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加杨树叶中3种黄酮类成分的含量测定
目的 建立同时测定加杨树叶中的槲皮素、高良姜素、白杨素含量的分析方法.方法 采用高效液相色谱法,色谱柱Agilent TC C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相:甲醇-0.1％甲酸,梯度洗脱:0～5 min,甲醇25％→55％,5～25 min,甲醇55％→65％,25～35 min,甲醇65％→75％;流速:1.0 mL·min-1;检测波长:264 nm;柱温:30℃.结果 加杨树叶中槲皮素、高良姜素、白杨素分离效果良好,线性范围分别为3.7～120,2.5～80和3.125～100 μg·mL-1;平均加样回收率分别为99.0％,100.1％,101.4％.结论 该方法准确可靠、结果稳定、重复性好,可为评价加杨树叶的质量提供依据.
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总黄酮、高良姜素和白杨素含量指标综合优选蜂胶前处理方法
目的 建立蜂胶含量分析的佳前处理方法.方法 采用单因素及L9(34)正交设计试验,以总黄酮、高良姜素、白杨素成分的含量变化为评价指标,对各流程进行优化,筛选佳前处理方法.结果 佳前处理方法:药材粉末用95％乙醇50℃超声提取2次,每次30 min.结论 该方法准确可靠,能作为蜂胶含量分析前处理方法.
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HPLC测定黄芩中6个成分的含量
目的 建立高效液相色谱法对黄芩中6个成分(黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、白杨素、千层纸素A)的含量分析方法.方法 采用Agilent ZORBAX SB-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈(A)-0.3％磷酸三乙胺(B)为流动相,梯度洗脱,检测波长为275 nm,流速1.0 mL·min-1,柱温30℃.结果 黄芩中的6个成分黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、白杨素、千层纸素A进样量分别在0.416 7～4.167 μg(r=0.999 2)、0.078 15～0.781 5 μg(r=0.999 5)、0.053 21～0.532 1 μg(r=0.999 3)、0.016 36～0.163 6 μg(r=0.999 3)、0.001160～0.011 60 μg(r=0.999 1)、0.010 46～0.104 6 μg(r=0.999 4)范围内呈良好线性关系；平均回收率(n=5)分别为99.4％、100.1％、99.9％、100.2％、100.4％、100.1％,RSD分别为1.9％、2.2％、2.3％、1.6％、2.2％、2.1％.结论 该方法准确可靠、重复性好,为黄芩质量综合评价提供了科学依据.
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白杨素减轻人脐静脉内皮细胞的氧化应激损伤
目的:观察白杨素对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)氧化应激损伤的保护作用.方法:常规培养HU-VEC细胞,分为5组:对照组,不加任何干预;H2 O2组,用400μmol/L过氧化氢处理2 h;白杨素高、中、低剂量组,提前用100、50、25μmol/L的白杨素孵育12 h,然后用400μmol/L过氧化氢处理2 h.处理结束后,用MTT法检测活细胞数目,并检测乳酸脱氢酶(LDH)的漏出.收集细胞上清液及细胞裂解液,检测NO、丙二醛(MDA)产量及内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、超氧化物歧化酶(SOD)活性.用荧光染料DCEF-DA染色后,酶标仪检测活性氧(ROS)的产量.用荧光定量RT-PCR的方法检测黏附分子的表达.结果:过氧化氢导致内皮细胞活细胞数目减少,LDH漏出增多,MDA、ROS产生增多,SOD活性下降,黏附分子表达增多,内皮细胞NO产生减少,eNOS活性下降.提前用白杨素预孵,可以增加细胞存活率,减轻氧化应激损伤,减少黏附分子的表达,eNOS蛋白活性增加,细胞NO的产量增加.结论:白杨素可以减轻HUVEC的氧化应激损伤,减少黏附分子的表达,增加细胞NO的合成能力.
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白杨素对去氧肾上腺素预收缩大鼠主动脉的舒张作用及机制
目的:研究白杨素(Chrysin)对去氧肾上腺素(PE)预收缩大鼠离体主动脉血管环张力的影响及其机制.方法:采用离体血管环张力检测系统,观察Chrysin对PE预收缩血管的舒张作用,通过孵浴一氧化氮合酶抑制剂L-NAME、鸟苷酸环化酶抑制剂MB、环氧合酶抑制剂Indo、钾通道抑制剂4-AP、BaCl2、Gli、TEA探讨白杨素对血管张力影响的机制.结果:Chrysin对PE预收缩的血管环具有浓度依赖性的舒张作用,但对去内皮的血管环舒张作用弱于内皮完整的血管环(P＜0.05),ECs0分别为4.76×106 mol/L(内皮完整)和1.12×10-5 mol/L(去内皮).L-NAME(10-4mol/L)和MB(10-5 mol/L)能部分抑制Chrysin的舒张血管作用(P＜0.05),但Indo(10-5 mol/L)则无明显作用(P＞0.05).4-AP(10-3 mol/L)、BaCl2(10-4 mol/L)、Gli(10-5 mol/L)、TEA(10-3moL/L)预孵后,Chrysin的大舒张血管作用(Emax)均被部分抑制(P＜0.05).结论:Chrysin 可以浓度依赖性地舒张大鼠主动脉,其机制可能与内皮NOS-NO-sGC通路和开放血管平滑肌上钾通道有关,而与前列环素无关.
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白杨素抗氧化应激对实验性糖尿病大鼠脑损伤的保护作用
目的:研究白杨素对大鼠实验性糖尿病脑损伤的影响及其机制.方法:SD大鼠一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ)溶液建立大鼠实验性糖尿病模型,72 h后空腹血糖≥15 mmol/L为模型成功标准.将模型大鼠随机分为模型组和白杨素低、高剂量组(每组10只),另取10只正常大鼠为空白对照组.每周测一次体质量和空腹血糖.4周后禁食12 h麻醉大鼠,采血,取脑组织,测定血清和脑的超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性及丙二醛(MDA)的含量,并且观察脑组织的形态学改变.结果:与模型组比较,白杨素可使血糖降低(P＜0.05),同时可减轻脑组织损伤,提高脑内SOD和GSH-Px的活性,降低脑内MDA的含量,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:白杨素对实验性糖尿病大鼠脑损伤有保护作用,其机制可能与其具有较强的抗氧化作用有关.
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白杨素衍生物dFMAChR体外抗乳腺癌作用及其可能机制
目的:研究白杨素衍生物6,8-二-三氟甲基-5-羟基-7-乙酰氧基白杨素(dFMAChR)对体外培养人乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响,并对其体外抗乳腺癌作用机制进行初步探讨.方法:MTT法测定dFMAChR对MCF-7细胞增殖活性的影响;Hochest染色观察dFMAChR诱导MCF-7细胞凋亡的形态学改变;进一步DNA凝胶电泳证实dFMAChR确有诱导MCF-7细胞凋亡作用;Western Blot检测凋亡相关蛋白PPARy、PTEN、p-Akt、Caspase-3的表达水平.结果:dFMAChR可剂量依赖性抑制人乳腺癌细胞的增殖,IC50值为8.51 μmol/L;3.0、10.0、30.0 μmol/LdFMAChR处理人乳腺癌细胞48 h后Hochest染色镜下可见核浓缩的凋亡细胞,10.0、30.0μmol/L dFMAChR处理人乳腺癌细胞48 h后DNA凝胶电泳显示“梯形”条带,说明dFMAChR可诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡;Western Blot结果表明不同浓度的dFMAChR可浓度依赖性上调PPARγ、PTEN、Caspase-3蛋白表达,下调p-Akt的表达.结论:dFMAChR具有体外抗乳腺癌作用,其诱导凋亡机制与激活PPARγ/PTEN信号通路,终增加Caspase-3蛋白表达有关.
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白杨素对高糖损伤血管内皮的影响
目的 探讨急性高糖条件下,白杨素(chrysin,Ch)对血管内皮舒张功能的影响.方法 ① 采用离体血管环实验,设立正常对照组(control)、白杨素处理组(Ch),观察正常糖浓度时,白杨素对大鼠离体主动脉的舒张作用;设立正常糖浓度组(NG,11 mmol·L-1 Glu)、高糖实验组(HG,44 mmol·L-1 Glu)、甘露醇对照组(M,11 mmol·L-1 Glu+33 mmol·L-1 Man)和白杨素急性给药组(HG+Ch,44 mmol·L-1 Glu+chrysin 1.0 μmol·L-1),观察急性高糖孵育后,白杨素对大鼠离体主动脉舒张功能的影响.② 采用HUVEC细胞系,设立正常糖浓度组(NG,5.5 mmol·L-1 Glu)、高糖实验组(HG,33.3 mmol·L-1 Glu)、甘露醇对照组(M,5.5 mmol·L-1 Glu+27.8 mmol·L-1 Man)以及不同浓度白杨素处理组(Ch 25、50 μmol·L-1),观察白杨素对高糖孵育HUVEC细胞存活率的影响,并检测各组NO释放量.结果 ① 正常糖浓度时,白杨素能浓度依赖性地舒张大鼠主动脉环,其Emax和EC50为(58.94±9.61)％、51.9 μmol·L-1(P<0.01);高糖浓度时,HG组ACh诱导的血管舒张反应性明显降低,其Emax与EC50值分别下降至(32.12±3.92)％、78.0 μmol·L-1(P<0.01),但硝普钠(SNP)诱导的血管舒张无变化;白杨素急性干预后,可以明显改善高糖对ACh诱导的血管内皮依赖性舒张功能的损伤,其Emax与EC50值分别为(70.7±3.87)％和0.852 μmol·L-1(P<0.01).② HUVEC高糖处理后,细胞存活率降低至(82.56±3.97)％,白杨素(25、50 μmol·L-1)干预后能浓度依赖地增强HUVEC的细胞存活率,其细胞存活率可分别增至(103.4±4.78)％、(107.6±11.58)％;并且能提高高糖处理后细胞培养液NO的释放量.结论 白杨素可以保护急性高糖损伤的血管内皮舒张功能,并增加内皮NO释放.
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白杨素对 TNF－α诱导慢性暴露TGF－β卵巢癌 OVCAR－3细胞系球形成的影响
目的：研究白杨素对肿瘤坏死因子－α（ TNF－α）诱导慢性暴露转化生长因子－β（ TGF－β）卵巢癌OVCAR－3细胞系球形成的影响，并探讨其作用机制是否涉及下调NF－κB（p65）蛋白表达。方法 TNF－α（10μg? L－1）处理TGF－β（5μg?L－1）预暴露12 d的卵巢癌OVCAR－3细胞24 h，球形成率测定法检测不同浓度（5．0、10．0、20．0μmol? L－1）白杨素对球形成率的影响；Western blot检测NF－κB（p65）蛋白表达；NF－κB（p65） siRNA转染探讨作用机制。结果 TNF－α（10μg?L－1）联合慢性暴露TGF－β（5μg? L－1）处理增高OVCAR－3细胞系球形成率。白杨素能有效地拮抗致炎因子诱导卵巢癌细胞自我更新作用，呈剂量依赖性（ P＜0．05），并伴随着NF－κB（ p65）蛋白表达下调。与对照 siRNA 相比， NF－κB （p65） siRNA转染OVCAR－3细胞NF－κB（p65）蛋白表达下调，并明显增强白杨素抑制球形成作用。结论下调NF－κB （p65）蛋白表达参与白杨素抑制TNF－α（10μg? L－1）联合慢性暴露TGF－β（5μg? L－1）处理诱导卵巢癌OVCAR－3细胞系球形成作用。
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8-溴-7-甲氧基白杨素诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡
目的 观察8-溴-7-甲氧基白杨素(8-bromo-7-methoxychrysin,BrMChR)诱导人胃癌(SGC-7901)细胞凋亡作用.方法 体外培养SGC-7901细胞,MTT法测定细胞存活率;PI染色流式细胞术(FCM)分析细胞凋亡率;DNA琼脂糖凝胶电泳观察梯形条带.结果 MTT测定结果 显示,BrMChR明显抑制SGC-7901细胞增殖,呈浓度依赖性,其IC50为2.6 μmol·L-1,BrMChR的效价强度约是白杨素(ChR,IC50为16.5 μmol·L-1)的8倍,约为氟尿嘧啶(5-FU,IC50为7.7 μmol·L-1)的3倍.PI染色FCM分析发现BrMChR(1.25、5.00、20.00 μmol·L-1)作用SGC-7901细胞48 h的细胞凋亡率分别是19.8%±0.2%,36.8%±1.9%,45.5%±3.5%,BrMChR(1.25 μmol·L-1)处理的细胞凋亡率较ChR(20.00 μmol·L-1)的凋亡率(12.9%±1.5%)高;DNA琼脂糖凝胶电泳观察BrMChR(20.00 μmol·L-1)作用24 h和48 h后SGC-7901细胞的基因DNA呈现典型梯形条带,且能被PPARγ阻断剂GW9662(10.00 μmol·L-1)预孵育减弱.结论 BrMChR可能部分通过活化PPARγ诱导SGC-7901细胞凋亡.
关键词： 胃肿瘤 白杨素 8-溴-7-甲氧基白杨素 凋亡 -
白杨素通过MAPK信号抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症
目的:探讨白杨素抑制LPS诱导的RAW 264.7细胞炎症的分子机制.方法:用不同浓度的白杨素处理RAW 264.7细胞24h后,CCK-8法检测细胞活力;western blot检测白杨素对LPS诱导的RAW 264.7细胞中MAPK信号蛋白p-ERK、p-JNK和p-P38水平;ELISA法检测TNF-α、IL-6和NO浓度;活性氧探针检测细胞内ROS释放情况.结果:白杨素浓度低于60 mg/L对RAW 264.7细胞增殖无影响;western blot检测表明白杨素抑制了MAPK信号分子p-ERK、p-JNK和p-P38的水平;ELISA结果显示,白杨素抑制TNF-α、IL-6和NO的释放;此外,白杨素也降低了细胞内ROS的产生.结论:白杨素抑制LPS诱导的RAW 264.7细胞炎症反应是通过MAPK信号实现的.
关键词： 白杨素 脂多糖 活性氧簇 Raw 264.7细胞 MAPK信号通路 -
HPLC法测定蜂胶片中两种有效成分的含量
本文采用高效液相色谱法测定蜂胶片中白杨素、高良姜素2种有效成分的含量.1 仪器与试剂岛津LC-2010A高效液相色谱仪(日本岛津公司);UV2401紫外可见分光光度计(日本岛津公司);Sartorius BP211D精密电子天平(德国Sartorius Corporation);Mettler-AE163电子天平(美国Metder Corporation);甲醇为色谱纯,水为重蒸馏水.其它试剂均为分析纯.
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白杨素及其衍生物在Caco-2细胞模型中的转运规律
目的 研究白杨素(chrysin,ChR)及其衍生物6,8-二-三氟甲基-7-乙酰氧基白杨素(dFMAChR)在人源结肠腺癌细胞系Caco-2细胞单层模型的转运规律.方法 建立精确灵敏、重复性好的ChR及dFMAChR的高效液相色谱(HPLC)检测方法;MTT(四甲基偶氮唑盐)法测定ChR和dFMAChR对Caco-2细胞的毒性作用.体外培养Caco-2细胞,用Transwell建立单层细胞模型;确定ChR和dFMAChR转运的佳pH条件.评价时间、浓度对dFMAChR和ChR的双向转运的影响,计算转运速率及表观渗透系数(Papp),并与阳性对照药普萘洛尔进行比较.结果 ChR和dFMAChR的转运佳介质pH分别为6.0和6.5,两者的转运无论是Apical侧(A侧)到Basolateral侧(B侧)还是B侧到A侧,均具有时间依赖性和浓度依赖性.ChR和dFMAChR的平均Papp (A-B)分别是(1.60±0.15)×10-6 cm/s和(10.63±0.35)×10-6 cm/s,平均Papp (B-A)分别是(1.22±0.17)×10-6 cm/s和(10.43±0.28)×10-6 cm/s,两者Papp (A-B) ＞Papp (B-A),且Papp (A-B) /Papp(B-A) ＜2.结论 在Caco-2模型中,dFMAChR和ChR均由被动扩散方式转运,dFMAChR的转运速率明显高于ChR,吸收接近普萘洛尔,属于吸收良好的化合物.
关键词： 白杨素 6 8-二-三氟甲基-7-乙酰氧基白杨素 Caco-2细胞 跨膜转运 -
活性氧生成在8-硝基白杨素诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡中的作用
目的 研究活性氧生成在8-硝基白杨素(NOC)诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡中的作用.方法 体外培养SGC-7901细胞,采用流式细胞术分析细胞凋亡率,ELISA法检测细胞组蛋白/DNA碎片,H2DCFH-DA探针流式细胞仪检测细胞活性氧( ROS)生成.结果 NOC诱导亚G1峰(Sub-G1)细胞百分率增高和细胞组蛋白/DNA碎片增加(P＜0.01),促进SGC-7901细胞活性氧生成(P＜0.01).抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)能有效对抗NOC诱导SGC-7901细胞凋亡作用.结论 NOC诱导SGC-7901细胞凋亡作用与促进活性氧生成相关.
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高效液相色谱法测定蜂胶片中白杨素和高良姜素的含量
目的:建立蜂胶片中白杨素和高良姜素的HPLC含量测定方法.方法:采用反向高效液相色谱法.色谱柱为Agilent TC-C18色谱柱(4.6 mm × 250 mm,5μm),流动相为甲醇-1.5 ml/L磷酸溶液(64∶ 36),流速1.0 mL/min,柱温35℃,检测波长为268 nm.结果:白杨素在84.00 ～560.00 ng、高良姜素在63.96 ～426.40 ng范围内线性关系良好(相关系数分别为0.999 9,0.999 9),平均加样回收率分别为100.04％、100.06％,RSD值分别为1.1％、1.3％(n=6).结论:该方法简便快速、准确、专属性强,可用于蜂胶片中白杨素和高良姜素的测定.
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溴代白杨素衍生物合成及其抗癌活性
目的 研究溴取代白杨素衍生物的体外抗癌活性.方法 合成溴取代的白杨素衍生物,并通过MTT法检测其对人急性粒细胞性白血病(HL-60)细胞、人结肠癌(HT-29)细胞和人胃癌(SGC-7901)细胞增殖抑制作用.结果 合成了6个溴取代白杨素衍生物.结论 溴取代白杨素衍生物具有良好的抗癌活性(IC50=0.85～11.60 μmol/L).
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8-硝基白杨素对HL-60细胞凋亡与PTEN-Akt途径的影响
目的 观察8-硝基白杨素(NOChR)抑制人急性髓性白血病细胞系(HL-60)细胞增殖和诱导凋亡作用,并探讨其作用机制是否与PTEN-Akt信号传导途径相关.方法 体外培养HL-60细胞.MTT比色法检测增殖活性;流式细胞术(FCM)定量分析细胞凋亡程度;Western Blot分析HL-60细胞PTEN、P-Akt蛋白表达的影响.结果 NOChR显著抑制HL-60细胞增殖,呈浓度依赖性,其IC50值为1.34 μmol/L;NOChR具有诱导HL-60细胞凋亡作用,且呈浓度和时间依赖性.NOChR以浓度和时间依赖方式上调HL-60细胞PTEN蛋白表达和抑制P-Akt蛋白表达,其作用可被PPARγ特异性阻断剂GW9662(10 μmol/L)预孵育拮抗.结论 NOChR诱导HL-60细胞凋亡作用与其活化PPARγ,上调PTEN蛋白表达,抑制抑制Akt磷酸化相关.
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原儿茶酸、白杨素对非酒精性脂肪肝细胞模型的抗氧化作用
目的:探讨原儿茶酸、白杨素对非酒精性脂肪肝细胞模型的抗氧化应激作用.方法:人肝细胞L02,随机分为对照组、模型组、原儿茶酸组、白杨素组.除对照组外,其余3组细胞均以20％脂肪乳诱导非酒精性脂肪肝细胞模型.模型诱导成功后,原儿茶酸组添加1.0μmol/L原儿茶酸,白杨素组添加20.0μmol/L白杨素,培养24h.收集细胞上清液检测AST、ALT的含量;收集细胞裂解液检测MDA、GSH-Px、TG含量及SOD的活性.结果:①与对照组比较,模型组的AST、ALT、TG、MDA水平明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05);GSH-Px和SOD的含量明显下降,差异有统计学意义(P＜0.05).②与模型组比较,原儿茶酸组及白杨素组的AST、ALT、TG、MDA水平明显下降,差异有统计学意义(P＜0.05);GSH-Px和SOD的含量明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05).③与原儿茶酸组比较,白杨素组的AST、ALT、TG、MDA水平变化不明显,差异无统计学意义(P ＞0.05);GSH-Px和SOD的含量变化不明显,差异无统计学意义(P＞0.05).结论:原儿茶酸、白杨素可通过抗氧化应激达到保护非酒精性脂肪肝细胞的作用.
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白杨素对人胃癌SGC-7901细胞增殖与凋亡的影响
目的 探讨白杨素(Chrysin,ChR)诱导人胃癌SGC-7901细胞株凋亡的作用及机制.方法 分别用10、20、40、80 μM的ChR处理人胃癌细胞株SGC-7901 48 h,采用MTT比色法检测ChR对SGC-7901细胞的增殖抑制效应;采用丫啶橙(AO)染色、流式细胞术检测ChR诱导SGC-7901细胞凋亡的发生;应用Western-blot法检测凋亡相关基因NF-κB、Bcl-2、Bax的蛋白表达,并用计算机图像分析软件进行半定量分析.结果 MTT比色法显示的10～80 μM的ChR在体外对人胃癌SGC-7901细胞有增殖抑制率为:9.71%～53.64%,该作用呈浓度依赖性;AO染色荧光显微镜观察ChR在体外能诱导人胃癌SGC-7901细胞发生凋亡,出现早期凋亡细胞及凋亡小体;流式细胞术检测结果显示:ChR呈浓度依赖性地诱导SGC-7901细胞凋亡,凋亡率为2.35%～20.8%;Western-blot检测结果显示:凋亡相关基因Bcl-2、NF-κB蛋白表达下调,Bax蛋白表达上调.结论 ChR对体外培养人胃癌细胞具有增殖抑制和诱导凋亡作用,呈浓度依赖性.ChR对人胃癌细胞增殖抑制和诱导凋亡作用机制可能与其抑制NF-κB活化、下调 Bcl-2蛋白表达和上调Bax 蛋白表达相关.
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白杨素诱导肝癌Hep3B细胞凋亡机制研究
目的 研究白杨素诱导人肝癌Hep 3B细胞凋亡是否涉及激活ROS/ASK1/JNK/Bim信号通路.方法 流式细胞术检测细胞凋亡,siRNA转染敲除细胞凋亡信号调节激酶1(ASK1)及Bim基因,SP600125抑制Jun氨基末端激酶(JNK),N-乙酰-L型半胱氨酸(NAC)清除活性氧(ROS),Western blot检测蛋白表达.结果 白杨素显著诱导Hep 3B细胞凋亡,同时上调细胞p-ASK1、p-JNK1/2及Bim水平.NAC或SP600125预处理以及ASK1或Bim特异性siRNA转染均能有效拮抗白杨素诱导的细胞凋亡.NAC预处理能抑制白杨素活化ASK1,NAC预孵育或ASK1特异性siRNA转染能抑制白杨素活化JNK,NAC预孵育、ASK1特异性siRNA转染或SP600125预处理均能拮抗白杨素上调Bim蛋白表达效应.结论 白杨素可能通过刺激ROS的生成激活ASK1,导致JNK活化,进而上调Bim表达,并终促进Hep 3B细胞凋亡.
关键词： 白杨素 肝癌 细胞凋亡 细胞凋亡信号调节激酶1
