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四妙勇安汤含药血清对高糖/高胰岛素诱导的兔VSMC增殖的影响及其机制
目的:研究四妙勇安汤含药血清对高糖/高胰岛素诱导的兔血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响及其作用机制.方法:9只新西兰大耳白兔随机分为3组,每组3只,分别给予蒸馏水10 mL/次,2次/日;辛伐他汀5 mg·kg-1,1次/日;四妙勇安汤按生药量11.25 g·kg-1,2次/日,连续3d,血清药理学方法制备含药血清,高糖/高胰岛素(4 500 mg·L-1葡萄糖+100 U·L-1胰岛素)诱导兔VSMC增殖,实验分为空白组(10％ FBS的正常DMEM)、正常组(10％ FBS的正常DMEM +5％正常血清)、模型组(10％ FBS的高糖DMEM +100 U·L-1胰岛素+5％正常血清)、西药组(10％ FBS的高糖DMEM+ 100 U·L-1胰岛素+5％辛伐他汀血清)、中药组(10％ FBS的高糖DMEM+100 U·L-1胰岛素+5％四妙勇安汤血清),四唑盐比色(MTT)法检测细胞增殖,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测细胞培养上清液中白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子(TNF-α)的含量.结果:高糖/高胰岛素可诱导VSMC增殖,与正常组比较模型组MTT的吸光度(A)、细胞培养上清液IL-6,TNF-α的含量显著升高(P＜0.05);与模型组比较,中药组、西药组均能降低MTT的A、细胞培养上清液IL-6和TNF-α的含量(P＜0.05).结论:四妙勇安汤对高糖高胰岛素诱导的平滑肌细胞增殖有一定的抑制作用,其机制之一可能与减少IL-6和TNF-α分泌有关.
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亚麻酸和亚油酸对高糖高胰岛素环境下胃癌细胞生长的影响
目的 糖尿病患者特别是高胰岛素血症患者罹患癌症的风险大大高于正常人群,本研究探讨不饱和脂肪酸降低糖尿病患者罹患癌症风险作用.方法 以正常胃细胞(GES-1)和胃癌细胞(MGC、SGC)为研究对象,建立高糖高胰岛素环境,用多不饱和脂肪酸(polyunsaturated fatty acids,PUFAs)亚麻酸(α-linolenic acid,ALA)、亚油酸(linoleicacid,LA)分别干预48h,MTT (thiazolyl blue tetrazolium bromide)法测定细胞存活率,流式细胞仪分析凋亡情况,荧光法测定活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)含量,化学法测定超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量.结果 ALA使MGC、SGC的SOD活性分别下降9.5％和49％,MDA含量分别增加23倍和41倍,ROS在细胞内大量积累,分别是实验对照组的2.3倍和5.17倍,两株癌细胞均显著凋亡;LA使两种癌细胞的SOD活性分别下降18％和54.8％,MDA含量分别增加6倍和6.7倍,ROS分别是实验对照组的1.9倍和4.3倍,同样引起MGC、SGC的显著凋亡.结论 多不饱和脂肪酸能显著增加自由基的积累,降低清除自由基的能力,引起癌细胞的氧化损伤,进而引发凋亡,具有抑制胃癌细胞在高糖高胰岛素环境下生长的能力.
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海胆黄多糖SEP抑制高糖高胰岛素诱导的大鼠乳鼠心肌细胞肥大
目的：观察海胆黄多糖SEP对高糖高胰岛素诱导的肥大心肌细胞的影响,并初步探索其作用机制。方法利用高糖高胰岛素模拟糖尿病机体微环境诱导乳鼠心肌细胞肥大模型,选择不同剂量海胆黄多糖SEP分组给药处理后,采用Lowrys法检测心肌细胞蛋白质含量；利用计算机图像分析系统检测心肌细胞表面积变化；采用RT-PCR法检测给药前后心肌细胞ANF和PPAR-α mRNA表达变化。结果与正常对照组相比,高糖高胰岛素组蛋白含量、细胞表面积、ANF和PPAR-α mRNA表达均明显增加；与高糖高胰岛素组相比,低、中、高给药组剂量依赖性降低了高糖高胰岛素诱导的肥大心肌细胞的蛋白含量、细胞表面积、以及 ANF 和PPAR-α mRNA表达。结论 SEP对高糖高胰岛素诱导的乳鼠心肌细胞肥大具有一定的抑制作用,PPAR-α信号通路可能参与了这一过程。
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一氧化氮参与非诺贝特抗高糖高胰岛素诱导的心肌肥大
目的 研究过氧化物酶体增殖物激活受体-α(peroxisome proliferator-activated receptor-α, PPAR-α)特异性激动剂非诺贝特(fenofibrate, FF)在高糖高胰岛素(high glucose and insulin, HGI)所致心肌细胞肥大中的作用及其与一氧化氮(nitric oxide, NO)途径的关系.方法 乳鼠心肌细胞培养,以细胞表面积、蛋白含量和心房利钠因子mRNA表达为心肌肥大反映指标,观察FF对HGI致肥大作用的影响.利用Real-time PCR和Western blot方法检测mRNA及蛋白水平的表达;比色法和硝酸还原法分别检测细胞培养液中一氧化氮合酶(nitric oxide ynthase, NOS)的活性和NO的浓度.结果 FF浓度依赖性地抑制HGI诱导的心肌细胞肥大(P<0.01);FF 0.3 μmol·L-1明显上调HGI导致的PPAR-α以及内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase, eNOS)mRNA和蛋白表达的降低(P<0.05);并增加HGI降低的NOS活性和NO浓度(P<0.01).PPAR-α阻断剂MK 886可完全取消FF的上述作用(P<0.05).L-精氨酸的作用与FF相似(P<0.01).结论 FF可能通过激活PPAR-α,从而促进eNOS的表达及NO的释放,产生抗HGI诱导心肌肥大的作用.
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PPARβ在虎杖苷抗高糖高胰岛素诱导心肌肥大中的作用
目的：观察虎杖苷（polydatin，PD）对高糖高胰岛素[（high glucose and insulin，HGI）葡萄糖25．5 mmol·L －1＋胰岛素0.1μmol·L －1]诱导心肌肥大的影响，并探讨过氧化物酶体增殖物激活受体β（peroxisome proliferator activated receptors-β，PPARβ）、核转录因子κB （nuclear transcription factor-κB，NF-κB）及一氧化氮（nitric oxide，NO）相关信号通路在其中可能存在的作用。方法体外培养乳鼠心肌细胞，以细胞表面积、蛋白含量和心房利钠因子（atrial natriuretic factor，ANF）mRNA 表达作为心肌细胞肥大反应指标；利用qRT-PCR、Western blot 法分别检测 PPARβ、NF-κB p65及诱导型一氧化氮合酶（induced nitric oxide synthase，iNOS）mR-NA 及蛋白表达，硝酸还原酶法和分光光度法分别检测 NO含量和 NOS 活性。结果HGI 作用下，细胞表面积增大、总蛋白含量增加、ANF mRNA 表达升高（P ＜0.01），出现明显的心肌肥大；同时，PPARβ表达降低，而 NF-κB p65、iNOS 表达明显升高；总 NOS 活性及 NO 含量亦增加（P ＜0.01）。PD （0.1、1、10μmol·L －1）明显抑制 HGI 诱导的心肌细胞肥大（P ＜0.01）；并逆转 HGI 对 PPARβ及 NF-κB p65、iNOS 表达和总 NOS 活性、NO 含量的影响。PPARβ选择性阻断剂GSK0660可阻断 PD 对心肌肥大的保护，取消其上述作用（P＜0.05）。结论PD 对 HGI 诱导的心肌肥大具有保护作用，其机制可能与其上调 PPARβ表达，抑制 NF-κB-iNOS-NO信号通路激活有关。
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COX-2信号通路参与高糖高胰岛素诱导的心肌细胞肥大研究
目的 探讨环氧化酶-2(COX-2)在高糖高胰岛素诱导的心肌肥大中的作用.方法 用高糖高胰岛素刺激体外培养的乳鼠心肌细胞,以细胞表面积、蛋白含量和心房利钠因子(ANF)mRNA表达为心肌细胞肥大的反映指标,观察COX-2特异性抑制剂--赛来昔布对高糖高胰岛素致肥大作用的影响.利用real-time PCR检测细胞中mRNA的表达.结果 高糖高胰岛素诱导细胞表面积、总蛋白含量以及ANF、COX-2 mRNA的表达增加(P<0.05);赛来昔布可以抑制高糖高胰岛素诱导的心肌细胞肥大(P<0.05),同时抑制COX-2的表达(P<0.05).结论 赛来昔布可以通过抑制COX-2的表达,从而对抗高糖高胰岛素诱导的心肌肥大.
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NLRP1炎性体促进高糖高胰岛素诱导的肾小球系膜细胞焦亡
目的 研究含pyrin结构域NOD样受体家族1(NLRP1)炎性体对高糖高胰岛素诱导的肾小球系膜细胞焦亡(pyroptosis)的调控作用.方法 将培养的人肾小球系膜细胞(HRMC)分为4.5 mg/mL葡萄糖处理的高糖组和10 μg/mL胰岛素处理的高胰岛素组,分别处理0、12、24、48、72、96 h.在各时间点,采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞焦亡,实时定量PCR检测HRMC的NLRP1、白细胞介素1β前体(pro-IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TTNF-α)和胱天蛋白酶1前体(pro-caspase-1)的mRNA水平,Western blot法检测NLRP1、IL-1β、TNF-α、caspase-1的蛋白水平;高糖高胰岛素培养的HRMC中转染NLRP1小干涉RNA(siNLRP1),采用以上方法检测上述指标的变化情况.结果 高糖高胰岛素处理48 h后,HRMC增殖能力下降、焦亡细胞数目显著增加,NLRP1、pro-IL-1β、TNF-α和pro-caspase-1 mRNA和NLRP1、IL-1β、TNF-α和caspase-1蛋白水平均显著增加;siNLRP1下调HRMC中NLRP1水平后,高糖高胰岛素培养的HRMC细胞焦亡减少,IL-1β、TNF-αt和caspase-1表达显著降低.结论 高糖高胰岛素处理促进NLRP1的激活从而增加肾小球系膜细胞焦亡和炎症反应,下调NLRP1的表达可抑制高糖高胰岛素诱导的肾小球系膜细胞焦亡和炎症反应.
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替米沙坦改善高糖高胰岛素诱导的心肌成纤维细胞增殖及其机制
目的 研究替米沙坦对高糖高胰岛素共同诱导的心肌成纤维细胞增殖的影响及其机制.方法 培养Spargue Dawley(SD)大鼠乳鼠心肌成纤维细胞,随机分为对照组(5.5 mmol/L葡萄糖)、高糖高胰岛素组(25 mmol/L葡萄糖+1×10-7 mol/L胰岛素)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)抑制剂组(高糖高胰岛素+10μmol/L PD98059)和替米沙坦组(高糖高胰岛素+10μmol/L替米沙坦),培养48 h后,CCK8法检测细胞增殖;结晶紫染色法测定细胞数量;[3H]thymidine标记法测定细胞DNA合成;流式细胞仪分析细胞周期;ELISA试剂盒测定上清液中血管紧张素(Ang)Ⅱ、醛固酮(ALD)含量;Western blot测定磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白表达量.结果 与对照组相比,高糖高胰岛素组细胞增殖(1.43±0.12 vs.0.50±0.10)、细胞计数(1.64±0.03 vs.1.06±0.02)、DNA合成量(26135.47±324.86 vs.14528.26±267.18)、S+G2+M百分比[(19.33±0.12)％vs.(8.56±0.07)％]、AngⅡ[(30.58±7.26)pg/ml vs.(18.26±2.64)pg/ml]与ALD含量[(19.62±1.25)pg/mlvs.(12.83±1.29)pg/ml]及p-ERK1/2蛋白表达量明显升高(P＜0.05);与高糖高胰岛素组相比,ERK抑制剂组细胞增殖(0.72±0.06 vs.1.33±0.12)、细胞计数(1.35±0.01 vs.1.64±0.03)、DNA合成量(18643.76±192.52 vs.26135.47±324.86)、S+G2+M百分比[(12.84±0.36)％vs.(19.33±0.12)％]、AngⅡ[(23.17±5.31)pg/ml vs.(30.58±7.26)pg/ml]与ALD[(15.27±1.13)pg/ml vs.(19.62±1.25)pg/ml]含量及p-ERK1/2蛋白表达量明显降低(P＜0.05);与高糖高胰岛素组相比,替米沙坦组细胞增殖(0.94±0.05vs.1.33±0.12)、细胞计数(1.49±0.02vs.1.64±0.03)、DNA合成量(21829.35±154.73 vs.26135.47±324.86)、S+G2+M百分比[(15.13±0.42)％vs.(19.33±0.12)％、AngⅡ[(26.84±4.36)pg/ml vs.(30.58±7.26)pg/ml]与ALD[(17.81±1.53)pg/ml弧vs(19.62±1.25)pg/ml]含量及p-ERK1/2蛋白表达量明显降低(P＜0.05);ERK抑制剂组与替米沙坦组各指标间没有统计学差异.结论 血管紧张素1型受体AT1R阻滞剂替米沙坦通过部分抑制ERK1/2信号通路改善高糖高胰岛素共同诱导的心肌成纤维细胞增殖.
