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化痰活血法对ApoE(-/-)小鼠主动脉胆固醇逆向转运相关蛋白表达的影响
目的:观察化痰活血法对ApoE基因敲除[ApoE(-/-)]小鼠主动脉胆固醇逆转运(RCT)主要相关蛋白小凹蛋白-1(caveolin-1)、清道夫受体BI(SR-BI)的影响.方法:4～6周龄ApoE(-/-)小鼠高脂饲料喂养16周后,分为化痰组、活血组、化痰活血组、普伐他汀组和模型对照组；另5周龄正常C57BL/6J家系小鼠10只,高脂饲料喂养16周,设为正常对照组.化痰组灌服小陷胸汤加枳壳水提液2.5 mL/100 g体质量,活血组灌服芎芍胶囊0.05 g/100 g体质量,化痰活血组灌服小陷胸汤加枳壳水提液2.5 mL/100 g体质量+芎芍胶囊0.05 g/100 g体质量,普伐他汀组灌服普伐他汀0.3 mg/100 g体质量；模型对照组及正常对照组均灌服生理盐水1 mL/100 g体质量,连续给药16周.取主动脉常规石蜡切片光镜下观察,测量动脉面积及斑块面积；免疫组化观察caveolin-1、SR-BI表达.结果:在高脂刺激下,ApoE(-/-)小鼠主动脉caveolin-1及SR-BI表达均有所增加(P＜0.01)；普伐他汀组、化痰组、活血组及化痰活血组均可显著提高ApoE(-/-)小鼠主动脉caveolin-1及SR-BI的表达,组间比较显示化痰活血组caveolin-1及SR-BI表达显著高于单纯化痰组和活血组(P＜0.05,P＜0.01).活血、化痰以及活血化痰三种治法均可显著减缓ApoE(-/-)小鼠主动脉粥样硬化病变程度,效果与普伐他汀相当.结论:活血、化痰或活血化痰法均可提高caveolin-1和SR-BI的表达,促进RCT过程,减少ApoE(-/-)小鼠主动脉粥样硬化斑块形成,其中活血化痰组在促进胆固醇逆向转运方面优于单纯活血组或化痰组.
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小凹蛋白-1介导阿托伐他汀对自发性高血压大鼠肾叶间动脉收缩反应的抑制作用
目的 肾叶间动脉收缩反应增强是高血压肾脏损伤的早期表现,是重要的预防和治疗靶点.平滑肌细胞小凹蛋白-1 (caveolin-1)上调是其发生机制之一,阿托伐他汀(atorvastatin,ATVS)可通过降低胆固醇(cholesterol,CHO)调控caveolin-1表达,本研究探讨ATVS是否通过caveolin-1抑制自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rat,SHR)肾叶间动脉对血管紧张素Ⅱ(angiotensin,Ang Ⅱ)的收缩反应.方法 12只SHR大鼠随机分为2组:SHR对照组及ATVS(50 mg·kg-1·d-1)处理组,每组6只,6只Wistar Kyoto (WKY)大鼠作为正常对照组.采用尾套法测量大鼠尾动脉收缩压(systolic blood pressure,SBP),血管环张力描记技术检测肾叶间动脉收缩反应,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测caveolin-1和血管紧张素Ⅱ1型受体(angiotensin Ⅱ type 1 re-ceptor,AT1)蛋白表达,免疫沉淀和Western blot检测caveoin-1与AT1的结合.结果 与WKY大鼠相比,SHR组SBP显著增高(P＜0.05),肾叶间动脉对AngⅡ的收缩反应强度及敏感性均显著增强(P＜0.05);4周ATVS处理显著降低SHR组SBP(P＜0.05)及肾叶间动脉对AngⅡ的收缩反应强度及敏感性(P＜0.05).SHR组动脉AT1及caveolin-1的蛋白表达显著高于WKY大鼠(P＜0.05),AngⅡ孵育所致caveolin-1与AT1的结合亦较WKY组显著增多(P＜0.05).ATVS处理可降低SHR组caveolin-1和AT1的蛋白表达(P＜0.05),并抑制caveolin-1与AT1的结合(P＜0.05),CHO孵育则可增高ATVS组caveolin-1蛋白含量并促进其与AT1的相互作用(P＜0.05),同时可显著增加肾叶间动脉对AngⅡ收缩反应的强度及敏感性(P＜0.05).结论 ATVS可抑制SHR大鼠肾叶间动脉对AngⅡ的收缩反应,其机制与caveolin-1的蛋白表达降低及caveolin-1与AT1的结合减少有关.
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转染Caveolin-1基因对LPS诱导的HBE细胞TLR-4表达的影响及大黄素的干预效应
[目的]研究转染小凹蛋白l(Caveolin-1,CAV-1)基因对脂多糖(LPS)诱导的人支气管上皮(HBE)细胞Toll样受体4(TLR- 4)表达的影响,以及大黄素对CAV-1和TLR-4表达的干预效应.[方法]本实验分为2部分:第1部分,对LPS诱导的HBE细胞给予不同剂量的大黄素干预,并设立正常对照、阳性对照(阿托伐他汀)和阴性对照(溶媒DMSO),用Western blot检测各组细胞CAV-1的表达水平；第2部分,通过构建CAV1-EGFP重组质粒,瞬时转染HBE细胞,于转染48h后给予LPS刺激,并给予大黄素干预转染后LPS诱导的HBE,Western blot 检测各组细胞TLR-4的表达.[结果]中、高剂量的大黄素均能抑制LPS诱导的HBE细胞CAV-1的表达；与各对照组相比,CAV-1过表达能上调LPS诱导的HBE细胞TLR-4的表达,大黄素能抑制该效应.[结论]转染CAV-1基因能上调LPS诱导的HBE细胞TLR-4的表达,大黄素能抑制LPS诱导的HBE细胞CAV-1与TLR-4的表达.
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葡萄糖对血管内皮细胞小凹蛋白1和血管内皮生长因子表达的影响
为了探讨高浓度葡萄糖损伤血管内皮细胞及其对小凹蛋白-1和血管内皮生长因子表达的影响.将人脐静脉内皮细胞株ECV304分别培养在对照组和含5.5 mmol/L、11.1 mmol/L、22.0 mmol/L、33.0 mmol/L葡萄糖的培养基中.经葡萄糖培养24 h后,噻唑蓝法测定细胞增殖活性,硝酸还原酶法测定培养上清液中一氧化氮浓度,免疫组织化学和免疫印迹方法检测细胞中小凹蛋白-1和血管内皮生长因子的表达.结果发现,随着葡萄糖浓度的增加,内皮细胞增殖活性呈浓度依赖性抑制(r=-0.776,P=0.000);一氧化氮浓度呈浓度依赖性增加(r=0.698,P=0.000);小凹蛋白-1和血管内皮生长因子为棕黄色颗粒,主要分布于胞浆中;血管内皮生长因子的表达呈浓度依赖性增加(r=0.645,P=0.009);小凹蛋白-1的表达也呈浓度依赖性增加(r=0.808,P=0.000).提示高糖可诱导血管内皮细胞的血管内皮生长因子和小凹蛋白-1的表达,此变化可能与糖尿病患者高糖致血管病变有关.
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二氢杨梅素对裸鼠腹腔移植人胃癌细胞中 Caveolin-1表达的影响
目的 观察二氢杨梅素(DMY)对裸鼠腹腔移植人胃癌细胞生长的抑制作用及对腹腔瘤组织中Caveolin-1表达的影响.方法 复制人胃癌腹腔移植的裸鼠模型.将复模成功的24只裸鼠随机分为4组,即移植瘤模型组,DMY低、中及高剂量处理组.分别观察荷瘤裸鼠的腹腔移植瘤的生长和成瘤情况,测量肿瘤的重量、长短径并计算肿瘤的体积.采用免疫组织化学法和Western blot检测人胃癌腹腔移植瘤腹腔瘤体中Caveolin-1和Ki67的表达.结果 与移植瘤模型组比较,100和200 mg/(kg·d)DMY中、高剂量组腹腔移植瘤成瘤个数,腹腔瘤体的重量及腹腔瘤体的体积均降低,呈现剂量依赖性(P<0.05),裸鼠的食欲、活动情况和精神状态等一般情况改善.与移植瘤模型组比较,100和200 mg/(kg·d)DMY中、高剂量组腹腔移植瘤体表达Caveolin-1的阳性细胞百分率和Caveolin-1的蛋白表达水平均增加,呈现剂量依赖性(P<0.05);而Ki67的阳性细胞百分率和Caveolin-1的蛋白表达水平均降低,也呈现剂量依赖性(P<0.05).结论 二氢杨梅素以剂量依赖的方式抑制人胃癌腹腔移植瘤的生长,其作用机制可能与上调Caveolin-1的表达有关.
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Caveolin-1基因重组腺病毒表达系统的构建与鉴定
目的：构建靶向肝脏的小凹蛋白-1 caveolin-1基因重组腺病毒并对该表达体系进行鉴定。方法：根据GeneBanks中caveolin-1的序列设计引物,以大鼠肝组织提取总RNA为模板,PCR扩增caveolin-1,并将caveolin-1序列克隆至pAdTrack-CMV质粒中,再与pAd-easy质粒进行同源重组构建重组腺病毒载体,利用脂质体法于293细胞中进行包装重组腺病毒, RT-PCR 检测 caveolin-1基因的转录, Western blotting检测caveolin-1蛋白的表达情况。结果：PCR及Western blotting检测结果表明成功构建出caveolin-1基因重组腺病毒。结论：成功构建出caveolin-1基因重组腺病毒,为进一步研究caveolin-1基因在肝纤维化及肝硬化疾病中的作用机制打下实验基础。
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血管紧张素Ⅱ诱导人脐静脉内皮细胞衰老及苦碟子注射液的干预研究
目的:观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)衰老的诱导作用,及苦碟子注射液的干预作用.方法:体外培养HUVECs,用AngⅡ(在10-6mol/L AngⅡ的DMEM培养液中48 h)干预,分为实验对照组、AngⅡ诱导组和苦碟子注射液组(给予AngⅡ刺激前1 h先加用10%苦碟子注射液).采用CCK-8法检测细胞存活率,以衰老相关β-半乳糖苷酶活性和细胞的增殖能力两种衰老标志物为主要观察指标.其中衰老相关β-半乳糖苷酶活性采用免疫化学染色方法,流式细胞术检测细胞周期来反应细胞的增殖能力:利用Western印迹法检测小凹蛋白-1(Caveolin-1,Cav-1)的表达.结果:与对照组比较,AngⅡ诱导组细胞存活率明显下降,β-gal阳性染色率明显增多,细胞周期多停滞于G0/G1期,S期细胞逐渐减少,Cav-1蛋白表达水平明显上调,表明AngⅡ成功诱导了HUVECs衰老,而给予苦碟子注射液干预后上述变化改善.结论:苦碟子注射液可以延缓AngⅡ诱导HUVECs衰老.其作用机制可能与下调Cav-1蛋白表达有关.
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烟酸对高脂血症兔脂肪组织Caveolin-1mRNA表达的影响
目的:探讨烟酸对高脂血症兔脂肪组织caveolin-1表达的影响.方法:16只健康雄性新西兰大白兔给予高脂饮食8周,随机分为高脂组(继续饲以高脂饲料6周)与烟酸组[在高脂饮食基础上给予烟酸200 mg/(kg·d)6周],另选8只兔予普通饮食14周为正常对照组.实验前后测血脂及采用实时荧光定量PCR检测各组兔腹股沟皮下脂肪组织caveolin-1 mRNA的表达.结果:与高脂组比较,烟酸组TC、TG和LDL-C明显降低,而HDL-C水平明显升高,脂肪组织caveolin-1 mRNA的表达显著升高.结论:烟酸可明显改善血脂谱及上调高脂血症脂肪组织caveolin-1的表达水平.
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小凹蛋白-1在动脉粥样硬化形成中的研究进展
动脉粥样硬化发病率逐年升高,致力于动脉粥样硬化发生机制及其影响因素的研究也越来越深入.小凹蛋白-1作为参与调控动脉粥样硬化形成机制的转化生长因子β(TGF-β/smads)信号通路的关键因素逐渐受到重视,并不断取得新进展.本文主要从血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ)及氧化低密度脂蛋白(Oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)对小凹蛋白-1的调节及小凹蛋白-1对下游TGF-β/smads信号通路调控两方面做一综述.
关键词： 动脉粥样硬化 小凹蛋白-1 TGF-β/Smads 信号通路 -
胃腺癌组织CD151、Cav-1与MT1-MMP的表达及其临床意义
目的：探讨胃腺癌组织分化抗原151(CD151)、小凹蛋白-1(Cav-1)与膜型基质金属蛋白酶-1(MT1-MMP)的表达变化及其临床意义。方法选取2014年5月至2015年5月我院消化外科胃腺癌手术患者65例，术中采集胃腺癌组织标本65例作为研究组，癌旁正常胃黏膜组织标本65例作为对照组，采用SP免疫组化方法检测CD151、Cav-1与MT1-MMP蛋白表达水平。结果研究组CD151与MT1-MMP蛋白阳性表达率分别为78.46%和80.00%，明显高于对照组的6.15%和12.31%，Cav-1蛋白阳性表达率为52.31%，明显低于对照组的80.00%，两组比较差异均具有统计学意义(P<0.05)；CD151、Cav-1与MT1-MMP蛋白表达与组织学分化程度、临床分期和淋巴结转移等临床病理特征具有明显的相关性，其中低分化及其未分化胃腺癌、中晚期胃腺癌及其有淋巴结转移胃腺癌CD151与MT1-MMP蛋白阳性表达率显著增高，Cav-1蛋白阳性表达率显著降低，不同临床病理特征胃腺癌组织CD151、Cav-1与MT1-MMP蛋白阳性表达率比较差异均具有统计学意义(P<0.05)；经Pearson相关性分析显示，CD151、MT1-MMP与Cav-1表达之间具有明显的负相关(r=-0.521，-0.501，P<0.05)，CD151与MT1-MMP表达之间具有明显的正相关(r=0.547，P<0.05)。结论胃腺癌组织CD151与MT1-MMP表达明显上调，Cav-1表达明显下调，三者均与临床病理特征具有紧密的关系。
关键词： 胃腺癌 人类白细胞分化抗原151 小凹蛋白-1 膜型基质金属蛋白酶-1 -
小凹蛋白-1与内皮型一氧化氮合成酶活性变化在大鼠门静脉高压形成中的作用
目的 探讨肝硬化发生发展过程中小凹蛋白-1的动态变化及与其肝纤维化程度、门静脉压力的关系,探讨小凹蛋白-1对内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)作用的可能调控机制.方法 构建二甲基亚硝胺致肝硬化大鼠模型,分别在造模后的1、2、3、4、6周,病理组织学观察肝纤维化程度及测定门静脉压力(PVP),放射强度测定法检测肝硬化组织中eNOS活性,免疫沉淀与Western blot检测小凹蛋白-1和eNOS蛋白变化及其相互作用.结果 造模过程中肝纤维化程度逐渐加重,至第4周已形成典型的肝硬化,其后逐渐减轻;免疫沉淀与Western blot实验结果表明eNOS和小凹蛋白-1可免疫共沉淀,且小凹蛋白-1与eNOS的结合可随造模时间延长而增加;小凹蛋白-1表达与肝纤维化程度、PVP呈显著正相关(r=0.967,P＜0.01;r=0.922,P＜0.01);NOS与肝纤维化程度、PVP呈显著负相关(r=-0.973,P＜0.01;r=-0.947,P＜0.01).结论 小凹蛋白-1作为eNOS的一个负调控因子,参与肝硬化门静脉高压的形成.
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肿瘤坏死因子-α通过内皮型一氧化氮合酶和小凹蛋白-1介导内皮细胞功能失调的研究
血管内皮细胞功能失调是致动脉粥样硬化形成的重要机制之一。其中，内皮型一氧化氮合酶和小凹蛋白-1是调节脂质物质摄取和炎症细胞跨内皮迁移的重要蛋白。肿瘤坏死因子-α为多效性促炎症反应细胞因子，可通过核因子-κB信号通路下调内皮型一氧化氮合酶表达，上调小凹蛋白-1表达，诱导内皮细胞胞吞转运作用失衡和炎症细胞跨内皮迁移，促使局部血管斑块形成。现就肿瘤坏死因子-α通过核因子-κB信号通路诱导血管内皮功能失调的机制做一简要综述。
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苦参碱对单核细胞源性泡沫细胞形成及PPAR-γ,caveolin-1表达的影响
目的:观察苦参碱对ox-LDL诱导的单核细胞源性泡沫细胞内胆固醇脂和PPAR-γ,小凹蛋白-1表达的影响.方法:用荧光分光光度法测定胆固醇浓度;采用TBARS法检测细胞内脂质过氧化产物;用油红O染色法检测泡沫细胞的形成;用荧光RT-PCR和Western Blot检测PPARγ,caveolin-1的表达.结果:单核细胞经PMA及oxLDL共同孵育后,细胞内形成大量脂滴,胆固醇酯(CE)和细胞内脂质过氧化产物(MDA)含量由(3.4±0.6) mg/L,(0.43±0.07) nmol/L升至(64.8±6.8) mg/L,(8.50±1.23) nmol/L (P＜0.05),泡沫细胞由(4.7±2.2)%升至(77.8±7.0)% (P＜0.05),而PPAR-γ mRNA和PPAR-γ,小凹蛋白-1蛋白表达由(4.4±0.8),(0.5±0.09),(0.6±0.09)降至(1.6±0.4),(0.33±0.09),(0.33±0.09)(P＜0.05),苦参碱低、中、高干预组细胞内积聚的CE和MDA含量分别为 (29.7±4.9) mg/L,(1.92±0.46) nmol/L,(5.8±1.3) mg/L,(0.6±0.08) nmol/L,(3.4±0.6) mg/L,(0.43±0.07) nmol/L;泡沫细胞为(46.2±5.8)%,(16.3±3.4)%,(4.8±1.5)%,PPAR-γ mRNA和PPAR-γ,小凹蛋白-1蛋白表达为(6.4±2.2),(0.6±0.08),(0.5±0.09),(7.4±2.2),(0.6±0.08),(0.6±0.07),(8.6±2.7),(0.6±0.06),(0.7±0.06),与ox-LDL+PMA组比较有显著性差异(P＜0.05).结论:苦参碱减少ox-LDL诱导的单核细胞源性泡沫细胞的形成及细胞内胆固醇聚集,增加泡沫细胞内PPAR-γ,小凹蛋白-1的表达.
关键词： 苦参碱 泡沫细胞 过氧化增殖物激活型受体-γ 胆固醇 小凹蛋白-1
