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重组人骨保护素与重组核因子κb活化因子受体蛋白对破骨前体细胞分化的影响
目的:对比重组人骨保护素(rhOPG-Fc)与重组核因子κb活化因子受体蛋白(rhRANK)对破骨前体细胞分化的影响.方法:采用成骨细胞与破骨前体细胞RAW264.7混合培养,在地塞米松、1,25 (OH) 2VitD3诱导下生成破骨细胞的方法.研究分3组:rhRANK组:10-5 g/L；rhOPG-Fc组:10-5 g/L;空白对照组.作用9d后观察破骨细胞数目和形态,抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色阳性细胞个数,骨磨片吸收陷窝计数.结果:在空白对照组,小鼠成骨细胞与破骨前体细胞RAW264.7混合培养6d后,开始出现多核细胞,9d时可见大量成熟多核细胞,经TRAP染色证实为成熟破骨细胞,而rhRANK组及rhOPG-Fc组TRAP染色阳性多核细胞数较对照组均减少,特别是rhRANK组减少更明显.骨片吸收陷窝计数显示rhRANK组及rhOPG-Fc组较对照组也明显减少,而相对来说,rhRANK组较rhOPG-Fc组更少.结论:rhOPG-Fc与rhRANK均可以有效抑制破骨前体细胞分化成为成熟破骨细胞,且rhRANK较rhOPG-Fc抑制效果更明显.
关键词： 骨保护素 核因子κb活化因子受体蛋白 破骨前体细胞 细胞分化 -
灯盏花对成骨细胞及破骨前体细胞OPG/RANKL/RANK表达的影响
目的 研究不同浓度和不同作用时间的灯盏花对体外培养的成骨细胞和破骨前体细胞中OPG/RANKL/RANK mRNA及蛋白表达的影响,初步探讨灯盏花对骨改建的作用及其机制.方法 体外培养人MG63细胞和小鼠RAW264.7细胞,分别取第三代细胞分为对照组和不同的实验组,分别应用不同浓度的灯盏花(0、0.001、0.01、0.1、1 mg/mL)干预48 h后提取总RNA和蛋白质,同时单独对0、1 mg组设12、24、48 h时间点提取蛋白质,采用半定量RT-PCR方法检测MG63细胞OPG mRNA和RANKL mRNA的表达以及RAW264.7细胞RANK mRNA的表达,采用Western blot法检测MG63细胞OPG蛋白和RANKL蛋白的表达以及RAW264.7细胞RANK蛋白的表达.结果灯盏花随浓度(0、0.001、0.01、0.1、1 mg/mL)增高,干预48 h后MG63细胞OPG mRNA和蛋白表达逐步降低(P <0.05);MG63细胞RANKL mRNA和蛋白表达逐步增加(P <0.05);RAW264.7细胞RANK mRNA表达增加(P <0.05),但0.1 mg/mL组较0.01 mg/mL组 mRNA表达稍降低,RANK蛋白表达逐步增加(P <0.05).1 mg/mL灯盏花干预12、24、48 h后MG63细胞OPG蛋白表达随时间逐步降低(P <0.05)、RANKL蛋白表达随时间逐步增加(P <0.05);RAW264.7细胞RANK蛋白表达随时间逐步增加(P <0.05).结论 灯盏花大致上呈剂量和时间依赖性抑制成骨细胞OPG表达,促进成骨细胞RANKL的表达和破骨前体细胞RANK的表达,灯盏花可能有促进骨吸收的作用.
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模拟微重力条件下重组骨保护素融合蛋白 (rhOPG-HSA)对破骨前体细胞Raw264.7抑制效应的研究
目的 探讨在模拟微重力(Simulated microgravity,SMG)条件下重组骨保护素融合蛋白(rhOPG-HAS)对破骨前体细胞Raw264.7的抑制效应.方法 在SMG条件下,分别培养破骨前体细胞Raw264.7与成骨细胞MC3T3-E1,利用ELISA法检测MC3T3-E1细胞培养液中骨保护素活性,用巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)以及可溶性破骨细胞分化因子(sRANKL)诱导Raw264.7分化为破骨细胞,通过抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色法鉴定rhOPG-HAS抑制破骨细胞能力,利用半定量RTPCR测定破骨细胞中TRAP的表达.结果 SMG条件下,骨保护素活性在72 h后显著降低(P<0.01);Raw264.7细胞经M-CSF及sRANKL诱导3、4、5 d后,与阴性对照组相比,TRAP阳性染色的破骨细胞用rhOPG-HAS处理后明显减少(P<0.05),RT-PCR测定结果表明破骨细胞TRAP的表达降低(P<0.05).结论 SMG条件下,rhOPG-HAS能够抑制破骨前体细胞Raw264.7的分化.
关键词： 模拟微重力 重组骨保护素融合蛋白 破骨前体细胞 抑制效应 -
破骨细胞异质性的研究进展
破骨细胞是参与骨改建过程的关键细胞。近年来，越来越多的证据表明人体不同部位的破骨细胞生物学特性存在着差异，即破骨细胞异质性。但破骨细胞异质性的产生机制尚不明确，不同部位参与诱导破骨细胞形成的成骨细胞存在差异；不同部位破骨细胞所黏附的骨基质结构及组成成分不同；不同部位破骨前体细胞不同，可能是其产生的机制。
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重建大鼠骨髓来源的破骨前体细胞端粒酶的活性
本实验采用含大鼠端粒酶逆转录酶（rTERT cDNA）全长的pcDNA载体，体外转染大鼠骨髓来源的破骨前体细胞，探讨是否能重建大鼠骨髓来源的破骨前体细胞端粒酶活性，延缓细胞衰老、死亡，促进骨髓来源的破骨前体细胞分裂，并分析转染后的获得性大鼠骨髓来源的破骨前体细胞的端粒酶活性及其生物学特性，以便为建立标准细胞系提供依据。
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破骨前体细胞在骨吸收中的作用和双光子显微镜活体观察破骨前体细胞的研究
近年来在骨质疏松和骨折愈合机制研究中,破骨细胞和破骨前体细胞在骨吸收中的相互作用越来越受到重视,被认为是未来药物治疗骨质疏松乃至其他骨质破坏疾病的关键策略和重要靶点.本文综述了趋化因子-1通路(CX3CL1-CX3CR1pathway)和1-磷酸鞘氨醇信号(S1P signal)及其受体在破骨细胞和破骨前体细胞间调控作用的新研究进展.同时还对近文献中出现的使用双光子显微镜活体观察破骨细胞和破骨前体细胞的方法进行了介绍,该方法被认为开启了骨科研究领域的新时代.
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雄激素对骨质疏松大鼠血清OPG表达水平的影响
骨代谢过程主要由成骨细胞和破骨细胞两类细胞来完成,分别调节骨形成与骨吸收;但它们之间又是相互作用、相互依存,共同维持骨代谢的动态平衡状态.近年来发现成骨细胞表达的OPG(osteoprotegerin)、RANKL(receptor anti-vator of nulcear factor-κ B ligand)有调节破骨细胞的作用,RANKL通过与表达于破骨前体细胞的RANKL结合,能够刺激破骨细胞激活和增殖;OPG与RANK竞争结合RAN-KL,从而来抑制骨吸收[1～3],所以OPG和RANKL水平能够反映骨形成与吸收情况.OPG和RANKL的表达受各种激素、细胞因子的调节:肿瘤坏死因子能够上调OPG表达[4];雌二醇可以促进成骨细胞合成OPG[5];Hofbauer等[6]发现雄激素减少体外成骨细胞OPG表达.但是,雄激素对于体内OPG表达的影响是否与体外一致还不十分明确.本实验通过抑制芳香化酶,观察雄激素对骨质疏松大鼠血循环中OPG蛋白表达水平的影响.
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血清白细胞介素-34在银屑病关节炎骨破坏中的作用研究
目的 探讨血清IL-34水平与PsA骨破坏的相关性.方法 以40例PsA患者为实验组,以20例银屑病患者(银屑病组)及20名健康志愿者为健康对照组,检测3组研究对象外周血IL-34及破骨细胞相关细胞因子,包括TNF-α、细胞NF-κB受体活化因子配体(RANKL)和骨保护素(OPG)的水平,分析IL-34与外周血破骨前体细胞(OCP)的数量、疾病活动度及影像学评分间的相关性.所有数据均采用GraphPad Prism 6软件进行分析.采用多因素方差分析进行多组比较,两两比较采用q检验,采用Spearman相关分析评估各指标间的相关性.结果 PsA组患者血清IL-34的水平[(328±476) pg/ml]高于银屑病组[(33±52)pg/ml,q=3.92,P＜0.01]及健康对照组[(32±32) pg/ml,q=3.93,P＜0.01],侵蚀性PsA组高于非侵蚀性PsA组[(449±527) pghrd与(47±24) pg/ml,q=4.04,P＜0.01].PsA组患者外周血TNF-α、RANKL水平及OCP计数[(125±79) pg/ml、(488±475) pg/ml及17.7±4.8(5个视野)]均高于银屑病组[(40±22) pg/rnl、(26±3) pg/ml及5.2±0.8(5个视野),q=7.32、6.14及2.94,P均＜0.01]及健康对照组[(41±19) pg/ml、(65±8) pg/ml及6.2±1.8(5个视野),q=6.67、5.62及2.71,P均＜0.01],PsA组的OPG/RANKL比值(0.5±0.4)显著低于银屑病组(4.3±2.7,q=-3.30,P＜0.01]及健康对照组(1.8±0.6,q=-1.72,P＜0.01),IL-34、TNF-α及RANKL的水平均与OCP呈正相关(r=0.10,P＜0.05;r=0.12,P＜0.05;r=0.13,P＜0.05).结论 PsA患者尤其是侵蚀性PsA患者外周血中存在较高水平的IL-34,与OCP数量呈正相关,IL-34参与了OCP及破骨细胞的分化,进而促进骨破坏过程.因此,IL-34有望成为治疗PsA的新靶点.
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磷酸钙/聚乳酸羟基乙酸复合骨水泥对破骨前体细胞炎症因子表达的影响
目的：观察磷酸钙/聚乳酸羟基乙酸复合骨水泥( CPC/PLGA)对破骨前体细胞炎症因子TNF-α、IL-1、IL-6表达的影响,了解PLGA促进CPC降解的机理。方法①根据高效液相色谱法检测出的乳酸、羟基乙酸浓度配置CPC/PLGA替代液。②将RAW264.7细胞分别培养在DMEM培养基(对照组),第6小时CPC初凝块浸提液(A组)及CPC/PLGA替代液(B组)。通过CCK-8法检测各组细胞的增殖变化,并通过RT-PCR法检测各组中TNF-α、IL-1、IL-6 mRNA的表达情况。结果增殖实验结果示,A组细胞的增殖率在5 d时达到高值(1.01±0.02),而B组细胞的增殖率在5 d时达到高值(1.07±0.02),均与对照组相比有统计学意义(P<0.05)。 RT-PCR法示A组和B组细胞TNF-αmRNA、IL-1 mRNA在6 h时表达高,IL-6 mRNA在12 h时表达高,与对照组比较均有统计学差异(P<0.05)。结论磷酸钙/聚乳酸羟基乙酸复合骨水泥调控破骨前体细胞炎症因子增高。
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S1P/S1PR1通路依赖的压力对破骨前体细胞趋化效应
目的:探究S1P/S1PR1通路轴在压力下对破骨前体细胞趋化影响的调节作用.方法:建立体外压力模型,通过实时荧光定量聚合酶链式反应,免疫印迹实验和细胞免疫荧光检测压力下Raw264.7细胞SPHK1和S1PR1的mRNA水平和蛋白水平.采用Transwell 24孔板通过趋化实验探究S1P/S1PR1在压力下对Raw264*7细胞的迁移能力的影响.结果:发现0.5、1.0和2.0 g/cm2压力作用下,Raw264.7细胞的SPHK1和S1PR1的表达及Raw264.7细胞的趋化显著降低.在S1PR1受体功能性激动剂FTY720作用下,压力作用下趋化能力被抑制的Raw264.7细胞趋化水平显著增加.结论:S1P/S1PR1信号轴在正畸治疗中调节破骨前体细胞迁移与功能发挥重要作用.
关键词： S1P/S1PR1通路 压力 破骨前体细胞 趋化 -
TNF-α与绝经后骨质疏松症研究进展
绝经后骨质疏松症(Postmenopausal osteoporosis,PMO)骨量丢失的高峰期多发生在绝经后5～10[1]年内.既往研究表明,雌激素缺乏和钙摄入不足是绝经期骨量丢失、骨质疏松(Osteoporosis,OP)产生的主要原因[2].近年来研究发现[3],随着妇女更年期雌激素水平的下降,刺激骨吸收的细胞因子产生过多,使骨吸收活动增强.肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosisfactor-α,TNF-α)是重要的骨吸收因子之一,其作用表现为刺激破骨前体细胞的增殖和分化,促进骨吸收,同时抑制成骨细胞碱性磷酸酶的生成,减少骨矿含量,抑制骨胶原合成,抑制骨形成和钙化.有学者甚至认为[4],雌激素抗骨吸收效应即通过抑制TNF-α等骨吸收细胞因子的分泌实现.
