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突变型P53和Ki67在人肝细胞癌中的表达及临床意义
目的 检测人肝细胞癌(HCC)中突变型P53和Ki67的表达,并探讨其与临床病理特征的关系及其在预后评估中的意义.方法 采用免疫组织化学SP法检测病理确诊的102例HCC中突变型P53和Ki67的表达,分析两者与HCC临床病理特征的关系.结果 HCC中突变型P53和Ki67表达率分别为50.98%(52/102)和48.04%(49/102);突变型P53和Ki67的表达分别在有无肿瘤脉管浸润组间、有无淋巴结转移组间、TNMⅠ+Ⅱ期与Ⅲ+Ⅳ期组间比较差异有统计学意义(P<0.05、P<0.01或P<0.001),在患者性别、年龄、肿瘤大小、Edmondson分级、有无肝硬化、HBsAg阳性/阴性组间分别比较突变型P53和Ki67的表达率,结果差异均无统计学意义(P>0.05);突变型P53和Ki67的阳性表达呈正相关(r=0.472,P<0.001).结论 检测突变型P53和Ki67的表达可能对HCC的发展和预后判断具有临床价值.
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锤头状核酶对肝癌突变基因p53的抑制作用
目的探讨p53核酶对肝癌细胞突变型抑癌基因p53的抑制作用. 方法应用计算机设计并合成针对突变型p53(249位密码子AGG→AGT)的锤头状核酶RZ,构建其体外转录和真核表达载体,检测核酶对突变型p53(mtp53)的体外切割作用,并在Lipofect AMINETM2000的介导下转染肝癌细胞MHCC97,应用逆转录聚合酶联反应(RT-PCR)检测核酶对肝癌细胞突变型p53的抑制作用. 结果测序证实核酶基因被正确克隆入体外转录载体pBSKU6和真核载体pEGFPC1中.体外切割效率为42%,而野生型p53(wtp53)没有被切割.在LipofectAMINETM2000的介导下成功转染肝癌细胞MHCC97, RT-PCR检测证实突变型p53的mRNA水平明显下降,细胞内的切割效率为69%. 结论 p53核酶可成功抑制肝癌细胞中突变型p53的表达,为肝癌的基因治疗提供了一个新的选择.
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血小板衍生生长因子受体-β信号促进突变型p53介导MDA-MB-231细胞阿霉素耐药
目的 探讨血小板衍生生长因子受体-β (platelet-derived growth factor receptor-beta, PDGFR-β)信号与三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞阿霉素耐药的关系及机制.方法 采用流式细胞术、MTS法检测PDGF-DD(PDGFR-β特异性配体)对阿霉素所致的细胞G2期阻滞、细胞凋亡及死亡情况的影响;qPCR和Western blot检测突变型p53、cdk1、PDGFR-β、p21、bax、hsp90及TopBP1表达水平,以研究PDGF-DD、Wortmannin(PI3K抑制剂)对突变型p53及其功能的影响;利用siRNA干扰技术、qPCR探讨突变型p53、PDGF-DD和耐药相关基因表达的关系.结果 PDGF-DD明显提高阿霉素条件下细胞存活率、降低细胞凋亡率、一定程度改善细胞G2期阻滞,显著提高突变型p53蛋白水平并改变其下游基因cdk1、PDGFR-β、p21、bax表达,但突变型p53 mRNA变化差异不具统计学意义(P＞0.05).PDGF-DD显著上调hsp90(突变型p53蛋白稳定因子)和TopBP1(突变型p53功能促进蛋白)mRNA和蛋白水平,Wortmannin处理后表达明显下降.PDGF-DD明显提高耐药相关基因FOXC2、twist、snail、nanog、oct4 mRNA水平,p53 siRNA处理后mRNA表达显著下降.结论 PDGF-DD/PDGFR-β信号能诱导MDAMB-231细胞发生阿霉素耐药,通过PI3K途径转录水平上调hsp90和TopBP1表达、稳定并促进突变型p53介导细胞耐药是其重要机制之一.
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“10-23”脱氧核酶对突变型p53基因表达的抑制作用
目的 探讨“10-23”脱氧核酶(“10-23”DZ)抑制突变型p53基因表达的效应.方法 设计合成针对mp53( R273H,CGT＞ CAT)的“10-23”DZ:p53DZ7、p53DZ9、p53DZ11及硫代修饰物p53DZ 11-s.在无细胞体系观察“10-23”DZ对p53RNA的切割效应.经脂质体将DZ转染进HT29结肠癌细胞株,RT-PCR检测各种DZ对HT29细胞mp53 mRNA的影响;免疫细胞化学及Image Pro Plus 4.5图像分析系统检测mp53蛋白,观察各种DZ及ASO对mp53蛋白表达的影响.结果 p53DZ11和p53DZ11-s在无细胞体系能有效切割mp53 RNA,而对wp53RNA的作用弱.在细胞内p53DZ11-s在浓度为250nM时,能下调HT29细胞mp53 mRNA水平和mp53蛋白表达.结论 针对mp53的273突变点所设计的p53DZ11、p53DZ11-s在细胞外均能有效切割mp53 RNA,在HT29细胞内p53DZ11-s也能抑制mp53mR-NA及mp53蛋白的表达.
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Pokemon在子宫内膜癌组织中的表达及其与突变型p53的相关性研究
目的 初步探讨Pokemon表达与子宫内膜癌(endometrial carcinoma,EC)临床特征之间的关系,并分析不同类型EC组织中Pokemon表达与p53突变的关系,为寻求基因治疗的有效靶点提供理论基础.方法 收集四川大学华西第二医院病理科2012年7月至2014年7月的子宫内膜存档石蜡标本共98例(其中EC 58例,正常内膜组织20例,非典型增生内膜组织20例),采用免疫组化法检测每例切片中Pokemon蛋白的表达情况,分析其表达水平与临床病理特征的关系,并分析Pokemon和突变型p53两者之间的相关性.结果 Pokemon在正常内膜组织、非典型增生内膜组织、EC组织的阳性率分别为25.00％(5/20)、60.00％(12/20)、93.10％(54/58),表达程度逐渐增强(P均＜0.05);Pokemon在Ⅱ型EC组织的阳性率97.14％(34/35)高于Ⅰ型的阳性率86.96％(20/23)(P=0.018);Pokemon在Ⅲ～Ⅳ期、Ⅱ型及Ki-67增殖指数≥50的内膜癌组织中表达程度较高(P=0.012、0.023、0.029);Ⅱ型EC组织中,Pokemon和突变型p53的秩和相关系数rS=0.669(P=0.000).结论 Pokemon的高表达引起突变型p53表达上调,可能是Ⅱ型EC的致癌模式之一.
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HSP90功能抑制对乳腺癌细胞端粒酶和突变型P53的影响
目的 应用HSP90功能抑制剂格尔德霉素(geldanamycin,GA)研究HSP90功能抑制对乳腺癌细胞增殖及端粒酶活性和突变型P53表达的影响.方法 培养人乳腺癌细胞株MDA-MB-435s,采用MTT法检测GA对 MDA-MB-435s 细胞的生长抑制作用,流式细胞术分析细胞周期,用TRAP-ELISA法检测细胞端粒酶活性.Western blot 检测细胞内突变型P53蛋白表达变化.结果 GA对MDA-MB-435s 细胞增殖有明显抑制作用,呈时效量效依赖关系,GA 作用后细胞呈现 G2/M 期阻滞,细胞内端粒酶活性下降,突变型 P53 蛋白表达明显下调.结论 乳腺癌细胞中端粒酶活化和突变型P53表达与HSP90功能有关,用GA抑制HSP90功能可降低端粒酶活性和突变型P53表达,从而抑制乳腺癌细胞增殖.
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诱导型一氧化氮合酶在反应性及肿瘤性星形胶质细胞中的表达
目的:探讨诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、突变型p53及VEGF在反应性及肿瘤性星形胶质细胞中的表达及其在星形胶质细胞瘤发生发展、血管形成中的作用.方法:应用组织芯片及免疫组织化学技术检测12例正常脑组织、49例星形细胞反应性增生、49例低级别(Ⅰ-Ⅱ级)及50例高级别(Ⅲ-Ⅳ级)星形胶质细胞瘤中iNOS、突变型p53、VEGF表达情况.结果:在正常脑组织中三者均为阴性表达;从星形细胞反应性增生组到高级别星形细胞瘤组,三者的阳性表达率均呈升高趋势,分别为:iNOS:28.89%(13/45),57.75%(27/47),81.63%(40/49);p53:23.81%(10/42),53.66%(22/41),79.55%(35/44);VEGF:22.73%(10/44),44.19%(19/43),69.77%(30/43),并且三者在星形细胞反应性增生组及低级别星形胶质细胞瘤组中的表达差异显著(P＜0.05);各实验组中iNOS与p53表达水平一致性较好,具有明显的相关性(P＜0.05);而iNOS与VEGF在低级别及高级别星形胶质细胞瘤组中表达水平具有较好的一致性及明显的相关性(P＜0.05),在反应性增生组表达无相关性(P＞0.05).结论:iNOS、突变型p53及VEGF的过表达是胶质瘤发生的早期分子生物学事件,三者相互作用共同促进星形胶质细胞瘤的发生发展及血管的形成;单一或联合检测可能有助于星形细胞反应性增生及低级别星形细胞瘤的鉴别诊断.
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Caspase-3、突变型p53在膀胱癌中的表达及预后意义
目的:研究Caspase-3、突变型p53在膀胱癌中的表达及预后意义.方法:应用免疫组化SP法检测55例行TUR-BT术切除膀胱癌组织石蜡切片中Caspase-3、突变型p53表达的情况,结合临床资料进行分析,15例正常膀胱黏膜为对照.结果:Caspase-3在膀胱癌标本中表达阳性率为36.4％ (20/55),与对照组阳性率80％ (12/15)相比差异有统计学意义(P＜0.05).突变型p53在膀胱癌标本中表达阳性率为65.5％(36/55),与对照组阳性率33.3％(5/15)相比差异具有统计学意义(P＜0.05),它与膀胱癌的初发和复发、病理分级、临床分期有显著相关(P＜0.05).膀胱癌中Caspase-3和突变型p53相比差异有统计学意义(P＜0.05).结论:Caspase-3表达和突变型p53对判断膀胱癌的预后有着重要的指导意义.
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凋亡相关蛋白Survivin及突变型p53在膀胱移行细胞癌中的临床意义
目的:Survivin、突变型p53在膀胱移行细胞癌(BTCC)中表达的临床意义.方法:应用SP免疫组织化学法检测60例行TUR-BT术切除BTCC标本组织石蜡切片中Survivin,突变型p53表达,结合临床资料进行分析,20例正常膀胱黏膜为对照.结果:Survivin在BTCC标本中的表达阳性率为70.0％ (42/60),而正常对照组中无1例呈阳性表达;Survivin表达与BTCC的初发、复发、病理分级有显著相关(P＜0.05),但与肿瘤数目,临床分期无关(P＞0.05);突变型P53在BTCC标本中表达阳性率为65.0％(39/60),与对照组阳性率35.0％(7/20)相比差异有统计学意义(P＜0.05),与BTCC的初发、复发、病理分级,临床分期有显著相关(P＜0.05),它与肿瘤数目无统计学意义(P＞0.05),BTCC中Survivin和突变型p53相比差异无统计学意义(P＞0.05).结论:Survivin在膀胱移形细胞癌中高表达提示该基因在BTCC发生发展中有着重要的作用,Survivin和突变型p53对临床医生判断BTCC的预后有着一定的临床指导意义.
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Survivin、Caspase-3、突变型p53在膀胱癌中的表达及预后意义
目的:Survivin、Caspase-3、突变型p53 在膀胱癌中的表达及预后意义.方法:应用S-P免疫组织化学法检测55例行TUR - BT术切除膀胱癌标本组织石蜡切片中Survivin、Caspase - 3、突变型p53表达的情况,结合临床资料进行分析,15例正常膀胱黏膜为 对照.结果:Survivin在膀胱癌标本中表达阳性率为70.9% (39 /55),而正常对照组中无一例阳性表达;Caspase - 3在膀胱癌标本中表达阳性率为36.4% (20/55),与对照组阳性率80% (12 /15)相比差异有统计学意义(P<0.05).突变型p53在膀胱癌标本中表达阳性率为55.5% (36/55),与对照组阳性率33.3% (5/15)相比差异无统计学意义(P＞0.05),它与肿瘤数目、膀胱癌的初发和复发、病理分级显著相关 (P<0.05).Survivin表达与膀胱癌的初发和复发、病理分级、临床分期有显著相关 (P<0.05),但与肿瘤数目无关;膀胱癌中Survivin和Caspase - 3表达,Caspase-3和突变型p53相比差异有统计学意义(P<0.05).结论:Survivin在膀胱癌中高表达提示该基因在膀胱癌发生发展中有着重要的作用,Caspase - 3表达和突变型p53对临床医生判断膀胱癌的预后有着重要的指导意义.
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非霍奇金淋巴瘤组织中突变型p53、bcl-2、Ki-67及survivin蛋白表达及临床意义
目的:探讨突变型p53、bcl-2、Ki-67、survivin在非霍奇金淋巴瘤(NHL)组织中的表达及其临床价值.方法:采用组织芯片技术及免疫组化SP法检测142例NHL和18例良性淋巴结病变组织中突变型p53、bcl-2、Ki-67、survivin蛋白的表达.结果:突变型p53、bcl-2、Ki-67、survivin蛋白在NHL中的表达阳性率分别为55.63%(79/142)、51.41%(73/142)、48.59%(69/142)和60.56%(86/142);与对照组相比具有非常显著性差异(P<0.01).在不同性别以及在不同细胞类别NHL中,突变型p53、bcl-2、Ki-67、survivin蛋白表达阳性率基本一致,统计分析无显著性差异(P>0.05);但在低年龄组、临床Ⅲ-Ⅳ期和高度恶性组突变型p53、bcl-2、Ki-67、survivin蛋白表达阳性率明显高于高年龄组、临床Ⅰ-Ⅱ期和低度恶性组,有显著性差异(P<0.05);突变型p53蛋白与Ki-67蛋白呈正相关(r=0.8769),survivin蛋白与bcl-2蛋白表达呈正相关(r=0.8846).结论:突变型p53、bcl-2、Ki-67、survivin蛋白在NHL组织中高表达,与NHL的发生与发展、细胞恶性程度和组织病理学等级密切相关.
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非小细胞肺癌组织FHIT和突变型P53表达的关联性及相互作用
目的:探讨FHIT和突变型P53在非小细胞肺癌(NSCLC)中表达的相关性以及两者潜在的相互作用. 方法: 采用免疫组化PicTureTM通用型二步法,检测FHIT和突变型P53蛋白在63例NSCLC和12例肺良性病变组织中的表达. 结果: NSCLC组织FHIT阳性率(42.9%)低于肺良性病变组织(75.0%);FHIT表达与病理分级(r=0.358, P＜0.05), TNM分期(r=0.314, P＜0.05)及淋巴结转移(r=0.380, P＜0.05)相关. 突变型P53在NSCLC组织中阳性率(52.4%)高于正常肺组织(8.3%);突变型P53表达与TNM分期(r=0.391, P＜0.05)及淋巴结转移(r=0.250, P＜0.05)相关,与病理分级无关联性. FHIT与突变型P53蛋白在63例NSCLC中表达相关(r=0.258, P＜0.05). 结论: P53突变和FHIT表达下调对NSCLC发生、发展均可能起重要作用, 在其病变过程中可能同时存在两条途径, 并可能相互交叉.
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凋亡诱导因子和突变型p53在胃癌前病变组织及胃癌组织中的表达及其相关性研究
目的：探讨凋亡诱导因子（AIF）与突变型p53（mp53）在胃癌前病变组织及胃癌组织中的表达及其相关性。方法胃癌根治术切除标本及胃镜活检标本125例，其中20例正常胃黏膜标本，42例低级别上皮内瘤变胃黏膜标本，23例高级别上皮内瘤变胃黏膜标本，40例胃癌组织标本，采用免疫组织化学染色技术检测各组的AIF及mp53的表达情况。结果 AIF在正常胃黏膜、低级别上皮内瘤变胃黏膜、高级别上皮内瘤变胃黏膜及绝大多数胃癌细胞胞质中表达，在少数胃癌细胞胞核中表达；mp53均在细胞核内表达。AIF与mp53的表达无相关性（P>0.05）。AIF和mp53在低级别上皮内瘤变胃黏膜、高级别上皮内瘤变胃黏膜及胃癌组织中的表达显著高于正常胃黏膜（P<0.01）。结论 AIF和mp53异常表达可能在胃癌发生发展过程中发挥作用。AIF蛋白表达量升高和p53基因发生突变在胃癌发生过程中均是早期事件。AIF在胃癌发生过程中可能执行氧化还原酶和细胞凋亡的双重功能，对其分子作用机制的深入探讨可能为胃癌的早期诊治提供新的思路。
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肝细胞癌DNA损伤修复基因APE1的表达及与p53的关系
目的 探讨肝细胞癌(HCC)中脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶(APE1)的表达特点及APE1与突变型p53表达的关系.方法 收集1991年至2004年第三军医大学大坪医院野战外科研究所病理科10例正常肝组织、40例结节性肝硬化组织和103例HCC组织标本,应用免疫组织化学SP二步法分别检测APE1和p53的表达情况.采用X~2检验、相关分析及K Independent-Samples Tests检验分析所得结果.结果 APE1在正常肝组织、肝硬化和HCC组织中均有不同程度的表达,阳性率分别为40.0%、82.5%、100.0%,三者比较差异有统计学意义(χ~2=47.852,P<0.01).正常肝组织APE1仅表达于细胞核;肝硬化和HCC组织中APE1出现异位表达,异位表达率分别为20.0%和53.4%(χ~2=20.757,P<0.01).不同APE1/p53表达模式的HCC临床分期及病理学分级比较差异有统计学意义(χ~2=12.910,14.481,P<0.01),APE1异位表达/p53阳性的HCC恶性程度高.结论 APE1过表达及异位表达与HCC的发生、发展密切相关;APE1异位表达和053突变可能在肿瘤的发生、发展过程中具有协同促进作用.
关键词： 肝肿瘤 脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶 突变型p53 -
非霍奇金淋巴瘤EB病毒与P53,bcl-2,C-myc蛋白表达及其意义
目的:探讨EB病毒LM-1与bcl-2、突变型p53、C-myc蛋白对NHL的发病的影响.方法:用免疫组化S-P法对39例NHL进行LMP-1、bcl-2、突变型p53、C-myc检测.选择同期增生性淋巴炎12例作为对照组.结果:LMP-1、bcl-2、突变型p53、C-myc在NHL的表达均明显高于对照组;LMP-1与突变型p53呈正相关,而与C-myc、bcl-2无相关性;bcl-2、突变型p53、C-myc之间的表达无相关性;LMP-1、bcl-2、突变型p53、C-myc对不同免疫表型及疾病分期无明显相关.结论:LMP-1、bcl-2、突变型p53、C-myc是导致T或B细胞NHL发病的原因之一;LMP-1可上调突变型p53,可能二者共同参与NHL淋巴细胞的恶性转化;LMP-1、bcl-2、突变型p53、C-myc与免疫分型和疾病的分期无关.
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放疗后脑恶性胶质瘤细胞内p53和p21WAF1蛋白的表达
目的探讨放射治疗后脑恶性胶质瘤细胞内p53蛋白及其下游靶基因p21WAF1和Bax表达的变化与内源性细胞内p53状态的关系.方法 Western Blot测定在放疗后不同时间点时两种人恶性胶质瘤细胞株:U87MG(野生型p53)和T98G(突变型p53)内p53、p21WAF1和Bax蛋白的表达,应用密度测定仪对表达的蛋白进行半定量分析.结果照射后2h,U87MG细胞内p53蛋白水平较照射前增加6倍,在24h内保持稳定,随后3d内继续增加.而p53下游靶基因p21WAF1蛋白被p53转录激活后6h开始增加,在12h大约是基线的10倍,随后其进一步增加.而在T98G细胞中放疗后p53蛋白表达无明显改变,在放疗后72h内没有观察到p21WAF1的表达.这两个细胞株中,Bax蛋白表达在放疗后均没有明显变化.结论放疗后恶性胶质瘤细胞内p53蛋白和其靶蛋白的激活和积聚取决于其内源性细胞内p53的状态.而Bax水平没有变化表明放射诱导的细胞凋亡并不需要bcl-2家族中该成员的参与.
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端粒酶逆转录酶及其调控因子C-myc、突变型p53在甲状腺肿瘤中的表达意义
目的 探讨人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA与其有关调控因子C-myc、突变型p53在甲状腺肿瘤中的表达意义.方法 采用原位杂交检测8s例甲状腺癌、20例甲状腺腺瘤与15例正常甲状腺组织中hTERTmRNA的表达,采用免疫组织化学法检测C-myc、突变型p53的表达. 结果 ①hTERTmRNA、C-myc的阳性表达与甲状腺癌的临床病理特征无关(P>0.05);突变型p53的表达与甲状腺癌的分化类型、有无淋巴结转移及临床分期有关(P<0.05);②hTERTmRNA与C-myc、突变型p53之间的相关性有统计学意义(P<0.05);C-myc与突变型p53之间的相关性无统计学意义(P>0.05).结论 端粒酶的活化与甲状腺癌的发生发展密切相关,C-myc与突变型p53在甲状腺癌中的表达增加激活了hTERTmRNA,从而导致甲状腺癌的发生.
