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针刺印堂百会风池肾俞穴组对慢性应激模型大鼠海马脑源性神经营养因子基因表达的影响
目的 探讨针刺印堂百会风池肾俞穴组治疗抑郁症的可能作用机制.方法 40只SD大鼠随机分为正常组、模型组、针刺组、西药组,每组10只.正常组大鼠正常饲养,其余各组大鼠孤养并进行28天的不可预见的慢性应激刺激建立慢性应激性大鼠模型.造模同时模型组每日予2 ml生理盐水灌胃;针刺组选用印堂、百会、风池(双侧)、肾俞(双侧)进行针刺治疗,每次30 min,每日1次;西药组给予氟西汀胶囊0.18 mg/(kg·d)灌胃,每日1次,各组均灌胃28天;正常组正常饲养不灌胃.检测各组大鼠海马脑源性神经营养因子(BDNF)、环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB) mRNA含量及海马BDNF I-17位点、BDNFI-17 CpG6位点基因甲基化水平.结果 与正常组比较,模型组大鼠海马CREB、BDNF mRNA含量水平明显降低(P＜0.05或P＜0.01);针刺组和西药组较模型组大鼠海马CREB、BDNF mRNA含量增加(P＜0.05).各组大鼠BDNFI-17位点甲基化水平未出现明显差异(P＞0.05),在BDNF I-17 CpG6位点上模型组大鼠甲基化水平明显低于正常组(P＜0.05),其他各组未出现明显差异.结论 针刺印堂百会风池肾俞穴组可有效增加慢性应激模型大鼠海马内CREB、BDNF mRNA水平,可能是其抗抑郁机制之一.
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益肾化浊方对SAMP8小鼠学习记忆能力及海马神经元突触关键蛋白CREB的影响
目的 观察益肾化浊方对SAMP8小鼠学习记忆能力及海马神经元突触关键蛋白环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)的影响. 方法 取30只12月龄快速老化小鼠(SAMP8),随机分为SAMP8组、盐酸多奈哌齐组及益肾化浊方组,另取10只正常老化小鼠(SAMR1)作为对照组.其中SAMR1组及SAMP8组不干预,益肾化浊方组给予益肾化浊方生药9.62 mg/kg,盐酸多奈哌齐组给予盐酸多奈哌齐0.01 mg/g,通过Morris水迷宫实验检测各组小鼠学习记忆能力;通过电镜观察各组小鼠海马神经元突触微观形态学变化;采用Western blot法检测各组小鼠海马组织CREB蛋白的表达.结果 在定位航行实验中,SAMP8组小鼠的潜伏时间与游泳总路程比SAMR1组明显延长(P＜0.05),与SAMP8组小鼠比较,益肾化浊方组小鼠潜伏时间与游泳总路程明显缩短(P＜0.05);空间探索实验中,与SAMR1组比较,SAMP8组小鼠穿越目标象限次数与t/t总明显减少(P＜0.05),益肾化浊方组穿越目标象限次数和t/t总较SAMP8组显著增加(P＜0.05),而盐酸多奈哌齐组穿越目标象限次数较SAMP8组显著增加(P＜0.05).电镜下SAMR1组小鼠海马神经元突触间隙清晰,突触前线粒体嵴和膜完整,突触小泡数量正常,大小均一.而SAMP8组突触间隙完全融合、模糊不清,突触前重度水肿,未见线粒体,突触小泡数量大量减少,大小不均一,益肾化浊方组突触间隙少部分融合,突触前水肿程度减轻,对于突触损伤的缓解程度优于盐酸多奈哌齐组.与SAMR1组比较,SAMP8组小鼠海马组织CREB表达明显减少(P＜0.05),益肾化浊方组与盐酸多奈哌齐组可上调CREB的表达(P＜0.05). 结论 益肾化浊方可明显改善SAMP8小鼠学习记忆能力,可能与上调海马组织内CREB蛋白的表达,保护海马神经元突触微观形态,进而改善神经元突触功能有关.
关键词： 益肾化浊方 SAMP8鼠 神经元 突触 环磷腺苷效应元件结合蛋白 -
阿伐他汀对ApoE基因敲除小鼠海马和大脑皮质HDAC4和pCREB表达的影响
目的：探讨阿伐他汀对高脂血症模型小鼠脑组织组蛋白去乙酰酶（HDAC4）和pCREB表达的影响。方法将16只雄性 ApoE基因敲除小鼠随机分成两组，一组正常饮食，一组在正常饮食同时给予阿伐他汀灌胃。实验结束后称重测血脂，取脑组织固定，石蜡切片后进行HE和免疫组化染色。结果阿伐他汀治疗组小鼠海马和大脑皮质HDAC4表达水平显著下降（P＜0.05），而pCREB表达水平显著增加（P＜0.05）。结论提示HDAC4和转录因子pCREB在阿伐他汀改善高脂血症引起的脑神经退行性疾病可能具有重要作用。
关键词： 阿伐他汀 apoE基因敲除 组蛋白去乙酰化酶 环磷腺苷效应元件结合蛋白 -
锌对神经病理性疼痛小鼠学习记忆障碍及海马DG区脑源性神经营养因子及环磷腺苷效应元件结合蛋白表达的影响
目的 探讨锌对L5脊神经结扎横切(L5-SNT)术所致神经病理性疼痛(NPP)后的学习记忆功能障碍小鼠海马DG区脑源性神经营养因子(BDNF)及环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)表达的影响.方法 成年小鼠(C57/BL6)48只,随机分为对照组、NPP组及高锌NPP组(Zn-NPP组),NPP组及Zn-NPP组施行左侧L5-SNT手术,3组术后第29天用Morris水迷宫实验测量小鼠空间学习记忆能力,水迷宫实验结束后,采用免疫组化及Western印迹检测各组BDNF及CREB表达.结果 对照组、Zn-NPP组、NPP组免疫组化及Western印迹结果显示海马BDNF及CREB的表达逐渐增多(P<0. 05).结论 锌可改善NPP后小鼠学习记忆能力,其机制可能与海马BDNF及CREB的表达改变有关.
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CREB及p-CREB在前列腺癌细胞增殖中的作用
目的:探讨环磷腺苷效应元件结合蛋白(cAMP-response element binding protein,CREB)及磷酸化CREB(p-CREB)在前列腺癌细胞增殖中的作用.方法:采用组织芯片技术检测人正常前列腺、前列腺增生、不同分级前列腺癌组织中CREB及p-CREB的表达水平;免疫荧光及Western blotting检测人正常前列腺基质永生化细胞WPMY-1、前列腺癌细胞PC3及LNCap中CREB及p-CREB的表达水平;构建重组人源CREB质粒,并转染PC3及LNCap细胞,Western blotting及CCK-8试剂盒检测转染效率及细胞增殖水平的变化.结果:CREB及p-CREB在前列腺癌组织中表达率明显高于正常前列腺(96％vs 50％,88％ vs 40％,P＜0.05)和前列腺增生组织(96％ vs 80％,88％vs 60％,P＜0.05);CREB及p-CREB蛋白水平在前列腺癌PC3及LNCap细胞中表达量显著高于正常前列腺基质永生化细胞WPMY-1[PC3细胞:(5.10±0.62)vs(2.31±0.40)、(4.31±0.54)vs(2.02±0.38);LNCap细胞:(7.5±0.83)vs(2.31±0.40)、(6.15±0.69) vs (2.02±0.38),均P＜ 0.05)];转染重组质粒CREB可上调前列腺癌细胞PC3及LNCap中增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达(均P＜0.05),且转染后的PC3及LNCap细胞增殖水平明显增加(P＜0.05).结论:CREB及p-CREB在前列腺癌组织、体外培养前列腺癌细胞PC3及LNCap中高表达,并可上调PC3及LNCap中增殖相关基因PCNA的表达,提高细胞增殖水平.
关键词： 环磷腺苷效应元件结合蛋白 磷酸化CREB 前列腺癌 增殖 -
蛋白激酶A部分通过环磷腺苷效应元件结合蛋白信号防止足细胞凋亡
目的 探讨转录因子环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)在蛋白激酶A(PKA)信号防止足细胞损伤中的作用.方法 使用条件永恒的小鼠足细胞株(5P12) 14 ～25代分化的足细胞进行研究,细胞分为对照组、阿霉素(ADR)处理组(ADR组)和PKA特异性激动剂(pCPT-cAMP)预孵育+ADR刺激组(pCPT-cAMP+ADR组).CCK-8法检测细胞毒性;Western blotting检测足细胞内被切割的半胱氨酸蛋白酶-3(cleavedcaspase-3)表达;siRNA抑制细胞内CREB表达,免疫荧光共聚焦显微镜和Western blotting检测磷酸化CREB(p-CREB)的定位和表达.结果 ADR诱导足细胞内cleaved caspase-3表达升高,pCPT-cAMP预孵育可显著降低ADR诱导的cleaved caspase-3表达上升.ADR使足细胞减少为原来的(40.45±6.78)％,pCPT-cAMP预孵育使细胞数量恢复为原来的(69.8±5.48)％.Western blotting检测结果显示:pCPT-cAMP分别预孵育5、15 min可使足细胞总蛋白中p-CREB表达分别上升(105.64±38.21)％和(98.61±41.03)％,细胞核内p-CREB的表达上升(114.52±11.28)％和(118.84±14.44)％.免疫荧光共聚焦显微镜检测显示pCPT-cAMP主要引起细胞核内p-CREB表达上升.siRNA可使足细胞CREB蛋白表达下降为原来的(25.1±2.44)％,且pCPT-cAMP预孵育不能防止ADR诱导的cleaved caspase-3表达升高.结论 转录因子CREB介导了PKA信号对足细胞的保护作用.
关键词： 足细胞 环磷酸腺苷 蛋白激酶A 环磷腺苷效应元件结合蛋白 凋亡 -
CaM/CaMK-Ⅱ信号通路在小鼠炎性痛中的作用
目的 探讨钙调蛋白/钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ(CaM/CaMK-Ⅱ)信号通路在C57BL6小鼠炎性痛中的作用.方法 选取体重25～27 g的雄性C57BL6小鼠60只,随机分为对照组(C组)、完全弗氏佐剂(CFA)组(F组)和KN-93+CFA组(KF组),每组20只.C组小鼠右侧后爪趾底注射生理盐水50μl,F组注射50μl CFA制备炎性痛模型,KF组注射CFA前30 min鞘内注射DMSO稀释的终浓度为10 mmol/L的KN-93.分别于右侧后爪趾底注射前30 min、注射后1h和4h测定小鼠热刺激缩足潜伏期(TWL);取小鼠脊髓组织,采用Western blot法检测p-CaMK-Ⅱ、p-CREB、c-fos蛋白含量;RT-PCR法检测CaMK-Ⅱ、CREB、c-fos基因表达.结果 注射后1h和4h,F和KF组TWL明显短于C组,但KF组明显长于F组(P＜0.05);F组和KF组脊髓组织p-CaMK-Ⅱ、p-CREB及c-fos蛋白含量和基因表达量均明显高于C组,但KF组明显低于F组(P＜0.05).结论 CaM/CaMK-Ⅱ信号通路参与小鼠炎性痛的发生与发展.
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慢性坐骨神经结扎大鼠前扣带皮层对脊髓痛觉信息传递的调节
目的：本研究观察慢性坐骨神经结扎(CCI)大鼠前扣带皮层(ACC)对脊髓痛觉信息传递的调节。方法成年雄性 SD 大鼠32只,随机分为四组：Sham 组,假手术组,仅分离出坐骨神经；CCI 组,右侧坐骨神经结扎组；ACC 组,正常大鼠,双侧 ACC 定点注射生理盐水1μl/侧；AP-5组, CCI 术后13 d,双侧 ACC 定点注射 NMDA 受体拮抗剂 AP-525 mM,1μl/侧。明暗箱实验、强迫游泳实验、机械痛阈、热痛阈等行为学测试完成后,将大鼠麻醉,取 ACC 和腰膨大脊髓,用 Western blot方法检测磷酸化环磷腺苷效应元件结合蛋白(pCREB)和磷酸化细胞外调节蛋白激酶(pERK)的表达。结果与 Sham 组比较,CCI 组术后2周机械痛阈值明显下降,明箱内时间明显缩短,穿梭次数明显减少,游泳潜伏期明显延长,手术侧脊髓 pERK 和 pCREB 的表达明显增多,ACC 内 pERK 和pCREB 的表达明显增多(P 均<0.01)。与 CCI 组比较,AP-5组术后2周机械痛阈明显升高,热痛阈明显升高,大鼠在明箱内时间明显延长,穿梭次数明显增多,且游泳潜伏期明显缩短,手术侧脊髓pERK 和 pCREB 表达明显减少(P 均<0.01)。结论 ACC 参与了 CCI 大鼠脊髓痛觉信息传递的调节。
关键词： 前扣带回皮层 脊髓 环磷腺苷效应元件结合蛋白 细胞外调节蛋白激酶 -
基于肝糖异生的降血糖药物研发进展
空腹高血糖既是2型糖尿病的重要临床诊断指标,也是2型糖尿病的主要治疗目标之一.肝糖异生亢进是2型糖尿病患者空腹血糖升高的一个重要病理机制,纠正亢进的肝糖生成有利于控制糖尿病发病进程及并发症.肝糖异生的效率在很大程度上依赖于激素、神经和代谢中间产物对糖异生相关基因的转录调控.因此,开发特异性靶向肝糖异生的抑制剂是降血糖药物研发的一个重要方向.糖异生调节剂包括以下几种类型:受体拮抗剂/激动剂/治疗性抗体、磷酸酶激动剂/抑制剂、转录因子调节剂和糖异生限速酶抑制剂.肝糖异生调节机制研究的进一步深入,将有助于发现更特异的靶点和先导化合物,从而促进新型降血糖药物的开发.
关键词： 肝糖异生 环磷腺苷效应元件结合蛋白 血糖 -
羟氯喹促进ERK1/2磷酸化减轻大鼠脑缺血再灌注损伤
目的:探讨羟氯喹(hydroxychloroquine,HCQ)对大鼠脑缺血再灌注损伤(ischemia/reperfusion,I/R)的影响.方法:采用随机数字表法将健康雄性SD大鼠72只分为6组:对照组、缺血再灌注组(I/R组)、低剂量羟氯喹预处理组(HCQ250组)、中剂量羟氯喹预处理组(HCQ500组)、高剂量羟氯喹预处理组(HCQ1000组)和细胞外信号调节激酶1/2(extracellular regulated protein kinases 1/2,ERK1/2)抑制剂U0126预处理组(U0126组),每组均为12只.采用线栓法行短暂性大鼠大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)建立大鼠缺血性脑卒中模型.I/R组行MCAO后2 h再灌注,HCQ250组、HCQ500组、HCQ1000组和U0126组分别在MCAO前72 h、48 h和24 h经侧脑室注射8μL 250、500、1000和1000μmol/L HCQ,其中U0126组在每次注射1000μmol/L HCQ后12 h再经侧脑室注射8μL 1000μmol/L U0126;对照组不栓塞大脑中动脉,其余处理同I/R组.再灌注6 h时将每组一半大鼠断头取脑,采用蛋白质印迹法检测缺血半暗带脑组织ERK1/2、p-ERK1/2、抗凋亡因子Bcl-2和促凋亡因子cleaved caspase-3、环磷腺苷效应元件结合蛋白(cAMP-response element binding protein,CREB)、磷酸化CREB(p-CREB)、蛋白激酶B(Akt)和磷酸化Akt(p-Akt)的表达;再灌注24 h时采用神经功能缺陷评分量表检测剩余大鼠的神经功能,再断头取脑后采用2％TTC染色测量脑梗死体积.结果:与对照组比较,其余5组神经功能缺陷评分显著降低,脑梗死体积明显增大,p-ERK1/2、cleaved caspase-3、p-CREB和p-Akt表达显著增高,Bcl-2表达降明显低(P均<0.05);与I/R组比较,HCQ250组、HCQ500组、HCQ1000组神经功能缺陷评分明显升高,脑梗死体积显著减少,p-ERK1/2、Bcl-2、p-CREB、p-Akt表达明显增高,cleaved caspase-3表达降低明显(P均<0.05);与HCQ1000组比较,U0126组神经功能缺陷评分明显降低,脑梗死体积显著增大,p-ERK1/2、Bcl-2、p-CREB和p-Akt表达降低显著,cleaved caspase-3表达明显增高(P均<0.05).结论:羟氯喹可能通过CREB/Akt信号通路促进p-ERK1/2表达,参与大鼠脑缺血再灌注损伤时的内源性保护机制.
关键词： 缺血再灌注损伤 羟氯喹 细胞外信号调节激酶 环磷腺苷效应元件结合蛋白 蛋白激酶B -
大鼠初级感觉神经元内PKA/CREB通路在骨癌痛中的作用
目的:观察蛋白激酶A拮抗剂H-89对骨癌痛大鼠疼痛行为和背根神经节环磷腺苷效应元件结合蛋白(cAMP-response element binding protein,CREB)磷酸化水平的影响.方法:①检测骨癌痛大鼠背根神经节CREB磷酸化水平:将32只雌性SD大鼠随机分为假手术组和骨癌痛组(n=16),分组后在大鼠右侧胫骨髓腔内分别注射PBS或乳腺癌Walker 256细胞,肿瘤细胞接种后1,3,7,10,14 d检测大鼠机械痛阈,第14天提取骨癌痛组大鼠第2至第5腰椎右侧的背根神经节,应用免疫印迹法检测磷酸化CREB(p-CREB)的表达量.②检测H-89对大鼠疼痛行为及CREB磷酸化的影响:将32只骨癌大鼠随机均分为DMSO组和H-89组.在肿瘤细胞接种后的第9天至第14天每天鞘内注射DMSO或H-89.分别在给药前、给药后15,30,45和60 min进行疼痛行为测试.在第14天后一次鞘内给药1h后,快速提取大鼠右侧背根神经节,应用免疫印迹法检测p-CREB的表达量.结果:与假手术组比较,骨癌痛组大鼠机械痛阈明显降低,背根神经节中CREB磷酸化水平升高(P＜0.05).鞘内注射DMSO或H-89后,H-89组大鼠机械痛阈较DMSO组明显升高.同时H-89组CREB磷酸化水平较DMSO组明显降低(P＜0.01).结论:蛋白激酶A通过CREB磷酸化加剧大鼠骨癌痛.
关键词： 蛋白激酶A 骨癌痛 背根神经节 环磷腺苷效应元件结合蛋白 -
慢性压迫损伤性神经病理性疼痛大鼠模型中脊髓背角ERK、CREB、BDNF表达的变化
目的 通过建立慢性神经结扎性损伤(CCI)大鼠模型,揭示在神经病理性疼痛发生、发展过程中细胞外调节蛋白激酶(ERK)、环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)、脑源性神经营养因子(BDNF)表达的变化.方法 将21只大鼠随机双盲分为模型组、假手术组、U0 126组,每组各7只,模型组及U0126组建立CCI模型,假手术组暴露坐骨神经不做结扎,3组均进行鞘内置管,U0126组鞘内注射阻断剂U0126 10μg/次,连续3d;模型组造模成功后、假手术组术后予0.9％氯化钠溶液0.12ml/kg灌胃至术后14d.对各组大鼠分别于术前、术后1、7、14d进行热痛觉过敏行为测试和机械刺激测试,采用Western blot法检测模型大鼠脊髓背角ERK、CREB、BDNF的表达水平.结果 与假手术组相比,模型组大鼠术后热板及机械缩足反射阈值明显降低,差异均有统计学意义(均P＜0.05).CCI导致大鼠脊髓背角内胞浆与胞核内ERK、CREB、BDNF水平均增加,差异均有统计学意义(均P＜0.01).ERK阻滞剂U0 126组能明显升高大鼠术后热板及机械痛敏阈值(P＜0.05),U0126组导致大鼠脊髓背角内胞质与胞核内CREB、BDNF水平均明显降低,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 CCI模型导致痛觉过敏,U0126可以减轻CCI大鼠的疼痛.ERK-CREB磷酸化的通路参与BDNF对于背根神经节的神经元的保护和修复过程.
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人参多糖通过cAMP/PKA/CREB信号通路抗糖尿病肾病肾纤维化作用机制研究
目的 探讨人参多糖对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病肾病(DN)模型小鼠肾纤维化的治疗作用,并揭示其可能的作用机制.方法 STZ(120 mg·kg-1)尾静脉注射构建糖尿病小鼠模型,并随机分为模型组、人参多糖(25、50、100 mg ·kg-1)组、空白组,连续灌胃给药12周.12周末,比较各组小鼠空腹血糖(FBG)、24 h尿微量白蛋白(mAlb)、血清肌酐(Scr)和尿素氮(BUN)含量变化;肾脏Masson染色观察肾脏病理学变化;免疫组织化学法检测肾皮质中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达;放射免疫分析法检测肾皮质中环磷酸腺苷(cAMP)含量;Western blot检测肾皮质中细胞外基质及信号通路PKA/CREB相关蛋白的表达.结果 人参多糖能够明显降低DN小鼠FBG、mAlb、Scr、BUN含量,并通过抑制cAMP/ PKA /CREB信号通路的激活,降低肾小管上皮细胞表型转化蛋白α-SMA及细胞外基质相关蛋白LN、FN的表达,延缓肾纤维化的进程.结论 人参多糖对DN小鼠肾纤维化具有明显的抑制作用,其机制可能与其抑制 cAMP/PKA/CREB信号通路的激活有关.
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姜黄素通过减少CREB转录活性抑制前脂肪细胞分化
目的 探讨姜黄素对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响及其作用机制.方法 选取3T3-L1前脂肪细胞为研究对象,姜黄素(10、20、40 μmol·L-1)处理3T3-L1前脂肪细胞并同步诱导细胞分化,采用MTT法检测3T3-L1前脂肪细胞增殖情况,油红O染色方法检测胞质脂质堆积情况,实时荧光定量PCR法及蛋白印迹法检测3T3-L1脂肪细胞环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)、CCAAT/增强子结合蛋白β(C/EBPβ)、CCAAT/增强子结合蛋白α(C/EBPα)、过氧化物体增殖剂活化受体γ (PPARγ)的mRNA及蛋白表达水平.结果 MTT结果显示,姜黄素对3T3-L1前脂肪细胞增殖具有明显抑制作用,且呈现一定剂量、时间依赖性;油红0染色显示,姜黄素可抑制3T3-L1前脂肪细胞分化,且呈现一定剂量依赖性;0、20、40 μmol·L-1姜黄素处理3T3-L1前脂肪细胞,p-CREB、C/EBPβ、C/EBPα、PPARγ mRNA水平及蛋白水平随姜黄素剂量升高均呈现明显下降趋势(P＜0.05).结论 姜黄素可有效抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖分化,其机制可能为姜黄素抑制CREB转录活性,从而抑制C/EBPβ、C/EBPα、PPARγ表达.
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附子理中丸对脾阳虚大鼠小肠上皮细胞CREB、Sirt1、UCP2表达和ATP合成的影响
目的 探讨附子理中丸对脾阳虚证大鼠小肠上皮细胞CREB、Sirt1、UCP2表达和ATP合成的影响.方法 取SPF级SD雄性大鼠40只,按体质量分层随机分为4组,空白组、模型组、中药组、自愈组,每组10只.采用“饮食失节+劳倦”等复合因素方法复制脾气虚动物模型.在此基础上,采用“苦寒泻下”法复制脾阳虚动物模型.动物模型复制成功后,中药组给予附子理中丸1∶1水溶液灌胃治疗.在造模结束和中药治疗干预后,分别采用Western blotting法和RT-PCR法检测大鼠小肠黏膜上皮细胞中CREB、Sirt1及线粒体中UCP2蛋白和mRNA表达.采用免疫荧光法检测小肠上皮组织中ATP含量.结果 与空白组相比,模型组大鼠小肠上皮组织中CREB与Sirt1蛋白和mRNA表达降低(P均＜0.01),UCP2蛋白和mRNA表达增加(P均＜0.01);与模型组相比,中药组大鼠小肠上皮组织中CREB与Sirt1蛋白和mRNA表达升高(P均＜0.05),UCP2蛋白和mRNA表达降低(P均＜0.01).与空白组相比,模型组大鼠小肠组织中ATP含量降低(P＜0.01);与模型组相比,中药组大鼠小肠组织中ATP含量升高(P＜0.01).结论 附子理中丸可使脾阳虚大鼠小肠上皮细胞CREB、SIRT1表达升高,线粒体UCP2蛋白表达上调、肠上皮组织中ATP合成减少.
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齐墩果酸对快速老化小鼠学习记忆能力突触形态及环磷腺苷效应元件结合蛋白表达的影响
目的 观察齐墩果酸对9月龄快速老化动物模型SMAP8小鼠行为学、突触结构完整性以及皮质及海马环磷腺苷效应元件结合蛋白(cAMP-response element binding protein,CREB)表达的影响.方法 30只9月龄健康雄性SMAP8小鼠随机分为模型组、齐墩果酸组、安理申组,每组10只,10只同龄同源健康雄性正常小鼠作为正常对照组.齐墩果酸组、安理申组给予相应的药物灌胃治疗,正常组、模型组给予等量生理盐水灌胃.4周后进行Morris水迷宫实验观察行为学变化,电镜观察各组小鼠海马神经元突触形态学变化,采用Western Blot法检测CREB蛋白的表达.结果 (1)Morris水迷宫结果显示:在隐蔽平台实验中,与正常组相比,模型组小鼠潜伏时间[(83.33±4.96)s,(75.13±6.01)s,(71.75±7.77)s,(63.40±8.93)s,(60.97±8.38)s]较长;与模型组相比,齐墩果酸组[(75.97±4.49)s,(64.98±4.93)s,(64.16±6.23)s,(53.47±5.99)s,(47.91±7.64)s]及安理申组[(71.30±7.65)s,(63.32±7.57)s,(59.82±4.69)s,(52.28±5.90)s,(46.22±7.27)s]小鼠潜伏时间明显缩短(P＜0.05).空间探索实验中,与正常组相比,模型组穿越次数减少;与模型组相比,齐墩果酸组及安理申组小鼠穿越次数增多(P＜0.05).(2)模型组与正常组相比突触数量少,突触间隙发生融合现象,突触前高度水肿,突触小泡不均一,线粒体数量极少,不能看出清晰的线粒体轮廓,而经齐墩果酸和安理申干预后突触轮廓清晰,突触前轻度水肿,小泡密集均一,不易见到清晰的线粒体膜和嵴结构.(3) Western Blot结果发现,与正常组比较,模型组不论海马还是皮质中的CREB蛋白表达量均下降,与模型组相比,齐墩果酸组与安理申组CREB蛋白表达量均上调(P＜ 0.05).结论 齐墩果酸具有改善模型小鼠的学习记忆能力的作用,这一作用可能与保护模型小鼠突触形态、提高CREB蛋白表达量有关.
关键词： 齐墩果酸 阿尔茨海默病 SAMP8小鼠 突触电镜 环磷腺苷效应元件结合蛋白 -
一种新的转录因子TORC2在脂联素抑制肝糖异生过程中的作用及机制研究
目的:探讨环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)辅激活物活性调节2传感器(TORC2)在脂联素抑制肝糖异生过程中的作用及机制.方法:实验室前期已构建的人脂联素真核表达质粒,并成功转染人肝细胞系L-02细胞.在此基础上采用蛋白免疫印迹试验、免疫组织化学等方法,对比不同葡萄糖浓度处理后的脂联素转染组和转染空质粒对照组L-02细胞中TORC2细胞内定位,以及磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶1(p-AMPK)、CREB、p-CREB蛋白表达差异,同时监测各组葡萄糖-6-磷酸酶(G 6 Pase)活性.结果:与对照组相比,转染组p-AMPK蛋白表达量显著增高(P＜0.05),CREB、p-CREB蛋白表达量差异无统计学意义(P＞0.05).定位分析显示转染组TORC2主要位于细胞质,而对照组TORC2主要位于细胞核内.葡萄糖关键酶检测发现转染组G-6-Pase活性显著低于对照组(P＜0.05).结论:脂联素抑制糖异生的机制可能与活化p-AMPK、抑制TORC2去磷酸化、阻止TORC2进入细胞核以及抑制糖异生关键酶基因表达有关.
关键词： 脂联素 肝糖异生 环磷腺苷效应元件结合蛋白 活性调节2传感器 葡萄糖-6-磷酸酶 -
环磷腺苷效应元件结合蛋白基因转染小鼠视网膜神经节细胞的神经保护作用
目的 探讨环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)在原代小鼠视网膜神经节细胞(RGC)缺氧模型中对抗缺氧损伤的神经保护作用机制.方法 原代细胞取材于C57BL/6小鼠视网膜,Thy-1、Bm-3a、神经丝蛋白(Neurofilament)进行细胞鉴定.实验组:常氧对照组、Ad-CREB组、Ad-绿色荧光蛋白(GFP)组、缺氧模型组.缺氧环境由三气培养箱构建,条件为:94％ N2,5％ CO2,1％O2.各组细胞在24、48h CREB、脑源性神经营养因子(BDNF)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、磷酸肌醇3激酶(PI3K) mRNA及蛋白水平通过实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)及Western blot检测.结果 观察到细胞中有Thy-1、Brn-3a、Neurofilament表达,证实细胞为RGC.在荧光显微镜下RGC可表达GFP,说明CREB成功转染.阿尔玛蓝(Alarmar Blue)检测结果显示常氧对照组和Ad-CREB组RGC活性明显高于Ad-GFP组和缺氧模型组(P＜0.05).RT-qPCR和Western blot结果显示Ad-CREB组中CREB、BDNF、bcl-2、PI3K mRNA(2.213±0.609、0.703±0.053、0.873±0.075、2.280±0.399)及蛋白表达(0.403 ±0.011、0.369 ±0.006、0.516±0.014、0.652 ±0.011)较Ad-GFP组(mRNA:0.458±0.066、0.432±0.023、0.555±0.103、1.076±0.011;蛋白:0.273 ±0.003、0.188±0.012、0.404 ±0.013、0.439±0.017)、缺氧模型组(mRNA:0.800±0.156、0.287±0.023、0.443 ±0.083、1.096 ±0.286;蛋白:0.194±0.005、0.134±0.006、0.331±0.011、0.369 ±0.010)明显上调,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 过表达CREB通过激活PI3K信号通路,上调bcl-2调节胞内BDNF的表达水平,从而调控RGC的存活,CREB可能是起到保护视神经作用的治疗新靶点.
关键词： 视网膜神经节细胞 缺氧 环磷腺苷效应元件结合蛋白 神经保护 -
电针对抑郁症大鼠模型行为学及海马ERK/CREB信号通路表达的影响
目的 探讨电针对抑郁症大鼠模型行为学及海马细胞外调节蛋白激酶(ERKy环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)信号通路的影响. 方法 将40只雄性SD大鼠按照随机数字表法分为正常组、模型组、电针组和假针组,每组10只.后3组大鼠应用慢性不可预见的中等强度刺激建立应激抑郁大鼠模型.电针组于造模2周后同时针刺“百会”、“印堂”,1次/d,15min/次,治疗2周;假针组进行安慰处理;正常组不做任何处理.4周后进行行为学测试,蔗糖水实验检测大鼠糖水偏好,强迫游泳实验测试大鼠求生欲望,水迷宫实验观察大鼠学习能力的改变,Western blotting实验检测海马ERK、CREB及其磷酸化水平的变化. 结果 与模型组大鼠比较,电针组大鼠治疗后糖水偏好百分比明显增加(62.080％±11.995％vs 74.881％±3.308％),强迫游泳不动时间明显减少[(123.668±18.925)svs(93.012±15.957)s],水迷宫逃避潜伏期明显减少,穿越平台次数明显增加(0.900±1.875vs 3.200±1.549),差异均有统计学意义(P＜0.05).同时,电针组大鼠海马磷酸化ERK、磷酸化CREB表达量较模型组大鼠明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 电针可改善抑郁症模型大鼠抑郁样行为,其机制可能与提高其海马ERK/CREB磷酸化水平有关.
关键词： 抑郁症 电针 细胞外调节蛋白激酶 环磷腺苷效应元件结合蛋白 -
帕金森病MPTP模型小鼠海马内星形胶质细胞活化和p-CREB的表达下降
目的:通过检测帕金森病(Parkinson's disease,PD) MPTP模型小鼠海马内GFAP和p-CREB的表达,探讨PD认知障碍发生的原因.方法:雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组和PD模型组,每组12只.PD模型组经腹腔注射MPTP和丙磺舒,3.5d注射1次,共10次,持续5周,对照组小鼠注射等量生理盐水.在第6周,旷场试验和爬杆试验评价运动功能.免疫组化检测黑质、纹状体TH的表达及海马GFAP和p-CREB的表达;Western Blot检测p-CREB的表达.结果:旷场实验和爬杆实验结果显示PD模型组小鼠运动能力明显低于对照组(P＜0.001).免疫组化显示PD模型组黑质TH阳性神经元和纹状体TH阳性神经纤维均明显低于对照组(P＜0.001),海马的GFAP阳性细胞的面积明显多于对照组.而Western Blot和免疫组化染色均显示PD模型组海马p-CREB的表达明显少于对照组(P＜0.001).结论:慢性PD模型小鼠海马内星形胶质细胞激活和p-CREB表达降低,可能参与了PD认知损害的病理过程.
关键词： 帕金森病 海马 星形胶质细胞 环磷腺苷效应元件结合蛋白 小鼠
