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高血糖对胸椎黄韧带骨化过程中BMP-2和TGF-β表达的影响
目的 观察高糖状态下原代培养的胸椎黄韧带细胞骨化相关因子骨形态发生蛋白-2(BMP-2)和转化生长因子β(TGF-β)的表达情况,探讨高血糖对胸椎黄韧带细胞骨化的影响.方法 使用胸椎黄韧带骨化患者和胸椎骨折患者的黄韧带进行原代培养,分为骨化对照组、骨化高糖组以及骨折对照组、骨折高糖组,在光镜下观察细胞生长状况,免疫细胞化学及Western blot方法检测骨化相关因子BMP-2和TGF-β的表达情况.结果 光镜下黄韧带细胞均匀分布,呈长梭形、多角形,胞质丰富,细胞核居中.骨折对照组细胞BMP-2和TGF-β表达量很少,骨化对照组BMP-2和TGF-β的表达明显增加(P＜0.05),高糖培养后骨折高糖组及骨化高糖组BMP-2和TGF-β的表达均明显增加(P＜0.01),而且骨化高糖组的表达量显著高于骨折高糖组(P＜0.01).结论 高血糖促进了胸椎黄韧带细胞骨化相关因子BMP-2和TGF-β的表达,糖尿病/高血糖是胸椎黄韧带骨化的危险因素.
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bmp-2和vegf165共表达基因修饰的BMSCs对腱骨界面愈合的研究
目的 探讨骨形态发生蛋白-2(bmp-2)和血管内皮生长因子165(vegf165)共表达基因修饰的骨髓间充质干细胞(BMSCs)对兔前交叉韧带重建术后腱骨界面的组织形态学和生物力学的影响.方法 将66只大白兔,随机分成实验组、对照组及正常组.实验组术后在腱骨界面注入经慢病毒转染稳定表达bmp-2和vegf165的BMSCs和纤维蛋白胶(FG),对照组腱骨界面注入BMSCs和FG,分别在术后第3、8和12周进行组织学观察和生物力学检测.结果 组织学病理显示,实验组新生血管和成纤维细胞浸润高于对照组,并在术后第12周形成典型的4层直接止点结构,其组织愈合情况优于同期对照组.生物力学显示相同时间点实验组大载负荷明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 bmp-2和vegf165共表达基因修饰的BMSCs对腱骨界面愈合有促进作用.
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TGF-β1和BMP-2对终板软骨细胞增殖和糖胺多糖合成的影响
目的:探讨转化生长因子β1(TGF-β1)和骨形态发生蛋白2(BMP-2)对体外培养大鼠终板软骨细胞增殖和合成糖胺多糖的影响.方法:取原代大鼠终板软骨细胞,体外培养传代至第二代,常规培养液培养组为对照组,培养液中加入TGF-β1及BMP-2作用于软骨细胞为实验组,观察细胞的生长情况,测定终板软骨细胞增殖和糖胺多糖(GAG)含量的变化,分析两种因子对软骨细胞增殖行为和合成糖胺多糖的影响.结果:单独应用TGF-β1与BMP-2刺激,终板软骨细胞增殖能力及糖胺多糖合成较对照组增高,而TGF-β1与BMP-2联合使用能够更加明显地促进终板软骨细胞增殖能力及糖胺多糖的合成.结论:一定浓度的TGF-β1与BMP-2联合使用,能有效促进体外培养的软骨细胞增殖和合成GAG基质的能力.
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骨形态发生蛋白2基因转染的兔骨髓间充质干细胞复合聚乳酸-聚己内酯支架体外构建载基因仿生骨的实验研究
[目的] 构建聚乳酸-聚己内酯(PLA/PCL)吸附骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)基因的聚乙二醇(PEG)纳米复合物形成生物可降解仿生骨材料,接种兔骨髓间充质干细胞(rabbit bone mes-enchymal stem cells,rBMSCs),检测BMP-2基因的转染情况及其对细胞增殖、分化的影响.[方法] 通过溶液共混法制备PLA/PCL载基因仿生骨,接种rBMSCs细胞于仿生骨之上,培养48 h；Real-time PCR检测转染后细胞BMP-2及骨钙素mRNA表达水平；应用Western Blot及免疫组化检测rBMSCs转染后BMP-2蛋白表达；免疫荧光检测rBMSCs细胞Ⅰ型胶原蛋白表达；ELISA检测转染后细胞培养上清中分泌BMP-2浓度,同时检测细胞内碱性磷酸酶活性,从而分析细胞分化情况；流式细胞检测转染BMP-2后细胞周期的变化.[结果] 以未转染细胞作为对照,免疫组化表明转染后细胞内BMP-2表达量明显上调(P＜0.05)；Real-time PCR检测结果表明BMP-2与骨钙素mR-NA表达显著增加(P＜0.05)；同时Western Blot结果同免疫组化结果相似,BMP-2也有明显上调(P＜0.01)；免疫荧光检测Ⅰ型胶原表达量显著上升(P＜0.01)；ELISA检测细胞培养上清中BMP-2分泌量也有增加(P＜0.05)；碱性磷酸酶较对照组相比活性显著增强(P＜0.05),而流式细胞检测S期细胞无明显变化(P＞0.05).[结论] 载基因仿生骨具有稳定而安全的转染性能,其转染后对rBMSCs细胞的分化效果是明显的,而对于细胞周期变化的影响并不显著.
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胶原蛋白膜包裹藻酸钙凝胶/骨髓基质细胞/BMP-2复合体修复兔桡骨缺损
[目的]探讨在外源性生长因子(BMP -2)作用下,使用胶原蛋白膜包裹经体外培养扩增的骨髓基质干细胞(BMSCs)与藻酸钙凝胶形成的复合物修复骨缺损的可行性.[方法]选用成年新西兰白兔36只.手术造成两侧桡骨标准缺损后,左侧植入复合体,右侧空白对照.取自体BMSCs,经体外分离培养扩增后,与BMP -2、藻酸钙凝胶及胶原蛋白膜形成复合体修复骨缺损,于2、4、8、12周时行大体、X线片、免疫组织化学观察.[结果]整个过程中可见实验组缺损区新生骨组织增殖明显、持续时间较长,且无过量的结缔组织生长；X线早期可见连续性骨痂通过缺损区,分布均匀；免疫组织化学可见多个成骨中心,骨小梁排列有序,成熟骨替代完全,BMP分布持续时间长,且在新骨组织中分布范围大.[结论]复合体能修复骨缺损,并且能够阻挡周围软组织进入缺损区,为新骨生长提供空间；同时作为BMP的载体,能减少外溢,提高其疗效.
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非创伤性股骨头坏死股骨头局部bFGF与BMP-2 mRNA表达的研究
[目的]探讨非创伤性股骨头坏死(nontraumatic osteonecrosis of femoral head ,NONFH)股骨头局部碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)与骨形态发生蛋白-2(bone morphogenic proteins,BMP-2)表达的变化情况及其意义.[方法]收集经全髋关节置换术取下的NONFH的股骨头标本30例作为实验组,新鲜股骨颈骨折标本10例作为对照组.于坏死区、健存区取材,经固定、脱钙后,制成切片,光镜观察其病理变化,并运用原位杂交技术分别对其bFGF与BMP-2的表达情况进行检测.[结果]实验组组织结构紊乱,破碎,骨小梁稀疏、不完整,有大量的空骨陷窝,而对照组骨小梁相对较完整、排列整齐,骨小梁中的骨细胞清晰可见,偶见空骨陷窝.实验组中bFGF与BMP-2的阳性表达强度及面积均明显低于对照组,结果有统计学意义(P＜0.05).[结论]NONFH股骨头局部bFGF与BMP-2表达的降低,极有可能是导致其自身修复能力不足的重要原因.增加股骨头局部bFGF与BMP-2的表达可能有助于股骨头缺血坏死的修复.
关键词： 非创伤性股骨头坏死 碱性成纤维细胞生长因子 骨形态发生蛋白-2 表达 -
大段同种异体骨移植复合BMP2和TGF-β2对兔桡骨中段骨缺损愈合的影响
[目的]探讨外源性TGF-β2和BMP2复合同种异体骨对骨缺损愈合的作用.[方法]用兔桡骨骨缺损模型,在骨缺损局部单独或联合应用TGF-β2和BMP2与同种异体骨复合,A组:同种异体骨与BMP2复合;B组(对照组):自体骨;C组:同种异体骨与TGF-β2复合;D组:同种异体骨与TGF-β2、BMP2复合;通过不同时间X线片、生物力学、骨密度和骨痂钙含量的检测对骨缺损愈合情况进行评估.[结果]B组的骨痂钙含量、骨缺损愈合情况和愈合后的力学强度明显优于A、C、D组(P＜0.01),D组优于A、C组(P＜0.05),C组优于A组(P＜0.01).[结论]TGF-β2和BMP2在骨缺损愈合过程中均发挥了重要的作用.在兔骨缺损周围局部应用外源性TGF-β2和BMP2与同种异体骨复合,可明显促进骨缺损愈合,使骨痂量增加,增强骨折愈合后的力学强度.并且在骨折愈合时间上接近自体骨移植骨折愈合的时间,从而在临床上缩短了需要大段植骨患者治疗时间,减轻了患者痛苦.单用TGF-β2的作用强于BMP2.它们联合应用时,这种作用进一步增强,在促进骨缺损愈合方面具有协同作用.同时也为异体骨复合何种因子及因子的剂量提供可靠的参考指标.
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黄韧带骨化超微结构的实验研究
目的:研究实验性黄韧带骨化的超微结构演变特点.材料和方法:将重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)诱发的骨化过程不同时期的动物黄韧带组织行超薄切片,用电镜进行观察.结果:rhBMP-2植入2周,黄韧带内胶原纤维增生,弹力纤维减少、断裂,成纤维细胞代谢旺盛,其间可见散在的不成熟软骨细胞、2种细胞胞浆中均可见大量的粗面内质网和线粒体;4周:黄韧带内软骨细胞明显增多、分化成熟,胞浆内可见丰富的粗面内质网和核糖体、线粒体,靠近细胞分泌端的基质陷窝中可见数量不等的电子致密小体,基质中胶原纤维大量增生;6周:成熟的软骨细胞体积增大,呈圆形,胞浆内富含线粒体,并可见线粒体与细胞膜融合形成分泌小泡,细胞周围基质中可见大量的电子致密小体,尚可见数量不等的新生弹力纤维;8周:肥大的软骨细胞退变、坏死,表现为细胞核皱缩,细胞膜及核膜广泛碎裂,残留物附近出现数量更多的电子致密小体;尚可观察到幼稚骨细胞和骨细胞的存在.结论:黄韧带骨化过程中软骨细胞来源于成纤维细胞的软骨化生.
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BMP-2 mRNA在实验性黄韧带骨化组织中的表达及其意义
目的:从分子水平研究BMP-2在黄韧带骨化过程中的作用机理.方法:以rhBMP-2诱导的黄韧带骨化(实验组,O组)为研究对象,分别于诱导物植入后2、4、6周取实验节段黄韧带,提取总RNA,采用Dot blot和Northern blot方法检测其BMP-2 mRNA的表达程度,设立PBS溶液/明胶海绵植入为实验对照组(EC组),未手术动物为阴性对照组(N组),pSBMP-2质粒为阳性对照组(P组).结果:Dot blot和Northern bloe放射自显影图像显示:rhBMP-2植入2周时,黄韧带内BMP-2 mRNA表达程度高,然后逐渐下降,到6周时明显减弱,与病理组织学研究中所见的韧带组织中成纤维细胞软骨化生的活跃程度呈正相关.实验对照组和阴性对照组均未见BMP-2 mRNA表达.图像灰度扫描示:02组、04组和06组BMP-2 mRNA的表达程度分别为0.615±0.1484、0.443±0.0982、0.232±0.0749.结论:rhBMP-2诱导的骨化过程中黄韧带组织内存在不同程度BMP-2 mRNA的表达,其表达水平与成纤维细胞软骨化生的活跃程度呈正相关;内源性BMP-2可能参与黄韧带骨化的启动和持续发展.
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BMP-2对培养兔关节软骨细胞代谢的影响
目的：探讨BMP-2对体外培养兔关节软骨细胞 代谢影响进而了解其在关节软骨损伤修复中的作用。方法:利用荧光分光光度计，721-型分 光光度计，3S-Na2SO4同位素掺入法等测定DNA含量、胶原和蛋白多糖的合成。结果: BMP-2既能促进原代及反分化关节软骨细胞DNA合成又能增加羟脯氨酸的含量和35S-Na 2SO4掺入。结论:BMP-2能促进软骨细胞的增殖和维持其表型，还可使已丢失软骨表型 的反分化软骨细胞有向恢复软骨表型方向分化的可能。
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siRNA抑制转化生长因子-β1对小鼠黄韧带骨化的影响
目的 运用RNA干扰(RNAi)技术抑制转化生长因子-β1(TGF-β1)在小鼠黄韧带成纤维细胞中的表达,探讨其对脊柱黄韧带骨化的影响.方法 培养小鼠黄韧带成纤维细胞,经人重组骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)诱导骨化,对骨化成功的黄韧带细胞(成骨细胞)进行形态学观察,并对其进行碱性磷酸酶(ALP)染色及钙结节茜素红染色鉴定;构建靶向TGF-β1基因的小干扰RNA(siRNA)真核表达载体(siRNA-pSilencer2.0U6-TGFβ1)并转染成骨细胞,分为3组:真核表达载体转染后细胞为实验组,空载体转染后细胞为阴性对照组,未转染细胞为空白对照组.应用免疫荧光技术检测转染前后细胞中TGF-β1、BMP-2的表达;RT-PCR检测TGF-β1 mRNA在细胞内表达变化;Western blotting检测TGF-β1和BMP-2蛋白在细胞内表达变化;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞中ALP、骨钙素(OC)水平的变化.结果 经诱导骨化成功后,小鼠黄韧带细胞形态学观察可见细胞ALP染色、钙结节茜素红染色均呈阳性,具有典型成骨细胞生物学特征.构建的siRNA表达载体对细胞转染后,免疫荧光检测显示TGF-β1和BMP-2荧光强度下降;RT-PCR检测显示实验组较阴性对照组和空白对照组TGF-β1 mRNA表达分别下降41.94％、47.82％,差异有统计学意义(P＜0.01);Western blotting检测显示实验组较阴性对照组和空白对照组TGF-β1/β-action蛋白表达比值分别下降35.88％、44.75％,差异有统计学意义(P＜0.01);BMP-2/β-action蛋白表达比值分别下降81.79％、86.06％,差异有统计学意义(P ＜0.01);ELISA检测显示实验组较阴性对照组和空白对照组ALP分别下降24.14％、32.30％,差异有统计学意义(P＜0.01);OC分别下降17.01％、21.63％,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 构建靶向TGF-β1基因的siRNA真核表达载体能够有效抑制成骨细胞中TGF-β1以及内源性BMP-2表达,达到抑制脊柱黄韧带骨化的目的.
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骨形态发生蛋白-2对神经干细胞增殖和分化的影响
目的 探讨原代小鼠神经干细胞(NSCs)的培养方法及骨形态发生蛋白-2(BMP-2)对NSCs增殖和分化的影响.方法 采用机械吹打结合尼龙膜滤过的方法,从胚胎12.5d的S129小鼠大脑分离NSCs并培养;用巢蛋白(nestin)免疫荧光染色鉴定NSCs;将NSCs分为对照组和BMP-2处理组(BMP-2终浓度10 ng/mL),培养后进行BrdU染色和微管相关蛋白2(MAP2)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光染色.结果 ①镜下观察原代培养的NSCs,胞体圆形,单个或成对存在,3～5d后形成神经球,神经球90％以上细胞为nestin阳性,台盼蓝染色表明活细胞数大于95％.②BMP-2处理组BrdU阳性细胞比率明显低于对照组(P＜0.05).③BMP-2处理组MAP2阳性细胞比率显著低于对照组(P＜0.05),而GFAP阳性细胞比率显著高于对照组(P＜0.05).结论 ①运用机械吹打结合尼龙膜滤过的方法可以得到存活率高的原代NSCs;②10 ng/mL BMP-2可抑制NSCs增殖及其向神经元方向分化,促进其向神经胶质细胞方向分化.
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体外诱导兔骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化的实验研究
目的 探讨兔骨髓间充质干细胞(bone marrow derived mesenchymal stem cells,BMSCs)在特定培养条件下向软骨细胞定向分化的情况.方法 密度梯度离心法分离兔 BMSCs,在体外培养扩增后用含有骨形态发生蛋白(bone magnetic protein,BMP)-2的条件培养液诱导其在体外单层培养模式下向软骨细胞分化.采用甲苯胺蓝染色、Masson染色、免疫组织化学染色、阿利新蓝比色法测定糖胺聚(glycosaminoglyean,GAG)的含量检测BMSCs分化情况.统计学分析比较第2、4、7代(P2、P4、P7)BMSCs诱导后增殖能力及向软骨细胞分化能力的变化.结果 定向诱导后BMSCs表现出软骨细胞的特性.P2、P4间的细胞增殖能力和成软骨细胞分化能力比较差异无统计学意义(P>0.05);P7与P2、P4相比,细胞增殖能力和成软骨细胞分化能力均降低,差异有统计学意义(P<0.01).结论 BMP-2能诱导兔BMSCs在体外单层培养模式下向软骨细胞分化;细胞传代对BMSCs向软骨细胞分化有重要影响.
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人BMP-2体外定向诱导犬BMSCs向成骨方向分化的实验研究
目的：通过将犬骨髓间充质干细胞（ bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs）建立体外培养体系，运用人骨形态发生蛋白-2（bone morphogenetic protein-2，BMP-2）体外定向诱导分化为成骨细胞，为后期建立骨组织工程提供种子细胞。方法提取比格犬BMSCs，全骨髓贴壁法结合密度梯度离心法行体外分离培养，每日观察细胞生长变化。将生长形态良好的第3代BMSCs分成两组，实验组加入200 ng/ml人BMP-2的含血清培养基对其进行成骨诱导培养，对照组只用含血清的完全培养基培养，于诱导3周后行碱性磷酸酶染色、诱导4周后行茜素红染色与Von-Kossa染色以鉴定分化的成骨细胞。结果诱导3周后实验组碱性磷酸酶染色示细胞胞质内黑色颗粒阳性表达，对照组为阴性；诱导4周后实验组茜素红染色以及Von-Kossa染色均呈钙结节阳性表达，对照组均为阴性。实验组染色结果都表达成骨细胞的特性。结论体外分离培养的比格犬BMSCs，在诱导剂人BMP-2的作用下可以向成骨细胞定向分化。
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脊柱融合术患者BMP-2基因突变的检测及其意义
目的 检测脊柱融合术患者的骨形态发生蛋白-2(BMP-2)基因突变状况.方法 从80例行脊柱融合术患者的术前空腹静脉血中提取DNA,采用聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)及测序技术,检测其BMP-2基因部分编码区及其侧翼序列的突变.结果 脊柱融合术患者的外周静脉血中BMP-2基因有突变:TCG→GCG,TCA→TCG,并引起相应多肽的结构改变.结论 脊柱融合术患者中存在BMP-2基因突变及多态性分布,并有可能影响植骨融合效果.
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rhBMP-2/卵磷脂复合物治疗股骨头坏死的实验研究
目的观察人重组骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)/卵磷脂复合材料修复早期兔股骨头坏死(ANFH)病灶清除后缺损区的成骨能力,为临床治疗股骨头坏死提供新方法.方法采用液氮冷冻制备兔双侧股骨头坏死动物模型,实验侧植入rhBMP-2/卵磷脂复合材料,对照侧植入单纯卵磷脂片;3、6、9周时取股骨头标本进行组织学检查及碱性磷酸酶(ALP)活性、Ca2+测定,评价rhBMP-2/卵磷脂复合材料成骨效果.结果3周时实验侧缺损区可见成骨细胞和骨细胞,9周有大量的骨细胞和成骨细胞,对照侧仅见纤维组织充填;ALP活性及Ca2+含量实验侧均高于对照侧.结论rhBMP-2/卵磷脂复合材料具有良好的诱导成骨活性,生物相容性好,可降解,能够有效的提高ANFH的骨修复能力.
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BMP-2体外诱导小鼠皮肤成纤维细胞向成骨细胞分化的可行性探讨
目的 探讨骨形态发生蛋白-2(BMP-2)体外诱导小鼠皮肤成纤维细胞向成骨细胞分化的可行性.方法培养新生小鼠皮肤成纤维细胞,应用BMP-2诱导骨化,观察细胞形态变化,并应用茜素红染色和BMP免疫荧光进行细胞鉴定.结果应用含有BMP-2细胞培养液培养成纤维细胞,可见细胞形态学逐渐发生变化,具有成骨细胞形态学相关特征,茜素红染色阳性,具有成骨细胞生物学特性.茜素红染色半定量分析结果:含有BMP-2细胞培养液培养6 d后茜素红染色测定染色面积比例为0.3％;培养8 d后染色面积比例为0.75％;培养10 d后染色面积比例为2.42％;培养12 d后染色面积比例为17.61％.培养12 d后茜素红染色面积与其他三个时间点比较,差异有统计学意义(P均<0.05).免疫荧光显示,含有BMP-2细胞培养液培养12 d后细胞能够有效表达BMP-2.结论BMP-2可诱导成纤维细胞在体外分化为成骨细胞.
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补肾活血中药对膝骨关节炎患者经典Wnt/β-catenin通路调控作用的临床研究
目的:观察补肾活血中药治疗膝骨关节炎的临床疗效及其作用机制.方法:纳入研究的膝骨关节炎患者30例,采用口服补肾活血中药治疗.比较治疗前及治疗后12周,膝骨关节炎患者的JOA评分和WOMAC评分;并采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测Wnt-5a、β-catenin、BMP-2 mRNA表达的变化情况.结果:治疗后12周,JOA评分较治疗前明显提高[(62.01±11.79)分,(80.90±6.90)分,t=4.767,P=0.001];WOMAC评分较治疗前明显降低[(43.20±10.89)分,(19.20±5.43)分,t=4.535,P=0.002];Wnt-5a、β-catenin、BMP-2 mRNA表达量较治疗前均降低(2.74 ±0.69,1.44±0.29,t=4.874,P=0.001;3.21±1.13,1.45±0.32,=5.574,P=0.001;3.55±1.38,1.33±0.53,t=4.235,P=0.003).结论:采用补肾活血中药治疗膝骨关节炎,能改善膝关节功能,缓解患者疼痛;降低Wnt-5a、β-catenin、BMP-2 mRNA表达量,这可能是补肾活血中药防治骨关节炎的可能作用机制.
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肩峰下撞击综合征肩峰下滑囊骨形态发生蛋白-2及7表达及意义
目的 探讨骨形态发生蛋白-2及7在肩峰下撞击综合征患者肩峰下滑囊中表达及临床意义.方法 肩峰下撞击综合征患者12例为观察组,非肩峰下撞击综合征肱骨外科颈骨折10例为对照组,观察组采用肩关节镜微创手术方式取肩峰下滑囊标本,对照组采取开放手术方式取标本,采用ELISA法检测肩峰下滑囊骨形态发生蛋白-2及7含量.结果 观察组骨形态发生蛋白-2及7表达水平(760.36±98.61) pg/mL及(620.34±101.43) pg/mL明显高于对照组(230.35±97.30)pg/mL及(320.42±98.51)pg/mL(P＜0.05).结论 肩峰下撞击综合征肩峰下滑囊骨形态发生蛋白-2及-7表达水平明显增加,可能与肩峰下骨赘、肩袖退变等肩峰下间隙内病理变化有关.
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低载荷机械振动对小鼠MC3T3-E1细胞增殖的影响
目的 探讨低载荷机械振动对小鼠MC3T3-E1细胞增殖及成骨相关信号分子基因蛋白表达的影响.方法 小鼠MC3T3-E1细胞采用35 Hz、加速度0.25g的低载荷机械振动装置作用,按每天振动时间分为0 min组,15 min组,30 min组和60 min组,连续7d.各组采用MTT增殖实验检测小鼠MC3T3-E1细胞的细胞增殖活性,采用反转录-PCR检测成骨相关信号分子基因转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)mRNA、骨形态发生蛋白-2(bonemorphogenetic protein-2,BMP-2)mRNA、Runt相关转录因子(runt-related transcription factor 2,Runx2) mRNA表达情况,采用Western blot法检测TGF-β1、Runx2和磷酸化细胞外信号调节激酶(phosphorylated extracellularsignal-regulated kinase,p-ERK)蛋白表达情况.结果 15 min组、30 min组细胞增殖活性(0.553±0.041、0.596±0.078)、TGF-β1 mRNA (5.022±0.223、4.526±0.235)和蛋白(0.986±0.037、1.216±0.054) 、BMP-2 mRNA(3.876±0.230、4.329±0.198)、Runx2 mRNA (6.014±0.330、7.977±0.356)和蛋白(0.564±0.017、0.794±0.044)、p-ERK蛋白(0.577±0.021、0.946±0.054)表达水平均明显高于0 min组(增殖活性:0.292±0.025,TGF-β1 mRNA和蛋白:1.012±0.038、0.438±0.012,BMP-2 mRNA:1.014±0.032,Runx2 mRNA和蛋白:1.022±0.028、0.215±0.008,p-ERK蛋白:0.203±0.011)和60 min组(增殖活性:0.313±0.037,TGF-β1mRNA和蛋白:1.239±0.038、0.578±0.072,BMP2 mRNA:0.987±0.028,Runx2 mRNA和蛋白:1.230±0.026、0.262±0.029,p ERK蛋白:0.265±0.009)(P＜0.05),60 min组与0 min组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 低载荷机械振动可提高小鼠MC3T3-E1细胞的增殖能力,上调成骨相关信号分子TGF-β1、BMP-2、Runx2及p-ERK的表达.
