中一类含量丰富的分子伴侣,其中HSP90在调节细胞生长、增殖、凋亡等过程中具有重要作用.近来大量研究发现HSP90与纤维化病变及病理性瘢痕关系密切,HSP90可作为这类疾病的一个治疗靶点.该文旨在阐述HSP90对病理性瘢痕形成的影响.
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eNOS与HSP90在肺动脉高压内皮表达的研究
目的 探讨内皮一氧化氮合成酶(Endothelial nitric oxide synthase,eNOS)与热休克蛋白90(Heat shock protein 90,HSP90)在肺动脉高压(PH)发病机制中的关系与作用. 方法 以持续性肺动脉高压的胎羊模型(PH组)为研究对象,以正常胎羊为对照(NC组),利用免疫沉淀和Western印迹等技术,检测各组胎羊肺动脉内皮细胞eNOS和HSP90的表达量及eNOS和HSP90两者的结合情况. 结果 PH组内皮eNOS的表达水平、eNOS和HSP90结合量与NC组相比均呈显著性降低(P＜0.05). 结论 PH形成时内皮和eNOS功能受损,表现为eNOS的表达或eNOS与HSP90结合量的减少,导致NO生成减少而氧自由基增加.
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Kongensin A抑制坏死性凋亡途径在慢性肾脏病中作用的研究进展
坏死性凋亡(Necroptosis)在炎症性、免疫性和神经退行性等疾病的发病机制中起着重要作用,参与了慢性肾脏病(CKD)的发生发展,但其明确的分子机制还没有被完全阐明.热休克蛋白90(HSP90)作为一种重要的分子伴侣,底物蛋白种类繁多,广泛参与诸多生命活动,在维持细胞内蛋白质稳态方面起到关键的调节作用.随着研究的深入,研究者发现坏死性凋亡途径中的核心组成部分受体相互作用蛋白1(RIP1)、受体相互作用蛋白3(RIP3)和混合谱系激酶结构域样蛋白(MLKL)均受到热休克蛋白90的调控.而天然产物Kongensin A(KA)是一种热休克蛋白90抑制剂,热休克蛋白90受到抑制后进而阻断了坏死性凋亡途径.进一步研究坏死性凋亡途径及其对慢性肾脏病的影响,必将为慢性肾脏病的防治提供新的靶点.
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参与多发性骨髓瘤发病的新成员:蛋白激酶CK2
多发性骨髓瘤(MM)是一种恶性浆细胞病,发病后导致组织器官损伤和骨破坏,具有较高的死亡率.蛋白激酶CK2(酪蛋白激酶)是真核生物中普遍存在的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,在肿瘤细胞增殖和血液肿瘤中起重要作用.CK2在恶性血液病包括慢性、急性白血病和多发性骨髓瘤中有致瘤作用,可通过调节多种关键的信号通路促进恶性肿瘤的生长.该文综述了CK2在多发性骨髓瘤中对NF-κB和STAT3信号通路及内质网应激(ERS)、未折叠蛋白反应(UPR)和热休克蛋白90的调节作用,并讨论其作为MM治疗靶点的可行性,为MM的预防及治疗提供理论依据.
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人热休克蛋白90β基因沉默质粒的构建及转染效率的观察
目的:构建能表达小发夹RNA,从而特异、有效抑制人Hsp90βmRNA水平的质粒,比较该质粒对不同细胞株的转染效率.方法:合成3条对应于靶基因3个区域的64nt寡聚核苷酸,插入pSUPER EGFP1质粒,用DH5α细菌扩增,用酶切和测序法鉴定.以绿色荧光蛋白表达为标记,比较不同比例脂质体和质粒条件下,HepG2、HUVEC、HeK293 3种细胞株的转染效率.结果:构建的pSuper-Hsp90β1、pSuper-Hsp90β2、pSuper-Hsp90β3 3个重组沉默质粒,插入片段碱基完全正确.在相同条件下,所构建的质粒对HeK293细胞转染效率高,HepG2细胞低.结论:利用pSUPER质粒可成功构建人Hsp90β基因沉默质粒,该质粒对细胞株的转染效率可因细胞的不同而有显著差异.
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小鼠Hsp84真核表达质粒的构建及鉴定
目的:构建小鼠Hsp84基因真核表达质粒.方法:采用逆转录、热降落PCR方法,扩增BALb/c小鼠Hsp84基因片段,将其连入pMD18-T载体,筛选阳性克隆、测序验证.然后以重组T载体为模板,PCR扩增目的序列,插入真核表达质粒pcD-NA3.1中,转化大肠杆菌DH5 α,通过琼脂糖电泳、双酶切挑选和验证阳性重组克隆.结果:RT-PCR自小鼠脑组织中扩增出目的基因片段,克隆入pMD18-T载体后,测序结果证明为BALb/c小鼠Hsp84基因.插入目的基因的真核表达载体的酶切谱与设计一致.结论:成功构建了小鼠Hsp84编码框全长的真核细胞表达质粒.
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热休克蛋白90抑制剂治疗多发性骨髓瘤的研究进展
多发性骨髓瘤是一种浆细胞异常增生的恶性肿瘤,占血液系统恶性肿瘤的第二位.在过去的15年,多发性骨髓瘤的治疗有了明显的进展,以硼替佐米为代表的蛋白酶体抑制剂和以沙利度胺及其衍生物雷利度胺为代表的免疫调节药物等多种靶向药物的临床应用为多发性骨髓瘤患者的治疗提供了新的治疗方法.尽管如此,多发性骨髓瘤目前仍然不可治愈,因此需探索新的治疗方法以改善多发性骨髓瘤患者的生存和预后.研究表明·热休克蛋白90在骨髓瘤细胞中高表达,已成为多发性骨髓瘤治疗的一个新靶点,热休克蛋白90抑制剂可诱导骨髓瘤细胞凋亡,并能增加其他靶向治疗药物的敏感性.
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热休克蛋白90-白血病治疗的潜在分子靶点
热休克蛋白90(heat shock protein90,Hsp90)在机体内作为分子伴侣,参与蛋白质的折叠、移位、修复和降解,通过与辅伴侣分子形成超级陪伴装置以调节依附蛋白的生物学活性.近年来研究表明很多癌基因蛋白均为Hsp90的作用靶点,因此抑制Hsp90的功能将促进这些癌基因蛋白的降解,有助于肿瘤的治疗.将Hsp90抑制剂用于白血病治疗的研究,其中格尔德霉素(GA)和17-烯丙胺17-脱甲氧格尔德霉素(17-AAG)可诱导肿瘤细胞凋亡,并能增加其他抗肿瘤药的敏感性.
关键词： 热休克蛋白90 热休克蛋白90抑制剂 白血病 分子靶 -
17-AAG联合紫杉醇对人未分化甲状腺癌FRO细胞增殖和凋亡影响的研究
目的 探讨热休克蛋白90(HSP90)抑制剂17-丙烯胺基-17-去甲氧格尔德霉素(17-AAG)联合紫杉醇对人未分化甲状腺癌FRO细胞增殖和凋亡的影响.方法 ①采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT比色法)测定不同浓度(17-AAG:0.3125、0.625 0、1.250 0、2.500 0及5.0000μmol/L;紫杉醇:0.001 0、0.010 0、0.1000及1.0000μmol/L)、不同时间(24、48及72h)17-AAG、紫杉醇单药和联合处理(17-AAG:0.6250 μmol/L,紫杉醇:0.0010、0.010 0、0.100 0及1.000 0 μmol/L)后FRO细胞的增殖抑制率.②采用流式细胞仪检测17-AAG、紫杉醇单药及联合处理24 h后(17-AAG:0.625 0 μmol/L、紫杉醇:0.100 0 μmol/L;联合用药:17-AAG的浓度为0.625 0 μmol/L,紫杉醇的浓度为0.1000 μmol/L)FRO细胞的细胞周期变化及凋亡率.③采用胱天蛋白酶-3(Caspase-3)和Caspase-9检测试剂盒检测17-AAG、紫杉醇单药及联合处理24 h后(17-AAG:0.625 0 μmol/L、紫杉醇:0.100 0 μmol/L;联合用药:17-AAG的浓度为0.625 0 μmol/L,紫杉醇的浓度为0.100 0 μmol/L)后FRO细胞中的Caspase-3和Caspase-9活性.空白对照组均不加任何药物,只加培养液.结果 ①同时点空白对照组、各剂量17-AAG组/紫杉醇组/17-AAG联合紫杉醇组的增殖抑制率随浓度升高而逐渐升高,任2组比较差异均有统计学意义(P＜0.05);各剂量17-AAG组/紫杉醇组/17-AAG联合紫杉醇组的增殖抑制率在24、28及72h逐渐增高,任2组比较差异均有统计学意义(P＜0.05);同时点同浓度情况下,17-AAG联合紫杉醇组的增殖抑制率均高于单独用药组(P＜0.05).各时点17-AAG与紫杉醇联合的q值均大于1.15,两者之间呈协同作用.②17-AAG组、紫杉醇组及17-AAG联合紫杉醇组FRO细胞的凋亡率均明显高于空白对照组(P＜0.05),且17-AAG联合紫杉醇组FRO细胞的凋亡率高于17-AAG组和紫杉醇组(P＜0.05).③17-AAG组、紫杉醇组及17-AAG联合紫杉醇组FRO细胞的Caspase-3和Caspase-9活性均高于空白对照组(P＜0.05);且17-AAG联合紫杉醇组细胞的Caspase-3和Caspase-9活性均高于17-AAG组和紫杉醇组相应指标(P＜0.05).结论 17-AAG和紫杉醇均可明显抑制FRO细胞的增殖并诱导细胞凋亡,联合用药有一定的协同效应,呈剂量依赖关系.
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热休克蛋白90抑制剂对TNFα诱导肿瘤细胞凋亡和调控NF-κB信号通路的影响
目的 探讨热休克蛋白90(heat shock protein 90,HSP90)抑制剂17-dimethylamino-ethvlaminogeldanamycin(17DMAG)对肿瘤坏死因子α(TNFα)诱导的肿瘤细胞凋亡的影响及其作用机理.方法 采用乳酸脱氢酶释放实验检测不同剂量的17DMAG与TNFα共培养对子宫颈癌细胞株HeLa和卵巢癌细胞株SKOV3的细胞毒作用,吖啶橙/溴化乙锭双重染色后荧光显微镜下观察17DMAG和TNFα共同处理所导致的细胞形态学改变,并采用Western blot检测细胞凋亡相关分子半胱天冬酶-8(caspase-8)、半胱天冬酶-3(caspase-3)、多聚(ADP-核糖)聚合酶[poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]和TNFα诱导的核因子-kB(NF-kB)信号通路信号分子receptor-interaction protein(RIP)IkB kinase β(IKKβ)、inhibitor of IkB(IkBα)的变化.结果 17DMAG可增强TNFα对HeLa细胞和SKOV3细胞的杀伤作用,17DMAG可抑制TNFα诱导的NNF-kB信号通路中关键的信号分子RIP和IKKβ,阻断NF-kB的活化,增强TNFα诱导的外源性细胞凋亡.结论 17DMAG可通过抑制NF-kB信号通路增强TNFα诱导的肿瘤细胞凋亡,提高TNFα的抗肿瘤效率.
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银屑病皮损组织中HSP60、HSP90的表达与糖皮质激素受体活性的相关性研究
目的:探索银屑病皮损组织中热休克蛋白60(HSP60)、热休克蛋白90(HSP90)与糖皮质激素受体活性的相关性.方法:采用免疫组化方法检测银屑病患者皮损组织中HSP60、HSP90和糖皮质激素受体(GR)的表达,并作相关性分析.结果:银屑病皮损组织中HSP60、HSP90明显表达,GR有较低水平表达,HSP60、HSP90与GR呈负相关,相关系数分别为-0.77457与-0.74252.结论:银屑病皮损组织中HSP60、HSP90与GR的活性有一定的关系,可能在银屑病发病和病程演变中起一定的作用.
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急性缺氧暴露对豚鼠耳蜗热休克蛋白90表达的影响
目的:观察热休克蛋白90(heat shock protein90,HSP90)在急性缺氧后早期豚鼠耳蜗中的表达变化特点.方法:利用自制缺氧舱使实验动物缺氧,应用免疫组化SABC法结合图象分析技术检测正常和急性缺氧后早期豚鼠耳蜗HSP90的表达.结果:HSP90在正常和缺氧损伤后豚鼠耳蜗各回均有不同程度的染色,主要阳性部位是螺旋神经节、螺旋器、血管纹和螺旋韧带.但缺氧损伤后早期HSP90在耳蜗各阳性部位的表达均有增强,其中在螺旋神经节和螺旋器的表达增强明显(P＜0.01).结论:HSP90在正常和缺氧豚鼠耳蜗组织均有表达,缺氧可明显诱导HSP90在耳蜗组织的表达增强.HSP90可能对缺氧损害后耳蜗功能的恢复起作用.
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子痫前期患者血清PCT,HSP90及hs-CRP检测的临床意义
目的 通过检测子痫前期(preeclampsia,PE)患者血清中降钙素原(procalcitonin,PCT)、热休克蛋白90(heat shock protein,HSP90)和超敏C反应蛋白(highsensitivity C-reactive protein,hs-CRP),评价它们在子痫前期诊断中的临床价值.方法 将65例子痫前期孕妇分为轻度子痫前期组(轻度组)和重度子痫前期组(重度组),另选择同期34例健康孕妇作为对照组.各组受试者均检测血清PCT,HSP90及hs-CRP水平,分析其与子痫前期及其严重程度的相关性.结果 ①轻度组、重度组、对照组血清PCT表达水平分别为0.22±0.05,0.88±0.13和0.04±0.02 ng/ml,各组之间差异具有统计学意义(F=9.73,P<0.01),与对照组相比,重度组(q=7.36,P<0.01)、轻度组(q=5.27,P<0.01),差异均具有统计学意义.②轻度组、重度组、对照组血清HSP90表达水平分别为1.10±0.16,2.7±0.26和0.38±0.15 ng/ml,各组之间差异具有统计学意义(F=8.52,P<0.01),与对照组相比,重度组(q=6.34,P<0.01)、轻度组(q=4.48,P<0.01),差异均具有统计学意义.③轻度组、重度组、对照组血清hs-CRP表达水平分别为17.50±2.90,63.00±12.20和3.90±0.90 mg/L,各组之间差异具有统计学意义(F=11.59,P<0.01),与对照组相比,重度组(q=9.37,P<0.01)、轻度组(q=5.46,P<0.01),差异均具有统计学意义.④子痫前期组血清中PCT,HSP90及hs-CRP表达水平与其疾病严重程度正相关(r值分别为0.871,0.874,0.931,均P<0.01).结论 血清PCT,HSP90及hs-CRP与子痫前期的发生及疾病严重程度高度相关,可用于子痫前期的预测、诊断及疾病严重程度的评估.
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热休克蛋白在良恶性嗜铬细胞瘤中的表达及其意义
目的 通过检测热休克蛋白90(HSP90)在良、恶性嗜铬细胞瘤(PC)组织中的表达情况,探讨HSP90能否成为一项用于评估嗜铬细胞瘤潜在恶性程度的有效分子标记物.方法 选取1986年10月～2006年8月在我院泌尿外科行手术治疗、且有完整的临床、病理和随访资料的嗜铬细胞瘤患者存档石蜡标本38例,其中良性嗜铬细胞瘤(BP)21例,恶性嗜铬细胞瘤(MP)17例.采用免疫组化技术Envision二步法,检测良、恶性嗜铬细胞瘤中HSP90的表达情况.恶性组经首次手术确诊后随访28～179月,良性组经首次手术确诊后随访93～264月.结果 在MP组中HSP90的阳性表达率为70.59％,明显高于BP组中阳性表达率28.57％,两组热休克蛋白的表达具有显著的统计学差异(P＜0.05).结论 HSP90有望成为区分嗜铬细胞瘤良恶性的一项指标.
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人前列腺癌组织中热休克蛋白90、糖蛋白96的表达及意义
目的 研究人前列腺癌组织中热休克蛋白90(HSP90)、糖蛋白96(gp96)的表达及其临床意义.方法 收集我院2010年4月至2014年4月间确诊的前列腺癌组织标本56例(其中新鲜组织16例),同期人院的良性前列腺增生组织标本25例(其中新鲜组织8例)作为对照组.同时收集每例患者完整的临床病理资料.运用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和免疫组织化学(IHC)方法分别检测前列腺癌和前列腺增生组织中HSP90、gp96在mRNA和蛋白水平的表达情况及其与患者临床病理资料之间的相关性.结果 前列腺癌组织中HSP90、gp96在mRNA水平(P＜0.05)及蛋白水平(P＜0.01)的表达均明显高于良性前列腺增生组织,且HSP90与gp96表达两者间存在关联性(P＜0.01).结合患者临床病理相关参数分析显示,Gleason评分≥7分的中高危组与7分以下的低危组之间HSP90、gp96的阳性表达率均有显著差异(P＜0.05),且gp96的表达还与患者T分期密切相关(P＜0.01).但HSP90、gp96的表达与患者年龄、前列腺体积、血清tPSA值、淋巴结转移均无关.结论 前列腺癌组织中HSP90、gp96在mRNA和蛋白水平均明显高表达,对于前列腺癌的发生发展可能起到促进作用,可作为判断前列腺癌恶性程度的指标.
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Ganetespib对PC12细胞的凋亡及血管内皮生长因子表达的影响
目的 体外探讨热休克蛋白90(heat shock protein 90,HSP90)抑制剂Ganetespib对PC12细胞生长的影响及血管内皮生长因子VEGF表达的调控.方法 应用噻唑蓝(MTT)比色法观察Ganetespib对大鼠嗜铬细胞瘤细胞系PC12细胞的生长抑制作用;流式细胞学技术观察不同浓度Ganetespib处理细胞后的细胞周期变化;蛋白质免疫印迹法(Western blotting法)检测HSP90、VEGF蛋白的表达变化.结果 Ganetespib呈时间、剂量依赖性抑制PC12细胞,24 h半数抑制浓度(IC50)为0.2μmol/L;Ganetespib在0.2μmol/L浓度能够有效引起PC12细胞周期阻滞于G0/G1期;Ganetespib能抑制PC12细胞的HSP90、VEGF的表达.结论 HSP90抑制剂Ganetespib能抑制PC12细胞增殖,诱导细胞周期阻滞,抑制HSP90、VEGF蛋白表达.
关键词： 嗜铬细胞瘤 PC12细胞 血管内皮生长因子 热休克蛋白90 Ganetespib
