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循经取穴针刺对心肌缺血大鼠模型心肌细胞瞬时外向钾通道基因表达的影响
目的:探讨针刺不同经脉腧穴对心肌细胞瞬时外向钾通道(Kv1.4、Kv4.2、Kv4.3)及其辅助亚基(KChIP2)表达水平变化的影响.方法:通过大剂量注射盐酸异丙肾上腺素(ISO)建立心肌缺血大鼠模型,随机分为5组:对照组、模型组、内关组、列缺组和非经非穴组.针刺干预7d后,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-TimePCR)技术,检测大鼠左心室肌上述基因的表达情况.结果:与模型组比较,内关组、列缺组待测基因表达显著升高,差异有统计学意义(P＜0.05);与内关组比较,列缺组、非经非穴组待测基因表达显著降低,差异有统计学意义(P＜0.05);结论:心肌细胞瞬时外向钾通道(Kv1.4、Kv4.2、Kv4.3)及其辅助亚基(KChIP2)的异常表达是心肌缺血的发病机制之一,针刺手厥阴心包经内关穴抗心肌缺血具有循经特异性.
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牛磺酸镁对哇巴因致大鼠心室肌细胞瞬时外向钾离子通道异常的影响
目的:观察牛磺酸镁配合物(taurine magnesium coordination compound,TMCC)在细胞水平对哇巴因致大鼠心室肌细胞心律失常的瞬时外向钾电流的作用.方法:酶解法分离大鼠单个心室肌细胞,5 μmol· L-1哇巴因诱发细胞水平心律失常,采用全细胞膜片钳技术,在电压钳模式下记录下不同浓度TMCC及胺碘酮对正常细胞和哇巴因所致大鼠单个心室肌细胞心律失常模型Ito变化.结果:TMCC对正常细胞Ito呈浓度依赖性抑制作用.24 μmol·L-胺碘酮使电流减少到(17.36±1.20) pA/pF(P ＜0.01).TMCC及胺碘酮均使激活曲线右移,失活曲线左移.5 μmol· L-哇巴因使Ito从(25.74±3.60) pA/pF减少到(18.79±2.78) pA/pF(P＜0.01).哇巴因使激活曲线右移,失活曲线左移.TMCC未能进一步改变哇巴因诱导Ito的减少,而胺碘酮则使之减小到(13.64±1.03) pA/pF.TMCC对激活、失活曲线无明显作用,而胺碘酮可使激活曲线进一步右移,失活曲线进一步左移.结论:TMCC抑制大鼠正常心室肌细胞的Ito,Ito是TMCC抗心律失常作用的离子靶点之一,TMCC不会进一步抑制由哇巴因诱发Ito的减少.
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慢性房颤患者心肌瞬时外向钾通道电流密度变化
目的 旨在研究慢性房颤患者心房肌瞬时外向钾通道电流的变化,为房颤机制的阐明提供更多的实验依据.方法 心房肌标本取材于体外循环手术患者右心耳.采用全细胞膜片钳技术研究心房肌瞬时外向钾通道电流密度的变化.结果 慢性心房颤动患者心房肌瞬时外向钾通道电流密度降低,在测试电位-20 mV以上各电位水平时均有显著性差异(n=16,P<0.05).结论 慢性房颤时瞬时外向钾电流密度降低对房颤的电重构起一定的作用.
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神经调节蛋白1对心肌梗死急性期大鼠心肌组织钾、钙离子通道蛋白表达的影响
目的：探讨神经调节蛋白1（NRG-1）对心肌梗死急性期大鼠心肌组织钾、钙离子通道蛋白表达的影响。方法45只健康SD大鼠随机分为3组，假手术组（SO组）、急性心肌梗死模型组（AMI组）、急性心肌梗死rh-NRG-1干预组（ NRG-1组），每组15只。建立急性心肌梗死模型24 h后取心脏梗死周边区心肌组织，以Western blot法检测瞬时外向钾通道KV1．4和L型钙通道β亚单位LTCCsβ的蛋白表达情况。结果 AMI组和NRG-1组模型建立成功，心肌梗死面积比较差异无统计学意义[（35．4±3．6）％ vs．（33．3±4．9）％， P ＞0．05]。与SO组比较，AMI组KV1．4降低（0．43±0．23 vs．0．20±0．17， P ＜0．05）；而LTCCsβ差异无统计学意义（1．05±0．31 vs．1．00±0．21， P ＞0．05）。与AMI组相比，NRG-1组（0．66±0．29）梗死周边区心肌组织KV1．4蛋白表达显著增加，LTCCsβ蛋白表达（0．18±0．11）显著下降，差异均有统计学意义（ t ＝20．95， P ＜0．05）。结论心肌梗死急性期给予NRG-1干预，能够上调KV1．4，下调LTCCsβ的蛋白表达，可发挥稳定心电保护心肌的作用。
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实验性高脂血症大鼠心肌瞬时外向钾通道Kv4.2、Kv4.3基因mRNA表达的研究
目的研究大鼠实验性高脂血症模型中心肌细胞瞬时外向钾通道Kv4.2、Kv4.3基因mRNA的表达情况.方法通过脂肪乳灌胃4周,建立实验性高脂血症大鼠模型.采用Trizol一步法提取心室肌总RNA,并用RT-PCR(逆转录聚合酶链反应)方法检测高脂组与正常组间Kv4.2、Kv4.3基因mRNA的表达差异.结果高脂组Kv4.2、Kv4.3基因mRNA的表达高于正常组(P＜0.05).结论实验性高脂血症大鼠心肌细胞瞬时外向钾通道Kv4.2、Kv4.3基因mRNA的表达增强.
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雌激素调控瞬时外向钾通道对大鼠慢性颞叶癫发作的影响
目的 探讨雌激素对大鼠慢性颞叶癫发作的影响及其与瞬时外向钾通道(kv4.2)之间的关系.方法 SD雌性大鼠随机分为正常对照组、去势对照组、正常致组、去势致组.应用毛果芸香碱诱导大鼠癫持续状态(SE),观察大鼠行为学变化.经4周后成为慢性颞叶癫大鼠.Western bolt方法检测大鼠海马瞬时外向钾通道Kv4.2蛋白表达水平.结果 与正常致组比较,去势致组达到SE的潜伏期延长、死亡率降低,但差异无统计学意义(P>0.05);去势致组的癫发作强度较正常致组轻,差异有统计学意义(P<0.05).去势致组和正常致组在SE 4周后海马Kv4.2均较正常对照组显著升高,均差异有统计学意义(P<0.05和P<0.01).去势对照组和去势致组比较,均未见对Kv4.2蛋白表达产生影响,说明Kv4.2蛋白表达升高为癫发作所致.结论 大鼠癫发作后Kv4.2表达增加、瞬时外向钾电流增强、神经冲动的发放频率减慢,可能是产生代偿性自我保护反应的结果;虽然去势雌性大鼠未对Kv4.2表达产生影响,但出现潜伏期延长和死亡率降低、发作强度降低的行为学趋势,提示低剂量雌激素可能存在对癫发作的保护作用.
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白藜芦醇甙增强大鼠心室肌细胞内向整流钾通道电流
本研究旨在应用全细胞膜片钳技术观察白藜芦醇甙(polydatin)对大鼠心室肌细胞瞬时外向钾通道电流(Ito)、稳态外向钾通道电流(Iss)和内向整流钾通道电流(IK1)的影响.结果显示:(1)白藜芦醇甙(10 μmol/L以上浓度)可通过非浓度依赖性方式增加心室肌细胞IK1.(2)白藜芦醇甙对心室肌细胞Ito无影响,对Ito的激活、失活和失活后的恢复动力学亦无影响.(3)白藜芦醇甙对心室肌细胞Iss无明显影响.以上结果提示,白藜芦醇甙对大鼠心室肌细胞IK1具有激活作用,可增加IK1,但对Ito和Iss无明显影响；白藜芦醇甙对IK1的作用可能是其抗心律失常作用的离子机制之一.
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电压门控性钾通道与认知功能障碍的研究进展
认知功能障碍患者的增多给社会、家庭带来了沉重的精神和经济负担。电压门控性钾通道（ voltage-gated potas-sium channels， Kv）主要分为延迟整流钾通道和瞬时外向钾通道，参与认知功能障碍的发生。文中对Kv通道与认知功能障碍，以及Kv通道与在学习和记忆过程中起重要作用的N-甲基-D-天冬氨酸（N-methyl-D-aspartic acid， NMDA）受体之间的关系作一综述。
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蛇床子素对体外培养大鼠乳鼠心肌细胞钾通道的影响
目的 研究蛇床子素对体外培养大鼠乳鼠心肌细胞钾通道电流的影响.方法 采用全细胞膜片钳技术,首先在乳鼠心肌细胞上诱导出内向整流钾电流和瞬时外向钾电流,然后观察蛇床子素对这2种钾电流的影响.结果 蛇床子素以浓度依赖的方式快速可逆地抑制心肌细胞瞬时外向钾电流,抑制的半有效浓度为(101.1±5.2)μmol·L-1,蛇床子素不改变瞬时外向钾通道的激活动力学.蛇床子素对内向整流钾电流有一定的抑制作用,在200 μmol·L-1的浓度下抑制(68.2±7.5)％的内向钾电流.结论 蛇床子素能够抑制乳鼠心肌细胞钾通道电流,并呈浓度依赖性.
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替米沙坦对“两肾一夹”大鼠心房肌瞬时外向钾通道和L型钙通道表达的影响
目的:本实验研究替米沙坦对“两肾一夹”(Two kidney one clip,2K1C)SD大鼠心房肌细胞瞬时外向钾通道Ito和L型钙通道Ica-Lα亚基编码基因(Kcnd2和Cacnalc)的mRNA和蛋白(Kv4.2和Cav1.2)变化的影响.方法:雄性SD大鼠39只,分成4组:对照组、2K1C+替米沙坦低剂量组[5mg/(kg·d)]、2K1C+替米沙坦高剂量组[10 mg/(kg·d)]和2K1C组.用药4周后采用反转录聚合酶链反应及免疫印记反应(Western blot)方法分别测定Kcnd2、Cacnalc的mRNA及蛋白水平并对结果进行半定量分析.结果:2K1C组Kcnd2的mRNA及蛋白水平低于对照组(0.23±0.02 vs. 1.0±0.12,0.34±0.11 vs.0.78±0.13,P＜0.01),Cacnalc高于对照组(1.54±0.17 vs.1.0±0.13,1.58±0.09 vs.0.92±0.05,P＜0.01);替米沙坦5、10 mg组Kcnd2的mRNA及蛋白水平均高于2K1C组(0.32±0.01,0.53±0.11 vs.0.23±0.02;0.54±0.07,0.72±0.08 vs.0.34±0.11,P＜0.01),Cacnalc低于2K1C组(1.21±0.18,1.02±0.14 vs.1.54±0.17; 1.21±0.06,0.98±0.07 vs.1.58±0.09,P＜0.01).结论:替米沙坦通过调节Kcnd2和Cacnalc的mRNA和蛋白水平来发挥其抗心律失常作用.
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心肌组织瞬时外向钾通道的研究进展
瞬时外向钾通道(transient outside potassium channel)在哺乳动物心肌组织中高度表达,参与心肌细胞动作电位复极1期和2期,对动作电位时程和形态有重要影响.瞬时外向钾通道在维持心脏正常功能活动中起重要作用.许多心血管疾病中表现出瞬时外向钾电流密度和通道表达的改变.
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人心房肌KChIP2基因表达质粒pEGFP-KChIP2的构建和鉴定
目的:KChIP5作为瞬时外向钾通道(Ito)重要的辅助亚基,在调控通道基因表达和电流特性中起重要作用.本实验拟构建人心房肌KChIP2基因表达质粒,为研究KChIP2对Ito的调控功能奠定基础.方法:①提取人心房肌总RNA,逆转录得到cDNA;②通过特异性引物进行PCK扩增得到KChIP2编码区全长序列,亚克隆到pMD18-T载体中,得到重组克隆质粒pMD18-T-KChIP2;③再设计带有酶切位点HindⅢ和BamH Ⅰ的特异性引物,对重组克隆质粒pMD18-T-KChIP2进行PCK扩增,得到含有酶切位点的KChIP2编码区全长序列;④对含有酶切位点的KChIP2全长片段和pEGFP-c1进行HindⅢ和BamH Ⅰ双酶切反应,然后进行电泳后胶回收,再进行连接和转化反应;⑤提取质粒,测序鉴定.结果:质粒测序结果与PubMed数据库KChIP2(AY026328)序列比对,同源性为99%.结论:成功构建人心房肌KChIP2基因表达质粒,为下一步转染实验研究KChIP2对瞬时外向钾通道的功能调控奠定了基础.
