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腺病毒骨形态发生蛋白2绿色荧光蛋白基因转染兔骨髓基质干细胞成骨及示踪作用
目的 观察腺病毒介导的人骨形态发生蛋白绿色荧光蛋白基因(Ad-GFP-hBMP-2)转染对骨髓间质干细胞(bMSCs)成骨能力的影响.方法 取日本大耳白兔4只自双侧股骨远端抽取骨髓培养bMSCs.以Ad-GFP-hBMP-2基因(实验组)及Ad-GFP(对照组)基因转染bMSCs后,用ALP检测试剂盒检测两组细胞的ALP活性;原位杂交检测两组细胞I型胶原的表达;Western blot 检测细胞中BMP-2的表达.将转染后24 h的bMSCs接种到裸鼠体内,术后第4、8、12周观察成骨情况.结果 转Ad-GFP-hBMP-2基因组和Ad-GFP组各时间段ALP分泌量差异分别有统计学意义(P<0.01);实验组I型胶原原位杂交实验组为阳性.实验组成骨阳性率为90%,对照组为40%.结论 bMSCs经Ad-GFP-hBMP-2基因转染后能高效表达BMP-2并诱导成骨.腺病毒介导人BMP-2转基因可以提高bMSCs的成骨能力.
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重组人骨形态发生蛋白-2/异体骨复合骨用于兔腰椎融合的显微CT研究
目的 观察重组人骨形态发生蛋白-2/异体骨复合骨、自体骨与异体骨分别用于兔腰椎融合后,不同时间点融合骨组织微结构的变化.方法 成年雄性新西兰大白兔45只,随机分为3组,每组15只.在每只兔的L5、L6横突间行腰椎后路植骨融合术,各组分别植入复合骨条,自体髂骨条以及单纯异体髂骨条,每组于术后第3、4、5周各处死5只大白兔,分离保存融合节段标本.用显微cT扫描后行骨组织定量分析.结果 术后3个时间点中,复合骨组和自体骨组新生骨小梁的强度和形态均要优于异体骨组且差异有统计学意义(P＜0.05).第3周,复合骨组的组织骨密度(TMD)为(433.98±2.64)mg/cm3,高于自体骨组(424.81±4.69)mg/cm3(P＜0.05);第4周,复合骨组的骨小梁厚度(Tb.Th)为(0.097±0.004)mm,高于自体骨组(0.082±0.003)mm(P＜0.01);第5周,复合组的组织矿含量(TMC)为(7.70±0.30)mg,高于自体骨组(7.00±0.24)mg(P＜0.01).结论 在兔腰椎后路横突间植骨融合中,重组人骨形态发生蛋-2/异体骨复合骨的成骨效应不低于自体骨,优于异体骨.
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包裹骨形态发生蛋白-2基因转染干细胞的微囊化方法和蛋白释放效应
目的 观察转基因骨髓间充质干细胞的微囊化包裹方法和骨形态发生蛋白-2(BMP-2)释放效应.方法 利用高压微电场制备由海藻酸纳和多聚赖胺酸组成的微囊(细胞浓度为3×106 个/ml,海藻酸钠浓度为1.5%)包被转β-gal(报告基因)或BMP-2基因的骨髓间充质干细胞,根据X-gal染色观察细胞在微囊内的存活情况,ELISA方法检测其所释放的BMP-2蛋白量,共培养方法检测其生物学活性.结果 7、14、21、28 d时微囊内转基因细胞X-gal染色均为阳性.包裹后30d,培养液上清中仍可检测到BMP-2蛋白.转BMP-2基因微囊化细胞与未包裹骨髓间充质干细胞共培养10 d后,ALP活性定量检测结果表明,Adv-hBMP-2转染细胞组ALP活性为(52.537±1.774)U/ml,明显高于未转染细胞组的(42.336±0.857)U/ml,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 微囊化转基因干细胞生长良好,能持续分泌BMP-2蛋白并促进干细胞向成骨细胞方向分化.
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骨形态发生蛋白-2对椎间盘细胞软骨特异性基因 mRNA的调节作用
目的探讨骨形态发生蛋白(BMP)-2对椎间盘细胞软骨特异性基因Sox9、Ⅱ型胶原和蛋白聚糖基因的调控作用.方法应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测BMP-2对培养的人椎间盘细胞中Sox9、Ⅱ型胶原和蛋白聚糖基因 mRNA表达的调控作用.结果在BMP-2浓度为100 μg/L(0.149±0.006,P<0.05)和1 000 μg/L(0.163±0.006,P<0.01)时,其对椎间盘细胞中Sox9基因 mRNA可起到显著的正向调控作用;在此浓度下,它也可以对Ⅱ型胶原和蛋白聚糖基因mRNA起到正向调控作用.结论 BMP-2可以按照剂量依赖方式正向调控椎间盘细胞中Sox9、Ⅱ型胶原和蛋白聚糖基因的表达.
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同种异体骨混合自体骨复合骨形态发生蛋白-2修复胫骨骨缺损的研究
目的 观察同种异体骨混合自体骨复合骨形态发生蛋白-2 (BMP-2)修复胫骨骨缺损的临床疗效.方法 采用同种异体骨混合自体骨复合BMP-2修复胫骨骨缺损17例,其中内固定术后骨不连硬化骨去除后骨缺损11例,感染性骨折不愈合去除感染骨后骨缺损6例,均采用植骨结合髓内、外固定治疗,术后1、3、6个月、1年复查X线评价骨折愈合情况,并采用Johner-Wruhs评分评估治疗效果.结果 所有患者平均随访14个月(10 ～ 38个月).骨缺损均得以修复,骨折愈合,无感染复发,创面均闭合.Johner-Wruhs评分优良率为94％.结论 同种异体骨混合自体骨复合BMP-2所构成的“三合一”植骨模式,在修复胫骨骨缺损中来源广泛、成骨可靠、安全性高.
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骨形态发生蛋白-2与血管内皮生长因子双基因质粒转染鼠骨髓间充质干细胞的研究
目的 利用骨形态发生蛋白-2(BMP-2)、血管内皮生长因子(VEGF)基因构建双基因质粒,转染鼠骨髓间充质干细胞,通过基因表达,促进成骨、成血管能力.方法 构建BMP-2、VEGF基因及双基因质粒,分离培养鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),进行质粒转染,在激发波长488 nm、发射波长507 nm荧光显微镜下观察并计算转染率,分别于1、4、7、10、15、21 d采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测转染了各组质粒的BMSCs培养液中BMP-2、VEGF蛋白的表达.结果 转染结果显示,BMP-2组为38.2％,VEGF组为40.1％、双基因质粒组为37.2％.结果显示各组均有目的蛋白的分泌,BMSCs及空载体组在BMP-2、VEGF的表达上差异无统计学意义(P＞0.05),其余各组释放量比较差异有统计学意义(P＜0.05),双基因质粒组的两种蛋白分泌量大于其他各组.结论 双基因质粒的表达可以互相促进,起到级联放大作用.
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聚乙烯亚胺介导骨形态发生蛋白2基因转染兔脂肪干细胞的研究
目的 观察聚乙烯亚胺作为载体介导骨形态发生蛋白-2(BMP-2)基因转染脂肪干细胞(ADSCs)的基因表达,探讨转染后细胞的成骨分化效果.方法 取成年日本大耳白兔的颈部脂肪10 g,经体外分离培养的方法获得ADSCs,并对其进行表型鉴定,用相对分子质量为13×103的聚乙烯亚胺介导BMP@基因转染至ADSCs,G418筛选获得阳性细胞克隆.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测BMP-2mRNA表达,酶联免疫吸附试验(EHSA)法检测BMP@蛋白表达分泌,Westem blm法检测骨钙素和Ⅰ型胶原蛋白的含量,碱性磷酸酶定量检测,并行茜素红染色,未转染组作对照.结果 从兔脂肪组织中分离出来的第3、6代ADSCs均高表达CD29、CD44,阳性率超过90％;低表达CD34、CD45,阳性率不超过5％;转染细胞有BMP@mRNA的转录及其蛋白的表达,碱性磷酸酶、骨钙素和Ⅰ型胶原蛋白的含量增加,茜素红染色呈阳性反应,对照组呈阴性.结论 聚乙烯亚胺可介导BMP@基因转染兔ADSCs,BMP@基因在ADSCs中有效表达并诱导其定向成骨分化.
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国人骨形态发生蛋白-2基因多态性与颈椎后纵韧带骨化的遗传关联研究
目的 探讨国人骨形态发生蛋白4(BMP4)基因编码区单核苷酸多态性(SNPs)位点与颈椎后纵韧带骨化(OPLL)的遗传易感性和骨化程度的关系.方法 临床收集OPLL病例420例,对照组506例,采用直接测序法对目的基因片段进行序列分析,进而对BMP-2基因编码区SNPs位点进行分型,比较不同基因型和等位基因的分布差异.结果 BMP-2基因外显子2上的Ser37Ala(T/G)的TT、TG、GG基因型分别为752例(81％)、174例(19％)、0例,基因型分布在病例组与对照组间差异有统计学意义(P＜0.01),TG基因型与OPL的发生有关.外显子3上的Arg190Ser (A/T)的AA、AT、TT基因型分别为228例(24％)、464例(50％)、234例(26％),基因型分布在病例组与对照组间差异有统计学意义(P＜0.01),AT基因型与OPLL的发生有关.对OPLL患者外显子2上的Ser87Ser(A/G)基因型分析发现,GG基因型的OPLL患者其骨化椎体的数量明显多于AG和AA基因型(P＜0.05),表明G等位基因能够加重OPL患者的严重程度,A等位基因能够限制OPLL患者异位骨化的发生.结论 BMP-2基因外显子2上的Ser37Ala(T/G)和外显子3上的Arg190Ser(A/T)多态性与OPLL的发生相关.BMP-2基因外显子2上的Ser87Ser (A/G)基因型与OPLL的严重程度有关.BMP4是OPLL的易感基因.
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骨形态发生蛋白-2/胶原/掺锶羟基磷灰石材料修复颅骨缺损
目的 制备骨形态发生蛋白-2( BMP-2)/胶原/掺锶羟基磷灰石材料并探讨其修复大鼠颅骨缺损的可行性和有效性.方法 扫描电镜观察Ⅰ型胶原制备单纯胶原、胶原/羟基磷灰石、胶原/掺锶羟基磷灰石、BMP-2/胶原/掺锶羟基磷灰石4组骨修复材料表面结构.用BMP-2/胶原/掺锶羟基磷灰石材料浸提液进行细胞毒性试验和体外溶血试验评价其生物相容性.在大鼠头颅制备颅骨极限骨缺损模型,分别植入4种骨修复材料.术后12周CT扫描观察骨缺损修复影像学.苏木素-伊红(HE)和Masson染色观察骨缺损组织学变化,并在骨缺损及其周围新生骨部位行骨桥蛋白( OPN)和β-连环蛋白(β-catenin)免疫组织化学染色.结果 在扫描电镜下观察发现单纯的胶原材料为交织样物质结构,胶原/羟基磷灰石材料为交织晶体板状结构胶原/掺锶羟基磷灰石和BMP-2/胶原/掺锶羟基磷灰石材料晶体结构为单晶体交织状.BMP-2/胶原/掺锶羟基磷灰石材料浸提液对细胞相对增殖率(RGR)无显著影响(P＞0.05),材料的细胞毒性为1级.骨缺损CT扫描平均CT值分别为(98.5±10.2)、(208.4±19.5)、(418.4±27.1)、(476.8±30.5)hu,BMP-2/胶原/掺锶羟基磷灰石材料缺损部位CT值高.HE和Masson染色见BMP-2/胶原/掺锶羟基磷灰石组骨质愈合完全,原骨缺损处多为红色成熟骨.胶原/掺锶羟基磷灰石组植入区内蓝色的新生骨较多.胶原/羟基磷灰石材料组,植入区在植入材料边缘新生骨形成,界限仍然清晰.单纯胶原组骨质未愈合,骨缺损处为淡蓝色条索状结构,中间未见骨形成.对比其他3组,BMP-2/胶原/掺锶羟基磷灰石组存在大量棕色的OPN和β-catenin染色阳性新生骨组织,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 BMP-2/胶原/掺锶羟基磷灰石材料促进骨修复能力强于单纯胶原、胶原/羟基磷灰石、胶原/掺锶羟基磷灰石材料.
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不同剂量激素对股骨近端的影响
目的 观察不同剂量地塞米松对大鼠股骨近端组织学、骨形态发生蛋白-2(BMP-2)及其受体表达、细胞凋亡的影响.方法 将96只雄性Wister大鼠随机分为对照组(C组)、地塞米松剂量5 mg/kg组(L组)、10 ms/ks组(M组)、15 ms/kg组(H组).各组分别于用药后2、4、6、8周对股骨近端1/3骨质进行组织学、BMP-2及其受体表达和细胞凋亡检测.结果 实验组骨小梁/髓腔面积比、皮质/髓腔面积比、骨形态发生蛋白Ⅰ型受体(BMP-R T)的含量均随用药时间的增加以及剂量的增加而降低,均低于C组.空骨陷窝计数和凋亡细胞计数则有随用药剂量及时间的增加而增加的趋势.L组的BMP-2平均染色面积百分比和BMP-2染色的平均吸光度在2周时明显高于对照组,而后降低,至8周时已明显低于对照组;M组和H组2周时接近正常水平,4、6、8周逐渐降低至较低水平.结论 大剂量地塞米松可以显著降低股骨近端的骨质质量;激素对股骨近端的影响具有剂量依赖性.
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假体周围骨溶解性骨缺损的转骨形态发生蛋白-2基因治疗
目的 模拟假体周围骨溶解环境,观察骨形态发生蛋白-2(BMP-2)基因治疗假体周围骨溶解性骨缺损的效果.方法 成年雄性Beagle犬6条,于股骨外髁造成假体周围3mm骨缺损区.1条动物的左侧缺损区植入1ml平均直径1μm的钛合金颗粒混悬液,右侧植入1ml磷酸盐缓冲液(PBS),观察造模结果;其他5条动物双侧植入1ml钛合金颗粒混悬液,于术后2个月取出假体,植入转BMP-2基因冻干骨或单纯冻干骨,二次术后3个月取材,行组织学、组织形态计量学观察植骨愈合替代及界面骨整合情况.结果 颗粒造模术后2个月可见典型的骨溶解界膜组织形成.翻修术后3个月,冻干骨组见较多植骨残余,假体-骨界面基本为软组织界膜,假体骨接触率(BIC)为(1.38±1.22)%;基因治疗组见少量植骨残余,假体-骨界面有点状骨接触,BIC为(12.96±1.61)%,两组差异有统计学意义(P<0.01).结论 采用BMP-2基因治疗可提高假体周围骨溶解性骨缺损的界面骨整合.
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体外轴向应力刺激促进兔胫骨骨折愈合研究
目的 探讨体外轴向应力刺激对骨折愈合过程中不同时间点血管内皮生长因子(VEGF)、CD34分子(CD34)、骨形态发生蛋白-2(BMP-2)及转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响.方法 制作新西兰大白兔胫骨骨折模型,随机分为实验组和对照组,实验组术后第8天开始每两天给予应力刺激1次,每次30 min,对照组为无体外轴向应力治疗组.术后第2、4、6、8周行X线检查并用Lane-Sandhu评分标准评估骨折愈合程度,并于各时间点取材组织学(n=6)染色并进行半定量分析比较两组标本VEGF、CD34、BMP-2及TGF-β1的表达.结果 X线片显示术后4、6、8周实验组骨痂量均较对照组好,实验组X线Lane-Sandhu评分[(5.33±0.54)、(7.00±0.82)、(9.67±0.47)分]明显高于对照组[(3.67±0.15)、(5.67±0.44)、(7.08 ±0.32)分],差异均有统计学意义(P＜0.05);术后第4周实验组VEGF达到高峰,平均吸光度值(532.50±13.50)高于对照组(319.18±12.09),差异有统计学意义(P＜0.05);术后第6周BMP-2达到高峰,实验组平均吸光度值(571.79±7.97)高于对照组(296.10±12.99),差异有统计学意义(P＜0.01);CD34在术后第4周达到高峰,实验组平均吸光度值(451.69±40.94)高于对照组(252.65±14.49),差异有统计学意义(P ＜0.01);TGF-β1在术后第4周达到高峰,实验组平均吸光度值(433.78±3.41)高于对照组(249.41±12.03),差异有统计学意义(P＜0.01),且CD34和TGF-β1在术后第6、8周两组差异无统计学意义.结论 体外轴向应力刺激治疗可以促进兔胫骨骨折部位VEGF、CD34、BMP-2和TGF-β1的表达,促进骨断端血管化及刺激成骨,从而促进骨折愈合.
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下颌骨骨痂组织中TGF-β1及BMP-2的表达及意义
目的:观察转化生长因子β1(TGF-β1)、骨形成蛋白-2(BMP-2)在人下颌骨骨折骨痂组织中的表达及量的变化.方法:在下颌骨骨折的手术患者中,收集术中去除的骨断端间骨痂组织30例,以2例方颌畸形患者术中切取的下颌角骨块作正常对照;利用SABC免疫组织化学方法检测骨折后不同时期骨痂组织及正常下颌角骨组织中TGF-β11、BMP-2的表达.结果:TGF-β1、BMP-2在正常骨组织中没有表达;在不同时期骨痂组织中均有表达,TGF-β1在骨折后第1周到第3周表达量缓慢增加,至第3周时达到高峰,随着时间推移,表达量逐渐下降;BMP-2在骨折后前2周表达呈增加趋势,第2周达到高峰,以后随时间推移,表达量缓慢下降.结论:①BMP-2可能是启动骨折修复的因子之一;②TGF-β1可能是骨折修复的另一条信号通路;③BMP-2与TGF-β1在骨折愈合过程中可能存在协同作用.
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BMP-2、bFGF基因转染的大鼠骨髓干细胞与牙胚细胞在体外混合培养对成牙基因的影响
目的:观察骨形态发生蛋白-2和(或)碱性成纤维细胞生长因子转染的大鼠骨髓干细胞(BMSCs)和牙胚细胞在体外混合培养对牙本质基质蛋白1、成釉蛋白、Ⅰ型胶原蛋白、同源异型盒基因1的影响.方法:采用实时定量PCR和Western blot的方法,检测BMP-2和(或)bFGF对成牙基因的影响.结果:对照组、bFGF组、BMP-2组、bFGF/BMP-2组四组间,AMBN、COLLAGEN-Ⅰ、DLX1、DMP1基因在mRNA和蛋白水平表达量上存在明显差异(P＜0.05).结论:BMP2和bFGF有一定的协同交互作用,BMP2/bFGF/BMSCs/牙胚细胞可以作为构建组织工程牙的种子细胞.
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BMP-2、bFGF在牵引成骨中的表达及意义
目的:通过两种不同术式的比较,研究骨形态发生蛋白-2(BMP-2)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的表达水平和成骨的关系,探讨牵引成骨的成骨机制.方法:28只狗随机分为牵引成骨组和直接延长组各12只及正常对照组4只,用免疫组化染色方法观察比较BMP-2、bFGF在两组牵引第6天、固定2周、固定8周时的表达情况.结果:两组在牵引第6天骨断端附近的新生编织骨边缘基质及周缘的活跃的成骨细胞、骨膜下及牵开区增生活跃的间充质细胞、成纤维细胞、胶原纤维基质均可见BMP-2、bFGF强阳性的染色,染色平均灰度比较均无统计学差异(P>0.05);牵引后固定2周,牵引组新生编织骨边缘的成骨细胞、软骨细胞、牵开区纤维结缔组织仍可见BMP-2、bFGF阳性染色,而直接延长组的BMP-2、bFGF在牵开区的染色强度明显降低(P<0.05);牵引后固定8周,BMP-2、bFGF在牵引组和直接延长组的组织中的染色强度均明显减弱,染色灰度比较均无统计学差异(P>0.05).结论:在下颌骨牵引成骨过程中,在机械的牵引力和微创伤等多种因素刺激下,局部牵开区BMP-2和bFGF持续高表达.两种生长因子可能共同参与促进了牵开区大量新骨的形成.
关键词： 牵引成骨 骨形态发生蛋白-2 碱性成纤维细胞生长因子 表达 -
三七总皂苷在兔牙齿移动过程中对牙周组织中破骨细胞及BMP-2表达的影响
目的:通过建立兔子牙移动的模型,研究三七总皂苷(panax notoginseng saponin,PNS)对正牙过程中牙槽骨改建及牙周组织中BMP-2表达的影响.方法:选取32只3～6月龄的新西兰白兔随机分成PNS组和生理盐水(normal saline,NS)组,通过肌肉注射血栓通[40 mg/kg·d-1]和NS.每组各16只,又分为7、14、21、28d4个亚组,分别于正畸牙移动1周、2周、3周、4周4个时间点分别处死各组动物取材,使用苏木精-伊红(HE)染色观察牙周膜及牙槽骨的变化,抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色检测破骨细胞,免疫组织化学染色(immunohistochemical,IHC)检测骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)的表达变化.结果:PNS组破骨细胞数目在第1周达到高峰,显著高于NS组(P＜0.05),然后持续下降,至第3周时下降至NS组水平,无统计学差别.从第1周开始,PNS组BMP-2的表达高于NS组(P＜0.05),在第2周达到高峰,显著高于对照组(P＜0.05),然后持续下降,第3周、第4周时PNS组与NS组相比无显著差异.结论:三七总皂苷能在给药初始时期使牙周组织中破骨细胞的数量得到提升,还能提高牙周组织中BMP-2抗体蛋白的表达量,提示PNS在正畸牙齿移动的骨组织改建过程中具有积极作用.
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载药电纺纤维膜防治双膦酸盐相关性颌骨坏死的研究
目的:通过构建载BMP-2纤维膜,探究其是否能有效防治双膦酸盐相关性颌骨坏死(bisphosphonate-related osteonecrosis of jaw,BRONJ).方法:通过对大鼠腹腔注射唑来膦酸结合拔牙诱导BRONJ的发生,运用Micro-CT及组织学检测评价建模效果;制备载BMP-2生物膜并检测其性质,将其植入接受长期双膦酸盐注射的大鼠下颌拔牙创中,检测其防治效果.结果:腹腔注射唑来膦酸结合拔牙法构建BRONJ成功率高达70%;构建的纤维膜能稳定降解并释放BMP-2.拔牙创置入载BMP-2纤维膜实验组大鼠骨重建,破骨细胞功能及创周黏膜愈合较佳.结论:通过对大鼠腹腔注射唑来膦酸并拔牙,能有效构建BRONJ动物模型;载BMP-2电纺纤维膜置入拔牙创中,能够加强骨重建能力,促进创周黏膜恢复并减少BRONJ发病率.
关键词： 双膦酸盐相关性骨坏死 电纺纤维膜 骨形态发生蛋白-2 -
BMP-2在乳腺癌组织中的表达及其与OPN、ON表达和微钙化的关系
目的 探讨乳腺癌组织中骨形态发生蛋白-2(BMP-2)在微钙化形成中的作用. 资料与方法 搜集钼靶X线检查及临床资料齐全的61例浸润性乳腺癌组织标本,依据钼靶片中癌瘤微钙化征象进行描述并分组.应用SP免疫组织化学技术检测BMP-2的表达,并分析其与骨桥蛋白(OPN)、骨连接蛋白(ON)表达以及微钙化的关系. 结果 BMP-2阳性表达率为65.57%(40/61).钙化组与无钙化组比较,BMP-2表达差异有统计学意义(χ2=5.528,P＜0.05).BMP-2阳性表达与OPN的高表达存在着显著的正相关关系(r=0.627,P＜0.05),与ON间无明显相关性(r=-0.067,P＞0.05). 结论 乳腺癌组织中BMP-2的表达与OPN的表达及微钙化的出现具有密切关系,BMP-2在乳腺癌微钙化形成中可能发挥了重要调控作用.
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补肾活血方对兔膝骨关节炎病变软骨BMP-2/gremlin表达的影响
目的 观察家兔膝骨关节炎模型关节软骨BMP-2/gremlin的表达情况及补肾活血方的调节作用.方法 48只实验用家兔随机分为治疗组、阳性对照组和阴性对照组,每组16只.治疗组和阳性对照组行右膝关节前交叉韧带横断手术(ACLT)造模,阴性对照组行右膝模拟造模手术.治疗组造模后给予补肾活血方灌胃治疗,阳性对照组造模后给予制动干预,阴性对照组行模拟手术后给予生理盐水灌胃.在术后第4、8周各组各处死8只家兔,观察膝关节损伤软骨肉眼改变,取组织标本经石蜡包埋切片后行常规苏木精-伊红染色观察软骨组织的病理变化,Real time PCR法及免疫组化法检测BMP-2、gremlin的表达.结果 补肾活血方可减轻兔膝骨关节炎模型关节软骨形态学损害.治疗组和阳性对照组第4、8周软骨中BMP-2及gremlin表达量明显高于阴性对照组(P＜0.05),且阳性对照组较治疗组gremlin同期表达增多(P＜0.05);第8周阳性对照组标本中BMP-2表达持续稳定,但gremlin表达水平较第4周明显上升(P＜0.05).结论补肾活血方对兔ACLT模型关节软骨中修复保护性细胞因子BMP-2的表达有上调作用,同时抑制BMP-2拮抗因子gremlin过度表达,对骨关节炎修复有良好的调节作用.
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淫羊藿苷对体外培养的成骨细胞骨形态发生蛋白-2表达的影响
目的:检测不同浓度淫羊藿苷(ICA)对体外培养的成骨细胞MC3T3-E1中骨形态发生蛋白-2(BMP-2)表达的影响.方法:分别用10、20、40 ng/mL的淫羊藿苷作用MC3T3-E1细胞,观察细胞生长情况;MTT法测绘细胞生长曲线;FCM法测定细胞生长周期;免疫细胞化学方法和Western bloting测定细胞BMP-2蛋白表达情况.结果:淫羊藿苷组可使细胞的生长曲线明显上移,S期细胞百分率升高,G1期细胞百分率减少以及BMP-2蛋白表达量增加,其中20 ng/mL组作用更为显著,各组间比较有显著差异(P﹤0.01).结论:淫羊藿苷可以促进成骨细胞增殖,增加成骨细胞BMP-2的表达.
