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白杨素对胰岛素抵抗小鼠的干预研究
目的：研究白杨素对胰岛素抵抗小鼠模型的干预作用及其相应机制。方法：40只雄性C57小鼠，根据饮食随机分为对照组、胰岛素抵抗组、白杨素低剂量组及高剂量组，每组各10只。喂养24周后检测各组小鼠体重、肝指数和脂肪指数，评价胰岛素抵抗状况（血糖、胰岛素水平及HOMA－IR）及氧化应激水平（ SOD、GSH－Px和MDA）；real－time PCR检测肝脏胰岛素信号通路分子（IR、IRS1、IRS2、Glut2和Glut4）及炎症分子（TNF－α、IL－1β、IL－6和NF－κB） mRNA表达水平。 Western blot检测肝脏关键信号蛋白（ IRS1和p65）及其磷酸化的水平。结果：经过24周干预后，胰岛素抵抗组小鼠明显肥胖，体脂沉积显著（P＜0．01），血糖、胰岛素水平及HOMA－IR指数均高于对照组（P＜0．01），且肝脏氧化应激增加（P＜0．05），成功建立胰岛素抵抗模型。白杨素干预后，无论低剂量组还是高剂量组小鼠体重、血糖较胰岛素抵抗组上升缓慢（P＜0．05），血清胰岛素水平及HOMA－IR亦明显降低（P＜0．05），肝脏氧化应激水平明显下降（ P＜0．05）。白杨素能够上调胰岛素信号通路中IR、IRS1、IRS2、Glut2及Glut4的mR－NA表达，同时降低各炎症因子的表达，对NF－κB有抑制作用（ P＜0．05）。其中高剂量组在炎症抑制方面更强（ P＜0．05）。 Western blot实验结果提示白杨素的改善作用与上调p－IRS1及下调p－p65相关。结论：白杨素降低了肥胖、高血糖及高胰岛素血症，缓解了胰岛素抵抗及氧化应激，这一作用可能与其调控胰岛素信号通路及抑制炎症因子表达密切相关。
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白杨素通过JAK-STATs信号通路抑制内毒素诱导的巨噬细胞炎症反应
目的 探讨白杨素对LPS诱导的RAW264.7细胞炎症的调控机制.方法 分别用不同浓度(0、5、10、20、40、60、80、100、150、200 μg/mL)白杨素作用RAW264.7细胞24 h后,采用CCK-8检测细胞活力值;分别用(10、30、60 μg/mL)白杨素预处理RAW264.7细胞2 h后,用LPS刺激RAW264.7细胞18 h后,采用ELISA法检测炎症因子TNF-α、IL-6和MCP-1的释放水平;分别用(10、30、60 μg/mL)白杨素预处理RAW264.7细胞2 h后,用LPS刺激RAW264.7细胞4 h后,运用Western blotting法检测JAK-1、JAK-2、STAT-1、STAT-3的磷酸化水平;分别用(10、30、60 μg/mL)白杨素预处理RAW264.7细胞2 h后,用LPS刺激RAW264.7细胞15 min后,运用CM-H2DCFDA荧光探针检测RAW264.7细胞内活性氧簇水平;运用ROS清除剂NAC处理RAW264.7细胞,检测ROS对LPS诱导RAW264.7细胞JAK-STATs信号和炎症反应的影响;运用激光共聚焦显微镜观察转录因子STAT-1和STAT-3核转位情况.结果 在白杨素浓度低于60 μg/mL时,对RAW264.7细胞活力没有显著影响,因此我们选择10、30、60 μg/mL白杨素作为抑制炎症作用的低、中、高剂量组;白杨素剂量依赖性地抑制LPS诱导的炎症蛋白iNOS的表达;白杨素剂量依赖性的下调LPS诱导的RAW264.7细胞中促炎因子TNF-α、IL-6和MCP-1的释放(P<0.01);白杨素抑制RAW264.7细胞中JAK-STATs信号活化并抑制STAT-1和STAT-3核转位;白杨素抑制RAW264.7细胞内ROS的产生;ROS作为上游信号介导JAK-STATs信号通路的活化.结论 白杨素能有效阻断ROS介导的JAK-STATs信号活化,从而抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症反应.
关键词： 白杨素 活性氧簇 RAW264.7细胞 JAK-STATs信号通路 -
白杨素通过调控MAPKs信号通路促进SMMC-7721细胞凋亡
目的 探究白杨素诱导肝癌细胞系SMMC-7721细胞凋亡的效应及分子机制.方法 将SMMC-7721细胞分为空白对照组,DMSO溶剂对照组和白杨素处理组(5,10,20,40,60,80,100,150,200μg/mL),采用CCK-8法检测细胞的增殖抑制作用;将SMMC-7721细胞分为空白对照组,DMSO溶剂对照组和白杨素处理组(5,10,20μg/mL),在倒置显微镜下观察细胞形态学变化;DAPI染色后,在荧光倒置显微镜下观察细胞核形态变化;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;将SMMC-7721细胞分别用白杨素,P38特异性抑制剂SB203580(0,5,10μmol/L)、ERK特异性抑制剂U0126(0,5,10μmol/L)和JNK特异性抑制剂SP600125(0,5,10μmol/L)处理后,Western blotting技术检测凋亡相关蛋白PARP、caspase-3和凋亡相关信号通路和MAPKs的磷酸化变化情况.结果 白杨素显著抑制SMMC-7721细胞增殖,和对照组相比,DMSO组,5,10,20μg/mL白杨素处理组细胞抑制率分别为96％,76％,71.75％和64.29％,具有剂量依赖性.超过60μg/mL细胞抑制率达到饱和.另外,白杨素促进细胞凋亡,20μg/mL白杨素处理组细胞凋亡率为68.7％,比空白对照组增加了59.4％,PARP和caspase-3显著切割.白杨素激活MAPKs信号通路,具有剂量和时间依赖性.分别用SB203580、U0126、SP600125预处理细胞,白杨素诱导的P38、ERK和JNK的磷酸化和PARP切割被抑制.结论 白杨素通过调控MAPKs信号分子的活化,抑制SMMC-7721细胞的增殖并且促进细胞凋亡的发生.
关键词： 白杨素 SMMC-7721细胞 细胞凋亡 MAPKs -
白杨素对小鼠T细胞体外活化、增殖和细胞周期的影响
目的:研究白杨素(CR)对刀豆蛋白A(ConA)刺激的小鼠T细胞体外活化、增殖和细胞周期的影响,初步探讨其免疫调节作用机制.方法:利用荧光标记的单克隆抗体染色结合流式细胞术,检测小鼠活化T细胞CD69的表达情况;用羧基荧光素已酰已酸(CFDA-SE)染色结合流式细胞术,分析T细胞增殖相关指数;用碘化丙锭(PI)染色分析细胞周期分布.结果:加入终浓度为5、25、50 μmol/L的CR后,活化T细胞CD69的表达率由ConA对照组的(85.12±1.07)%,分别降低为(78.42±1.82)%、(66.24±1.43)%和(53.09±1.77)%;72 h的T细胞增殖指数由ConA对照组的2.29±0.14分别降至1.91±0.02、1.47±0.03和1.14±0.01;对细胞周期的影响表现为:随着CR浓度升高,处于G0/G1期的细胞增加,S期细胞减少,25 μmol/L时,G2/M期细胞也减少.结论:CR能有效抑制小鼠T细胞的体外活化和增殖,阻滞活化细胞从G1期进入S期,是一种潜在的免疫抑制剂.
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dFMAChR抑制荷人宫颈癌裸鼠移植瘤生长的机制研究
目的:研究6,8-二-三氟甲基-7-乙酰氧基白杨素(dFMAChR)抑制荷人宫颈癌裸鼠移植瘤生长的可能机制.方法:建立人宫颈癌裸鼠移植瘤模型,通过免疫组织化学SP染色法观察dFMAChR对人宫颈癌移植瘤组织血管内皮生长因子(VEGF)、细胞增殖核抗原(PCNA)表达的影响.结果:免疫组织化学检测发现dFMAChR抑制人宫颈癌移植瘤组织VEGF和PCNA的表达,且呈剂量依赖性.结论:dFAMChR能有效抑制人宫颈癌裸鼠移植瘤细胞PCNA和VEGF蛋白表达,这可能是dFMAChR抑制人宫颈癌裸鼠移植瘤生长的分子机制之一.
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蜂胶血液移行成分对心肌细胞的保护作用
目的 观察蜂胶及其特征单体血液移行成分对离体心肌细胞的保护作用.方法 大鼠连续灌胃蜂胶提取物及其特征单体白杨素、高良姜素7 d,后一次灌胃45 min后,腹主动脉取血,离心制备含蜂胶及其特征单体移行成分的血清.提取SD大鼠乳鼠心肌细胞并培养,采用阿霉素(DOX)制备心肌细胞损伤模型,使用四甲基偶氮唑盐(MTT)代谢率法研究心肌细胞存活率;用过氧化氢(H2O2)制备心肌细胞损伤模型并测定不同样品中心肌细胞培养液中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及乳酸脱氢酶(LDH)含量.结果 MTT实验结果表明,蜂胶提取物组、白杨素组、高良姜素组能明显改善心肌细胞的存活率(P<0.05).H2O2心肌细胞损伤实验结果表明,蜂胶提取物组较模型组LDH、MDA 生成量降低,SOD 活性提高,差异有统计学意义(P<0.05);而白杨素组、高良姜素组的LHD、MDA和SOD与模型组差异无统计学意义(P>0.05).结论 药典剂量下,蜂胶血液移行成分具有心肌细胞保护作用,减轻阿霉素、H2O2诱导的心肌细胞损伤,其机制可能与抗氧化有关;白杨素、高良姜素可改善阿霉素引起的心肌细胞损伤,其机制可能与抗氧化无关.
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HPLC法测定紫果西番莲叶中白杨素的含量
目的:建立测定紫果西番莲叶中白杨素含量的方法.方法:样品经硅胶柱色谱分离纯化后进行高效液相色谱分析.色谱柱为HypersilODSC18(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-0.1磷酸(18∶82),流速为1.0mL·min-1,检测波长为220nm,进样量为10μL.结果:白杨素进样浓度在0.012～0.120mg·mL-1范围内与峰面积积分值呈良好线性关系(r=0.9980);平均加样回收率为99.41％,RSD=1.6％(n=6).结论:该方法准确、可靠、重复性好,可用于西番莲属植物中白杨素含量的测定.
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HPLC法测定不同产地蜂胶中白杨素的含量
目的:测定国内不同产地蜂胶中白杨素的含量.方法:采用HPLC法,Diamonsil(钻石)C18(46mm×250mm, 5μm)色谱柱,甲醇-0.4%的磷酸水(65:35)为流动相,流速为1.0mL/min,检测波长为256nm.结果:白杨素在0.00592～0.03552ms/mL范围内呈良好的线性关系(R2=0.9999);白杨素的含量,山东高,为23.054mg·g-1,其次是内蒙和河南,分别为14.170ms·g-1,13.656mg·g-1,甘肃低为6.697mg·g-1.结论:不同产地蜂胶中白杨素的含量有一定差异.
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白杨素对老年大鼠冠状动脉的保护作用及其机制研究
目的:研究白杨素对老年冠状动脉的保护作用及其机制.方法:利用微血管张力记录仪观察白杨素对老年大鼠冠状动脉肌张力的影响,利用Langedorff实验系统观察白杨素对大鼠离体心脏冠脉流量的影响.结果:1.白杨素(10-6,3×10-6,105,3×105,10-4 mol/L)对冠状动脉血管环静息肌张力没有显著影响;2.白杨素或阳性对照药物芦丁(10-6,3×10*,105,3×10-5,10-4 mol/L)对高钾预收缩的青年大鼠冠脉血管环的大舒张百分比为(30.3±4.2)％和(40.4±3.5)％,二者比较有统计学差异(P＜0.05);白杨素或芦丁(10-6,3×10-6,10-5,3×10-5,104 mol/L)对内皮素预收缩的青年大鼠冠脉血管环的大舒张百分比为(31.7±3.3)％和(42.3±4.2)％,二者比较有统计学差异(P＜0.05);白杨素或芦丁(10-6,3×10-6,10-5,3×10-5,104 mol/L)对高钾预收缩的老年大鼠冠脉血管环的大舒张百分比为(58.9±4.1)％和(65.5±4.2)％,二者比较有统计学差异(P＜0.05);白杨素或芦丁(10-6,3×10-6,104,3×10-5,10-4 mol/L)对内皮素预收缩的老年大鼠冠脉血管环的大舒张百分比为(67.6±5.2)％和(78.2±3.2)％,二者比较有统计学差异(P＜0.05);3.白杨素(10-6,3 × 10-6,105,3×10-5,10-4 mol/L)浓度依赖性舒张高钾和内皮素预收缩的青年和老年大鼠的冠脉血管环,对高钾预收缩冠脉环的大舒张百分比分别为(30.3±4.2)％(青年)和(58.9±4.1)％(老年),两组之间有显著性差异(P＜0.05);对内皮素预收缩冠脉环的大舒张百分比分别为(31.7±3.3)％(青年)和(67.6±5.2)％(老年),两组之间有显著性差异(P＜0.05);4.提前孵育电压依赖性钾通道阻断剂4-AP(4-氨基吡啶,10-3 mol/L),使白杨素对高钾或内皮素预收缩老年大鼠冠脉的舒张幅度分别降低了(17.1±3.2)％和(19.4±4.2)％;而提前孵育钙激活的钾通道阻断剂TEA(四乙基铵,10-4 mol/L),对高钾或内皮素预收缩老年大鼠冠脉的舒张幅度没有产生显著影响;5.白杨素(10-6,3×10-6,10-5,3×10-5,10-4mol/L)浓度依赖性增加青年和老年大鼠离体心脏的冠脉流量,大增加幅度分别为(17.3±3.1)％(青年)和(25.4±4.2)％(老年).结论:白杨素对老年大鼠冠状动脉有明显的舒张作用,其舒张作用与激活电压依赖性钾通道有关.
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UPLC法测定益智中的白杨素和圆柚酮
目的 采用超高效液相色谱法(UPLC)同时测定益智药材中的白杨素和圆柚酮.方法 色谱柱为Acquity UPLC BEH C18柱(100mm×2.1 mm,1.7 μm),流动相为乙腈-水溶液,流速0.2 mL· min-,采用梯度洗脱,检测波长251 nm.结果 白杨素0.139 ～347.5 μg·mL-1、圆柚酮0.197 ～ 492.5μg· mL-1与峰面积呈良好的线性关系(r2分别为0.9995、0.9994).平均加样回收率分别为98.97％(RSD=1.94％,n=9)、98.90％(RSD=1.45％,n=9).不同地区的益智和益智的不同部位中两种成分的含量均有明显差异.结论 所用方法准确、简单、重复性好,适用于益智中白杨素和圆柚酮的含量测定.
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HPLC法测定蜂珍膏中白杨素和高良姜素的含量
目的:建立测定蜂珍膏的高效液相色谱含量测定方法.方法:采用高效液相色谱法,色谱柱:Zorbox SB - C18(150 mm ×4.6mm,5μm)；流动相:甲醇-0.1％甲酸；梯度洗脱:0→30min,甲醇-0.1％甲酸比例由50∶ 50→75∶25(v/v)；流速:1.0mL min1-1；检测波长:267 nm；柱温:25℃；进样量:10.0μl.结果:白杨素在0.61 -4.3μg.ml-1(r =0.9996)范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系；平均加样回收率为98.82％,RSD=1.46％ (n =6).高良姜素在0.40 - 3.9μg.ml-1(r=0.9995)范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系；平均加样回收率为98.64％,RSD=1.03％ (n =6).结论:该方法是一种灵敏、准确的方法,可用于该制剂的质量控制.
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中药复方制剂蜂珍膏质量标准的研究
目的:建立蜂珍膏的质量标准.方法:采用TLC对方中蜂胶、黄柏、三七进行鉴别;采用HPLC对制剂中白杨素的含量进行测定.结果:TLC法能检出蜂胶、黄柏和三七;平均加样回收率为99.22％,RSD=1.4％ (n =6).结论:方法快速、简便,适合该制剂的质量控制.
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不同产地盐益智仁炮制前后白杨素的含量测定
目的：比较不同产地益智仁盐炙前后白杨素的含量差异。方法：采用高效液相色谱法，色谱柱：Kromasil C18色谱柱（250×4.6mm，5μm）；流动相：2.5％四氢呋喃甲醇－水梯度洗脱；流速：1.0ml ／min，检测波长：269nm。结果：白杨素在0～13μg 之间呈线性关系（r ＝0.9999），平均加样回收率为87.54％，RSD 为1.93％（n ＝5）；有4个样品在炮制后白杨素含量增加，1个样品减少。结论：采用高效液相色谱法测定益智仁中白杨素含量的方法简单、快速，结果准确、可靠。
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白杨素诱导白血病细胞 HL -60凋亡及其机制
目的：检测白杨素诱导白血病细胞 HL -60凋亡及其机制。方法：分别利用 MTT 实验和 Annexin V- FITC/ PI 双染实验检测细胞增殖和凋亡。Western blot 技术检测相关通路蛋白变化。结果：白杨素可以明显诱导白血病细胞 HL -60凋亡。白杨素处理后细胞的 p - AKT 蛋白水平明显下降。结论：白杨素能够通过AKT 通路诱导 HL -60细胞凋亡。
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白杨素对甲状腺癌细胞 SW579增殖和侵袭的影响
目的：检测白杨素对甲状腺癌 SW579细胞增殖和侵袭的影响及其机制。方法：利用 MTT 实验和 Tr-answell 实验检测细胞增殖和侵袭。Western blot 技术检测相关蛋白变化。结果：白杨素可以明显抑制 SW579细胞增殖和侵袭。白杨素处理后的细胞中 E - cadherin 表达增高，而 N - cadherin 表达降低。结论：白杨素能够通过 EMT 抑制 SW579细胞侵袭。
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HPLC法测定中药木蝴蝶中黄芩苷和白杨素
目的：建立HPLC测定中药木蝴蝶干燥种子中的黄芩苷和白杨素的方法。方法使用岛津2010 AHT型高效液相色谱系统，Waters Xtera C18色谱柱（150 mm ×4．6 mm ，5μm），以乙腈-0．5 mL · L-1甲酸水溶液（50∶50）为流动相，流速1．0 mL · min-1，进样量10μL ，双波长检测，检测波长分别为黄芩苷280 nm ，白杨素275 nm ，柱温为30℃。结果在该色谱条件下，黄芩苷和白杨素分离良好，可在较短时间内对2个化合物进行定量分析。结论该方法快速、稳定，能够用于木蝴蝶的质量控制。
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不同固体制剂中白杨素的溶出度评价
目的：考察白杨素不同固体制剂的体外溶出度，并建立白杨素制剂的溶出度HPLC测定方法。方法分别以体积分数40％和50％乙醇溶液，5和10g?L－1十二烷基硫酸钠（SLS）溶液为溶出介质，对制备的3种白杨素固体制剂进行体外溶出度考察，并建立白杨素溶出度HPLC测定方法。结果10g?L－1十二烷基硫酸钠溶液更适合作为本研究中制备的3种白杨素固体制剂的溶出介质，白杨素微粉化胶囊剂的溶出度高。此外，初步探讨了白杨素固体制剂体外溶出标准。结论不同制剂的白杨素溶出度差异较大，微粉化工艺能显著提高白杨素的溶出度。
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白杨素对结肠癌SW480细胞体内外抑制作用
目的:观察白杨素(Chrysin,ChR)对结肠癌SW480细胞体内外的抑制作用.方法:采用CCK-8法检测白杨素对SW480细胞增殖活力的影响,采用Hochest33258染色检测SW480细胞形态变化及凋亡,观察白杨素对体外结肠癌细胞的生长抑制作用;建立结肠癌SW480细胞株裸鼠异种移植瘤模型,共24只,分为4组,每组6只,即对照组、白杨素高、中、低剂量组.观察不同剂量白杨素对体内肿瘤生长的抑制作用.结果:白杨素对SW480细胞具有较强的增殖抑制作用,20、40、80μM抑制率分别为10.10％、45.63％、61.96％,且呈剂量依赖关系;白杨素可诱导结肠癌SW480细胞凋亡,凋亡率高低呈剂量依赖关系;与对照组相比,白杨素各治疗组体内异种移植肿瘤的重量均减少(P<0.01),且白杨素低、中、高剂量组的抑瘤率分别为25.91％,39.98％和56.77％.结论:白杨素对体内外结肠癌SW480细胞生长具有较强的抑制作用,这与白杨素能够诱导其凋亡相关.
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木蝴蝶树皮中黄芩苷和白杨素的HPLC分析
目的:建立测定木蝴蝶树皮中黄芩苷和白杨素的反相液相色谱法.方法:采用Phenomenex ODS 3(250 mm ×4.6 mm,5μm)色谱柱;流动相:乙腈-0.2%磷酸溶液,梯度洗脱[0～10 min,乙腈-0.2%磷酸溶液比例(25:75);10～25 min乙腈-0.2%磷酸溶液比例由(25:75)→(60:40)],流速:1.0 mL·min-1;检测波长:268 nm;柱温:30℃.结果:黄芩苷、白杨素线性范围分别为0.03～7.55 mg(r=0.9999)和0.01～2.21 mg(r=0.9999);黄芩苷、门杨素的平均回收率(n:9)分别为96.8%和97.2%.结论:该方法简便、准确,重复性好,为木蝴蝶树皮的进一步研究和质量控制提供科学依据.
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蜂胶中白杨素和高良姜素的HPLC分析
目的:建立测定蜂胶中白杨素和高良姜素的反相高效液相色谱法,并用该方法测定9个产地蜂胶样品中白杨素和高良姜素的含量.方法:采用Zorbax SB-C18(150 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱;流动相:甲醇-0.1%甲酸;梯度洗脱:0→35 min,甲醇-0.1%甲酸比例由(50∶50)→(75∶25);流速:1.0 mL·min-1;检测波长:267 nm;柱温:30℃.结果:白杨素在0.08～4.1 μg(r=0.9999)范围内线性关系良好,其高、中、低3个量的平均加样回收率分别为99.1%,101.2%,99.7%;RSD分别为1.3%,1.8%,1.4%.高良姜素在0.06～3.8 μg(r=0.9998)范围内线性关系良好,其高、中、低3个量的平均加样回收率分别为99.7%,100.6%,100.2%;RSD分别为1.0%,1.7%,1.8%.9个蜂胶样品中白杨素和高良姜素含量范围分别为2.25%～5.58%和2.18%～3.44%.结论:该方法是一种灵敏、准确的分析方法.
