人源抗狂犬病毒中和性全抗体在昆虫细胞中的表达

将来源于噬菌体抗体库的人源狂犬病毒糖蛋白特异性单抗G10 Fab的基因,克隆入杆状病毒入源IgG抗体表达载体,通过转染将重组质粒导入昆虫细胞,以全抗体的形式表达了一株人源抗狂犬病毒基因工程抗体G10.用亲和层析的方法纯化了表达产物,经与一株鼠源糖蛋白特异性单抗竞争证实,该单克隆抗体特异性识别狂犬病毒糖蛋白,亲和力约为10-9M.体外中和实验证明,该单抗对狂犬病毒aG株具有体外中和活性.

SARS冠状病毒S蛋白在昆虫细胞中的表达和纯化

导致严重急性呼吸综合征(severe acute respiratory syndrome,SARS)的元凶是一种新型的冠状病毒(SARS coronavirus,SARS-CoV).SARS-CoV感染入侵宿主细胞关键的一环是病毒自身的棘突蛋白(spike protein,S protein)与细胞受体的相互作用,故而S蛋白已成为SARS研究的主要热点.本文通过构建杆状病毒载体,利用昆虫细胞表达体系,在真核细胞中得到了全长S蛋白,并用恢复期SARS患者的血清对其进行了初步鉴定.这为进一步深入研究SARS-CoV S蛋白与宿主细胞的作用机制、研发SARS疫苗等提供了实验材料.

蜱IgG结合蛋白的昆虫细胞表达及结合IgG特性分析

蜱吸食宿主大量血液,其中宿主血液中IgG分子能穿过蜱肠道,进入血淋巴,且能保持其活性.为逃避宿主免疫攻击,蜱唾液腺分泌一种免疫球蛋白结合蛋白(Immunoglobulin G binding protein,IGBP),与蜱体内的宿主IgG结合,抑制宿主IgG对蜱的损害,是蜱唾液腺重要的功能分子,也是抗蜱疫苗候选分子.镰形扇头蜱是我国南方的优势蜱种,其唾液腺免疫球蛋白结合蛋白(RH-IGBP)被鉴定为抗蜱免疫保护性抗原,为进一步了解其生物学功能,本研究应用杆状病毒表达系统,构建出重组杆粒Bacmid-IGBP,并在昆虫细胞中表达出真核重组蛋白RH-IGBP,经免疫荧光实验鉴定和Western blot分析,重组蛋白大小为23kDa,与预期一致.重组蛋白经纯化,利用ELISA方法,研究重组蛋白与不同哺乳动物宿主(兔、猪、牛羊、鼠、犬)和人的IgG结合能力,发现RH-IGBP与不同宿主IgG结合能力不同,与兔、猪的IgG有明显结合能力.对来自兔源IgG不同酶切片段F(ab′)2 和Fc与RH-IGBP结合特性分析表明,蜱IgG结合蛋白主要识别部位是IgG的F(ab′)2片段.这些结果初步揭示了蜱IgG结合蛋白的作用机制和特点.

HPV16 L1-E7c嵌合基因的重组杆状病毒在昆虫细胞中表达及免疫小鼠的效应研究

目前,关于人乳头瘤病毒疫苗的研究主要集中在嵌合型病毒样颗粒(cVLP)上.本研究制备了昆虫细胞表达的HPV16 L1-E7c CVLP,并将该蛋白疫苗接种动物,探讨其诱发体液免疫应答和细胞因子的效应.

在昆虫细胞表达汉坦病毒的核蛋白及其在血清检测中的初步应用

酵母表达的重组戊型肝炎病毒ORF2蛋白在实验感染恒河猴血清抗体检测中的应用

诊断试剂的研制和开发亦是戊型肝炎研究的重要内容,以E.Coli及昆虫细胞表达的重组戊型肝炎病毒(HEV)ORF2蛋白作为抗原建立的免疫学检测方法已应用临床戊型肝炎的诊断、实验感染灵长类动物抗戊型肝炎病毒(HEV)抗体的检测以及HEV特异性抗原的检测.这些方法包括:Western blot,IFA,ELISA等.研究证实,重组HEV ORF2蛋白具有较好的抗原性[1-3].我们应用巴氏毕赤酵母(Pichia pastoris)成功表达了戊型肝炎结构区蛋白ORF2,制备了新型重组HEV ORF2[4],将其作为抗原建立ELISA应用于实验感染恒河猴血清抗-HEV抗体的检测,旨在研究酵母表达的重组HEV ORF2蛋白的抗原性,以进一步探讨该重组蛋白在戊型肝炎诊断上的价值.

O-GlcNAc糖基转移酶在原核和真核细胞中的表达和提纯

目的:本文为进一步研究蛋白O-GlcNAc糖基化修饰提供重要资源.方法:为了探索制备纯化具有生物学活性的重组OGT的有效方法,本文用大肠杆菌和Hi5昆虫细胞表达并纯化具有活性的重组 OGT.携带人OGT cDNA的PET32a质粒在大肠杆菌中表达出带有1个S-Tag的重组人OGT融合蛋白,然后用与S-蛋白质偶联的琼脂糖凝胶颗粒从细菌裂解液中亲和纯化OGT融合蛋白.结果:其纯化的OGT在电泳中显现单一条带并具有生物活性,但其活性在洗脱后丧失.在Hi5昆虫细胞中表达的鼠肝OGT带有一His6tag,经镍离子螯合柱纯化后,其比活性达到0.88 nmol·min-1·mg-1 OGT.结论:在这两个表达系统中制备重组OGT各有利弊.

丙型肝炎病毒H株包膜糖蛋白在昆虫细胞中的表达

［付莉，徐志凯，汤丽霞，薛小平，尹文 . 细胞与分子免疫学杂志，2001;17（4）：337-339］ 目的利用杆状病毒表达系统，在昆虫细胞中表达了丙型肝炎病毒(HCV)H株的包膜糖蛋白E，并应用表达产物对HCV感染患者血清中抗膜蛋白抗体进行检测. 方法将HCV H株E基因片段克隆到杆状病毒转移载体上，转染昆虫细胞，表达包膜糖蛋白，经免疫杂交法鉴定表达产物，并用细胞间接免疫荧光法检测患者血清抗膜蛋白抗体的水平. 结果 Western blot显示，表达产物中有多条分子量不同、可与HCV RNA阳性血清反应的蛋白. 细胞免疫荧光染色表明，HCV包膜糖蛋白在细胞浆中表达.用表达产物分别检测HCV患者血清，发现仅11.4%血清中含有膜抗体. 结论成功利用昆虫细胞表达了HCV包膜糖蛋白，为HCV疫苗的研究奠定了基础.（何扬举）