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没食子酸对卵巢癌SKOV3细胞的生长抑制作用及机制
目的 探讨没食子酸对卵巢癌细胞株SKOV3的生长抑制作用及机制,为其临床应用提供依据.方法 采用MTT法测定没食子酸单独作用及没食子酸与顺铂、丁酸钠联合用药后卵巢癌细胞株SKOV3的生长抑制率.Annexin V-FITC凋亡试剂盒于荧光倒置显微镜下观察没食子酸诱导SKOV-3细胞凋亡情况.结果 没食子酸对SKOV-3细胞株生长有明显抑制作用,且呈一定的浓度依赖性;IC50为23.4 μg/ml.没食子酸与顺铂合用可以明显增加顺铂对卵巢癌SKOV3细胞的抑制作用,而与丁酸钠联合用药仅为单纯相加作用.随着没食子酸剂量增加,凋亡细胞数目增多.结论 没食子酸可抑制SKOV3细胞生长,其机制为诱导细胞凋亡;没食子酸与顺铂联用有协同作用.
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丁酸钠对大鼠酒精觅药行为及海马NMDA受体2B亚基基因启动子区H3K9乙酰化的影响
目的 研究丁酸钠对Wistar大鼠酒精觅药行为及海马NMDA受体2B亚基(NMDA receptor 2B subunit,NR2B)基因启动子区H3K9乙酰化表达的影响,探讨酒精觅药行为形成的表观遗传学机制.方法 48只雄性Wistar大鼠,采用随机数字表法分为4组:生理盐水组、丁酸钠组、酒精组、丁酸钠酒精组,每组12只.采用腹腔注射的方法造模,采用条件性位置偏爱(conditioned place preference,CPP)实验评价大鼠的酒精觅药行为,采用Western-blot、实时荧光定量PCR、染色质免疫共沉淀技术分别检测4组大鼠海马NR2B蛋白、NR2B mRNA、NR2B基因启动子区H3K9乙酰化的表达水平.结果 4组大鼠CPP测试值、CPP分值组间均差异有统计学意义(P＜0.05);与生理盐水组CPP测试值[(261.1± 102.2)s]、CPP分值[(48.5±94.6)s]相比,酒精组、丁酸钠酒精组CPP测试值[(406.8±109.2)s、(502.7±72.89)s]、CPP分值[(198.2±119.4)s、(277.5±76.2)s]均增加(P＜0.05),丁酸钠组CPP测试值[(193.4±93.8)s]、CPP分值[(9.7±94.0)s]差异无统计学意义(P＞0.05);与酒精组相比,丁酸钠酒精组CPP测试值增加(P＜0.05).4组大鼠海马NR2B蛋白表达水平、NR2B mRNA表达水平、NR2B基因启动子区H3K9乙酰化表达水平组间均差异有统计学意义(P＜0.05);与生理盐水组NR2B蛋白(1.00±0.28)、NR2BmRNA(1.00±0.14)、NR2B基因启动子区H3K9乙酰化(1.00±0.25)表达水平相比,酒精组、丁酸钠酒精组NR2B蛋白[(1.40±0.34)、(1.79±0.30)]、NR2B mRNA[(1.26±0.16)、(1.50±0.08)]、NR2B基因启动子区H3K9乙酰化[(1.68±0.16)、(2.35±0.45)]表达水平均增高(P＜0.05),丁酸钠组海马NR2B蛋白(0.85±0.24)、NR2B mRNA(1.05±0.13)、NR2B基因启动子区H3K9乙酰化(0.96±0.41)表达水平差异无统计学意义(P＞0.05);与酒精组相比,丁酸钠酒精组NR2B蛋白、NR2B mRNA、NR2B基因启动子区H3K9乙酰化表达水平均增高(P＜0.05).CPP分值与NR2B蛋白表达水平(r=0.474,P＜0.05)、NR2B蛋白表达水平与NR2B mRNA表达水平(r=0.468,P＜0.05)、NR2B mRNA表达水平与NR2B基因启动子区H3K9乙酰化表达水平(r=0.596,P＜0.05)、CPP分值与NR2B基因启动子区H3K9乙酰化表达水平(r=0.542,P＜0.05)均呈正相关.结论 海马NR2B基因启动子区H3K9乙酰化可能是Wistar大鼠酒精觅药行为形成的表观遗传学机制之一,海马NR2B启动子区H3K9去乙酰化修饰可能是防治酒精依赖的一个新靶点.
关键词： 酒精 丁酸钠 组蛋白乙酰化 NMDA受体2B亚基 -
丁酸钠对结肠癌细胞株HT-29血管内皮生长因子表达水平的影响
目的观察丁酸钠对结肠癌细胞株HT-29的生长抑制情况以及对血管内皮生长因子(VEGF)表达水平的影响.方法运用细胞增生抑制实验(MTT法),免疫细胞化学技术观察丁酸钠对HT-29细胞株的生长和对VEGF表达水平的影响.结果丁酸钠能抑制HT-29细胞株增生,并降低VEGF表达水平.结论丁酸钠能够降低VEGF的表达水平,提示可用作抗血管生成物质降低肿瘤细胞侵袭力.
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快动眼睡眠剥夺对丁酸钠诱导的内脏感觉过敏大鼠模型的调节作用
目的 研究丁酸钠灌肠对大鼠内脏感觉功能的影响以及快动眼睡眠剥夺对大鼠内脏感觉功能的调节作用.方法 大鼠行丁酸钠溶液灌肠(200mmol/L,6次),对照组行生理盐水灌肠.两组大鼠均在第1次灌肠后的第3、6、9、12、15、18天行结直肠气囊扩张(CRD),观察大鼠的腹壁回撤反射(AWR)测定内脏感觉功能.丁酸钠灌肠大鼠分为快动眼睡眠剥夺组和对照组.在快动眼睡眠剥夺的第24h、48h、72h行CRD,观察大鼠的腹壁回撤反射(AWR)测定内脏感觉功能.结果 第3、6、9、12天,在20、40、60、80mmHg的扩张压力下,丁酸钠灌肠组的AWR评分明显高于生理盐水灌肠组(P＜0.05).而在第15、18天,丁酸钠灌肠组的AWR评分与对照组无显著性差异(P＞0.05).快动眼睡眠剥夺的第24h,大鼠对80mmHg扩张刺激的AWR评分明显低于对照组(P＜0.05);而快动眼睡眠剥夺的第48、72h,大鼠对不同程度扩张刺激的AWR评分均明显低于对照组(P＜0.05).在快动眼睡眠剥夺的第48、72h大鼠的疼痛感觉阈值升高(P＜0.01).结论 丁酸钠溶液反复灌肠可诱导大鼠内脏感觉过敏;快动眼睡眠剥夺可提高模型鼠的内脏疼痛感觉阈值,降低内脏感觉敏感性.
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Zebularine联合丁酸钠对结肠癌细胞系LOVO增殖、凋亡以及P16基因表达的影响
目的 探讨Zebularine和丁酸钠对结肠癌LOVO细胞增殖、凋亡及P16基因表达的影响.方法 培养人结肠癌细胞系LOVO,分为4组:阴性对照组、Zebularine组、丁酸钠组、Zebularine+丁酸钠组.四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞处理24 h、48 h、72 h后的增殖状况,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测P16基因的表达.结果 Zebularine组和丁酸钠组LOVO细胞的抑制率和凋亡率与对照组相比显著增高,Zebularine+丁酸钠组细胞抑制率和凋亡率均显著高于单独用药组(P＜0.05)；Zebularine组和丁酸钠组P16 mRNA相对表达量显著高于对照组(P＜0.05),Zebularine+丁酸钠组P16 mRNA相对表达量显著高于各单独用药组和对照组(P＜0.05).结论 与单独用药相比,Zebularine联合丁酸钠可以明显促进P16 mRNA 的表达,抑制结肠癌细胞生长.
关键词： zebularine 丁酸钠 p21 凋亡 结肠癌 -
葡萄糖影响丁酸钠诱导结肠癌细胞凋亡和增殖抑制作用及其可能机制
目的 观察葡萄糖对丁酸钠诱导结肠癌细胞凋亡和增殖抑制作用效果的影响,并探讨这种影响的可能机制.方法 细胞生存率的检测采用MTT法,流式细胞仪法检测细胞凋亡.RT-PCR方法检测单羧酸转运蛋白1(MCT1)和葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)mRNA的表达情况.结果 低葡萄糖浓度培养条件下可以诱导结肠癌细胞HT-29凋亡,并影响其生长.且葡萄糖能够明显抵制丁酸钠诱导凋亡和增殖抑制作用,同时葡萄糖轻度抑制GLUT1 mRNA表达,对MCT1 mRNA也有一定抑制作用.结论 葡萄糖浓度变化能够明显影响丁酸钠诱导凋亡和增殖抑制作用,这种影响可能与葡萄糖和丁酸钠在细胞内浓度变化有关.
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黄芪多糖和丁酸钠联合用药对K562细胞胎儿血红蛋白合成的作用
目的 探讨黄芪多糖(APS)和丁酸钠(NaB)联合用药对人K562细胞胎儿血红蛋白(HbF)合成的作用,为临床联合用药治疗β-珠蛋白生成障碍性贫血(β-地贫)提供实验依据.方法 以K562细胞为模型,低剂量APS和NaB联合用药诱导的细胞为实验组,低剂量APS、NaB单药和常规剂量 NaB单药诱导的细胞分别为阳性对照组1、2、3,未加药组细胞为对照组4,采用联苯胺染色和Western blot技术分析药物作用K562细胞96 h后红系分化和HbF表达.结果 1.实验组对细胞生长的抑制作用显著弱于对照组3(P<0.05).2.APS和NaB联合作用K562细胞的佳剂量组合为APS 2.50 g·L-1+NaB 250 μmol·L-1.3.联苯胺染色结果显示实验组联苯胺染色阳性率于48 h显著升高,96 h达高峰,与各对照组比较差异均有统计学意义(F=966.630,P<0.05),作用可维持至144 h.4.Western blot结果显示实验组和对照组3诱导K562细胞后HbF合成分别增加至对照组4的(1.82±0.16)倍和(1.57±0.08)倍(F=26.569,P<0.05),实验组HbF表达水平显著高于对照组3(P<0.05).结论 APS和 NaB低剂量联合用药诱导HbF表达增强,作用维持时间长,细胞毒性低,有望成为β-地贫的一种新的治疗方案.
关键词： β-珠蛋白生成障碍性贫血 K562细胞 黄芪多糖 丁酸钠 联合用药 -
丁酸钠诱导K562细胞红系分化基因表达谱分析
目的 分析丁酸钠(NaB)诱导K562细胞后的差异表达基因,筛选出与红系分化相关基因,探索NaB的作用机制.方法 应用Affymetrix公司的人类全基因组HG-U133 Plus 2芯片,检测0.5 mmol/L NaB诱导K562细胞48 h的珠蛋白基因变化及差异表达基因,筛选出与红系分化相关基因.应用反转录(RT)-PCR检测ε、γ、β、δ4个珠蛋白基因及2个红系分化相关基因KLF1及KLF3的表达,验证基因芯片结果 .结果 表达谱基因芯片结果分析显示:总探针组54 675个芯片中,阳性表达数23 175(42.4%),阴性表达数30693(56.1%).信号比对数值(SLR)结果显示,表达上调(SLR>1)433个,包含340个不同的基因;表达下调(SLR<-1)171个,包含144个不同的基因.生物学功能分类发现所涉及的基因主要包括参与细胞及大分子代谢、细胞信号、生物学调节、细胞发育及细胞增殖等.7个珠蛋白中ε、Aγ、Gγ、β、δ珠蛋白基因表达均上调,而α及ζ珠蛋白基因无明显改变;表达上调或下调且与红系分化相关的有ALAS2、EGR1、LMO2、RUNX1、KIT、GYPA、GATA-2、KLF1及KLF3等29个基因.RT-PCR验证基因芯片结果 可靠.结论 NaB诱导K562细胞向红系分化;NaB可能通过调节ALAS2、EGR1、LMO2、RUNX1、KIT、GYPA、GATA-2、KLF1及KLF3等与红系分化相关的基因调控γ珠蛋白合成.
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丁酸钠对K562细胞系γ珠蛋白基因表达的诱导作用及机制
目的:研究丁酸钠对K562细胞系γ珠蛋白基因表达和胎儿血红蛋白合成的诱导作用及机制.方法:以丁酸钠(0.5 mmoL/L)诱导72 h的K562细胞为实验组,设K562亲本细胞和SB203580(10 μmol/L)处理1 h后用丁酸钠(0.5 mmoL/L)诱导72 h 的K562细胞为阴性对照组,设羟基脲(100 μmol/L)诱导72 h的K562细胞为阳性对照.分别提取细胞总RNA 和总蛋白.采用RT-PCR、Western blotting和联苯胺染色方法检测γ珠蛋白基因、胎儿血红蛋白和p38表达及p38磷酸化水平.结果:与K562亲本细胞和SB203580处理后丁酸钠诱导的K562细胞相比,丁酸钠诱导的K562细胞中G-γ珠蛋白、A-γ珠蛋白和胎儿血红蛋白的表达均明显上调(P<0.05),p38 mRNA和蛋白水平表达均无明显变化(P>0.05),但p38蛋白磷酸化水平显著增加(P<0.05).K562亲本细胞、SB203580处理后丁酸钠诱导的K562细胞和丁酸钠诱导的K562细胞中联苯胺阳性细胞百分率分别为(3.2±0.4)%、(12.7±0.2)%和(36.3±0.8)%(P<0.05).结论:丁酸钠可以诱导K562细胞高表达γ珠蛋白基因、合成胎儿血红蛋白,p38MAPKs的激活在丁酸钠诱导K562细胞高表达γ珠蛋白基因中发挥重要作用.
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丁酸钠对Hep-2细胞生长、凋亡及细胞周期的影响
目的:观察丁酸钠(SB)对人喉癌Hep-2细胞的生长抑制作用,探讨其对细胞凋亡及细胞周期的影响.方法:以MTT法检测0.625～10.000 mmol/L SB对Hep-2细胞生长的抑制作用;以TUNEL法检测1.250～5.000 mmol/L SB作用24 h、48 h、72 h后的细胞凋亡情况;以琼脂糖凝胶电泳法检测2.500 mmol/L SB作用24 h、48 h、72 h后的细胞DNA片段;应用流式细胞仪分析1.250 mmol/L、2.500 mmol/L、5.000 mmol/L SB作用24 h后细胞凋亡率和细胞周期变化;采用免疫组织化学SP法检测2.500 mmol/L SB作用24 h、48 h、72 h后细胞抗凋亡蛋白Survivin表达的变化.结果:SB对Hep-2细胞的生长抑制作用具有时间和剂量关系(不同时间组、不同剂量组间比较,P均＜0.01);细胞凋亡指数随SB剂量升高、作用时间延长而增加(P均＜0.01);琼脂糖凝胶电泳可见特征性的凋亡细胞DNA梯状条带;流式细胞术显示细胞凋亡率随SB剂量升高而增加(P＜0.01),细胞周期阻滞于G0/G1期;2.500 mmol/L SB作用72 h,Survivin表达阳性细胞的光密度值由作用前的0.164±0.009下降至0.045±0.006(P＜0.01).结论:SB能有效抑制 Hep-2细胞的生长,其机制可能与抑制细胞Survivin蛋白表达进而诱导细胞凋亡以及参与细胞周期调控有关.
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结肠癌尿激酶分子系统调节作用的研究
目的 研究转化生长因子β1(TGF-β1)和丁酸钠对结肠癌LoVo细胞的增殖、尿激酶型纤溶酶原激活剂(UPA)和纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)的调节作用,探讨肿瘤浸润转移的机制.方法 选择体外培养的LoVo细胞,分为对照组、TGF-β1,组、丁酸钠组、TGF-β1+丁酸钠组,分别在无血清培养条件下处理细胞,以(3)H-TdR掺入法观察TGF-β1和丁酸钠对细胞增殖的影响,并应用纤溶酶特异的发色底物法和酶联免疫测定法分别测定它们对结肠癌LoVo细胞UPA和PAI-1的调节作用,并同时观察不同条件处理后细胞形态和黏附度的变化.结果 TGF-β1对LoVo细胞增殖无影响,但可增加UPA和PAI-1的含量.丁酸钠抑制细胞增殖和UPA活性,而不影响PAI-1的水平.结论 TGF-β1通过提高UPA和PAI-1的水平促进肿瘤细胞的侵袭和转移.丁酸钠则可抑制细胞增殖和侵袭而阻止肿瘤发展.
关键词： 结肠癌 转化生长因子β1 丁酸钠 尿激型纤溶酶原激活剂 纤溶酶原激活物抑制剂 -
丁酸钠对腹膜炎小鼠肠道屏障功能的保护作用
目的 探讨丁酸钠保护腹膜炎小鼠肠屏障的机制.方法 将B57小鼠随机分为丁酸钠组及对照组.丁酸钠组胃灌丁酸钠(0.2 g/kg,2次/d).24 h后检测胃肠道内丁酸浓度(n=4).行盲肠结扎穿孔手术,观察术后死亡率.术后24 h胃灌示踪剂FD40,测血浆中浓度以衡量胃肠通透性.取回肠组织石蜡切片,比较两组小鼠腹膜炎后组织学变化.结果 (1)丁酸钠组和对照组鼠胃(2.08±0.39比＜0.01 mmol/kg,P＜0.01)、空肠(1.23 ±0.48比＜0.01 mmol/kg,P＜0.05)、回肠(1.64±0.22比＜0.01 mmol/kg,P＜0.01)内丁酸浓度差异有统计学意义；(2)丁酸钠组小鼠腹膜炎死亡率(23.1％,n=19)低于对照组(53.8％,n=19)(P＜ 0.05)；(3)术后小鼠肠道通透性明显上升[血浆FD40:假手术组(0.050±0.005) mg/L,腹膜炎组(0.230±0.020) mg/L),丁酸钠降低了腹膜炎鼠胃肠道通透性[血浆FD40:(0.120 ±0.020) mg/L,P＜0.01).(4)腹膜炎小鼠的回肠黏膜明显破坏,丁酸钠减轻损伤,加快修复.结论 在小鼠腹膜炎模型中,丁酸钠具有保护肠道屏障功能的作用.
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丁酸钠通过信号转导和转录激活因子1抑制肝癌细胞吲哚胺2,3-双加氧酶的表达
目的 观察丁酸钠(NaB)对干扰素-γ(IFN-γ)诱导的人肝癌细胞HepG2内吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)表达的影响.方法 利用低浓度(10、20、30、40 mmol/L)的NaB作用于人肝癌细胞HepG2 24 h,通过噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞的增殖；利用蛋白印迹法及细胞免疫化学法检测NaB对HepG2细胞内IDO表达的影响;蛋白印迹法检测NaB对IDO基因表达的关键性干扰素应答因子1 (IRF-1)及信号转导和转录激活因子1(STAT1)的影响.结果 低浓度NaB对人肝癌细胞HepG2的增殖具有1％～20％的抑制作用；3 mmol/L的NaB能完全抑制IFN-γ诱导的IDO的表达；这种抑制作用通过抑制STAT-1701位的酪氨酸磷酸化实现.结论 NaB通过抑制STAT1的磷酸化而抑制肝癌细胞HepG2中IDO的表达.
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不同细胞因子诱导对树突状细胞体外分化的影响
目的 观察不同细胞因子诱导对于体外培养的树突状细胞(DC)免疫刺激活性的影响.方法 通过1000 U/ml人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和500 U/ml白细胞介素(IL)-4体外诱导的人单个核细胞来源的DC,经1000 U/ml肿瘤坏死因子(TNF)-α、1 mg/L脂多糖(LPS)、1 mmol/L丁酸钠、细胞因子鸡尾酒法诱导成熟,分别以流式细胞仪、FITC-Dxtran内吞检测、混合淋巴细胞反应(MLR)、酶联免疫吸附试验(ELISA)检测DC的表面标志、内吞能力、刺激淋巴细胞增殖能力和IL-12分泌的变化.结果 鸡尾酒法诱导下的DC成熟标志显著上调,内吞能力减弱186.74±38.66,刺激淋巴细胞增殖能力增强18.23 ±2.22,并且IL-12的分泌能力增加(656.18±38.52)ng/L,说明其显著促进DC成熟.而丁酸钠诱导下的各项成熟指标均下调,导致DC免疫刺激源性减弱.结论 细胞因子鸡尾酒法是诱导DC成熟的佳方法;而丁酸钠可以抑制DC成熟,改变DC的免疫状态.
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丁酸钠增强未成熟树突状细胞表达吲哚胺2,3双加氧酶抑制T细胞增殖
目的 观察丁酸钠诱导的不成熟树突状细胞(DCs)吲哚胺2,3双加氧酶(IDO)的表达及其在抑制T细胞免疫反应中的作用.方法 用重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素(IL)-4诱导人单个核细胞来源的未成熟DCs,6 d后分别加入丁酸钠、脂多糖(LPS)和多细胞因子鸡尾酒组合[肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-6、IL-1β、前列腺腺素E2(PGE2)],24h后收集DCs;流式细胞仪检测Des表型,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和实时荧光定量PCR检测IDO mRNA的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测IL-12分泌;混合淋巴细胞培养(MLR)检测各组DCs对同种异体T淋巴细胞增殖的影响.结果 丁酸钠诱导的DCs呈现典型未成熟DCs的特征,低表达CD83、CD80和HLA-DR,分泌IL-12水平低.与对照组比较,丁酸钠组和LPS组DCs的IDO mRNA的表达分别升高了(32.03±4.02)倍和(1.01±0.43)倍,而鸡尾酒组则降低(3.31±1.07)倍,差异有统计学意义(P<0.01);丁酸钠诱导的未成熟DCs采用IDO抑制剂1-甲基色氨酸(1-MT)处理后,可以有效刺激T细胞增殖,但其能力仍低于LPS或鸡尾酒法诱导的成熟DCs.结论 丁酸钠可显著增强未成熟DCs的表达IDO,并且IDO过表达在其抑制T细胞增殖中起重要作用.
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丁酸钠对膀胱癌细胞生长的影响
目的 观察丁酸钠对膀胱癌细胞生长的影响.方法 不同浓度的丁酸钠干预后,采用~3H-TdR掺入试验比较了膀胱癌BIU-87和E-J细胞的生长曲线变化,并采用流式细胞术研究了丁酸钠对膀胱癌细胞周期的影响.结果 1 mmol/L浓度组在各观察时间点均未显示出对E-J细胞的抑制;5、10mmol/L在各观察点显示出明显的生长抑制作用,各组之间差异有统计学意义(P<0.01);随着丁酸钠浓度的升高,越来越多的BIU-87和E-J细胞细胞被阻滞在G_0/G_1期.结论 丁酸钠对肿瘤细胞增殖的抑制作用具有浓度、时间依赖性,这种作用是通过G_0/G_1期阻滞实现的.
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不同浓度丁酸钠体外诱导树突状细胞分化的细胞表型研究
目的 探讨不同浓度丁酸钠诱导对体外培养树突状细胞(DC)细胞表型的变化规律.方法 通过粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和白细胞介素-4(IL-4)体外诱导的人外周血单个核细胞来源的DC,按不同丁酸钠浓度和不同诱导时间分组培养,流式细胞仪检测各组DC的细胞表型.结果 在丁酸钠诱导下,各组DC表面的成熟标志均显著下调,丁酸钠浓度越高下调越明显,随着培养时间的延长,各组DC表面的成熟标志均显著下调;但是细胞的凋亡率也同时上升.结论 丁酸钠在体外可以显著抑制DC的成熟过程,以丁酸钠浓度为0.75mmol/L和培养48h为佳的诱导浓度和时间.
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丁酸钠对人肝癌细胞株SMMC-7721的诱导分化作用及其机制
目的 探讨丁酸钠(Sodium Butyrate,NaB)抑制人肝癌细胞株SMMC-7721细胞生长、诱导其凋亡的分子机制.方法 采用噻唑蓝(MTT)比色法、倒置显微镜观察药物对细胞生长的影响并绘制细胞增殖抑制曲线;透射电镜观察细胞凋亡的形态变化;流式细胞术分析细胞周期;半定量RT-PCR方法检测细胞p21WAF1基因mRNA的表达水平;Western blot检测细胞p21WAF1蛋白的表达变化.结果 NaB对人肝癌细胞生长的抑制呈剂量依赖和时间依赖关系.将细胞周期阻滞于G0/G1期,NaB上调p21WAF1 mRNA及蛋白的表达.结论 NaB具有抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖、诱导其凋亡的作用,这种作用可能是通过上调p21WAF1 mRNA及蛋白完成的.
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丁酸钠诱导MCF-7细胞凋亡反义cDNA文库的构建和初步鉴定
目的构建丁酸钠诱导MCF-7细胞凋亡过程的反义cDNA文库,以分离丁酸钠抗肿瘤效应基因.方法收集经2.5 mmol/L丁酸钠处理0、12、18、24、36、48、72 h的人乳腺癌MCF-7细胞,提取poly(A)+RNA,逆转录合成cDNA第一链和第二链,双链cDNA修平末端后连上EcoRⅠ/Hind Ⅲ接头,分别用EcoRⅠ/Hind Ⅲ酶切消化后,反向连上载体pcDNA 3.1,连接产物转化大肠杆菌得一反义cDNA文库,随机挑取40个克隆子进行酶切鉴定.结果构建的反义cDNA文库含1×106重组子,重组效率为90%,插入子平均长度为1.5kb.结论构建的文库容量较大,质量较高,为进一步分离丁酸钠抗肿瘤效应基因奠定了基础.
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丁酸钠诱导人肝癌细胞凋亡机制
丁酸钠(NaB)作为一种组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂,已被证实能抑制多种体外培养的肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞衰老和凋亡[1].我们拟用NaB作用于人肝癌SMMC-7721细胞,采用FCM检测细胞周期、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法及Western blot方法在mRNA及蛋白水平检测p21WAF.
