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HPLC法测定蜂珍膏中白杨素的含量
目的:建立以高效液相色谱法测定蜂珍膏中白杨素含量的方法.方法:色谱柱:Zorbox SB-C18柱(150 mm×4.6 mm, 5μm);流动相:甲醇-0.1%甲酸;梯度洗脱:0→35 min,甲醇-0.1%甲酸比例由50:50→75:25(v/v);流速:1.0 ml·min-1;检测波长:267 nm;柱温:25℃;进样量:10.0μl.结果:白杨素在0.61～4.3 μg·ml-1 (r=0.9996)范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系;平均加样回收率为99.3%,RSD=1.4%(n=6).结论:本方法可靠、灵敏、准确、易行,可用于蜂珍膏的质量控制.
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白杨素通过调控miR-199a-3p/ZHX1抑制食管鳞癌细胞增殖和侵袭
目的:探究白杨素(Chrysin,CR)对食管鳞癌细胞增殖和侵袭的影响及其潜在的分子机制.方法:将食管鳞癌细胞分为对照组(未转染、未CR处理细胞常规培养)、miR-NC组(稳定转染的miR-199a-3p-NC用等量DSMO培养)、miR mimic组(稳定转染的miR-199a-3p mimic用等量DSMO培养)、CR-miR-NC组(稳定转染的miR-199a-3p-NC用终浓度100μmol·L-1 CR培养)、CR-miR mimic组(稳定转染的miR-199a-3p mimic用终浓度100μmol·L-1CR培养),48 h后,采用流式细胞仪检测转染效率,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测EC9706细胞中miR-199a-3p和锌指和同源框蛋白1(Zinc-fingers and ho-meoboxes protein 1,ZHX1)表达情况,采用荧光素活性和蛋白免疫印迹(Western blot)检测miR-199a-3p对ZHX1的调控作用,分别采用MTT和transwell小室实验检测EC9706细胞增殖和侵袭能力.结果:流式细胞仪检测结果显示转染效率达到80％以上;CR-miR-NC组miR-199a-3p的表达水平显著低于miR-NC组(P<0.05);CR-miR mimic组miR-199a-3p的表达水平显著低于miR mimic组(P<0.05),CR-miR-NC组ZHX1的表达水平显著高于miR-NC组(P<0.05);CR-miR mimic组ZHX1的表达水平显著高于miR mimic组(P<0.05).荧光素酶活性测定显示,在转染ZHX13'UTR的细胞中,与miR-199a-3p-NC组相比,miR-199a-3p mimic组荧光素酶活性显著降低(P<0.05),而在转染ZHX13'UTR-Mut的细胞中,miR-199a-3p mimic组与miR-199a-3p-NC组的荧光素酶活性差异无统计学意义(P>0.05),CR-miR-NC组EC9706细胞增殖和侵袭能力显著低于miR-NC组(P<0.05),CR-miR mimic组EC9706细胞增殖和侵袭能力显著低于miR mimic组(P<0.05).结论:CR通过调控miR-199a-3p/ZHX1抑制食管鳞癌细胞增殖和侵袭,为食管鳞癌的靶向治疗提供一定的理论依据.
关键词： 白杨素 食管鳞癌 miR-199a-3p 新型转录因子ZHX1 细胞增殖 细胞侵袭 -
不同产地蒺藜黄酮成分比较
目的:采用HPLC法以芦丁、木樨草素、槲皮素、山柰酚、异鼠李素、白杨素为指标对蒺藜进行含量测定方法研究,并对比不同产地6种黄酮类成分的区别. 方法:采用HPLC法,色谱柱为Welch Ultimate LP-C18(250 mm ×4.6 mm,5 μm),流动相为0. 05%磷酸水-乙腈梯度洗脱,检测波长为360 nm,流速为1. 0 ml·min-1 ,对蒺藜6种黄酮成分进行含量测定. 结果: 对照品芦丁、木樨草素、槲皮素、山柰酚、异鼠李素、白杨素的标准曲线呈良好的线性关系(r≥0. 999 4),平均回收率为97. 5% ~99. 7%,RSD≤1. 24%(n=6),符合方法学的相关要求. 各产地6种成分的含量各有不同,但从总量上来看,以湖南产的黄酮总量高为15. 59 mg·g-1 ,以贵州产的黄酮总量低为7. 89 mg·g-1. 结论:所建立的HLPC法,简便易行,精密度、回收率、重复性等均符合要求,可用于蒺藜的含量测定,6种蒺藜黄酮成分在不同产地蒺藜药材普遍存在,以此为目标进行相关研究具有意义.
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多指标综合加权评分法优选蜂胶总黄酮提取工艺研究
目的:研究乙醇提取蜂胶中总黄酮的佳工艺.方法:以乙醇浓度、料液比、提取时间以及提取次数为考察因素,用L9(34)正交表设计安排正交试验,以总黄酮含量,白杨素、高良姜素的含量为考察指标,采用综合加权评分法进行数据分析,优选佳提取工艺.结果:佳工艺参数为:加入蜂胶量10倍90%乙醇,浸提三次,每次24 h.结论:该工艺简单、可行,可用于大规模生产.
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8-硝基白杨素对人宫颈癌Hela细胞增殖和凋亡的影响
目的:观察8-硝基白杨素(8-NOChR)抑制体外培养人宫颈癌Hela细胞增殖和诱导凋亡作用.方法:体外培养人宫颈癌Hela细胞系细胞.MTT比色法测定Hela细胞增殖活性.软琼脂培养克隆形成法检测Hela细胞集落形成能力.AO/EB染色荧光显微镜观察Hela细胞凋亡形态学改变.DNA凝胶电泳观察梯形DNA条带.结果:MTT比色测定显示,8-NOChR抑制Hela细胞增殖,呈剂量依赖性.软琼脂培养克隆形成法检测表明,8-NO-ChR显著抑制Hela细胞集落形成,呈剂量依赖性.AO/EB染色荧光显微镜观察发现,8-NOChR诱导Hela细胞呈现典型凋亡细胞形态特征.8-NOChR(30 μmol/L)处理Hela细胞72 h,琼脂糖凝胶电泳出现"梯形"DNA条带.结论:8-NOChR具有抑制人宫颈癌Hela细胞增殖和诱导细胞凋亡作用.
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白杨素苯并咪唑衍生物合成及其体外抗肿瘤活性的研究
目的 合成一系列白杨素苯并咪唑衍生物并研究其体外抗肿瘤活性.方法 以白杨素为起始原料,通过醚化反应引入苯并咪唑衍生物,合成9个白杨素苯并咪唑衍生物3～11.采用MTT法检测化合物3～11对人源性胃癌细胞MGC?803,乳腺癌细胞MCF?7、肝癌细胞HepG?2和鼠源性胃癌细胞MFC的体外抗增殖活性.流式细胞仪检测化合物10作用24 h后细胞的凋亡和周期情况.结果 合成的白杨素苯并咪唑衍生物均用1H NMR,MS确证.相比于乳腺癌细胞MCF?7和肝癌细胞HepG?2,化合物3～11对胃癌细胞MGC?803的抗增殖活性更好.化合物4、6、7、9、10、11对胃癌细胞MGC?803的抗增殖活性优于白杨素,化合物7、10、11对胃癌细胞MGC?803和胃癌细胞MFC的抗增殖活性优于阳性对照药5?氟尿嘧啶,其中化合物10对鼠源性胃癌细胞MFC的IC 50值为(25.72±3.95)μM.用不同浓度的化合物10处理后细胞凋亡率明显增加,G0/G1期细胞逐渐增多,而S期和G2/M期细胞逐渐减少.结论 化合物10抗肿瘤细胞增殖活性强,能以剂量依赖方式诱导MFC细胞凋亡,并使细胞停滞于G0/G1期.化合物10可作为抗肿瘤候选药物进一步优化和评价.
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异丙酰基为桥合成白杨素氨基酸衍生物及其抗癌活性研究
目的 为改善天然产物白杨素的活性,利用氨基酸类物质特性,以异丙酰基为桥合成一系列白杨素氨基酸类衍生物,以期得到活性更高的衍生物.方法 采用烷基化、水解、酰胺缩合等药物合成方法在白杨素的7位引入不同类型的氨基酸,得到一系列衍生物,运用1H-NMR和13C-NMR等方法对其结构进行确证;采用MTT法,以白杨素母体、5-FU为对照,检测其抗人肝癌细胞HepG2和人乳腺癌细胞MCF-7活性.结果 1H-NMR和13C-NMR等数据显示,烷酰基、氨基酸等基团被成功地引入到白杨素分子的7位.活性测试结果显示,化合物2,5b,5d抑制HepG2细胞的IC50值低于母体化合物白杨素,化合物2,3,4b,4c,4d,5a和5c抑制MCF-7细胞的IC50值低于白杨素.结论 通过实验能成功地将烷酰基、氨基酸等基团引入白杨素的7位,且得到的大多数衍生物,相较于天然产物白杨素母体,具有更好的抗人肝癌细胞HepG2和人乳腺癌细胞MCF-7的活性.
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白杨素衍生物的合成及其抗癌活性研究
目的：合成一系列白杨素衍生物并研究其体外抗肿瘤活性。方法以白杨素为起始原料，通过醚化反应引入5-溴水杨酸酯，合成6个白杨素衍生物。然后采用MTT法检测白杨素衍生物对人胃癌MGC-803细胞、人肝癌HepG2细胞的体外抗肿瘤活性。结果化合物3a、3b、4b抑制HepG2的IC50值高于白杨素，化合物2a、2b、4a抑制HepG2的IC50值低于白杨素，其中化合物2a、4a的IC50值低于阳性对照药5-氟尿嘧啶。化合物3a抑制MGC-803细胞的IC50值低于白杨素和阳性对照药5-氟尿嘧啶。结论合成的白杨素衍生物均经过1H NMR，MS确证。目标化合物2a对HepG2细胞具有较强抑制作用，化合物3a对MGC-803细胞具有较好的抑制作用，抑制作用均较阳性对照药物5-氟尿嘧啶强。
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6,8- 二- 三氟甲基-5- 羟基-7- 乙酰氧基白杨素的抗胃癌作用
目的 研究6,8- 二- 三氟甲基-5- 羟基-7- 乙酰氧基白杨素(dFMAChR)的体外抗胃癌作用.方法 体外培养人胃癌SGC-7901 细胞.MTT 比色法测定细胞活性.PI 染色流式细胞术(FCM)分析细胞凋亡率.Western Blot 检测细胞NF-κB、Bcl-2、Bax 蛋白表达.结果 dFMAChR 显著抑制体外培养人胃腺癌SGC-7901细胞活性,呈剂量依赖性;dFMAChR 有效诱导人胃腺癌SGC-7901 细胞凋亡; dFMAChR 下调NF-κB(p65)、Bcl-2 蛋白表达,同时,上调Bax 蛋白表达,呈浓度依赖性.结论 6,8- 二- 三氟甲基-5- 羟基-7- 乙酰氧基白杨素具有抗胃癌作用,其机制可能与其抑制NF-κB 活化、下调 Bcl-2 蛋白表达和上调Bax 蛋白表达相关.
关键词： 胃肿瘤 白杨素 6 8-二-三氟甲基-5-羟基-7-乙酰氧基白杨素 治疗作用 -
含磷白杨素衍生物合成的研究进展
白杨素存在于许多水果和蔬菜中，具有多种生物活性，如抗癌、抗炎、抗氧化和抗突变等。但因其脂溶性和水溶性均较差，大大降低了其生物利用度，而引入含磷基团可有效地提高其脂溶性和水溶性，同时对其生物活性也有一定的提高。本文综述了含磷白杨素衍生物合成的研究进展。
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蜂胶质量标准的研究
目的 对不同产地或批次蜂胶样品进行分析,建立蜂胶的质量控制标准.方法 用性状、薄层色谱、浸出物及总黄酮、白杨素和高良姜素含量等为指标进行质量评价.先对蜂胶进行除蜡处理后,采用薄层色谱法对蜂胶进行定性鉴别,采用紫外分光光度计对总黄酮进行定量测定,采用高效液相色谱法对白杨素和高良姜素进行定量测定.结果 薄层色谱斑点清晰,易于识别,具有较好的专属性;制定蜂胶浸出物含量应≥50.0％;总黄酮含量范围应≥8.0 g/100 g;白杨素含量应≥2.0％;高良姜素含量应≥1.0％.结论 所建立的方法操作简便、准确,可作为蜂胶的质量控制方法.
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8-溴-7-甲氧基白杨素体外抗肝癌作用及首过糖苷化速率的测定
目的 观察白杨素(ChR)衍生物8-溴-7-甲氧基白杨素(BrMC)对体外培养肝癌HepG2细胞生长的抑制作用;用人结肠腺癌(Caco-2)细胞模型比较白杨素及其衍生物BrMC的首过糖苷化速率,从药动学角度阐明BrMC比ChR抗肿瘤活性强的可能原因,为寻找既具有较强抗肿瘤活性又具有良好的药动学特性的活性新化学实体提供实验依据.方法 ①MTT比色法测定BrMC对体外培养肝癌Hep-G2细胞和人胚肝L-02细胞增殖的影响,评价其对肝癌细胞作用选择性;②体外培养Caco-2细胞,用Transwell建立单层细胞模型;③评价时间时BrMC和ChR葡萄糖醛酸化产物形成的影响,用β-葡萄糖醛酸苷酶水解葡萄糖醛酸结合物,高效液相色谱(HPLC)检测,计算葡萄糖苷化速率.结果 ①MTT比色法结果 显示,BrMC(3.0、10.0、30.0 tanol·L-1)及其先导化合物ChR(30.0 μmol·L-1)与阳性对照药物5-氟尿嘧啶(5-Fu 30.μmol·L-1)分别处理肝癌HepG2细胞48 h,其增殖相对抑制率分别为31.5%、52.3%、61.2%、51.1%和60.8%;BrMC的效价强度高于其先导化合物ChR,与5-FU相当.BrMC对正常人胚肝L-02细胞的毒性作用(IC50为446.5 μmol·L-1)远小于对肝癌HepG2细胞的毒性(JC50为10.3μmol·L-1),对人肝癌HepG2细胞的药物选择指数达43.3;②Caco-2细胞培养21 d后,成功建立细胞单层模型;③BrMC和ChR的葡萄糖苷化产物均随时间延长而增加,但BrMC比ChR的糖苷化速率显著降低.结论 以ChR为先导物,选择性引进溴和甲氧基的衍生物BrMC对肝癌的生长抑制作用较ChR明显增强,可能与其葡萄糖醛酸化程度显著降低,药物在肝癌细胞中的蓄积增加有关.
关键词： 肝癌 白杨素 8-溴-7-甲氧基白杨素 首过糖苷化速率 -
不同虫龄米缟螟所产三叶虫茶HPLC指纹图谱的研究
目的 建立不同虫龄米缟螟幼虫所产三叶虫茶的HPLC指纹图谱.方法 采用HPLC法,色谱条件: Sinochrom ODS-BP柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相:乙腈-1% 醋酸水溶液,梯度洗脱;流速为1.0 mL·min-1;检测波长为285 nm;柱温为40 ℃.结果 通过检测 6 批次三叶虫茶,建立其HPLC指纹图谱,共标定了26个共有指纹峰,并且比较了其中的白杨素苷和白杨素的含量.结论 所用方法稳定、重复性好,可用于三叶虫茶的质量控制.
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白杨素敏化rhsTRAIL诱导人肝癌Bel-7402细胞凋亡
目的:研究白杨素(ChR)是否具有增敏重组人可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(rhsTRAIL)诱导人肝癌Bel-7402细胞凋亡作用.方法:体外培养人肝癌Bel-7402细胞.碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)分析细胞死亡率.DNA琼脂糖凝胶电泳确证诱导细胞凋亡作用.Western Bloting检测细胞DR5蛋白的表达.结果:ChR 40μmol/L、rhsTRAIL 100 ng/mL以及两者合用的细胞死亡率分别为4.91%±0.38%、5.89%±0.39%和28.7%±2.50%.ChR(40μmol/L)联合rhsTRAIL(100 ng/mL)处理48小时,人肝癌Bel-7402细胞展示出典型DNA梯形条带图谱.Western Blot分析结果发现:白杨素以浓度和时间依赖的方式上调Bel-7402细胞DR5表达.结论:亚细胞毒性浓度的白杨素具有敏化rhsTRAIL诱导人肝癌Bel-7402细胞凋亡作用.
关键词： 肝癌 白杨素 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 凋亡 -
白杨素增强rhsTRAIL对人胃癌SGC-7901细胞毒性
目的:研究白杨素(ChR)是否具有增强rhsTRAIL对人胃癌SGC-7901细胞毒性作用.方法:体外培养SGC-7901细胞.MTT比色法测定细胞毒性.碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)分析细胞死亡率.结果:ChR、rhsTRAIL以及两者合用对SGC-7901细胞活性的半数抑制浓度(IC50值)分别为134μmol/L、402ng/mL和47ng/mL,合并用药效应的CI值是0.4676.ChR 40μmol/L、rhsTRAIL100ng/mL以及两者合用的细胞死亡率分别为4.65%±0.58%,6、3.60%±0.16%和49.87%±4.27%.结论:亚细胞毒性浓度的白杨素具有增强rhsTRAIL对人胃癌SGC-7901细胞毒性作用.
关键词： 胃癌 白杨素 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 细胞毒性 -
5-烯丙基-7-二氟甲基白杨素诱导肺癌A549细胞生长抑制和凋亡
目的:研究5-烯丙基-7-二氟甲基白杨素(ADFMChR)诱导人肺癌细胞(A549)细胞生长抑制和凋亡的作用.方法:体外培养人肺癌A549细胞,平皿集落形成法测定细胞锚定依赖性生长能力,软琼脂集落形成法测定细胞非锚定依赖性生长能力,流式细胞术(FCM)分析细胞周期和细胞凋亡率;凝胶电泳观察凋亡细胞的基因DNA梯形条带.结果:平皿集落形成法和软琼脂集落形成法结果显示ADFMChR呈剂量依赖性抑制A549细胞生长,FCM分析发现ADFMChR呈剂量依赖性诱导A549细胞凋亡;ADFMChR(10μg/mL)孵育A549细胞48h后,DNA琼脂糖凝胶电泳呈现典型梯形条带.结论:ADFMChR具有抑制人肺癌A549细胞生长和诱导凋亡作用.
关键词： 肺癌 白杨素 5-烯丙基-7-二氟甲基白杨素 治疗作用 -
8-硝基白杨素诱导结肠癌HT-29细胞凋亡
目的:观察8-硝基白杨素(NOChR)诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡作用.方法:MTT比色法测定细胞增殖活性;流式细胞分析术检测细胞凋亡率;琼脂糖凝胶电泳观察DNA梯形条带.结果:NOChR抑制HT-29细胞活性,呈浓度依赖性,其IC50值为1.78μM;NOChR具有诱导HT-29细胞凋亡作用;PPARγ特异性阻断剂GW9662能部分拮抗NOChR诱导HT-29细胞凋亡.结论:NOChR诱导HT-29细胞凋亡作用与其活化PPARγ相关.
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ADFMCHR激活PPAR γ抑制人肝癌SMMC-7721细胞生长
目的:研究5-烯丙基-7-二氟亚甲基白杨素(ADFMChR)激活过氧化物酶活化因子受体γ(PPAR γ)抑制体外培养人肝癌SMMC-7721细胞增殖作用.方法:体外培养人肝癌SMMC-7721细胞.台盼蓝拒染法检测细胞生长;平皿克隆形成法检测细胞锚定依赖性生长;软琼脂克隆形成法检测细胞集落形成能力.结果:细胞计数结果显示,ADFMChR延长SMMC-7721细胞倍增时间,抑制SMMC-7721细胞生长,呈剂量依赖性.但是对预先用PPAR γ阻断剂GW9662孵育30分钟的SMMC-7721细胞,ADFMChR的生长抑制作用明显降低;平皿克隆、软琼脂克隆形成法结果显示,ADFMChR抑制SMMC-7721细胞的锚定依赖性生长能力和锚定非依赖性生长能力,而GW9662可以降低ADFMChR对SMMC-7721细胞的增值抑制作用.结论:ADFMChR具有抑制人肝癌SMMC-7721细胞生长作用,其机制与激活PPAR γ有关.
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6,8-二-三氟甲基-7-乙酰基白杨素抗肝癌作用实验研究
目的:研究6,8-二-三氟甲基-7-乙酰基白杨素(dFMAChR)体内外抗肝癌作用.方法:MTT比色法测定dFMAChR对体外培养人肝癌细胞Hep G2细胞和人胚肝细胞L-02细胞增殖的影响;平皿克隆形成法及软琼脂克隆形成法测定dFMAChR对体外培养Hep G2细胞的锚定依赖性及非锚定依赖性生长作用;PI染色流式细胞术(FCM)分析dFMAChR对Hep G2细胞周期的影响;人肝癌裸鼠异种移植瘤模型治疗实验评价dFMAChR治疗人肝癌的有效性.结果:dFMAChR抑制体外培养人肝癌Hep G2细胞增殖和生长,其效价强度高于先导化合物白杨素(ChR),而对人胚肝(L-02)细胞的毒性小,其选择指数为42.96.PI染色FCM结果显示3.0μM,10.0μM,30.0μM的dFMAChR作用于Hep G2细胞48h后,其G1期累积细胞百分率分别为64.5%、69.1%、78.4%,较溶媒对照组和ChR 30.0μM的58.2%和68.3%有显著提高,呈现G1期阻滞现象.人肝癌裸鼠异种移植瘤模型治疗实验结果显示:dFMAChR对人肝癌异种移植瘤生长具有显著抑制作用,20,40,80 mg/kg的dFMAChR对移植瘤的瘤重抑制率分别为40.17%,47.41%和66.81%.结论:dFMAChR具有人肝癌治疗作用.
关键词： 肝肿瘤 白杨素 6 8-二-三氟甲基-7-乙酰基白杨素 治疗作用 -
5,7-二甲氧基白杨素对体外培养宫颈癌HeLa细胞生长的影响
目的:观察5,7-二甲氧基白杨素(dMChR)对体外培养宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响.方法:检测5,7-二甲氧基白杨素对HeLa细胞增殖活性的影响采用MTT法;观察HeLa细胞凋亡形态运用丫啶橙/溴化乙啶(AO/EB)荧光双染色法;检测HeLa细胞凋亡率采用流式细胞术.结果:5,7-二甲氧基白杨素对HeLa细胞增殖具有抑制作用,呈剂量依赖性;5,7-二甲氧基白杨素能有效地诱导HeLa细胞凋亡,呈剂量依赖性.结论:5,7-二甲氧基白杨素具有抑制人宫颈癌HeLa细胞增殖和诱导细胞凋亡作用.
